Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：将36只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤（SCI）模型（脊髓中度损伤），分为对照组（单纯损伤A组18只，按时间段又分为A1，A2，A3），治疗组（应用Z-DEVD-FMK治疗B组18只，按时间段又分为B1，B2，B3）。损伤后6h，3d，8d对脊髓损伤区进行组织学HE染色，细胞凋亡TUNEL标记，Fas凋亡因子检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化，同时采用BBB评分方法和斜板试验观察神经功能恢复情况。结果：对照组和治疗组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。Z-DEVD-FMK治疗组神经细胞的凋亡数减少，Caspase-3表达降低，神经功能增强，两组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论：Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基的强的松龙对脊髓损伤区细胞凋亡的影响。方法：将大鼠分为脊髓损伤应用大剂量甲基强的松龙治疗组（Ａ组）、单纯脊髓损伤组（Ｂ组）,损伤后１、３、７、１４、２８天驿脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（ＴＵＮＥＬ）以及Ｂｃｌ－２蛋白免疫反应表达的测定（免疫组化法）,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果：Ａ、Ｂ两组中均发现凋亡细胞及ＢＣＬ－２蛋白阳性表达,Ｂ组细胞凋亡率大于     

大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及Caspase-3、Fas的表达和意义

目的：研究脊髓损伤后神经细胞凋亡表达及Caspase-3、Fas的表达变化规律.方法：使用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,实验分对照组（脊髓未受打击）和损伤5个组,致大鼠脊髓（T9、T10）中度撞击损伤,损伤后6h、1d、3d、7d、15d取材,共分6组,采用HE染色、荧光Hoechst33258染色、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导DUTP标记法（TUNEL）对损伤脊髓组织进行标记;免疫组化方法测Caspase-3及凋亡因子Fas,半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）测定各时间段Caspase-3的表达变化.结果：大鼠急性损伤后TUNEL标记阳性凋亡细胞6h开始出现,多位于脊髓白质;3d达到高峰,在灰质和白质均有表达,7d后开始降低,持续15d;免疫组化检测Fas表达的阳性细胞6h开始增高,2d达到高峰,15d下降;Caspase-3 mRNA 6h开始增高,3d达到高峰,7d后恢复正常.免疫组化检测Caspase-3表达的阳性细胞与TUNEL标记阳性凋亡细胞出现的时限相似.结论：脊髓损伤后存在神经细胞凋亡现象发生,Caspase-3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.Caspase-3的表达和Fas的变化有一定的相关性.     

FTY720对小鼠胸腺淋巴细胞的影响

目的 FTY720是将冬虫夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成分ISP-Ⅰ进行结构改造而成的新型免疫抑制剂,研究目的是明确FTY720对于小鼠胸腺淋巴细胞的影响。方法利用MTT比色法和DNA Ladder两种方法检测经过FTY720处理后的小鼠胸腺细胞的活性。没2h,4h,6h三个时间对照;0．5mg／mL,1mg／mL,2mg／mL三个浓度对照。并对MTT法用F-检验双样本方差分析,t-检验双样本等方差假设两种统计学方法检验结果。对DNA Ladder法直接观察凋亡条带。结果不同浓度FTY720作用过的小鼠胸腺细胞活性有差异,浓度越高活性越低;同一浓度作用不同时间后,细胞活性也有差异,时间越长活性越低。     

FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡影响的研究

目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响。结果当FTY720浓度为6 400 ng/ml时,体外培养MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,抑制率为62.0%（P〈0.05）,而且抑制率呈浓度依赖性;镜下可见细胞出现凋亡的形态;流式细胞仪检测分析显示FTY720可将MCF-7细胞阻滞于G1期,并促进其发生凋亡,凋亡率呈浓度依赖性。结论在体外培养的MCF-7细胞培养液中加入一定浓度的FTY720,能明显抑制该细胞的增殖,调节该细胞周期并诱导其凋亡。     

FTY720改善颅脑损伤大鼠神经功能的机制研究

目的探讨FTY720对颅脑损伤大鼠神经功能的影响及其相关机制研究。 方法60只大鼠分成假手术组、模型组和治疗组,每组20只,采用改进的Feeney自由落体损伤装置建立大鼠颅脑损伤模型。治疗组大鼠按1 mg/kg剂量予FTY720腹腔注射,假手术组及模型组大鼠予以腹腔注射1 ml生理盐水。术后24 h,每组各取10只大鼠断头处死,分离海马组织,采用Western-blotting检测核因子κB表达水平,采用免疫组织化学染色法检测大鼠小胶质细胞OX-42表达水平。同时采用前肢放置试验评分、平衡实验评分及改良神经功能缺损程度评分进行神经功能评估。 结果三组大鼠海马组织核因子κB蛋白表达水平（F=95.962,P<0.001）及小胶质细胞（F=108.853,P<0.001）比较,差异均有统计学意义。且模型组核因子κB蛋白及小胶质细胞OX-42表达水平较假手术组及治疗组明显增加（P均< 0.05）。同时,模型组大鼠术后7、14、21、28 d前肢放置试验评分[（7.0 ± 0.7）分vs.（6.3 ± 0.5）分,（5.9 ± 0.7）分vs.（5.0 ± 0.8）分,（4.9 ± 1.0）分vs.（3.8 ± 0.8）分,（3.7 ± 1.1）分vs.（2.3 ± 0.7）分;t=2.689、2.586、2.741、3.525,P=0.015、0.019、0.013、0.002]、平衡实验评分[（4.3 ± 0.7）分vs.（3.6 ± 0.7）分,（3.5 ± 1.1）分vs.（2.6 ± 0.7）分,（2.9 ± 0.9）分vs.（1.9 ± 0.7）分,（2.5 ± 0.7）分vs.（1.8 ± 0.6）分;t=2.278、2.212、2.762、2.333,P=0.035、0.040、0.013、0.031]及改良神经功能缺损程度评分[（10.1 ± 1.0）分vs.（8.7 ± 1.6）分,（8.8 ± 0.8）分vs.（7.5 ± 1.5）分,（7.3 ± 1.0）分vs.（5.6 ± 1.3）分,（5.7 ± 1.3）分vs.（4.1 ± 1.4）分;t=2.385、2.414、3.400、2.726,P=0.028、0.027、0.003、0.014]均明显高于治疗组。 结论FTY720可显著改善颅脑损伤大鼠神经功能,其作用机制可能与FTY720的中枢炎症抑制作用有关。     

孕酮对大鼠脊髓损伤后早期细胞凋亡的影响

目的:探讨孕酮对大鼠脊髓损伤后早期细胞凋亡的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分成假手术组、损伤组、孕酮组,采用改良的Allen’s撞击法制作脊髓损伤模型。孕酮组在造模成功后1、6、24、487、2 h腹腔注射16 mg/kg孕酮。术后6、24、48、75 h取材,采用HE染色观察脊髓形态学的变化,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达,原位末端标记法(TUNEL染色)检测细胞凋亡。结果:假手术组大鼠脊髓形态正常,偶见凋亡细胞及Caspase-3阳性细胞;与损伤组相比,孕酮组术后各时间点的凋亡指数下降,Caspase-3阳性细胞数显著减少,差异有统计学意义。结论:抑制脊髓损伤后的细胞凋亡可能是孕酮的神经保护作用机制之一。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后行为学变化及细胞凋亡的影响

目的：观察三七总皂甙对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用并分析其可能的作用途径。 方法：实验于2005—06／11在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。实验共选取64只SD大鼠，随机分为损伤组和三七总皂甙组。每组32只，采用改良Allen’s重物打击法造成大鼠中度脊髓损伤，三七总皂甙组于伤后30min腹腔注射50g／L三七总皂甙（100mg／kg），伤后2，4h用50mg／kg，以后1次／d。剂量200mg/kg，连用12d。损伤组于伤后各时间点腹腔注射等体积生理盐水。观察比较治疗后不同时间大鼠行为评分、斜板试验、组织学检查及脊髓神经细胞凋亡指数变化。 结果：64只SD大鼠全部纳入结果分析。①三七总皂甙组和损伤组大鼠在7d时行为评分分别为2．50&;#177;0．53、1．38&;#177;0．74，14d时分别为3．25&;#177;0．89、1．75&;#177;0．71，两组比较差异有显著性（t=-3．473，-3．742，P〈0．05）。②三七总皂甙组与损伤组1，3，7，14d各时间点斜板最大角度差异均有显著性（t=-4．081，-4．235，-4．245，-4．687，P〈0．05）。③苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组。④损伤组大鼠脊髓损伤后1d在灰质及白质中均可见标记阳性细胞，损伤3d后凋亡指数渐增，7d达高峰；三七总皂甙组大鼠脊髓神经细胞凋亡指数较损伤组低，高峰提前，发生在损伤后3d，以后逐渐降低。两组比较差异均有显著性（t=4．196，2.627，7．732，3．547，P〈0．05）。 结论：三七总皂甙能抑制脊髓损伤神经细胞凋亡，对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后行为学变化及细胞凋亡的影响

目的:观察三七总皂甙对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用并分析其可能的作用途径。方法:实验于2005-06/11在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。实验共选取64只SD大鼠,随机分为损伤组和三七总皂甙组,每组32只,采用改良Allen’s重物打击法造成大鼠中度脊髓损伤,三七总皂甙组于伤后30min腹腔注射50g/L三七总皂甙(100mg/kg),伤后2,4h用50mg/kg,以后1次/d,剂量200mg/kg,连用12d。损伤组于伤后各时间点腹腔注射等体积生理盐水。观察比较治疗后不同时间大鼠行为评分、斜板试验、组织学检查及脊髓神经细胞凋亡指数变化。结果:64只SD大鼠全部纳入结果分析。①三七总皂甙组和损伤组大鼠在7d时行为评分分别为2.50±0.53、1.38±0.74,14d时分别为3.25±0.89、1.75±0.71,两组比较差异有显著性(t=-3.473,-3.742,P<0.05)。②三七总皂甙组与损伤组1,3,7,14d各时间点斜板最大角度差异均有显著性(t=-4.081,-4.235,-4.245,-4.687,P<0.05)。③苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组。④损伤组大鼠脊髓损伤后1d在灰质及白质中均可见标记阳性细胞,损伤3d后凋亡指数渐增,7d达高峰;三七总皂甙组大鼠脊髓神经细胞凋亡指数较损伤组低,高峰提前,发生在损伤后3d,以后逐渐降低。两组比较差异均有显著性(t=4.196,2.627,7.732,3.547,P<0.05)。结论:三七总皂甙能抑制脊髓损伤神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。     

复方丹参对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠脊髓损伤后应用复方丹参对细胞凋亡的影响以进一步探讨其对急性脊髓损伤治疗的可能性。方法：成年大鼠随机分为正常组、脊髓损伤后应用复方丹参组和应用生理盐水对照组，损伤1，2，4周后按改良的联合行为评分(combined behavioral score，CBS)方法评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后在不同时间点(8h，1，3，7，14，28d)处死。用苏木精-伊红(HE)染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变复方丹参组明显轻于生理盐水组。CBS评分在复方丹参组、生理盐水组7，14，28d时间点间比较差异有显著性意义(t=3．572，4．853，2．495，v=8；P&;lt;0．05或P&;lt;0．01)；复方丹参组、生理盐水组两组均发现凋亡细胞，且神经细胞凋亡指数在生理盐水组、复方丹参组8h，1，3，7，14，28d时间点间比较差异有显著性意义(t=2．533，1．201，3．342，3．027，2．953，2．282，v=18；P&;lt;0．05或P&;lt;0．01)。结论：复方丹参能抑制大鼠脊髓损伤后细胞凋亡，并对其继发性损害有多重的保护作用。     

Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响。方法：将48只大鼠制备为压迫性脊髓损伤模型。分为单纯损伤组24只及实验组(应用zVAD-fmk)24只。损伤后8h、3及7d对脊髓损伤区进行HE、细胞凋亡的检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化。同时采用BBB评分和斜板试验观察脊髓神经功能恢复情况。结果：2组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。实验组凋亡的细胞数减少。免疫组化检测Caspase-3表达降低，神经功能增强。结论：Caspase阻滞剂zVAD-fmk能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

NT-3对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的作用

【目的】研究神经营养素-3（NT-3）对大鼠皮质脊髓束横断后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的影响及意义。【方法】健康Sprague-Dawley大鼠100只,分为损伤对照组（C组）和损伤NT_3注射组（NT-3组）。各组内分别行BBB评分、神经元中丝蛋白（NF）染色及RT—PCR检测Bax和Bcl-2基因表达的变化。【结果】①损伤后C组和NT-3组Bax及Bcl-2基因转录水平升高;②NT-3组与损伤对照组相比Bax基因转录水平下降而Bcl-2基因转录水平升高;③NT-3组NF平均灰度值小于C组。【结论】NT-3可能通过影响凋亡基因Bax和Bcl-2表达的变化对脊髓损伤起保护作用及修复促进作用。     

胞磷胆碱对大鼠脊髓损伤的神经保护性作用

目的:观察胞磷胆碱对大鼠脊髓损伤(SCI)的神经保护作用。方法:成年SD大鼠72只随机分为对照组、甲基强的松龙(MP)组、胞磷胆碱组及联合组,各组18只;造模后即刻腹腔注射给药1次,对照组给予等量生理盐水,MP组给予30mg/kg MP,胞磷胆碱组给予40mg/kg胞磷胆碱,联合组给予30mg/kg MP及40mg/kg胞磷胆碱;伤后8、24及72h每组各处死6只大鼠取材;HE染色观察脊髓组织的病理学变化,免疫组织化学方法观察半胱天冬氨酸酶(Caspase)-3和环氧化酶(COX)-2表达变化情况,DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡。结果:与对照组相比,MP组、胞磷胆碱组及联合组脊髓组织病理学改变明显减轻,Caspase-3和COX-2表达降低(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05),MP组、胞磷胆碱组及联合组各组之间差异无统计学意义。结论:胞磷胆碱对大鼠SCI有神经保护性作用,与MP疗效相似,两者的联合应用与单独用药相比未见明显优势。     

依达拉奉治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨依达拉奉(必存)对大鼠脊髓损伤细胞的保护作用。方法:采用Allen法将32只SD大鼠制成脊髓中度损伤模型,随机分为必存组和对照组各16只,分别给予必存及生理盐水治疗,比较治疗前及治疗后6周2组大鼠斜板最大角度和神经功能恢复率。结果:从伤后第2和3周起,必存组斜板最大角度和神经功能恢复率均较对照组明显提高(P<0.01)。结论:必存对大鼠脊髓损伤细胞具有保护作用。     

大鼠脊髓损伤后勿动蛋白受体的动态表达

目的观察大鼠脊髓损伤后勿动蛋白受体(NgR)在脊髓组织中的动态表达变化。方法108 只Sprague-Dawley 大鼠随机分成正常组、假手术组和模型组,每组36 只,其中模型组采用改良Allen 法造模。3 组分别于干预后24 h、3 d、7 d、14 d 处死大鼠,每组9 只,以免疫组化及Western blotting 检测各组大鼠脊髓组织中NgR表达的变化,以荧光定量PCR检测NgR mRNA表达变化。结果正常组、假手术组各时间点NgR表达无明显变化(P>0.05)。模型组在损伤后24 h NgR及其mRNA表达较低,3 d 后下降至最低,7 d 后迅速上升达到高峰,14 d 时有所下降。与正常组比较,模型组在损伤后各时间点,NgR免疫组化及Western blotting蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组在损伤后各时间点,NgR mRNA表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠脊髓损伤后,NgR及其mRNA表达均在7 d 时上升至峰值,并较长时间保持高水平表达。这可能是造成脊髓损伤后轴突再生困难的重要原因之一。     

脊髓损伤后对大鼠骨质的影响

选用36只Wistar大鼠，随机分为实验组及假手术组，每组18只。实验组切断脊髓。每组于手术后1、2、3个月各处死6只大鼠，测量血清Ca，P，AKP含量，并测定胫骨上段BMC及BD。结果表明，在脊髓损伤后大鼠血清AKP明显增高（P＜0．05），Ca，P变化不明显，实验组与假手术组比较差异有显著性（P＜0．05），说明脊髓损伤后大鼠体内骨转化增高，骨质明显下降。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠脊髓急性损伤细胞凋亡和bFGF变化的影响

目的 应用大剂量甲基强的松龙(MP)干预急性大鼠脊髓损伤，以探讨其对神经细胞凋亡和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法 采用改良Allen氏WD法制造急性脊髓损伤(ASCI)模型，时104只雌性wister大白鼠随机分为A、B、C三个组，其中A为细胞凋亡组，B为bc1-2组，C为bFGF组。每组又分为两个亚组：大剂量MP治疗组和生理盐水组。术后d2、d5、d28取损伤部位脊髓组织做以下检测：①HE染色进行形态学观察；②TUNEL法检测凋亡细胞比例；③免疫组化检测bc1-2基因蛋白和bFGF。结果 所有动物HE染色组织形态学观察和TUNEL法均证实有凋亡现象的存在，d2开始出现，d5达高峰，d28开始下降；应用大剂量MP可以减少脊髓组织神经细胞发生凋亡的比例；在各个时间点上，大剂量MP可以显著地提高bc1-2和bFGF蛋白的表达。结论 大剂量MP可以通过提高bc1-2和bFGF的表达，来发挥抑制ASCI神经细胞凋亡和营养神经细胞的作用，从而减轻了ASCI后的继发性损害程度。     

神经营养素-3对大鼠脊髓损伤后caspase-3基因表达的影响

【目的】研究神经营养素-3(NT-3)对大鼠脊髓损伤后caspase-3基因表达的影响,探讨NT-3在脊髓损伤修复中的作用。【方法】SD大鼠80只,分为生理盐水对照组和NT-3组。用RT-PCR分析方法观察两组caspase-3基因的表达情况。【结果】①脊髓损伤后caspase-3基因mRNA转录水平升高;②NT-3组与生理盐水对照组相比caspase-3基因转录水平下降(P<0.05)。【结论】NT-3抑制caspase-3基因的表达,可能是促进神经纤维损伤后再生的一个重要因素。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Bcl-2、Bax和Bcl-xl表达的影响

目的：探讨二甲胺四环素（minocycline）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡和相关因子表达的影响及对损伤脊髓神经功能的保护作用。方法：36 只SD大鼠分为4组，空白组只暴露脊髓，不损伤，A、B组及损伤组建立脊髓损伤模型。A、B组分别给予二甲胺四环素和甲基强的松龙腹腔内注射；损伤组和空白组腹腔内注射生理盐水。免疫组化法检测4组大鼠损伤脊髓神经细胞凋亡因子（Bcl-2 、Bcl-xl、 Bax）的表达； TUNEL 标记凋亡细胞。结果：A组的神经功能高于损伤组（P〈0.01），与B组差异无显著性意义；损伤组的凋亡阳性细胞多于A、B组（P〈0.05）；A组Bcl-2阳性表达细胞多于损伤组（P〈0.05），而Bcl-xl、 Bax表达与损伤组差异无显著性意义。结论：凋亡是脊髓损伤后神经细胞死亡的一种重要方式； 二甲胺四环素能上调Bcl-2的表达，改变Bcl-2/Bax的比值，从而抑制脊髓神经细胞凋亡，对损伤脊髓的神经功能有保护作用。