连接蛋白43和胶质纤维酸性蛋白在甘珀酸预处理的戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的：研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和连接蛋白43的形态学反应及其相互关系。方法：实验于2003-10／2004-06在解放军第四军医大学神经科学研究所进行。取24只大鼠分为生理盐水组、甘珀酸组、戊四氮组、甘珀酸 戊四氮组，应用免疫荧光组织化学双重标记显示胶质纤维酸性蛋白和连接蛋白43蛋白在前脑的表达及其相互关系。结果：甘珀酸 戊四氮组的大鼠癫痫发作的行为表现比戊四氮组显著加重，星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达也比戊四氮组明显升高，值得注意的是甘珀酸组的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达比生理盐水组明显升高。连接蛋白43在戊四氮引起的癫痫大鼠的大脑皮质、海马和杏仁核内增加，而甘珀酸预处理后的癫痫模型中连接蛋白43进一步增强。在连接蛋白43与胶质纤维酸性蛋白双标的切片上发现，阳性的星形胶质细胞双标，在甘珀酸预处理后的癫痫模型中胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞显著增加的同时连接蛋白43也明显增加。结论：在整体动物甘珀酸预处理可以导致癫痫发作增强，这可能与星形胶质细胞增生及其连接蛋白43表达升高有关。     

缝隙连接蛋白Cx43在SD大鼠电点燃癫痫模型中的表达

目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)在癫痫形成中的作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别造模。观察SD大鼠行为,记录脑电图。通过免疫蛋白印迹的方法检测Cx43在大鼠海马区的表达变化。通过药物对癫痫电点燃模型成模过程的干预来观察癫痫形成与缝隙连接蛋白间的关系。结果模型组大鼠出现癫痫发作。蛋白印迹显示Cx43的表达异常增高。药物干预的2组SD大鼠模型痫性发作滞后,发作频率降低,程度减轻,痫性脑电波波幅降低,蛋白印迹显示Cx43的表达增高受到抑制。结论缝隙连接蛋白是癫痫形成的物质基础。抑制Cx43的过度表达,减少异常缝隙连接的形成,癫痫形成也受到抑制,从而预防癫痫产生。     

侧脑室注射甘珀酸对扩散性抑制的影响

目的:探讨缝隙连接蛋白阻断剂甘珀酸(CBX)对扩散性抑制(SD)的影响。方法:SD大鼠30只,随机分为对照组、假手术组和CBX干预组各10只,后两者用高浓度KCl诱导大鼠皮质SD波,假手术组不给予CBX干预,CBX干预组给予5 ug/uL的CBX进行干预,用MS4000U生物信号采集分析系统对波幅、时程进行计算分析。结果:与假手术组比较,CBX干预组所记录到SD波波幅明显减小(P<0.05),SD波的阳性率降低(P<0.05),但SD波的时程无差异。结论:CBX对高浓度KCl诱导的皮质SD波有明显的抑制作用,提示缝隙连接在SD的发生发展过程中具有重要作用。     

缝隙连接蛋白Cx32与Cx43在癫痫发病中的作用

目的:探讨缝隙连接蛋白(Cx)与癫痫之间的关系.方法:采用免疫组织化学方法测定氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠癫痫发作后不同时间不同脑区Cx32与Cx43免疫阳性表达情况.结果:与对照组比较,致痫组大鼠海马区与皮层区Cx32和Cx43免疫阳性表达在癫痫发作1h后开始增强(Cx32免疫阳性细胞数分别为海马区16.62±4.51和皮层区14.85±3.30,均P＜0.05;Cx43免疫阳性细胞数分别为海马区18.26±4.03和皮层区18.65±4.51,均P＜0.01),24 h达到高峰(Cx32免疫阳性细胞数分别为海马区46.53±9.47和皮层区28.25±8.69,均P＜0.01;Cx43免疫阳性细胞数分别为海马区39.77±7.79和皮层区26.50±6.56,均P＜0.01),此后逐步下降.但至14 d Cx32海马区与皮层区免疫阳性细胞数分别为22.45±6.56和15.92±3.16,仍高于对照组(均P＜0.05),而Cx43在14 d的表达则有所不同:海马区免疫阳性细胞数17.54±3.77仍高于对照组(P＜0.01);皮层区表达则降至正常水平.致痫24 h时海马区Cx32和Cx43免疫阳性表达均明显高于同一时限的皮层区(均P＜0.05).结论:Cx32和Cx43参与了癫痫的发生与发展过程,反映了脑组织中神经元、星形胶质细胞之间的缝隙连接与癫痫发病机制密切相关.     

缝隙连接蛋白CX43在炎性镜像痛大鼠脊髓背角的表达

目的:探讨缝隙连接蛋白Cx43在炎性镜像痛大鼠脊髓背角的表达.方法:(1)行为学研究:鞘内置管成功的雄性SD大鼠24只,随机分为3组(n=8).CFA模型组:于大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl建立关节炎性痛模型,鞘内注射NS 10μl;CBX处理组:皮下注射CFA 50μa,鞘内注射缝隙连接阻滞剂甘珀酸(CBX)100μg(10μl);NS对照组:皮下注射NS50μl,鞘内注射NS 10μl.分别于CFA致炎前1d(基础值)和致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d每次鞘内注射后2h测定双侧的热缩足反射潜伏期(PWTL).(2)形态学研究:雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5):NS生理盐水组、C1d组、C3d组和C7d组.分别在CFA致炎后相应时间点取腰段脊髓行Cx43免疫组织化学染色分析,测定双侧脊髓背角积分光密度值.结果:(1)单侧踝关节外侧皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d诱导出双侧的热痛觉过敏,呈现明显的镜像痛和域外痛现象(P＜0.01或0.05),鞘内注射CBX可以在炎性痛的不同阶段逆转上述改变.(2)单侧CFA致炎后,大鼠脊髓双侧Cx43的表达与对照组相比均显著增加(P＜0.01或0.05),主要集中于Ⅰ～Ⅱ层和Ⅹ层,其时程变化与行为学变化基本一致.结论:大鼠单侧CFA致炎诱导的关节炎性痛模型,具有显著的镜像痛特征.脊髓双侧背角Cx43表达增加,鞘内应用缝隙连接阻滞剂可以逆转镜像痛现象,提示脊髓缝隙连接可能在疼痛中枢敏感化中起重要作用.     

连接蛋白43和胶质纤维酸性蛋白在甘珀酸预处理的戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的:研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和连接蛋白43的形态学反应及其相互关系。方法:实验于2003-10/2004-06在解放军第四军医大学神经科学研究所进行。取24只大鼠分为生理盐水组、甘珀酸组、戊四氮组、甘珀酸+戊四氮组,应用免疫荧光组织化学双重标记显示胶质纤维酸性蛋白和连接蛋白43蛋白在前脑的表达及其相互关系。结果:甘珀酸+戊四氮组的大鼠癫痫发作的行为表现比戊四氮组显著加重,星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达也比戊四氮组明显升高,值得注意的是甘珀酸组的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达比生理盐水组明显升高。连接蛋白43在戊四氮引起的癫痫大鼠的大脑皮质、海马和杏仁核内增加,而甘珀酸预处理后的癫痫模型中连接蛋白43进一步增强。在连接蛋白43与胶质纤维酸性蛋白双标的切片上发现,阳性的星形胶质细胞双标,在甘珀酸预处理后的癫痫模型中胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞显著增加的同时连接蛋白43也明显增加。结论:在整体动物甘珀酸预处理可以导致癫痫发作增强,这可能与星形胶质细胞增生及其连接蛋白43表达升高有关。     

难治性颞叶癫痫病灶中Cx32与Cx43表达的研究

目的分析难治性癫痫患者脑组织中缝隙连接蛋白32（Cx32）、连接蛋白43（Cx43）表达,探讨缝隙连接在癫痫发生发展中的作用。方法对30例难治性癫痫患者（癫痫灶组）进行皮质电图监测下手术切除痫灶,采用免疫组化染色法（二步法）检测癫痫灶及10例周边脑组织（周边脑组织组）Cx32、Cx43表达,并进行统计学分析。结果癫痫灶组及周边脑组织组Cx43、Cx32均有表达,Cx43在癫痫灶组中表达明显增多（U=4．066,P〈0．001）;而癫痫灶组及周边脑组织组中Cx32的表达比较差别无统计学意义（U=1．866,P〉0．05）。结论缝隙连接在癫痫发生、发展中有重要作用,长期癫痫发作可造成神经元凋亡。     

缝隙连接蛋白43在阿尔茨海默病中的研究进展

星型胶质细胞的功能异常与多种神经退行性疾病的发生发展关系密切,缝隙连接的异常是其中重要的机制之一。缝隙连接主要是由缝隙连接蛋白（connexin,Cx）构成,是相邻细胞间代谢和离子耦合以及电传递的主要结构。Cx43和Cx30是在脑中含量最多的Cx亚型,其中又以Cx43为主。Cx43在脑中含量或分布与阿尔兹海默病的发生发展关系密切。本文就以Cx43与阿尔兹海默病的关系进行综述。     

缝隙连接蛋白43在人食管胃连接部的表达及意义

目的 探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在人食管胃连接部的表达水平及临床意义.方法 选取高位食管中段癌患者8例,在行根治性食管癌切除食管胃吻合术时切除食管胃连接部,分离出食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维,以及部分下段食管环行肌和胃底环行肌,应用Western blot法检测Cx43在各环行平滑肌中的表达水平.结果 下段食管环行肌和胃底环行肌之间Cx43的表达水平没有差异(153.77±13.54与139.34±16.54,P>0.05),套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞之间Cx43表达量也没有差异(259.01±16.70与303.32±22.02,P>0.05);但套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞Cx43的表达水平高于下段食管和胃底环行肌的表达水平(P<0.05).结论 人食管下括约肌的套索纤维、钩状纤维以及下段食管和胃底环行肌中Cx43的表达水平不同.     

沉默穴位局部缝隙连接蛋白43的表达对针刺促大鼠胚泡着床效应的影响

目的观察穴位局部沉默缝隙连接蛋白(Cx43)的表达对针刺促大鼠胚泡着床效应的影响,探讨Cx43与针刺效应之间的相关性。 方法将孕鼠随机分为正常对照组、模型组、针刺组、干扰对照组和干扰组。除正常对照组外,其余4组以米非司酮造成大鼠胚泡着床障碍模型。干扰组在各针刺穴位局部注射P-Cx43-shRNA(1)干扰质粒;干扰对照组以同样方法注射P-con-shRNA对照质粒。针刺组、干扰对照组和干扰组予以7 d针刺治疗。妊娠第8天观察各组大鼠着床胚泡质量及其发育、妊娠率和平均着床胚泡数的差异。 结果①干扰组“足三里”穴位处Cx43 mRNA及蛋白水平均低于针刺组,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;干扰对照组与针刺组相比,差异无统计学意义（P&rt;0.05）;②与正常对照组相比,模型组和干扰组中子宫着床胚泡数较少,着床胚泡质量差,胚泡明显较小,且大小不均一,分布不均匀,血供较差。针刺组和干扰对照组大鼠胚泡着床情况较模型组明显改善;③正常对照组、模型组、针刺组、干扰对照组和干扰组的妊娠率分别为100%, 50%, 75%, 75%, 50%,但各组间的差异无统计学意义;④模型组、干扰组平均着床胚泡数均较正常对照组低,差异具有统计学意义（P<0.01）;与针刺组相比,干扰组平均着床胚泡数较少,差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论针刺能明显改善胚泡着床障碍大鼠的胚泡着床质量及其发育,并有提高其妊娠率和平均着床胚泡数的趋势。穴位局部注射Cx43特异性shRNA真核表达载体有效地沉默穴位局部Cx43的表达,并显著影响针刺促胚泡着床效应,说明Cx43在针刺效应中发挥着重要的作用。     

美托洛尔对心力衰竭大鼠连接蛋白43表达及分布模式影响的研究

目的 观察不同剂量美托洛尔(Meto)对心力衰竭大鼠心肌连接蛋白43 (Cx43)表达及分布的影响,探讨其心脏保护机制.方法 SD大鼠100只随机(随机数字法)分为5组,每组20只:(1)假手术组(sham组);(2)心力衰竭模型组(HF组);(3) Meto治疗小剂量组[Meto A组,1.25mg/(k·d)];(4) Meto治疗中剂量组[Meto B组,5 mg/ (kg· d)]; (5)Meto治疗大剂量组[Meto C,20mg/ (kg·d)].缩窄大鼠腹主动脉建立心衰模型,术后第4周开始给药至第8周,术后第8周取材免疫组化观察大鼠心肌Cx43表达量及分布模式,Western blot检测心肌总Cx43 (T-Cx43)、磷酸化Cx43 (P-Cx43)表达水平.结果 (1) HF组大鼠与Sham组比较,心脏T-Cx43分布紊乱明显,Cx43mRNA表达及P-Cx43、T-Cx43蛋白表达显著增加;MetoC组虽较Meto A、MetoB组进一步显著改善HF大鼠心脏T-Cx43分布紊乱情况,但显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43表达(P＜0.01);Meto A、MetoB组未显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43蛋白的表达.(2)HF组大鼠中P-Cx43表达量显著高于sham组(P＜0.叭),随Meto治疗剂量的逐级增加各治疗组P-Cx43表达量较HF组逐级降低(MetoAvs.HF,P＜0.05;MetoBvs.HF,P＜0.01;MetoCvs.HF,P＜0.01),且Meto治疗组各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 Meto可通过抑制心肌Cx43磷酸化及改善其分布紊乱而发挥心脏保护作用.     

卡维地洛对连接蛋白43的分布及数量的影响

目的观察卡维地洛对心肌梗死边缘区Cx43分布的影响。方法36只家兔随机分为梗死组,卡维地洛组,假手术组,每组12只。梗死组和卡维地洛组开胸结扎冠状动脉左前降支,假手术组不结扎。所有家兔普通饲料喂养,卡维地洛组另给予卡维地洛5mg·kg^-1·d^-1。12周后观察：（1）共聚焦激光显微镜观察梗死边缘区Cx43的分布,（2）Werstem Blot检查梗死边缘区Cx43的蛋白表达。结果（1）共聚焦激光显微镜下观察心肌梗死组Cx43荧光斑的形态相对粗乱,呈现不均一分布;卡维地洛组Cx43的荧光分布改变较少,不均一分布的程度较心肌梗死组减轻;心梗组的Cx43相对密度显著低于卡维地洛组;[（0．16±0．06）％vs（0．32±0．11）％,P〈0．05];（2）Werstem Blot检查梗死组Cx43及卡维地洛组较假手术组减少,但卡维地洛组的Cx43表达较心肌梗死组增多[（0．89±0．28）vs（0．67±0．32）,P〈0．05]。结论卡维地洛可以引起Cx43的再分布,增加心肌梗死后Cx43蛋白的表达,这可能是其较减少心肌梗死后室性心律失常的原因之一。     

褪黑素对毛果芸香碱致痫大鼠行为和海马Fos蛋白表达的影响

目的:探讨褪黑素对毛果芸香碱致痫大鼠的抗惊厥作用及其作用特点。方法:实验于2003-08/12在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室完成。建立毛果芸香碱致痫大鼠模型,依据褪黑素不同的给药时间、给药剂量进行分组,观察褪黑素对癫痫大鼠行为学和海马Fos蛋白表达的影响。结果:17:00给药时,褪黑素10～50mg/kg腹腔注射组均可明显延长毛果芸香碱致痫大鼠首次痫性发作出现的潜伏期(P<0.01),并可显著抑制海马Fos蛋白的表达P<0.01),上述作用尤以褪黑素25mg/kg(腹腔注射组明显。结论:褪黑素在毛果芸香碱致痫大鼠模型中具有抗惊厥作用,且这种作用呈一定的剂量、时间依赖性。     

1,6-二磷酸果糖对脑白质损害大鼠皮质生长相关蛋白43表达的影响

目的:探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)对脑白质损害(WMD)大鼠皮质生长相关蛋白43(growthassociation protein43,GAP-43)表达的影响。方法:选用2日龄新生大鼠50只,随机分为对照组(12只)、FDP组(13只)、生理盐水组(12只)及WMD组(13只),后3组通过结扎右侧颈总动脉,吸入氧体积浓度为6%的氮氧混合气,制作新生大鼠WMD模型,分别进行相应的实验干预。损伤后第7天和14天时将大鼠处死,取脑组织应用Western Blots方法检测皮质GAP-43的表达,损伤后30d进行感觉运动功能检测,以观察治疗效果。结果:FDP组感觉运动功能较WMD组和生理盐水组有明显改善(P<0.01或P<0.05)。WMD组、生理盐水组和FDP组皮质GAP-43的表达在干预后7d时高于对照组,在14d时FDP组高于WMD组、生理盐组和对照组(P<0.01)。结论:FDP可以上调WMD大鼠皮质GAP-43表达,改善WMD大鼠的脑功能。     

神经肽Y、丹参多酚酸盐对癫痫大鼠海马FOS蛋白表达的影响及作用探讨

目的探讨NPY及丹参多酚酸盐干预对大鼠海马FOS蛋白的表达影响研究及作用探讨。方法采用匹鲁卡品诱发癫痫状态模型,随机分为丹参多酚酸盐干预组、NPY干预组、盐水干预组和对照组,观察各组大鼠的行为学改变,用免疫组织化学法标记显示各组癫痫发作脑内海马FOS蛋白的表达变化。结果在海马门区、CA3区、CA1区有FOS阳性细胞表达,干预方法不同,海马FOS阳性细胞数表达不同,NS、NPY、丹参多酚酸盐干预组FOS阳性细胞数高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论丹参多酚酸盐和NPY可能通过某种机制抑制了FOS的表达,在一定程度上起到了抗癫痫作用。     

电刺激对海马表达Nogo-A蛋白的影响

目的 探讨慢性电刺激对大鼠海马表达Nogo=A蛋白表达的影响，以了解海马Nogo-A蛋白升高与癫痫发生的因果关系。方法 70只大鼠随机分为5组，即4个电刺激组，1个假电刺激组，分别电刺激1，3，6，9d，对海马进行免疫组织化学染色和蛋白印迹实验，检测海马表达Nogo-A蛋白的情况。结果 假电刺激组14只大鼠行为均无异常；电刺激1d与3d组大鼠亦未发生抽搐；电刺激6d组有3只发生抽搐，电刺激9d组在刺激6d时，有1只发生抽搐，刺激9d时有13只发生抽搐。同时，免疫组织化学实验发现，在电刺激3，6，9d后，海马Nogo-A蛋白表达量与假电刺激组相比均有显著升高（P〈0．05或P〈0．01），其升高趋势呈电刺激时间的依赖性（r=0．775），蛋白印迹实验结果基本相同。结论 海马Nogo-A蛋白表达的量与电刺激的时间呈正相关，而在发生癫痫之前大鼠海马Nogo-A蛋白表达已经升高。     

急性心房颤动犬缝隙连接蛋白40和43重构及胺碘酮的干预作用

目的 采用快速心房起搏致犬急性心房颤动(简称房颤)模型,观察心房肌缝隙连接蛋白40和43(Cx40、Cx43)含量的改变以及胺碘酮干预的效果.方法 18只成年杂种犬,随机等分为三组,即正常对照组、急性房颤组、胺碘酮组.快速心房起搏,对照组不起搏,胺碘酮组先静脉注射胺碘酮负荷量3 mg/kg,10～15 min内注入,后以维持量1.5 mg/kg静脉滴注进行干预,另两组给予等容量的生理盐水.连续刺激并且房颤8 h后,取右心耳组织,用Western blot 检测Cx40和Cx43的含量,用Lucifer Yellow划痕标记荧光传输技术在荧光显微镜上观察细胞缝隙连接通讯状态.结果 急性房颤组心房肌组织Cx40和Cx43含量较对照组降低(P均<0.05),胺碘酮组Cx40、Cx43含量较正常对照组低,差异有显著性(P均<0.05),较房颤组含量差异无显著性(P>0.05),胺碘酮可以改善急性房颤时细胞缝隙连接通讯的传导.结论 急性房颤犬缝隙连接蛋白40和43发生了结构重构,从而影响细胞间通讯,胺碘酮可以改善细胞间电信号传导,但不能改善缝隙连接结构重构.     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马的表达

目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马中的表达情况及其与神经元凋亡之间的关系。方法：选取成年雄性Wistar大鼠88只，随机分为脑淋巴引流阻断组40只、假手术组40只及正常对照组8只。脑淋巴引流阻断组和假手术组分为术后1，3，5，7，14d5个时间点，每个时间点8只。脑淋巴引流阻断组建立淋巴滞留性脑病动物模型，在损伤后各时间点取颞顶皮质、海马区脑组织。假手术组只分离和暴露淋巴结，但不结扎淋巴管，亦不摘除淋巴结。用半定量反转录-聚合酶链反应方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA的表达情况。结果 88只大鼠均进入结果分析。①在颞顶皮质，Caspase3mRNA在淋巴阻塞后3d内表达上调，以第1天表达最高，淋巴阻塞后3d内Caspase 3mRNA表达比假手术组及对照组高，且有统计学意义（F=29．892，P=0．001〈0．01）。淋巴阻塞3d后表达接近正常对照及假手术组。对照组与假手术组之间差异无统计学意义。②在海马，Caspase 3mRNA较颞顶皮质表达上调更明显，以第1天表达最高，淋巴阻塞后5d内Caspase-3mRNA表达比假手术组及对照组高，差异有统计学意义（P〈0．05），5d后表达接近正常对照及假手术组。结论：在淋巴滞留性脑病大鼠模型中神经元凋亡的发生可能与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的激活有关。