人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞Syntrophin的表达变化

目的观察人颞叶内侧癫痫(MTLE)海马组织星形胶质细胞syntrophin的表达变化。方法 2015年4月至2016年7月,17例癫痫患者手术切除的海马组织,依据苏木素-伊红(HE)染色及胶质原纤维酸性蛋白、神经元核抗原免疫组织化学染色结果,分为MTLE组13例和非MTLE组4例。免疫荧光双重组织化学法及免疫荧光组织化学法观察syntrophin的表达。结果 MTLE组星形胶质细胞大量增生,神经元明显减少。syntrophin在星形胶质细胞膜及足突处表达。与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin在血管周围星形胶质细胞足突处分布减少,在其他部位分布增加。图像分析显示,与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin蛋白量显著增多(t=5.421,P0.001)。结论海马组织syntrophin在星形胶质细胞上的分布及其整体表达变化可能与MTLE发生相关。     

细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1 基因表达的影响

目的探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构,水通道蛋白(AQP)1、AQP4 及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,加CytD 0.05 μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml、0.40μg/ml、0.80 μg/ml 和1.00 μg/ml 共培养2 h、12 h 和24 h。MTT法检测细胞增殖情况;鬼笔环肽联合Hoechst 33342 套染后激光共聚焦显微镜下观察共培养2 h 后细胞骨架重构情况;RT-PCR法检测共培养2 h 时AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达水平。结果细胞生存率随CytD 浓度升高和作用时间延长而减少。CytD 使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生解聚、弯曲,但极性未失。CytD 0.05μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml 和0.40 μg/ml 上调AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达。结论适当浓度CytD可以重建星形胶质细胞骨架,上调大鼠脊髓星形胶质细胞AQP1、AQP4和Kir4.1基因表达。     

颞叶致痫脑肿瘤的MRI影像分析

目的 观察和分析颞叶致痫脑肿瘤患者的临床、肿瘤病理类型和MRI表现.材料与方法 回顾性分析39例颞叶致痫肿瘤的发病年龄、病程与癫痫类型等临床资料、MRI表现、累及部位及病理类型.结果 39例颞叶肿瘤患者的癫痫发病年龄平均9.4岁,36例(92.3％)为儿童期起病;平均癫痫病程98.8个月.以复杂部分性发作居多,共29例(74.4％),其中11例伴全身性强直-震挛发作(GTCS),2例伴失神发作;GTCS和强直性发作分别为5例(12.8％)和2例(5.1％);单纯部分性发作3例(7.7％).颞叶肿瘤病理类型:节细胞胶质瘤24例(61.5％),星形细胞瘤5例(12.8％),少枝胶质细胞瘤和发育不良性神经上皮瘤各3例(7.7％),其他类型肿瘤4例(10.3％).肿瘤位于颢叶内侧和外侧分别为28例和11例;颞叶内侧肿瘤累及海马者(71.4％)显著高于颞叶外侧肿瘤(9.1％).MRI确定病灶为囊实性、实性为主和囊性为主者分别占46.2％、30.8％和23.1％; MRI增强扫描64.1％的病灶无强化.除胚胎发育不良性神经上皮瘤(DNET)位于皮层内,具有多小囊性特征外,其他各类肿瘤MRI表现缺少特异性.结论 颞叶肿瘤性癫痫好发于儿童期,多为累及颞叶内侧或外侧皮层,且为生长缓慢的小肿瘤,其中尤以节细胞胶质瘤居多.癫痫发作类型以复杂部分性发作伴有或不伴有全身强直震挛发作最为常见.     

海马横切术对顽固性颞叶内侧型癫痫患者术后癫痫的疗效分析

目的研究海马横切术对顽固性颞叶内侧型癫痫(MTLE)患者术后癫痫控制有效率及认知功能的影响。方法选择2017年2月～2018年3月我院顽固性MTLE患者68例,依照治疗方案不同分为观察组和对照组各34例。对照组行前颞叶切除术治疗,观察组行海马横切术治疗,比较两组术后并发症发生率、随访1年癫痫控制有效率,评估韦氏成人智力量表评分:操作智商(PIQ)、语言智商(VIQ)、总智商(FIQ)。结果随访1年观察组术后癫痫控制总有效率为94.12%,高于对照组的70.59%,差异有统计学意义(P0.05);术后1年观察组VIQ、PIQ、FIQ评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);观察组术后并发症发生率为2.94%,与对照组的11.76%比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论海马横切术治疗顽固性MTLE患者临床效果显著,能提高术后癫痫控制有效率,改善认知功能,安全性较高。     

星形胶质细胞水通道蛋白-4在高渗液中的表达变化

目的研究高渗培养液对体外培养星形胶质细胞表达水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP4)的影响及AQP4在高渗性脱水中的作用.方法取生后2 d的Wistar大鼠的大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,分别予不同程度的高渗培养液作用于星形胶质细胞,建立星形胶质细胞对高渗液反应的实验模型.通过形态学观察、PT-PCR、免疫细胞化学、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及图像分析等方法,研究体外星形胶质细胞对高渗液的反应及AQP4 mRNA和蛋白的表达变化.结果高渗组各时相点吸光度A值均低于对照组(P＜0.05),星形胶质细胞表现出特征性的细胞脱水形态学变化,AQP4mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P＜0.01),尤以作用12 h后最明显,而且AQP4 mRNA和蛋白的表达呈显著正相关(rs＞0.8485,Ps＜0.01).结论在高渗状态下,AQP4 mRNA和蛋白的表达增强,AQP4表达上调在高渗性脱水的早期(＜12 h)可能起到重要的代偿作用.     

动脉自旋标记技术在内侧颞叶癫痫中的应用进展

内侧颞叶癫痫（MTLE）为致痫灶起源于内侧颞叶并可伴有海马硬化的一类癫痫,随着新技术的开发与应用,影像学检查在改善其临床诊断与治疗中发挥着越来越大的作用。动脉自旋标记（ASL）是一种无创的MR成像技术。本文对ASL在MTLE相关基础研究与临床应用中的进展进行综述。     

颞叶癫痫儿童灰质异常脑区与神经心理学测验的关系及意义

[目的]评估儿童颞叶癫痫（ TLE）临床表现和神经心理学测验成绩与局部脑萎缩的相关性.[方法]症状性TLE患儿14例（海马萎缩所致中颞叶癫痫 9例,颞叶新皮质损伤所致TLE 5例）,健康对照儿童14名;中颞叶癫痫（ MTLE）成人及其对照各9例.所有入组对象进行脑MRI获取T1结构像,用像素为基础的形态测定法分析图像.所有儿童进行综合神经心理学测验.[结果]TLE患儿同侧海马和海马外周区灰质体积显著减小,灰质体积减小与神经心理学测验成绩显著相关（P〈0.05）.单侧海马萎缩的MTLE患儿中,癫痫发作区域同侧的海马灰质体积显著减小,同侧扣带和对侧额中回皮质萎缩,皮质萎缩程度及范围较同类成人患者小.[结论]与成人MTLE患者相似,儿童MTLE与海马和海马外周的细胞减少有关;儿童TLE灰质萎缩的程度和范围较成人患者小,仅限于额叶区;中颞叶和额叶区灰质体积的减小与神经心理学测验成绩显著相关;TLE患儿的认知或行为障碍是神经网络损伤的结果.     

低渗液对AQP4蛋白在体外培养星形胶质细胞中的表达变化

目的　研究低渗培养液对星形胶质细胞AQP4蛋白的表达变化 ,并探讨其在脑水肿中的作用机制。方法　取出生后 2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养 ,分别予不同程度的低渗培养液作用于星形胶质细胞 ,建立星形胶质细胞对低渗压反应的实验模型。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞活性 ,采用免疫细胞化学法检测AQP4蛋白的表达 ,通过光镜观察低渗液对星形胶质细胞形态学影响。结果　体外培养的星形胶质细胞在不同程度的低渗培养液作用 3、6、12、2 4h后 ,各时相点的AQP4蛋白表达水平均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而且与作用时间和低渗压的程度密切相关 ;在光镜下 ,星形胶质细胞出现典型的细胞水肿形态学改变 ,其活性明显下降。结论　低渗液可导致星形胶质细胞水肿 ,AQP4蛋白表达增强 ,而且AQP4表达上调与低渗压的程度和作用时间有关 ,抑制AQP4的表达可能为脑水肿的治疗提供新的理论依据。     

水通道蛋白-4在正常兔脊髓内的分布研究

目的明确正常兔脊髓水通道蛋白-4（AQP4）的表达分布规律，为进一步研究脊髓组织中水分子的运输及平衡调节提供理论依据。方法采用免疫组化技术检测AQP4在兔脊髓内的表达分布。结果AQP4在灰质的分布明显多于白质，主要为神经胶质细胞的细胞膜着色，脊髓中央管周围、软脊膜以及血管周围呈极性分布，邻近蛛网膜下腔、毛细血管内皮细胞和神经元的胶质细胞突起表达非常丰富。结论AQP4在兔脊髓内具有广泛的表达并且呈极性分布，主要集中在与水分子转运关系密切的部位，表明AQP4在脊髓内主要参与脊髓水代谢的调节。     

谷氨酸引起培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4表达动态变化

目的研究谷氨酸是否引起培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达变化。方法利用传代培养至10d左右的大鼠星形胶质细胞,给予1mmol/LL-谷氨酸钠,分别作用1h、3h、6h、12h、24h、48h后进行细胞形态学观察、GFAP免疫化学染色及荧光定量PCR检测AQP4mRNA表达变化。结果谷氨酸作用1h后星形胶质细胞出现肿胀并随着作用时间延长肿胀持续,AQP4mRNA3h时开始出现表达降低(P0.05),后随谷氨酸作用时间延长先下调后上调,12h达最低(P0.01),48h升至高于正常(P0.05)。结论AQP4可能在谷氨酸引起星形胶质细胞肿胀发生发展中发挥作用。     

Ultrastructural localization of aquaporin 4 and alpha1-syntrophin in the vascular feet of brain astrocytes

Aquaporin 4 (AQP4) is a recently discovered membrane bound water-selective channel and has been described at the light microscopic level to be predominantly expressed in the astrocytes of the brain, especially at the perivascular astrocyte endfoot processes. Alpha1-syntrophin, a member of dystrophin-associated protein, has also been reported at the light microscopic to be expressed level in the same site of astrocytes as AQP4 and interacts with other molecules through its PDZ domain. AQP4 expression has been reported to be absent at the sarcolemma and the perivascular astrocyte endfoot processes of alpha1-syntrophin knockout mice. Based on these observations, the molecular association between AQP4 and alpha1-syntrophin could be speculated. To test this hypothesis, we investigated the ultrasturctural localization of AQP4 and alpha1-syntrophin in the brain astrocytes by using double immunogold labeled electron microscopy. The results showed that AQP4 and alpha1-syntrophin colocalized frequently at the astrocyte membrane, especially at the perivascular astrocyte endfoot processes and suggested the presence of linkage between AQP4 and alpha1-syntrophin at the astrocyte plasma membrane.     

星形胶质细胞在多发性硬化中的重新审视

在多发性硬化(MS)斑块的组成细胞类型中,星形胶质细胞被认为在其发病机理中起很小的作用。传统认为,星形胶质细胞间接导致瘢痕形成,在病变形成或修复中几乎不起作用。然而,近来对脱髓鞘性视神经脊髓炎(NMO)的高度关注发现,抗水通道蛋白-4的体液免疫反应引起的星形胶质细胞原发性损害,导致NMO首次被证实为髓鞘性疾病。NMO这一发现促使我们重新审视活动性损害的MS患者的数据和资料。我们的重新评估清楚显示血管周围星形胶质细胞终足和邻近脑实质星形胶质细胞的早期损伤,但难以评估这种损伤是否为急性损伤时伴发的脑水肿和炎症的主要原因。由于恢复中病灶显示髓鞘再生,以及覆盖在血管周围的星形胶质细胞的完整性存在缺陷,星形胶质细胞的损害持续时间长。本研究和相关文献均发现,星形胶质细胞在MS变化发展中所起复杂作用取决于病变时期和病变地形的变化。与星形胶质细胞的抑制性作用不同的是,越来越多的充足证据表明,星形胶质细胞积极参与病变的发展与修复。我们建议,因星形胶质细胞在MS病变中明确的早期选择性作用,星形胶质细胞也许可作为MS治疗的切入点。     

Aquaporin-4-binding autoantibodies in patients with neuromyelitis optica impair glutamate transport by down-regulating EAAT2

Neuromyelitis optica (NMO)-immunoglobulin G (IgG) is a clinically validated serum biomarker that distinguishes relapsing central nervous system (CNS) inflammatory demyelinating disorders related to NMO from multiple sclerosis. This autoantibody targets astrocytic aquaporin-4 (AQP4) water channels. Clinical, radiological, and immunopathological data suggest that NMO-IgG might be pathogenic. Characteristic CNS lesions exhibit selective depletion of AQP4, with and without associated myelin loss; focal vasculocentric deposits of IgG, IgM, and complement; prominent edema; and inflammation. The effect of NMO-IgG on astrocytes has not been studied. In this study, we demonstrate that exposure to NMO patient serum and active complement compromises the membrane integrity of CNS-derived astrocytes. Without complement, astrocytic membranes remain intact, but AQP4 is endocytosed with concomitant loss of Na⁺-dependent glutamate transport and loss of the excitatory amino acid transporter 2 (EAAT2) . Our data suggest that EAAT2 and AQP4 exist in astrocytic membranes as a macromolecular complex. Transport-competent EAAT2 protein is up-regulated in differentiating astrocyte progenitors and in nonneural cells expressing AQP4 transgenically. Marked reduction of EAAT2 in AQP4-deficient regions of NMO patient spinal cord lesions supports our immunocytochemical and immunoprecipitation data. Thus, binding of NMO-IgG to astrocytic AQP4 initiates several potentially neuropathogenic mechanisms: complement activation, AQP4 and EAAT2 down-regulation, and disruption of glutamate homeostasis.     

低渗液对星形胶质细胞水通道蛋白-9表达的影响

目的探讨体外培养星形胶质细胞在低渗状态下水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)表达的变化特点及其所起的作用。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和低渗组(又分268、254、240mmol/L三个组),每组分为3、6、12、24h共4个时间点,每个时间点细胞孔数为6。对照组予正常培养液常规培养,低渗组分别予不同渗透压的低渗液作用于细胞,建立星形胶质细胞对低渗液反应的实验模型。通过采用原位杂交检测AQP9mRNA的表达,乳酸脱氢酶活性的测定及图像分析等方法研究星形胶质细胞对低渗液的反应及AQP9的表达变化。结果对照组在正常渗透压培养液中培养3、6、12、24h后,AQP9表达差异无统计学意义(P>0.05)。在相同的作用时间条件下,各低渗组细胞AQP9mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。尤以作用12h后明显,而且与作用时间和低渗液的程度密切相关;同时细胞存活能力明显下降,其严重程度与低渗液的作用时间和渗透压有关。结论低渗液可导致细胞的生存能力下降、AQP9mRNA表达增强,提示星形胶质细胞AQP9的表达与渗透压可能直接相关,AQP9可能参与脑水肿的形成。     

视神经脊髓炎IgG刺激原代培养大鼠星形胶质细胞免疫反应

视神经脊髓炎(NMO)主要累及星形胶质细胞,导致中枢神经系统炎症、脱髓鞘和组织损伤。脑内病灶常高表达水通道蛋白4(AQP4),AQP4被认为是NMO血清IgG的抗原目标。根据NMO的可逆性及对NMO病灶演变特点的分析,笔者推测NMO IgG可能诱导了星形胶质细胞的动态免疫过程。培养原代大鼠星形胶质细胞,加入从NMO患者血清中提取或纯化的IgG,星形胶质细胞出现炎性增殖,同时基因表达出现与之匹配的明显变化。且星形胶质细胞反应因子脂质运载蛋白-2、多种趋化因子、细胞因子、应激反应因子的表达均增加。而在培养的原代星形胶质细胞中加入从正常对照者血清中提取的IgG则无上述变化。此星形胶质细胞的反应还与疾病种类相关。从复发缓解型多发硬化、Sj觟gren's或系统性红斑狼疮患者血清中提取的IgG加入培养的原代星形胶质细胞中也不能导致上述变化。笔者推测是NMO IgG与AQP4结合,导致星形胶质细胞出现炎症反应,并出现基因在转录和翻译水平的相应变化。抑制星形胶质细胞的炎症反应可能有助于减少星形胶质细胞增殖,缓解NMO病灶的发展。     

高渗液对体外培养星形胶质细胞中水通道蛋白4 mRNA表达的影响

目的　研究体外培养星形胶质细胞高渗状态下水通道蛋白 4 (AQP4 ) m RNA表达的变化特点及其所起的作用。方法　取生后 2 d的新生 Wistar大鼠大脑皮质进行星形胶质细胞纯培养 ,分别用不同渗透压的高渗培养液作用于星形胶质细胞 ,建立星形胶质细胞对高渗反应的实验模型 ;采用原位杂交、乳酸脱氢酶(L DH)活性测定及图像分析等方法 ,研究体外培养星形胶质细胞对高渗液的反应和 AQP4 m RNA的表达规律。结果　 32 0、333和 345 m mol/ L的高渗培养液作用于星形胶质细胞 3、6、12和 2 4 h后 ,L DH活性测定的吸光度 A值在各时间点均显著高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ;原位杂交分析表明 ,AQP4 m RNA表达明显增高 ,与正常组相比有显著意义 ,尤以高渗液作用 12 h时最明显 ,而且与作用时间及渗透压相关。结论　在高渗状态下 ,细胞活性明显下降 ,AQP4 m RNA表达增强。 AQP4可能在高渗性脱水的早期起重要的调节作用。     

Protein S-100beta in brain and serum after deep hypothermic circulatory arrest in rabbits: relationship to perivascular astrocytic swelling.

The aim of this study was to evaluate the relationship between the kinetic patterns of the protein S-100beta, an astroglial cell marker, and its immunohistochemical expression in the brain in rabbits that underwent cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest. Fourteen New Zealand rabbits (weight, 3.1+/-0.25 kg) were anaesthetised, intubated and mechanically ventilated. Four animals were not connected to the cardiopulmonary bypass and served as controls. Ten animals were perfused according to a uniform protocol. After systemic cooling, deep hypothermic circulatory arrest was induced for 60 minutes. After reperfusion and rewarming, the animals were weaned from bypass and sacrificed. In the brain, astrocyte reactivity for S-100beta was evaluated immunocytochemically (DPC Immustain) and the serum concentrations of S-100beta were analysed using a commercially available immunoluminometric kit (Byk-Sangtec, Dietzenbach, Germany). In all experimental animals a significant increase of the serum concentration of the protein S-100beta was found immediately after reperfusion and the termination of cardiopulmonary bypass. In comparison with the control animals, increased staining of S-100beta was found in the astroglial cells and swollen astrocytic end-feet in the perivascular regions. There were fewer signs of neuronal cell injury of neurones in the hippocampus structure. In conclusion, astrocytic activation and S-100beta overexpression seems to precede the neurodegeneration following deep hypothermic circulatory arrest. The marked perivascular cell swelling may support the assumption of reperfusion injury of the astroglial cell complex that forms the blood-brain barrier, which may be indicative of the source of the released S-100beta into the blood stream.