聚合酶链反应检测乙肝病毒DNA判定乙肝病毒复制程度及传染性

为研究乙肝病毒(HBV)感染后乙肝病毒5项指标(HBVM)各模式中HBV复制程度及传染性，对443例未做转阴治疗的HBV感染者进行HBVM及乙肝病毒DNA(HBV DNA)检测，报道如下。     

血清乙肝病毒大蛋白在HBeAb阳性患者中检测的意义

目的:通过检测慢性乙型肝炎HBeAb阳性患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)、前S1抗原(PreSl)、前S2抗原(PreS2)等4项指标,探讨其相关性,从而了解检测HBV-LP对乙型肝炎HBeAb阳性患者病毒复制状况的诊断价值.方法:收集慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清308例,分别进行HBV-LP、HBV DNA、PreSl及PreS2的检测并进行比较分析.结果:308例HBeAb阳性患者中,HBV-LP和HBVDNA、PreS1、PreS2之间差异均存在显著性意义(x2=17.19、37.12、54.42,P＜0.05),阳性率分别为58.12％,28.90％、41.88％、40.91％,HBV-LP与PreSl、PreS2有82例共同阳性,93例共同阴性.结论:HBV-LP在慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清中检测率较高,可以作为临床抗病毒治疗监测的一个良好指标.     

乙肝病毒前S1蛋白与HBV DNA、乙肝免疫标志物检测结果相关性分析

乙肝病毒Dane颗粒外壳是由前S1、S2和S蛋白组成．其中有关前S1蛋白(PreS1)的研究较多，多数学者认为其与乙肝病毒复制有关，但其确切的临床意义尚存在争议。本文对666例住院患者同时进行PreS1、HBV DNA和乙肝二对半(HBVM)的检测，并对其结果进行分析讨论，现报道如下。     

乙型肝炎病毒前S1蛋白在血清学诊断乙肝病毒复制中的研究

目的：探讨前S1蛋白（Pre—S1）在血清学诊断乙肝病毒复制中的意义。方法：选择慢性乙型肝炎患者血清250例。分别测定每份患者血清中HBV标志物、前S1蛋白和HBV DNA。结果：HBeAg（＋）组中前S1蛋白阳性率97．2％（70／72）,HBV DNA阳性率100％（72／72）。HBeAg（-）组中前S1蛋白阳性率60．1％（107／178）,HBV DNA阳性率63．5％（113／178）。前S1蛋白和HBV DNA的总符合率为89．6%（224／250）,2者差异无统计学意义（P〉0．05）。HBeAg和HBV DNA的总符合率为54．8％（137／250）,2者差异有统计学意义（P〈0．01）。HBsAg（-）中检出前S1蛋白阳性2例。结论：前S1蛋白比HBeAg更敏感地反映HBV复制情况,且可弥补由于HBsAg基因编码区突变造成的漏诊。     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测在乙型肝炎诊疗中的临床价值

目的 探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV LP)用于临床乙型肝炎诊断的价值及与乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量的相关性.方法 分别采用ELISA法和实时荧光定量PCR检测305例HBV感染者血清HBV LP、HBeAg和HBV DNA.结果 (1)305例HBV感染者血清中HBV LP和HBV DNA的阳性率分别73.44％和70.16％,两者的检出一致率为71.25％,两者间差异无统计学意义(P＞0.05).(2) HBV LP含量与HBV DNA拷贝数之间呈正相关(r=0.354,P＜0.05).(3)HBeAg阳性156例中,HBV LP和HBV DNA阳性检出率分别是90.38％和86.54％:HBeAg阴性149例中HBV LP和HBV DNA阳性检出率分别是55.70％和53.02％,两者间差异均无统计学意义(P＞0.05).(4)HBV DNA阳性214例中,HBV LP的阳性率明显高于HBeAg的阳性率,分别是83.18％和49.06％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HBV LP是一个操作简便的可用于判断HBV感染者体内病毒复制程度的敏感指标,并且HBV LP与HBV DNA两者之间有很好的相关性,是反映HBeAg阴性HBV感染者体内病毒复制情况新的敏感监测指标.     

乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系

目的:检测不同模式乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)、乙肝前S1,HBV DNA以及ALT,比较HBV-LP以及乙肝前S1的检出与HBV DNA及ALT之间的关系,探讨HBV-LP用于乙肝患者临床诊断的意义．方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测177例HBV患者血清HBV-LP和乙肝前S1,荧光定量PCR方法检测患者HBV DNA,全自动生化分析仪检测ALT．结果:相同乙肝模式患者血清HBV-LP与HBV DNA检出率无显著差异;HBeAg阳性患者血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者(95．45％vs 44．36％,P<0．05; 93．18％vs 41．35％,P<0．05):相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV DNA的检出,两者差异显著(P<0．05);HBV-LP阳性患者的ALT明显高于HBV-LP阴性患者．结论:乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA有较高的符合率,是反映乙肝患者体内病毒复制情况的可靠指标;而且乙肝表面抗原大蛋白阳性患者ALT较阴性患者高,表明HBV-LP同时也反映了乙肝病情的活动情况．     

老年慢性乙型肝炎患者乙肝病毒大蛋白与HBV DNA的相关性

目的探讨老年慢性乙型肝炎病人乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)与HBA DNA的相关性。方法选取60例年龄>60岁的老年慢性乙型肝炎(HBsAg阳性)患者作为观察组,同时选取60例健康人群作为对照组。采用酶联免疫吸附试验进行HBV-LP检测,采用荧光定量法检测HBVDNA,采用化学发光法检测乙肝两对半标志物,并对检测结果进行比较。结果本组60例HBsAg阳性患者,大三阳组28例患者中HBV-LP阳性率为92.86%、HBV DNA阳性率为89.29%;小三阳组32例患者中,HBV-LP阳性率为43.75%、HBV DNA阳性率为40.61%,两组差异显著(P<0.05);对照组血清中检测不到HBV-LP与HBV DNA的存在。HBV-LP与HBV DNA呈正相关(r=0.356,P<0.05)。60例观察组患者中,40例(66.67%)HBV-LP阳性,38例(63.33%)HBV DNA阳性,两种血清标志物检测阳性率无显著差异(χ2=0.146,P<0.05)。结论 HBV-LP作为判断患者体内HBV病毒是否复制的重要血清标志物与HBV DNA明显相关,根据两者血清水平可对疾病进行正确评估、正确诊断,可作为除乙肝两对半以外的重要血清标志物。     

乙肝病毒DNA疫苗pHL-sec-LHBs的构建及小鼠免疫效果检测

目的 构建针对乙肝病毒的DNA疫苗,并检测该DNA疫苗免疫BALB/c小鼠的效果。方法 选择乙肝病毒表面蛋白中的LHBs蛋白基因作为抗原基因,以pHL-sec真核外泌型质粒为载体构建pHL-sec-LHBs质粒。使用pHL-sec-LHBs质粒、pHL-sec-LHBs质粒瞬时转染细胞上清和pHL-sec空载质粒在无佐剂或有佐剂条件下分别对BALB/c小鼠进行免疫,共计免疫5次,每次间隔14 d。第5次免疫7 d后对小鼠进行LHBs蛋白特异性抗体检测。结果 成功构建pHL-sec-LHBs重组质粒。使用该质粒瞬转293T细胞,Western blot检测到细胞内LHBs蛋白的表达,并有自切外泌信号肽迹象;ELISA检测细胞上清中LHBs蛋白成功外泌。BALB/c小鼠免疫试验显示,pHL-sec-LHBs质粒成功诱发小鼠针对LHBs蛋白特异性抗体产生。结论 成功构建pHL-sec-LHBs重组质粒作为乙肝病毒DNA疫苗,该疫苗对BALB/c小鼠中具有良好的免疫原性。     

肝癌患者血清HBV基因型、外膜大蛋白定量检测的临床意义

目的探讨血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型及HBV外膜大蛋白(LHBs)水平与肝细胞癌的关系。方法对61例肝癌、65例慢性活动性乙型肝炎患者及10例HBV携带者的血清HBV基因型、HBV LHBs进行检测。结果136例中,B基因型56例(41.0%),C基因型76例(55.9%),B、C混合型1例(0.7%),B、D混合型3例(2.2%);随病情加重,C基因型比例增加;不同基因型HBV感染的肝癌患者间HBV DNA、HBV LHBs水平存在明显差异;慢性活动性肝炎患者二者无统计学差异。结论本地区HBV以B、C基因型为主,不同基因型HBV感染在肝癌的发生中可能存在不同机制。     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白水平检测意义探讨

目的探讨慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白（HBV-LP） 水平差异及意义。方法选取2014年8月~2015 年12月我院诊治的慢性乙型肝炎患者508例,乙型肝炎肝硬化患者74例,原发性肝癌患者29例,采用ELISA 法检测血清HBV-LP水平,采用FQ-PCR法检测血清HBV DNA水平。结果慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清HBV-LP阳性率分别为77.2%、82.4%和89.7%,血清HBV DNA阳性率分别为78.9%、83.8%和93.1%;3组血清HBV-LP水平分别为（9.78±4.25）μg/L、（17.24±8.63）μg/L和（38.65±19.38）μg/L,差异有统计学意义（P<0.05）。结论HBV-LP是乙型肝炎病毒感染者血清重要的标记物,与血清HBV DNA存在某种相关性,其检测的意义值得探讨。     

乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)及其两个截短体(HBx1 ～ 101、HBx43～ 154)与损伤DNA结合蛋白(DDB)1在HBV复制中的作用.方法 用质粒瞬时转染HepG2细胞,72 h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA,通过Western blot分析验证DDB1蛋白表达,逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响.提取转染72 h后细胞胞质DNA,收集细胞的培养上清液,通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBV DNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平,从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响.对数据进行单因素方差分析及t检验.结果 在有HBV复制的HepG2细胞中,缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降(相对表达水平为野生型转染组的52.74％±8.95％,t=9.143,P＜0.05),胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降(相对表达水平分别为野生型转染组的55.49％±1.19％、48.05％±2.90％、46.22％±2.20％,P值均＜0.05).共转染HBx N-端截短体HBx43～54后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平,且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBV DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平.但共转染HBx C-端截短体HBx1 ～ 101的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降(相对表达水平为野生型转染组的59.95％±9.09％,t=7.629,P＜0.05),且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平(相对表达水平分别为野生型转染组的62.53％±0.67％、63.13％±2.14％、55.40％±0.99％,P值均＜0.05).并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBV DNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的.结论 C-端53个氨基酸及DDB1蛋白对于HBV野生型水平的复制是需要的,而N-端42个氨基酸对于HBV复制水平无明显影响.C-端53个氨基酸对HBV复制的影响作用可能是通过影响DDB1蛋白水平实现的.     

乙型肝炎患者血清HBV标志物与HBV DNA相关性分析

目的探讨乙型肝炎患者血清学标志(HBVM)与HBV DNA的关系。方法对257例乙型肝炎患者同时检测HBVM与HBV DNA。HBVM检测用EHSA法，HBV DNA检测用PCR法。根据不同检测结果进行对比分析。结果在HBsAg HBeAg HBcAb阳性的血清中HBV DNA阳性率和含量最高，血清HBeAg与HBV DNA含量密切相关，但部分HBeAg阴性或抗-HBe阳性患者也有较高的HBV DNA阳性率及含量。结论PCR定量检测HBV DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱，在临床上有重要意义。     

乙型肝炎病毒基因注入大鼠肝脏后的短暂抗原表达

目的建立ＨＢＶ感染的急性乙型肝炎大鼠模型。方法将经磷酸钙沉淀的含３．２ｋｂ全序列ＨＢＶＤＮＡ的ＨＢＶ－ＰＣＮＣＸ质粒直接导入大鼠肝脏。结果１０只实验动物中，８只大鼠血清ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性，肝细胞中ＨＢＶｍＲＮＡ及ＨＢｓＡｇ得到表达，肝脏出现局灶性炎性细胞浸润，肝细胞坏死、浊肿等典型的病毒性肝炎病理变化。结论将磷酸钙沉淀后的ＨＢＶＤＮＡ导入大鼠肝脏细胞，可产生病毒抗原血症和典型的急性病毒性肝炎病理变化     

乙型肝炎患者血清前S1抗原和HBV DNA与肝功能的关系探讨

目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(PreS1)及HBV-M和HBV DNA与肝功能检测间的关系。方法对576例血清标本进行PreS1及HBV-M和HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)同步检测。结果PreS1、HBV DNA阳性率分别为72.05%和61.81%,两者符合率达74.65%;在HBsAg(-)和正常对照组PreS1、HBV DNA均为阴性;在HBsAg、HBeAg与HBsAg、抗-HBe、抗-HBc和HBsAg、抗-HBc三种阳性模式组中,PreS1阳性率(87.25%、55.71%、68.21%)、HBV DNA阳性率(94.02%、29.29%、45.66%)在各组中相互比较差异均有显著性(P均<0.005);PreS1与HBV DNA阳性符合率为92.03%、53.57%、68.21%,差异有显著性(P<0.05);PreS1阳性组和PreS1阴性组ALT、AST异常率相比,差异有显著性(P<0.05)。结论PreS1主要存在于HbsAg阳性携带者中,且与HBeAg、HBV DNA关系密切,是反映HBV复制及传染性的又一血清学指标,同时PreS1阳性还与肝功能损害有关。PreS1联合HBV-M及HBV DNA和肝功能同步检测具有重要的临床意义。     

乙型肝炎病毒基因型与血清HBV DNA水平的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)基因型与血清HBVDNA水平的关系。方法　采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术以及荧光定量PCR技术 ,分别对 12 3例慢性乙型肝炎 (CHB)患者进行HBVDNA基因分型和血清HBVDNA水平的测定。结果　泉州地区CHB患者的HBV基因型以B型为主 ,其次为C型 ,部分以D型和混合型存在 ,分别占 74 80 %、17 0 7%、3 2 5 %和 5 69% ,无A、E、F型。C基因型的HBVDNA水平 (log值 )为 7 0 5± 1 3 5 ,显著高于B基因型的 6 3 2± 1 0 6,P <0 0 1;而C基因型的HBeAg含量为5 3 62± 2 5 3 2 ,亦显著高于B基因型的 40 1l± 15 17,P <0 0 1。C基因型患者的TBIL、ALT、AST均显著高于B基因型 ,而白蛋白水平则显著低于B基因型 ,P <0 0 1。结论　泉州地区CHB患者以B基因型为主 ,部分以C型、D型和混合型存在。C基因型的血清HBVDNA水平显著高于B型 ,其肝损伤程度亦显著高于B型     

e抗原阴性慢性乙型肝炎患者血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒DNA之间的关系

我国约1／3的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性，但仍然伴有高水平的乙型肝炎病毒（HBV）复制。在不能进行HBV DNA检测的单位，对这些患者HBV复制程度的判定难以进行。现探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（LHBs）与HBV DNA的关系，试图明确LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。     

Cellular DNA repair cofactors affecting hepatitis B virus infection and replication

AIM： To investigate whether hepatitis B virus （HBV） infection activates DNA damage response and DNA repair cofactors inhibit HBV infection and replication. METHODS： Human hepatocyte cell line HL7702 was studied. Immunoblotting was performed to test the expression of ataxia telangiectasia-mutated （ATM）- Rad3-related protein （ATR）, p21 and the level of phosphorylation of Chkl, p53, H2AX, ATM in HBV-infected or non-infected-cells. Special short RNAi oligos was transfected to induce transient ATR knockdown in HL7702. ATR-ATN chemical inhibitors caffeine （CF） and theophylline （TP）, or Chkl inhibitor 7-hydroxystaurosporine （UCN01） was studied to determine whether they suppress cellular DNA damage response and NG132 inhibits proteasome. RESULTS： The ATR checkpoint pathway, responding to single-strand breaks in DNA, was activated in response to HBV infection. ATR knockdown cells decreased the HBV DNA yields, implying that HBV infection and replication could activate and exploit the activated DNA damage response. CF/TP or UCN01 reduced the HBV DNA yield by 70% and 80%, respectively. HBV abrogated the ATR-dependent DNA damage signaling pathway by degrading p21, and introduction of the p21 protein before HBV infection reduced the HBV DNA yield. Consistent with this result, p21 accumulation after NG132 treatment also sharply decreased the HBV DNA yield. CONCLUSION： HBV infection can be treated with therapeutic approaches targeting host cell proteins by inhibiting a cellular gene required for HBV replication or by restoring a response abrogated by HBV, thus providing a potential approach to the prevention and treatment of HBV infection.     

乙型肝炎病毒基因型、YMDD变异与拉米夫定治疗后HBV DNA反弹关系的研究

目的探讨HBV基因型、YMDD变异与拉米夫定抗病毒治疗后HBV DNA反弹的关系。方法应用多引物对巢式PCR法、PCR-序列分析法检测拉米夫定治疗的27例乙型肝炎患者和19例从未用过抗病毒治疗的患者HBV基因型和P区（YMDD）的突变位点。结果在27例HBV DNA反弹的患者中，13例（48．15％）检出YMDD变异，而对照人群无YMDD变异（P〈0．05）。YMDD变异的位点为rtM204V／I（C区）±rtL180M（B区）；在治疗组YMDD变异的患者中，B、C基因型构成比（46．15％和59．26％）与对照组（53．85％和68．42％）比较无显著性差异（P〉0．05）。结论YMDD变异是拉米夫定治疗后出现耐药导致HBV DNA反弹的主要原因；YMDD变异的常见位点依然为rtM204V／I（C区）±rtL180M（B区）；YMDD变异在B、C基因型病人中无差别。