抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

抗人黑色素瘤单抗HB8759轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

获得新的鼠抗人黑色素瘤单Ｒ抗ＨＢ８７５９轻，重链可变区基因，以便对其进行基因工程改造。方法：采用反转录－ＰＣＲ从杂交瘤细胞中扩增抗体轻，重链可变区基因，测定ＤＮＡ序列，输入计算机分析，并在大肠杆菌中表达。结论：ＶＨ，ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

抗人黑色素瘤单抗重链可变区基因的克隆和序列测定

我们已报道了抗人黑色素瘤单克隆抗体Leo Mel3的轻链可变区基因序列。作者现报道该抗体重链可变区基因的克隆和序列分析结果。1 材料和方法 同文献[1]。2 结果 PCR之后进行琼脂糖凝胶电泳,见扩增     

抗HBs单克隆抗体Fv段基因的克隆及其表达

用聚克酶链反应（ＰＣＲ）获得抗－ＨＢｓ单克隆抗体Ｆｖ段轻、重链基因，经连接后形成一条单链含轻、重链的Ｆｖ基因（ＳｃＦｖ），并在重组－噬菌体－抗体系统（ＲＰＡＳ）中获得表达，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）证明表达的Ｆｖ段具有特异性抗原结合活性。     

抗人γ—精浆蛋白VH单域抗体基因的构建表达及空间构象分析

目的 扩增出抗人γ－精浆蛋白（γ－Sm）单克隆抗体（mAb）的重链可变区（VH）单域抗体基因,并进行原核表达及空间构象分析。方法 从分泌抗γ－Sm mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,经RT－PCR扩增VH单域抗体基因,将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX－4T－1中进行表达,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果 VH单域抗体基因全长363bp,含起始码和终止码。将其克隆到pGEX－4T－1内,转化大肠杆菌DH5α,获得高效表达,表达量占全菌总蛋白质的38％,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后,用谷胱甘肽（GST）亲和色谱纯化,再经凝血酶水解获得抗γ－SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论 构建成功抗γ－Sm的VH单域抗体,为进一步临床应用奠定基础。     

生物素标记人免疫球蛋白IgG重链的效果评估

目的对生物素标记的人免疫球蛋白IgG重链的效果进行评估和研究。方法将生物素与人免疫球蛋白IgG重链以各种不同的比例进行反应,然后让连接有抗人免疫球蛋白IgG重链抗体的微球颗粒与其反应,应用Luminex200仪器来测定其反应结果,最终来评估生物素与待标记的人免疫球蛋白IgG重链反应的效价。结果生物素与人免疫球蛋白IgG重链的重量比例适当时,微球颗粒上的平均荧光强度(MFI值)最强,而其他比例时,微球颗粒上的平均荧光强度呈下降趋势。结论生物素标记人免疫球蛋白IgG重链应有适当的比例,使被标记的生物素尽可能的多,同时又避免过多的生物素造成空间位阻影响。     

人黑色素瘤单抗VH—TNF融合蛋白基因的构建和表达

在大肠杆菌中表达人黑色素瘤单抗ＶＨ－ＴＮＦ融合蛋白基因。方法；在人肿瘤坏死因子基因上游插入了抗黑色素瘤单抗Ｍｅｌ３的重链可变区基因，将此融合基因插入大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物经凝血酶消化后，测定其对Ｌ９２９细胞的杀伤活性，并进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，用抗ＴＮＦ抗体进行蛋白印迹分析。     

以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-浆蛋白抗体轻链

以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板，筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链．方法：利用RT-PCR从前列腺癌患外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因，克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X／mFd中，电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。     

重组人肝细胞生长因子重链在大肠杆菌中的表达研究

目的 观察经过转录前加工、修饰后克隆至表达载体pBV220中的人肝细胞生长因子α链cDNA在肠杆菌的表达情况,优化表达条件,以建立hHGFα原核高效表达体系,并进一步研究hHGF-α蛋白的生物学功能。方法与结果 将重组表达质粒pBV220-hHGF-α转化大肠杆菌DH5a、Plyss,通过升温诱导法,即将温度由30℃升高到42℃,诱导外源基因表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测hHGF-α蛋白表达,电泳图谱显示一特异的分子量与单体hHGF-α链吻合的蛋白带。SDS-PAGE光密度扫描对外源基因表达产物进行初步产量,表达产物分别占细菌可溶性蛋白总量的25%、30%。进一步行West-ern-blot对表达产物进行定性,外源基因表达蛋白与特异的hHGF-α抗体呈阳性反应。结论 成功地建立了hHGF-α链原核高效表达工程菌系。     

抗CD3鼠／人嵌合抗体基因的构建及表面：I.CD3单抗重链可变区基因...

By using synthetic oligonucleotide primers specific for VH gene sequences of mouse IgG, PCR amplification of the VH gene from the cDNA of HIT3a hybridoma cells, a murine monoclonal antibody specific to CD3 was successfully performed. The amplified fragment has been cloned into pGEM-7Zf(+)plasmid DNA. Southern analysis shows that the cloned fragment hybridized strongly to both the universal oligonucleotide and DNA probe of the J region of mouse IgG Hc. Analysis of the sequences of recombinant plasmid DNA indicates that the cloned VH gene is 353 bp in size and VDJ4 rearrangement in which the D fragment comes from DSP 2.2, and is grouped into II B subset.     

抗HBsAg人源噬菌体抗体重链基因的序列分析

应用噬菌体抗体库技术筛选抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体重链基因，并用基因序列分析技术对其进行序列分析。结果：筛选出抗ＡＢｓＡｇ人源噬菌体抗体并发现其重链基因序列与人免疫球蛋白重链基因序列同源性可达９５％以上，且与人免疫球蛋白第Ⅲ家族的框架区基因序列同源性均可高达９７％。结论：筛选的抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体的重链基因属于人免疫球蛋白基因第Ⅲ家族成员     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

抗HBsAg人源噬菌体抗体重链基因的序列分析

应用噬菌体抗体库技术筛选抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体重链基因，并用基因序列分析技术对其进行序列分析。结果：筛选出抗ＡＢｓＡｇ人源噬菌体抗体并发现其重链基因序列与人免疫球蛋白重链基因序列同源性可达９５％以上，且与人免疫球蛋白第Ⅲ家族的框架区基因序列同源性均可高达９７％。结论：筛选的抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体的重链基因属于人免疫球蛋白基因第Ⅲ家族成员。     

抗人精浆蛋白McAb的制备及其特性研究

本文报道用杂交瘤技术建立了２株分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的细胞株Ｄ１和Ｃ１２。Ｄ１株分泌的抗体为ＩｇＭ，Ｃ１２株为ＩｇＧ３。这两株均能与正常人精浆和无精子症患者的精浆产生特异性免疫反应。Ｄ１株单抗具有补体依赖性制动人精子的作用，间接免疫荧光试验表明，它能结合到人精子颈部和顶体后区。这充分说明２株单抗是特异性抗人精浆的，Ｄ１是精子制动抗体，其相应的精子抗原属于精子外套抗原成分之一。     

人granzyme B基因在HeLa细胞中的表达

目的 构建携带人granzyme B基因的真核表达载体，并将其在HeLa细胞中的表达。方法 用反转录PCR获取人granzyme B全长cDNA序列，将其活性型序列克隆进pcD-NA3重组表达质粒。脂质体法转染HeLa细胞，间接免疫荧光检测目的蛋白表达，HE染色观察其对转染HeLa细胞形态的影响。结果工成功获得了野生型granzyme B cDNA，构建了编码活性型granzyme B的真核表达载体pcDNA3-G。转染HeLa细胞后观察到目的的蛋白表达，转染细胞形态发生变化，出现多核大细胞及固缩小细胞。结论 活性型granzyme B哺乳动物表达系统的建立，为进一步研究granzyme B的生物学效应奠定了基础。     

B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排的检测

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在B细胞性淋巴瘤(B-NHL)中的诊断价值。方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法检测B细胞淋巴瘤30例．淋巴结反应性增生(RH)10例及T细胞淋巴瘤(T-NHL)2例的IgH基因重排。结果 30例B-NHL中，22例(73．3％)出现IgH基因克隆性重排，而RH及T-NHL均未出现IgH基因重排。结论 B细胞淋巴瘤中存在B细胞单克隆增生，支持肿瘤单克隆起源学说；IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和反应性增生以及T细胞和B细胞淋巴瘤有重要意义。     

B细胞淋巴瘤患者外周血免疫球蛋白重链基因重排检测

目的:评价B细胞淋巴瘤(B-NHL)患者外周血免疫球蛋白重链(IgH)基因重排检测的应用价值.方法:收集慢性淋巴结炎患者(10例)、健康体检者(16例)和病理活检确诊为B-NHL的患者(28例)外周血,PCR法检测IgH基因重排,观察B-NHL患者治疗前后IgH基因重排的变化.结果:B-NHL患者IgH基因重排阳性率为67.9%(19/28),高于骨髓涂片细胞形态学检查阳性率32.1%(9/28),差异有统计学意义(P＜0.05),健康体检者及慢性淋巴结炎患者均为阴性.15例外周血单克隆IgH基因重排阳性者,治疗后10例完全缓解(CR).10例CR中,9例IgH基因重排转阴.结论:外周血IgH基因重排在B-NHL辅助诊断和预后评估等方面具有重要的临床价值.     

抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化

提取抗２型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞ｍＲＮＡ和ＤＮＡ反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＰＣＲ扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区（ＶＨ）基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果;该ＶＨ基因约４５０ｂｐ。实验证明,上述两种方法均是分离和扩增ＶＨ基因的有效方法,但提取ＤＮＡ后进行ＰＣＲ较提取ｍＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ经济,简单。