电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区白介素-4/信号传导及转录激活因子6与核因子-κB的影响

目的:观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区白介素-4(IL-4)含量,信号传导及转录激活因子6(STAT 6)、磷酸化STAT 6(pSTAT 6)与核因子-κB(NF-κB)p 65蛋白表达的影响,探讨电针治疗局灶脑缺血/再灌注后炎性反应的可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组15只。采用改良线栓法制备大脑中动脉闭塞/再灌注模型。电针组电针刺激大鼠"百会""合谷""太冲",再灌注0、12、24h各电针1次。运用免疫组化及Western blot法检测大鼠大脑缺血皮质区pSTAT 6/STAT 6、NF-κB p 65的表达水平;ELISA法检测大鼠大脑缺血皮质区IL-4的含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑缺血皮质区IL-4含量显著升高(P0.001),胞质及胞核NF-κB p 65表达水平显著增加(免疫组化法P0.001,Western blot法P0.01);与模型组比较,电针组IL-4含量显著升高(P0.01),pSTAT 6及pSTAT 6/STAT 6表达水平显著升高(均P0.01),胞质及胞核NF-κB p 65表达水平显著降低(免疫组化法P0.01,Western blot法P0.05)。结论:电针能有效提高局灶脑缺血/再灌注损伤大鼠大脑缺血皮质区抗炎因子IL-4含量,增加pSTAT 6/STAT 6表达水平,同时NF-κB p 65入核显著减少,可能与激活IL-4/STAT 6信号通路有关。     

续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠血清白介素-1β和肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的 观察续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠血清白介素-1β （IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响.方法 将清洁级SD大鼠分为分假手术组、模型组、尼莫地平组及续命汤低、中、高剂量组6组,通过栓线法制备局灶性脑缺血中风大鼠模型,观察并记录SD大鼠造模后神经功能评分,测定血清IL-1β和TNF-α含量.结果 造模后大鼠神经行为学评分显著升高,IL-1β和TNF-α含量增加,续命汤各剂量能拮抗以上作用,以续命汤中、高剂量为显著（P＜0.05或P＜ 0.01）,其疗效与尼莫地平组相当（P＞0.05）.结论 续命汤能降低IL-1β、TNF-α的过度表达,减少缺血中心区和周围区神经元损伤,减轻脑缺血和水肿,进而实现保护血脑屏障的作用.     

针刺对脑缺血再灌注大鼠海马组织核转录因子-κB表达及含量的影响

目的:观察电针对脑缺血再灌注大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号分子表达和含量的影响,探讨针刺抗局灶性脑缺血再灌注损伤的神经细胞信号转导机制。方法:将120只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型24h组、模型48h组、模型72h组、电针治疗24h组、电针治疗48h组、电针治疗72h组。采用改良线栓法制备局灶性脑缺血(MCAO)再灌模型,电针“大椎”、双侧“内关”穴(连续波,频率120次/min,强度1mA,持续30min)。运用免疫组化检测法和蛋白免疫印迹法,检测海马组织NF-κB-p65核转录因子蛋白的表达与含量。结果:模型各组大鼠缺血侧海马CA1区NF-κB-p65蛋白表达显著高于正常组和假手术组(P<0·05),也显著高于电针治疗同时相各组(P<0·01),NF-κB移位于核明显;模型各组大鼠缺血侧海马组织NF-κB-p65蛋白含量比电针治疗同时相各组高,有显著性差异(P<0·05)。结论:电针能下调脑缺血再灌注海马组织NF-κB蛋白水平,阻滞其转位于核,发挥神经保护作用。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层HSP70蛋白的影响

目的：探讨电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达的影响,进一步验证电针抗脑缺血损伤的机理与HSP70的关系。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,随机分组,经免疫组化（SABC法）、He染色、神经功能缺陷评分,观察大鼠缺血侧大脑皮层HSP70蛋白表达阳性细胞数,组织学损伤分级及神经功能缺陷评分的变化。结果：脑缺血再灌注电针组较对照组HSP70阳性细胞数多,组织学损伤分级低,神经功能缺陷评分低,且具有显著性差异（P〈0.01）。结论：电针可以提高局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层HSP70蛋白的表达,针刺治疗脑缺血的机制可能与HSP70蛋白增加有关,为临床针刺治疗脑缺血疾病提供又一新的理论依据。     

芪棱汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后核因子-κB表达的影响

目的观察芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后核因子-κ B(NF-κ B)表达的影响.方法雄性 SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及治疗组,除正常组外其余各组按再灌注的时间又随机分为 1、 3、 6、 12、 24、 48和 72h共 21个亚组;采用颈内动脉线栓与环扎法建立 MCAO模型.在术前 12、 24h及术后即刻治疗组予腹腔注射芪棱汤精制液,余组给予等体积生理盐水.动物杀检前进行神经学评分;采用免疫组化二步法检测再灌注各时点 NF-κ B p65和 ICAM- 1的表达.结果正常组和假手术组神经学评分正常,治疗组神经学评分较模型组显著降低. NF-κ B p65在正常组和假手术组有微弱表达,两组情况相近;模型组和治疗组 NF-κ B p65表达较假手组明显增加,但治疗组表达低于对照组. ICAM- 1在正常组和假手术组未见表达,治疗组和模型组表达增加,与模型组相比,治疗组 ICAM- 1表达显著减少.结论芪棱汤可降低 NT-κ B和 ICAM- 1的表达,可能是其抗脑缺血再灌注损伤的部分作用机制.     

脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制

目的：观察脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制。方法：构建局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,成模后随机分为模型对照组、阳性药物组、中药组、联合用药组,另选取健康斯泼累格·多雷（SD）大鼠作为假手术组。观察并评估各组大鼠的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比,免疫组织化学法检测脑组织Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的平均光密度值,蛋白质免疫印迹法、实时定量PCR（QT-PCR）检测脑组织叉头框转录因子3a（FoxO3a）基因、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、核因子κB（NF-κB）、脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及mRNA的表达水平。结果：与假手术组比较,模型对照组NIHSS评分,脑组织含水量,脑组织缺血体积百分比,脑组织FoxO3a、HIF-1α、NF-κB、BDNF蛋白和mRNA的表达水平,Bax、Bcl-2平均光密度值以及Bax/Bcl-2值均显著升高（均P<0.05）;与模型对照组比较,药物干预各组的NIHSS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、Bax平均光密度值、Bax/Bcl-2值、脑组织NF-κB蛋白和mRNA的表达水平显著降低（均P<0.05）,其中联合用药组的降低程度最大（均P<0.05）,Bcl-2平均光密度值,脑组织FoxO3a、HIF-1α、BDNF蛋白和mRNA的表达水平显著升高（均P<0.05）,其中联合用药组的升高程度最大（均P<0.05）。结论：脑泰通组方能有效保护局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织损伤,改善局部脑缺血,其作用机制可能与脑泰通组方调控FoxO3a/HIF-1α/NF-κB信号通路相关。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能障碍的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血区病理学形态及神经功能障碍的影响。方法:将30只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只,模型组与电针组大鼠采用线栓法栓塞大脑中动脉60 min后拔出线栓恢复血流,电针组在缺血再灌注2 h后开始电针刺激(百会、水沟、足三里,疏密波,频率2 Hz/15 Hz)30 min,每隔12 h重复刺激1次,假手术组除线拴插入深度不至大脑中动脉外,其余操作同模型组和电针组。再灌注72 h后,采用Zea-Longa评分方法观察电针对缺血再灌注大鼠神经功能障碍的影响以及HE染色观察电针对缺血区病理学形态的影响。结果:电针组大鼠脑组织病理学形态损伤较模型组明显改善;电针组大鼠神经功能障碍明显轻于模型组。结论:电针刺激可明显减轻脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤,对脑缺血再灌注大鼠神经功能有良性调节作用。     

电针督脉穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑基因表达谱的影响

目的:应用基因芯片技术研究电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织基因表达谱的影响。在分子水平探讨电针治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:大脑中动脉埋线法制备大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注24h后取受损脑组织提取总RNA。用大鼠全基因组寡核苷酸微阵列芯片检测电针"水沟"、"百会"穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑基因表达谱的影响。结果:局灶性脑缺血再灌注大鼠与假手术组大鼠脑组织基因表达谱相比,有175个差异表达基因,其中115个基因表达增高,60个基因表达下调;电针组与局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织基因表达谱相比,有74个差异表达基因,其中26个基因表达增高,48个基因表达下调。结论:本研究筛选出大量的差异表达基因,这些基因可能参与脑缺血再灌后脑损伤的发生发展过程,并参与了针灸抗损伤的机制。     

脑泰方对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB、基质金属蛋白酶9及其抑制剂表达的影响

目的观察益气活血中药脑泰方对局灶性脑缺血大鼠海马C2区缺血组织基质金属蛋白酶9(MMP-9),核因子-κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)表达的影响,探讨其治疗局灶性脑缺血的机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、模型组及脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠灌胃给药连续3 d,每日1次,预处理后采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,术后连续灌胃给药3 d。采用HE染色观察海马C2区细胞,免疫组化法检测海马C2区MMP-9、NF-κB及TIMP1表达。结果脑泰方高剂量组大鼠正常细胞较模型组明显增多,仅少数细胞出现核固缩样改变;脑泰方高、中、低剂量组MMP-9表达明显降低(P＜0.05);脑泰方高、中剂量组NF-κB表达明显下降(P＜0.05);脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P＜0.05)。结论脑泰方干预通过抑制NF-κB、降低MMP-9表达,增强TIMP1表达,保护血脑屏障,减轻脑水肿,对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用。     

电针对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马区内源性神经干细胞巢蛋白的影响

目的 分析电针治疗对成年大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间段海马区内源性神经干细胞巢蛋白（nestin）表达的影响,探讨电针治疗脑缺血再灌注性脑损伤的作用机制。方法 采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血再灌注模型,Wistar大鼠共75只,随机分为对照组、模型组、电针组,针刺“大椎”、“百会”,并行电针干预,采用巢蛋白免疫组化法观察脑缺再在灌注后1、3、7、14与21d五个不同时相巢蛋白表达阳性的数量。结果 缺血侧：电针组在3d、7d、14、21d巣蛋白阳性细胞数量较同时相模型组有明显的增加（P＜0.05或P＜0.01）;缺血对侧：电针组只有在7d时巢蛋白阳性细胞数量较模型组有明显的的增加（P＜0.05）。结论 电针刺激大鼠“大椎”、“百会”可促进局灶性脑缺血再灌注后海马区巢蛋白阳性细胞数量的增加,提示这种作用可能是电针治疗急性脑缺血疾病的重要作用机制之一。     

电针对局灶性脑缺血大鼠海马微血管内皮细胞葡萄糖转运蛋白-1表达的影响

目的:探讨电针对局灶性脑缺血大鼠微血管内皮细胞转运功能的影响机制。方法:60只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,电针组电针双侧"内关"穴(疏密波,4 Hz/20 Hz,强度1 mA,持续30 min)治疗15 d。运用免疫组化法和蛋白免疫印迹法检测大鼠缺血侧海马微血管内皮细胞葡萄糖转运蛋白-1的表达与含量。结果:模型组大鼠缺血侧海马微血管内皮细胞葡萄糖转运蛋白-1的表达显著低于假手术组(P0.05),电针治疗后葡萄糖转运蛋白-1的表达与模型组比较显著升高(P0.05)。结论:电针可促进局灶性脑缺血大鼠海马微血管内皮细胞葡萄糖转运蛋白-1的表达,提高脑缺血后微血管内皮细胞的葡萄糖转运功能。     

芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α的影响

目的探讨芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组及芪棱汤组。采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO／Reperfusion）。HE染色观察病理形态学变化。在再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测HIF-1α表达。结果与模型组相比,补阳还五汤组及芪棱汤组能够改善脑缺血再灌注时的病理损伤;能够促进HIF-1α阳性细胞在各时间点的表达（P〈0．05）;且芪棱汤的治疗效果高于补阳还五汤（P〈0．05）。结论芪棱汤能通过促进HIF-1α表达上调达到神经保护作用,且芪棱汤优于补阳还五汤。     

不同时间针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠BCL-2 Bax蛋白表达的影响

目的：观察局灶性脑缺血再灌注大鼠BCL-2、Bax蛋白表达的情况及不同时间针刺对其的影响。方法：采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，并分别在造模后6、12、24h不同时间段开始针刺，运用免疫组化法观察不同时间段治疗组半暗带与对照组BCL-2、Bax蛋白的表达情况。结果：在半暗带Bcl-2，Bax在缺血再灌注6h都开始表达，随着时间延长表达逐渐增加，而Bcl—2与Bax比值逐渐降低。不同时间开始针刺的治疗组与相应时段的模型组相比，Bcl-2均明显升高（P〈0.05），而Bax的变化无统计学意义，因此Bcl-2与Bax的比值也相应升高。不同时间进行针刺的各组之间，Bd-2的表达逐渐增加，但在6h组与12h组之间，12h组与24h组之间无统计学意义，而6h组与24h组之间差异具有统计学意义（P〈0．05），Bax的变化在各时间段则无统计学意义，二者的比值呈逐渐降低趋势。结论：针刺通过抑制细胞凋亡保护半暗区的神经元细胞，同时针刺介入的最佳时机应在脑缺血的早期。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内血管新生的影响

目的探讨电针对局灶性脑缺血再灌注（MCA0）模型大鼠脑内血管新生的影响。方法采用改良Longa动脉线栓法制作MCAO大鼠模型,选用雄性SD大鼠140只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,后两组分为缺血30min后再灌注3h、6h、12h、24h、48h、96h六个亚组。运用免疫组化S-P法,光镜下观察各组大鼠缺血脑组织微血管的密度。结果正常组和假手术组大鼠脑组织微血管密度计数（MVD）低于模型组及电针组,电针组各个时相MVD均显著高于相应时相的模型对照组（P〈0．05）。结论电针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤有保护作用,其作用机制可能与促血管新生有关。     

头穴针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内TGF-β1mRNA表达的调节

目的：观察头穴针刺治疗急性脑缺血的机理。方法：采用大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型，应用原位杂交方法观察脑缺血再灌注时TGF-β1 mRNA表达的变化及针刺对TGF-β1 mRNA表达的影响，同时测定了脑梗死体积。结果：假手术组大鼠TG-β1 mRNA在皮层、纹状体呈基础水平表达，脑缺血再灌注后24h TGF-β1 mRNA表达增强，针刺可明显缩小梗死的体积，明显增强皮层TGF-β1 mRNA的表达。结论：针刺对缺血性脑损伤的保护作用机制可能与针刺增强脑内TGF-β1 mRNA的表达有关。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内HIF-1α表达和神经行为学影响的实验研究

目的：观察脑缺血／再灌注后,电针“百会”、“水沟”、“足三里”穴对大鼠神经行为学评分、脑内HIF-1α表达的影响,并探讨它们之间的相关性,从而为电针治疗缺血性脑血管疾病提供一定的实验依据。方法：本实验采用改良线栓大鼠大脑中动脉法制作局灶性脑缺血再灌注模型,运用免疫组化sP法和Zea—longa神经功能评分标准,观察脑缺At．／再灌注后大鼠神经行为学评分、脑内HIF-1α的表达。结果：经过早期电针治疗后,普通光镜下MCAO实验鼠脑大体结构发生良性改变,缺血脑区HIF-1α表达显著增多,神经行为学评分得到改善。实验结果证实脑缺血缺氧可诱导缺血脑区HIF-1α表达,其与神经行为学症状评分呈现负性相关。结论：电针可能通过提高HIF-1α表达来抗脑缺血缺氧,帮助神经功能恢复。     

当归补血汤对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠神经功能影响

目的:探讨当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:雄性SD大鼠36只随机分为正常组、模型组、治疗组各12只。模型组和治疗组采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型。治疗组术后连续15天以0.36g/mL浓度当归补血汤3.6g/kg灌胃,每日2次(早、晚各1次)。治疗10天后进行各组大鼠神经行为学测试,用Nissl染色法观察大鼠海马CA1区神经元的形态和数量。结果:与模型组比较,治疗组神经功能评分增高,海马CA1区神经元数量增加(P0.05)。结论:当归补血汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,减少大鼠海马CA1区神经元的死亡,对海马CA1区神经元具有保护作用。     

腺苷后处理对大鼠缺血再灌注心肌NF-κB和IL-1β的影响

目的评价腺苷对大鼠心肌细胞核转录因子（NF-κB）及白介素-1β（IL-1β）表达的影响,探讨腺苷后处理对缺血再灌注心肌保护作用的分子机制。方法健康雄性Wistar大鼠32只随机分为4组：假手术组、再灌注组（I/R）、缺血后处理组、腺苷后处理组,每组8只,制作大鼠心肌缺血再灌注模型。光镜下观察心肌组织形态学改变,免疫组化检测心肌组织中NF-κB的表达,ELISA法测定心肌中IL-1β含量。结果与假手术组比较,I/R组心肌损害程度增加,免疫组织化学染色可见NF-κB蛋白表达显著增强且主要表达在心肌细胞核（P〈0.01）,IL-1β的含量明显升高（P〈0.01）;与I/R组相比,腺苷后处理组HE染色心肌变性减轻,NF-κB表达减少（P〈0.01）,IL-1β的含量降低（P〈0.01）;腺苷后处理组和缺血后处理组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论腺苷后处理对缺血再灌注心肌具有保护作用,其机制可能与腺苷后处理抑制NF-κB活性,减少IL-1β的表达有关。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：研究电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠ICAM-1表达的影响。方法：采用SD大鼠80只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、电针组,每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备MCAO缺血再灌注模型,神经功能障碍评分参照Zea—Longa评分标准;分别应用免疫组化SABC方法检测脑缺血再灌注大鼠缺血脑区微血管内皮细胞ICAM-1的表达和ELISA法检测外周血中sICAM-1含量及电针对其的影响。结果：脑缺血再灌注后,缺血脑区微血管内皮细胞CAM-1表达水平和外周血中sICAM-1含量均增高（模型组与正常组、假手术组比较P〈0．01）;电针治疗后缺血脑区微血管内皮细胞ICM-1表达水平和外周血中sICAM-1含量下调（电针组与模型组比较P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注后缺血脑区微血管内皮细胞释放ICAM-1,对脑组织产生炎性损伤;电针治疗可减少ICAM-1的表达,从而发挥脑保护作用。     

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血和骨髓内皮祖细胞的作用

目的:探讨电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血及骨髓中与血管再生相关的因子及细胞的影响。方法:54只SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,采用线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,并按局灶性脑缺血2h再灌注后的观察时间点,将模型组和电针组分为1、2、3、7d各4个亚组,每个时间点6只大鼠。电针刺激大鼠双侧"合谷"穴,刺激时间15min,每日1次。采用流式细胞术检测外周血内皮祖细胞(EPCs)、趋化因子受体4+(CXCR 4+)细胞和骨髓EPCs占单核细胞的百分比,酶联免疫法检测血清中基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)蛋白浓度。结果:局灶性脑缺血/再灌注大鼠1d模型组和电针组较正常组外周血EPCs和CXCR 4+细胞数量均显著增高(P<0.01),2d电针组高于模型组(P<0.05);2d电针组骨髓EPCs数量显著高于正常组和模型组(P<0.05,P<0.01);模型组和电针组血清SDF-1α蛋白浓度第1天均增至最高,较正常组差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且第1、2天电针组显著高于模型组(P<0.01)。结论:电针能促进局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血EPCs、CXCR 4+细胞和骨髓EPCs数量的增加,该作用可能与SDF-1α表达上调相关。