β^0纯合子β地中海贫血的分子基础和临床研究

β地中海贫血是由于β珠蛋白链合成的明显减少或完全不能合成所致。完全不能合成珠蛋白链的地中海贫血基因为β^0，合成减少为β^0。国内有的作者虽然做了β地中海贫血基因突变类型的报道，但未见β^0纯合子地中海贫血基因分析和临床的资料，兹将我们经基因分析确证的17例β^0。纯合子地中海贫血的临床资料报道如下。     

小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、表达及活性测定

通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA；构建其表达质粒并经测序证明其编码小鼠蛋白激酶CK2β亚基，但与两种已报道的小鼠CK2β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异，与大鼠、猪、兔和人CK2β亚基cDNA的编码区相应碱基序列则一致。将其在表达菌BL21(DE3)中诱导表达，出现一26kDa分子量蛋白过度表达，表达蛋白占菌体总蛋白的31．7％，但大多数以不溶形式存在。Western blot鉴定表明：过度表达产物能与抗人CK2β亚基抗体发生特异性免疫反应。当CK2α和β亚基以1：1摩尔比混合时，构成性的CK2全酶显示出最大活性，直接表明CK2β亚基对CK2α有激活作用。这些结果有力地证明了克隆表达的重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2β亚基。     

轻型β地中海贫血的分子基础及临床分析

本文对广西37例轻型β地中海贫血(β地贫杂合子)用聚合酶链反应(PCR)和特异性寡核苷酸(ASO)探针斑点杂空技术研究其基因突变类型，有5种类型突变。编码子41—42框架位移发生率最高，占51．3％，有2例未查明原因。     

人整合素分子β7亚基片段的表达鉴定及多抗制备

目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒,经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后,用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化,免疫家兔获得多抗。结果 β７片段在大肠杆菌中训效表达。表达产物以包涵体形式存在。免疫印迹鉴定为目的蛋白。多抗效价达１：１０２４００。结论 制备了抗β７的多抗,对β７整合素的功能研究有重要意义。     

脑内补体系统分子的表达与脑疾病

脑在免疫学上是一个相对独立的器官，血脑屏障的存在使脑与循环中的免疫细胞和免疫分子相分隔。血浆补体在血脑屏障正常的情况下难以进入脑。近年来通过大量实验发现，脑本身能够合成完整的有功能的补体系统，提示脑内补体系统分子的合成与活化在免疫防御中发挥重要作用，但同时也可能是导致脑的炎症和变性疾病的重要困素。本文仅就脑内补体系统分子的产生及其在脑疾病中的意义作一综述。     

人整合素β3亚基真核表达载体的构建及αIIbβ3在细胞表面的表达

目的 :构建人整合素 β3亚基真核表达载体 ,并探讨如何使人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面有效表达 ,为进一步研究整合素β3亚基作为汉坦病毒 (hantavirus,HV)受体的特异性奠定基础。方法 :构建编码人整合素 β3真核表达载体 pcDNA3.1 β3。将其与编码人整合素αIIb亚基真核表达载体 ,分别及共转染至中国仓鼠卵巢 (Chinahamsterovary ,CHO)细胞中进行表达。采用间接免疫荧光法 (IFA)检测外源基因的表达。结果 :共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达。pcDNA3.1 β3单独转染组 β3亚基在细胞膜的表达较共转染组弱 ;而pBJ1 αIIb单独转染组则未见有效的细胞膜表达。结论 :人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面的有效表达需要两个亚基共同参与。     

记忆性CD8^＋T淋巴细胞维持的细胞与分子基础

记忆性CD8^ T细胞在抗病毒，抗胞内菌感染及抗肿瘤等方面发挥重要作用，其维持不需要B细胞，CD4^ T细胞及抗原的存在；MHC份子，IL-15，IFN-I、IL-2等在维持中起重要的作用。CD8^ T记忆细胞长期存在的基因机制仍不详。     

高胆固醇对兔oddi括约肌BK通道β1亚基蛋白表达的影响

目的:研究高胆固醇作用下兔oddi括约肌(SO)钙依赖性钾通道β1亚基蛋白水平的变化。方法:制备鼠抗兔SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基抗血清,进行免疫组化染色,观察高胆固醇对oddi括约肌钙依赖性钾通道β1亚基蛋白表达的影响。结果:免疫组化染色显示,高胆固醇组SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基的蛋白表达降低,半定量分析显示,高胆固醇兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达水平与对照组比较有统计学意义。结论:高胆固醇可下调兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达的水平,从而影响BKca通道的功能。     

禽流感病毒致病性的分子基础研究进展

禽流感是给人类健康带来极大危害的烈性传染病,由于其病原体具有高变异性的特点,给人类防控禽流感带来很大困难,故禽流感病毒致病性的分子基础研究显得尤为重要.禽流感HA和NA两种蛋白质,是流感病毒破坏机体免疫系统,感染细胞的关键;而NS1蛋白则决定病毒在宿主细胞内的破坏作用,NP蛋白和M蛋白决定病毒的型特异性,RNA聚合酶决定禽流感病毒的复制.     

电极干预对青霉素致痫大鼠痫灶电势及ATP合成酶β亚基表达变化的影响

为探讨青霉素致痫大鼠脑内生物能量的变化过程及电极干预对其的影响,将50只SD大鼠随机分为生理盐水对照组(A组)、青霉素模型组(B组)、金属电极干预组(C组)及绝缘电极干预组(D组),测定致痫灶电势及海马ATP合成酶β亚基(ATP5B)表达。发现致痫灶内电势及海马神经元细胞ATP5B表达呈现先增强后减弱变化趋势,金属电极置入降低了致痫灶电势而不改变海马ATP5B表达。推测青霉素致痫大鼠痫性发作过程中存在脑内电势的变化,出现相应的生物能量代谢的变化,致痫灶电势因金属电极干预而消减。     

人类早期胚胎体外发育的分子基础

人类早期胚胎的发育过程是一个复杂的过程,不同的发育阶段的营养需求及代谢类型是在不断变化,并且基因表达也有所转变。胚胎在由母型调节向合子型调节转变的过渡期间细胞水平和分子水平上都发生了一系列复杂的变化,调节着胚胎的发育进程。     

α地中海贫血的分子基础及产前诊断

α地中海贫血（α地贫）,是世界上最常见的严重危害人类健康的单基因遗传病。其分子基础为珠蛋白基因缺陷导致珠蛋白链合成障碍,具有遗传异质性。目前,检测患者及其携带者的水平正不断提高。随着DNA分析技术水平的不断发展,α-地贫的基因诊断方法日臻完善,为α地贫的防治提供了有利条件,对优生优育和提高人口质量具有积极的意义。     

10例性腺发育不良患者细胞遗传和分子遗传学研究

目的为了分析10例性腺发育不良患者细胞遗传学和分子遗传学特征。方法采用染色体核型分析和多重PCR技术,扩增Y染色体长臂AZF区域序列标签位点（STS）即AZFa区sY84、sY86,AZFb区sY127、sY134,AZFd区sY152．AZFc区sY254、sY255,Yq12sY160（DYZ1）和短臂sY14（SRY）9个位点。结果1例染色体核型分析为46,X．del（X）（q13）的女性和1例45,X／46,X,min的女性,均未扩增出SRY及Y染色体AZFa、b、c区域位点。1例染色体核型为46,XX男性和1例46,X,-Y,＋min的男性患者仅SRY基因扩增阳性,AZFa、b、c区域位点均缺失;2例染色体核型分析为46,XY女性和1例染色体核型分析47,XYY的女性患者不仅SRY基因扩增阳性,而且Y染色体AZFa、b、c区域多个位点扩增阳性。1例染色体核型为46,X,del（Y）（q11）的男性患者,Y染色体AZFb、c区域多个位点的缺失,1例染色体核型为46,X,de1（Y）（q12）,Yq12sY160（DYZ1）缺失。结论染色体核型分析和Y染色体微缺失检测是辅助诊断性腺发育不良的重要方法。     

非酒精性脂肪肝患者脂代谢紊乱与血清补体C3的相关性研究

目的:研究血清补体C3与非酒精性脂肪肝发病危险因素及非酒精性脂肪肝发生发展的相关性.进而了解C3在非酒精性脂肪肝患者血清中含量变化的意义.方法:40例健康对照组、40例单纯转氨酶升高组、40例非酒精性脂肪肝转氨酶正常组、40例非酒精性脂肪肝转氨酶升高组.按脂肪肝患者ALT是否升高分为转氨酶正常组和异常组.用酶联免疫吸附...     

口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析

目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD, 并制备兔抗β6LBD多克隆抗体.方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段, 经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体, 构建的 pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒, 转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株, 经IPTG诱导表达, SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体, 纯化目的蛋白.然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体, 以ELISA方法测定抗体效价, 并以Western blot鉴定其特异性.结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42 000的GST-β6LBD融合蛋白, 与预期结果相符.目的蛋白纯化后, 在电泳图片上显示较为清晰的单一条带, 用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上, 具有较高的特异性.结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体, 为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础.     

miR-1和miR-133a对大鼠肥大心肌细胞L-型钙通道Cavβ_2和α1C亚基的调控作用

目的研究miR-1和miR-133a在大鼠心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)和α1C亚基的调控作用。方法异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌细胞肥大;在线数据库micro Cosm和Targetscan预测miR-1和miR-133a的靶基因;分别构建含有Cavβ23'UTR或α1C 3'UTR的重组质粒,与miR-1或miR-133a共转染HEK293细胞,验证Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因;用Western blot法检测心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达;用siRNA干扰Cavβ2和α1C表达,明确Cavβ2和α1C在心肌细胞肥大中的作用。结果 1)Cavβ2为miR-1的潜在靶基因,α1C为miR-133a的潜在靶基因。2)分别将miR-1和Cavβ23'UTR,miR-133a和α1C 3'UTR共转染HEK293细胞,荧光素酶荧光值均显著降低(P0.05,P0.01)。3)分别转染miR-1 mimic、miR-133a mimic上调miR-1、miR-133a的表达后,心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达均明显下降(P0.01,P0.05)。4)用RNAi下调Cavβ2和α1C表达可明显抑制心肌细胞表面积(P0.01),ANP和β-MHC mRNA表达增加(P0.05)。结论Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因。miR-1和miR-133a可能通过负性调控L-型钙通道Cavβ2和α1C蛋白表达,抑制心肌细胞肥大。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β-内酰胺酶和质粒AmpC型β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的 研究北京大学第三医院分离的大肠埃希菌（E.coli）和肺炎克雷伯菌（Klebsiellapneumoniae,Kpn）中超广谱β-内酰胺酶（ESBL）和质粒AmpC型β-内酰胺酶（p-AmpC）的分子流行病学特征.方法 收集2003年6月至2004年7月无重复临床分离E.coli和Kpn共293株,对其中产ESBL和/或p-AmpC的86株进行研究.采用琼脂稀释法测定抗生素最低抑菌浓度;等电聚焦电泳测定β-内酰胺酶等电点;接合实验判断β-内酰胺酶基因位置和移动性;PCR及其产物测序确定基因型;ERIC/BOX-PCR判断菌株克隆性（E.coli菌株分型同时结合种系进化群PCR结果）.结果 PGR产物测序结果显示：我院E.coli和Kpn中只产生ESBL、只产生p-AmpC、同时产生两种酶菌株的发生率分别是30.8%（60/195）、17.3%（17/98）、0.5%（1/195）和1.0%（1/98）、0.5%（1/195）、6.0%（6/98）;E.coli中ESBL以CTX-M-14型酶为主（70.5%）,Kpn中则以CTX-M-3（30.4%）、CTX-M-9（30.4%）、CTX-M-14（21.7%）常见,p-AmpC均为DHA-1型;发现blacrx-M-52（GenBank登录号DQ223685）,该基因编码的β-内酰胺酶和CTX-M-3相比有两处点突变（A77V和P167S）,导致对头孢他啶的水解活性比头孢噻肟高（临床株相应接合子MICCTX=16 μg/ml,MICCAz≥256 μg/ml）.产酶株多数呈多重耐药,对美罗培南敏感.E.coli种系进化群D群以一个克隆株为主,而Kpn则以两个克隆株常见.结论 我院存在分别或同时产生ESBL和p-AmpC酶的E.coli和Kpn,相应常见酶型分别是CTX-M型和DHA型,菌株间呈一定程度的同源性.应对产生两类酶的菌株进行持续的表型监测和深入的机制研究.     

α3β2与α3β4烟碱型乙酰胆碱受体α和β亚基不同配比的药理活性研究

目的:比较α和β亚基不同配比形成α3β2和α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)敏感性的差异。方法:体外转录获得α和β亚基的cRNA,采用显微注射将3种不同配比(α∶β分别为1∶10、1∶1和10∶1)的cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳检测受体表达情况。利用激动剂乙酰胆碱(ACh)和拮抗剂α-芋螺毒素Reg IIA(α-CTx Reg IIA)检测在3种配比条件下形成受体药理活性的差异。结果:对于α3β2 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的半数有效浓度(EC50)分别为91.2μmol/L、104.4μmol/L和130.6μmol/L,α-CTx Reg IIA的半数抑制浓度(IC50)分别为40.2 nmol/L、36.4 nmol/L和42.3 nmol/L。对于α3β4 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的EC50分别为44.0μmol/L、110.0μmol/L和230.0μmol/L,α-CTx Reg IIA的IC50分别为226.8 nmol/L、71.5 nmol/L和49.4 nmol/L。结论:α3和β4亚基比例的改变会导致α3β4 nAChR结构和药理活性的改变。α3和β2亚基比例的改变对α3β2 nAChR结构和活性没有影响。