缺氧对海马神经元培养的影响及巴曲酶的保护作用—HSP70的表…

本文采用新生大鼠海马神经元培养技术，以细胞形态学及ＨＳＰ７０免疫阳性细胞表达为指标，首次观察了巴曲酶对缺氧海马神经元伤的直接保护作用。     

在缺氧条件下培养的海马神经元形态结构及热休克蛋白70表达变化…

在体研究曾发现在缺血再灌注模型中，丹参具神经保护作用，本文采用新生大鼠海马神经元培养技术，以细胞形态学及ＨＳＰ７０免疫性细胞表达为指标，首次观察了缺氧条件下培养的海马神经元形态结构及ＨＳＰ７０表达变化及丹参的影响。结果发现：（１）不论缺氧１ｈ或２ｈ，在培养的海马神经细胞中，有的细胞出现细胞体周围光晕消失，胞浆内颗粒变性，细胞膜肥厚，粗糙，轴突变粗，断裂，并且出现ＨＳＰ７０免疫阳性细胞；（２）缺氧１     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作脑组织HSP70表达的免疫组化及免疫印迹分析

目的探讨热休克蛋白（ＨＳＰ）７０在癫痫发作后的表达及作用。方法用免疫组化及免疫印迹分析法观察红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作后ＨＳＰ７０的表达及其动态演变过程。结果正常海马结构含有一定量的组成性ＨＳＰ７０（ＨＳＣ７０），发作后３ｈ即有ＨＳＰ７０表达，２４ｈ达高峰（Ｐ＜０．０１），４８ｈ开始下降，持续至少７ｄ。在２４ｈ，ＨＳＰ７０免疫反应（ＨＳＰ７０－ＩＲ）阳性细胞主要分布在边缘结构。结论ＨＳＰ７０表达是癫痫发作所致细胞损伤的标志，并可能预示细胞死亡或存活，对于观察持续性神经细胞的活动特别是细胞损伤有较大意义     

巴曲酶对海马脑片缺氧损伤的保护作用

本实验采用离体大鼠海马脑片缺氧模型，观察巴曲酶对缺氧后海马脑片ＣＡ１区诱发突触电位的影响。结果可见：用三种浓度巴曲酶孵育的海马脑片缺氧后ＰＶ消失时间均明显延迟，但对ＰＳ的消失时间无明显影响。提示：巴曲酶对海马神经元缺氧损伤具有一定保护作用。     

巴曲酶对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机理的研究

用Ｓｍｉｔｈ等的方法制备大鼠前脑短暂缺血再灌注模型，在缺血１０分钟后，再灌注６小时缺血前脑ＯＨ、ＧＳＳＧ及ＧＳＳＧ／总ＧＳＨ比值明显增高；海马区组织病理学检查显示神经元有不同程度的变性及轻度坏死；海马ＣＡ１区细胞计数显示存活细胞明显减少。巴曲酶（１．６ＢＵ／ｋｇ）可明显地逆转上述氧应激状态，海马ＣＡ１区存活细胞比缺血组明显增多。巴曲酶对缺血神经元的保护作用可能是缓解氧自由基损伤的结果，似乎不是诱导热休克蛋白７０基因表达的结果。     

在缺氧条件下培养的海马神经元形态结构及热休克蛋白(HSP)70表达变化及丹参的影响

在体研究曾发现在缺血再灌注模型中，丹参具神经保护作用。本文采用新生大鼠海马神经元培养技术，以细胞形态学及HSP70免疫性细胞表达为指标，首次观察了缺氧条件下培养的海马神经无形态结构及HSP70表达变化及丹参的影响。结果发现：（1）不论缺氧1h或2h，在培养的海马神经细胞中，有的细胞出现细胞体周围光晕消失，胞浆内颗粒变性，细胞膜肥厚、粗糙，轴突变粗、断裂，并且出现HSP70免疫阳性细胞；（2）缺氧1h组的海马神经细胞存活率及HSP70免疫阳性细胞率均显著高于缺氧2h组，（3）丹参组（在缺氧0．5h前给丹参100mg／ml（终浓度）的海马神经细胞存活率及HSP70免疫阳性细胞率均显著高于缺氧2h组。结果提示丹参具有直接的抗缺氧性神经细胞损伤的作用，减轻了缺氧所造成的神经细胞形态学上的改变。     

局灶性缺血再灌注时丹参对热休克蛋白70的影响—免疫细胞化学及…

丹参素以活血化瘀称著，常用于治疗缺血性脑血管病，热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）具神经保护作用。本文研究目的：丹参是否也通过影响ＨＳＰ７０起作用，采用大鼠犬脑中动脉（ＭＣＡ）线检模型。以免疫细胞化学及病理组织方法在同一动物中进行研究。结果发现在缺血９０ｍｉｎ再灌注２４ｈ后，对照组手术侧皮层ＨＳＰ７０免疫反应增强及皮层神经细胞有缺血性损伤，而丹参组（缺血９０ｍｉｎ时给予丹参１０ｇ／Ｋｇ，体重ｉｐ），则Ｈ     

沙土鼠脑缺血后HSP70表达变化研究

目的研究脑缺血后ＨＳＰ７０表达变化。方法采用沙土鼠短暂前脑缺血再灌损伤模型,光镜观察缺血再灌后神经细胞损伤情况,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和免疫组化方法分别检测脑缺血后不同时期额叶ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ及蛋白表达。结果沙土鼠脑缺血后各期ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加（Ｐ＜０．０５）,而ＨＳＰ７０蛋白仅在再灌后１ｄ有少量表达（Ｐ＜０．０１）。缺血神经细胞在再灌后７ｄ大多出现损伤改变。结论沙土鼠脑缺血后,虽有ＨＳＰ７０转录增加,却存在着ＨＳＰ７０的翻译障碍。ＨＳＰ７０翻译障碍可能是导致神经细胞损伤的重要原因之一。     

丹参对癫痫大鼠脑内热休克蛋白70表达的影响

目的 探讨丹参对癫痫发作所造成神经元损伤的作用及其机制。方法 采用戊四氮致痫模型,运用常规病理及电镜检查方法,对比丹参组与对照组神经元受损的情况;运用免疫组织化学方法,对比观察丹参组与对照组热休克蛋白（ＨＳＰ）７０表达的变化。结果 丹参组与对照组动物相比,大脑皮质及海马区异常神经元的数目明显减少（Ｐ〈０．０１）,超微结构的异常改变也明显减轻,同时丹参组动物脑内ＨＳＰ７０免疫反应阳性神经元的数目明显     

脑梗塞患者血清中LPO,SOD水平与巴曲酶的影响

本文应用硫代巴比妥酸显色比色法和邻苯三酚自氧法测定８７例脑梗塞患者血清中ＬＰ０、ＳＯＤ含量，随机分组分别用巴曲酶和低分子右旋糖酐＋丹参治疗，并测定治疗后血清中ＬＰＯ、ＳＯＤ含量，研究证明脑梗塞患者血清中ＬＰＯ显著高于非脑血管病及健康对照者（Ｐ＜０．０１），而ＳＯＤ显著低于非脑血管病及健康对照者（Ｐ＜０．０１）。巴曲酶治疗后血清中ＬＰＯ明显低于治疗前（Ｐ＜０．０１），ＳＯＤ高于治疗前（Ｐ＜０．０５），而对照组无差异（Ｐ＞０．０５）。提示巴曲酶可抑制脑梗塞患者血清中ＬＰＯ产生，提高ＳＯＤ活性，具有保护神经细胞作用。     

MK-801对海人酸诱导大鼠癫痫发作脑组织HSP70表达的影响

目的：癫痫是一种神经系统常见病，其发病机制较为复杂。近年来研究发现，在许多化学药物及电刺激所造成的癫痫发作模型中均可诱导热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的合成。表明ＨＳＰ７０与癫痫发作有着密切的关系。方法：选择针对ＨＳＰ７０的鼠单克隆特异抗体，采用免疫组织化学法对海人酸（ＫＡ）诱导ＳＤ大鼠癫痫发作后ＨＳＰ７０表达进行了观察，并就ＭＫ－８０１对ＨＳＰ７０表达的影响做了初步探讨。结果：ＫＡ注射后２４ｈ，ＨＳＰ７０免疫反应阳性细胞主要分布在边缘结构，多数皮质区也有表达；预先用ＭＫ－８０１后，全部大鼠均没有出现明显惊厥行为，多数皮质区及丘脑区ＨＳＰ７０表达消失，但在齿状回，ＣＡ３区仍有高表达。结论：ＭＫ－８０１具有抗惊厥及神经保护作用，其对某些脑区ＨＳＰ７０表达的抑制作用显示出它对ＫＡ引起的同步性痫样放电活动的破坏     

实验性犬SAH后CVS血浆、CSF中ET、CGRP含量动态变化及巴曲酶的保护作用研究

采用放免法动态观察了２５只实验性犬ＳＡＨ后ＣＶＳ动物模型的血浆、ＣＳＦ中ＥＴ及ＣＧＲＰ含量变化及巴曲酶的保护作用。结果：单纯注血组及巴曲酶治疗组的血浆、ＣＳＦ中ＥＴ含量较对照组明显增高（Ｐ＜０．０１），ＣＧＲＰ含量明显降低（Ｐ＜０．０１）。单纯注血组在注血后３０ｍｉｎ血浆、ＣＳＦ中ＥＴ含量开始升高，ＣＧＲＰ含量开始下降，至第７ｄＥＴ达最高值，ＣＧＲＰ达最低值。经蛛网膜下腔及静脉注入巴曲酶０．４ＢＵ／ｋｇ／ｄ组，血浆及ＣＳＦ中ＥＴ含量均较同期单纯注血组明显降低（Ｐ＜０．０１），而ＣＧＲＰ则明显升高（Ｐ＜０．０１）。提示血浆、ＣＳＦ中ＥＴ、ＣＧＲＰ失衡是ＳＡＨ后ＣＶＳ的原因之一。巴曲酶可防止ＥＴ升高和ＣＧＲＰ降低。     

巴曲酶对沙土鼠海马CA1区神经元保护作用及其机制的研究

目的探讨巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注神经元保护作用的可能机制及时效关系。方法实验动物随机分为10组,分别为缺血再灌注后0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h组、假手术组及对照组,各个时间点分别给予腹腔注射巴曲酶8BU／kg,采用免疫组化SP法检测海马CA1区的Bcl-2、eNOS、VEGF及Akt蛋白的表达,光镜下计算沙土鼠海马CA1区的神经元阳性细胞数。并行电镜下神经元超微结构的观察。结果使用巴曲酶后,Bcl- 2、eNOS、VEGF及Akt蛋白表达明显增加,神经元阳性细胞数在巴曲酶各时间点与对照组比较差异有显著性(P< 0．01),而巴曲酶0h-24h时间点之间比较差异无统汁学意义(P>0．05);Bcl-2、eNOS及VEGF神经元阳性细胞数在0h-24h时间点与48h-72h时间点比较差异有统计学意义(P<0．05);超微结构显示0h-24h时间点较48h及 72h时间点抗细胞凋亡明显。结论巴曲酶脑保护作用的机制可能是通过上调Bcl-2、eNOS、VEGF及Akt蛋白的表达;72h内使用巴曲酶具有神经元保护作用,但在0h-24h时间点使用较48h及72h时间点保护作用更为明显。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白（Ｈsp70)表达的影响。结果显示,低氧预处理能诱导海马神经元对Ｈsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧－复氧后Ｈsp70表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp７０的表达,并使海马神经元对缺氧产生耐受,减少缺氧－复氧后神经元的死亡。     

实验性犬SAH后CVS血浆,CSF中ET,CGRP含量动态变化及巴曲…

采用放免法动态观察了２５只实验性犬ＳＡＨ后ＣＶＳ动物模型的血浆，ＣＳＦ有ＥＴ及ＣＧＲＰ含量变化及巴曲酶的保护作用，结果；单纯性血组及巴曲酶治疗组的血浆，ＣＳＦ中ＥＴ含量较对照组明显增高（Ｐ〈０．０１），ＣＧＲＰ含量明显降低（Ｐ〈０．０１）。单纯注血组在注血后３０ｍｉｎ血浆，ＣＳＦ中ＥＴ含量开始升高，ＣＧＲＰ含量开始下降，至第７ｄＥＴ达最高值，ＣＧＲＰ达最代值。经蛛网膜下腔及静脉注入巴曲酶０．４ＢＵ     

实验性犬SAH后CVS血浆、CSF中NPY、ANP含量动态变化及巴曲酶的保护作用研究

目的探讨蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）后脑血管痉挛（ＣＶＳ）的发病机理和防治方法。方法采用放免法动态观察了犬ＳＡＨ后血浆、ＣＳＦ中神经肽Ｙ（ＮＰＹ）、心钠素（ＡＮＰ）含量动态变化及巴曲酶的保护作用。结果单纯注血组及巴曲酶治疗组血浆、ＣＳＦ中ＮＰＹ、ＡＮＰ含量较注血前及同期正常对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）；单纯注血组在注血后３０ｍｉｎ血浆、ＣＳＦ中ＮＰＹ含量开始升高，ＣＳＦ中ＡＮＰ含量亦在注血后３０ｍｉｎ升高，血浆ＡＮＰ含量则在第２ｄ开始升高，至第７ｄ最高。蛛网膜下腔给药组和静脉注入巴曲酶０．４ＢＵｋｇ－１ｄ－１组血浆、ＣＳＦ中ＮＰＹ、ＡＮＰ含量均明显低于同期单纯注血组（Ｐ＜０．０１）。结论血浆、ＣＳＦ中ＮＰＹ、ＡＮＰ的异常增高是ＳＡＨ后ＣＶＳ的原因之一，巴曲酶可以防止ＮＰＹ和ＡＮＰ的异常增高。     

巴曲酶对沙土鼠海马CA1区的神经元保护作用的量效、时效及可能机制的探讨

目的 探讨巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注海马CA1区神经元保护作用的可能机制及量效时效关系.方法 成年雄性蒙古沙土鼠170只,随机分成巴曲酶组132只、对照组及假手术组各19只.巴曲酶组又分为A组60只包括巴曲酶1～32BU/kg各剂量组,对照组及假手术组各10只,行TUNEL染色;B组72只分别为缺血再灌注后0～72h各时间点组,每时间点组9只,对照组及假手术组各9只,其中6只分别采用TUNEL染色检测海马CA1区的凋亡细胞及SP法检测海马CA1区的Bc1-2、eNOS、VEGF及Akt蛋白的表达,3只行电镜下神经元超微结构的观察.光镜下用带刻度目镜计算沙土鼠海马CA1区的神经元阳性细胞数.结果 巴曲酶8BU/kg以上剂量组细胞凋亡率明显减少,与对照组、4BU/kg以下剂量组有显著差异(P＜0.01),8BU/kg以上剂量组之间无统计学意义(P＞0.05).不同时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数比较0h、1h、3h、6h、12h及24h亚组与对照组之间存在极显著性差异(P＜0.01).使用巴曲酶后,Bcl-2、eNOS、VEGF及Akt蛋白表达明显增加,神经元阳性细胞数在巴曲酶各时间点与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),超微结构显示0～24h时间点较48h及72h时间点抗细胞凋亡明显.结论 巴曲酶具有明显的脑保护作用,其机制可能是通过上调Bcl-2、eNOS、VEGF及Akt蛋白表达来达到脑保护作用的.巴曲酶的脑保护作用具有量效性及时效性,其最佳剂量为8BU/kg,72h内使用巴曲酶皆具有脑保护作用,尤以24h前使用效果明显.     

雌激素对癫癎大鼠大脑皮层、海马FOS蛋白表达的影响

目的;了解雌激素对马桑内酯（ＣＬ）致■大鼠中枢神经系统ＦＯＳ蛋白（ＦＯＳ）表达的影响。方法：应用流式细胞免疫荧光技术对ＣＬ致■及给予雌激素后再致■大鼠大脑皮层、海马细胞ＦＯＳ表达进行定量检测。结果：ＣＬ致■组大鼠大脑皮层、海马ＦＯＳ表达的荧光指数（ＦＩ）和阳性细胞数较正常对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）;给予雌二醇（Ｅ２）后再致■组皮层、海马ＦＯＳ表达较单纯ＣＬ致■组增加（Ｐ＜００５,Ｐ＜０．０１）。结抡：由于ＦＯＳ可作为神经元兴奋的标志,雌激素可以提高皮层、海马神经细胞的兴奋性,提示雌激素有致■性。     

自由基在大鼠全脑缺血再灌流损伤中作用机理及保精增智液的保护作用

本文采用大鼠４血管关闭方法制作了全脑血再灌流模型。于再灌流后２４ｈ取双侧海马，分别采用Ｐｒｏｇａｌｌｏｌ－ＮＢＴ和改良的ＴＢＡ法测定了ＳＯＤ活性和ＬＰＯ含量。结果ＳＯＤ明显低于对照组而ＬＰＯ明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。同时观察了一种新的中药方剂—保精增智液对自由基的拮抗作用，实验证明该药造模后给药效果不明显（Ｐ＞０．０５），造模前给药可使ＬＰＯ下降及ＳＯＤ上升，与对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。证明该药对全脑缺血再灌流损伤引起的自由基升高有保护作用。     

PACAP对谷氨酸引起海马神经元损伤的保护作用

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ）对谷氨酸引起的海马神经元损伤的保护作用及其受体机制。方法海马神经元体外培养７ｄ，给予谷氨酸。结果当谷氨酸是０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，随着剂量的增加，神经元的存活率逐渐降低；１０－９ｍｏｌ／Ｌ～１０－１３ｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＣＡＰ，能减轻谷氨酸引起的海马神经元损伤；ＰＡＣＡＰⅠ型受体特异性拮抗剂ＰＡＣＡＰ６－３８能抑制ＰＡＣＡＰ减轻谷氨酸对海马神经元损伤作用。结论ＰＡＣＡＰ具有减轻谷氨酸引起的海马神经元损伤的作用，该作用是由ＰＡＣＡＰⅠ型受体介导的。