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氧化砷对白血病细胞内 PML/PML-RARα 蛋白的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:探讨急性早幼粒细胞白血病细胞的分子标志PML-RARα在氧化砷(As2O3)诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法:观察As2O3对PML-RARα蛋白在亚细胞定位的影响。结果:①在1μmol/L的As2O3作用下,HL-60细胞核内PML抗血清染色明显减少,而在胞浆的近核膜区出现弥散分布的荧光染色;②As2O3诱导NB4细胞内散在分布的PML抗血清染色颗粒明显减少;③通常情况下,少数NB4细胞的胞浆中存在PML抗血清染色颗粒的聚集,这类细胞在As2O3作用后明显增多,凋亡细胞中PML抗血清染色聚集现象也存在;④全反式维甲酸(ATRA)预处理24或48小时并不改变As2O3对NB4细胞的凋亡诱导效应。结论:As2O3诱导细胞凋亡的过程不依赖维甲酸信号途径,可能通过PML/PML-RARα及其它相关基因或蛋白的调控来实现。 相似文献
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氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR—2)凋亡的体外 … 总被引:14,自引:0,他引:14
目的:深入了解氧化砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的机制。方法:以对全反式维甲酸耐药的APL细胞株MR-2为模型,用细胞生长,活力测定,形态学观察和流式细胞仪分析,四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察As2O3治疗APL的效应途径。结果:1.0μmol/LAs2O3可诱导MR-2细胞凋亡,并能降解APL特异蛋白PML-RARα融合蛋白。结论:As2O3治疗APL的效应途径可能不同 相似文献
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氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR-2)凋亡的体外研究 总被引:22,自引:0,他引:22
目的:深入了解氧化砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的机制。方法:以对全反式维甲酸耐药的APL细胞株MR2为模型,用细胞生长、活力测定、形态学观察和流式细胞仪分析、四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察As2O3治疗APL的效应途径。结果:1.0μmol/LAs2O3可诱导MR2细胞凋亡,并能降解APL特异蛋白PMLRARα融合蛋白。结论:As2O3治疗APL的效应途径可能不同于ATRA,但PMLRARα可能是二者的共同作用靶点 相似文献
4.
As2O3诱导K562细胞凋亡过程中酪氨酸蛋白激酶活性的变化 总被引:31,自引:1,他引:31
目的:阐明As2O3诱导K562细胞凋亡的可能机制,为As2O3治疗白血病的推广应用提供一定的理论基础。方法:采用免疫沉淀、Westernblot及生物化学等方法,观察在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中,细胞胞浆和胞膜蛋白及ABL蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性及某些内源性蛋白酪氨酸磷酸化的变化。结果:在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中,细胞胞浆和胞膜蛋白及ABL蛋白PTK活性降低,分子量为18万和12.5万的蛋白酪氨酸磷酸化减少。结论:As2O3可能通过降低细胞内某些蛋白,尤其BCR/ABL蛋白的PTK活性,减少蛋白酪氨酸磷酸化,从而阻断BCR/ABL抗凋亡信号的传导,诱导K562细胞凋亡 相似文献
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As2O3对K562细胞BCR/ABL蛋白酪氨酸磷酸化的影响 总被引:22,自引:1,他引:22
目的 进一步阐明As2O3 诱导K562 细胞凋亡和抑制其生长的可能机制,为As2O3 在临床上的应用提供理论依据。方法 采用免疫沉淀、Western blot、生物化学及免疫荧光等方法研究了As2O3对BCR/ABL蛋白酪氨酸磷酸化及其所介导的信号途径和某些凋亡相关蛋白表达的影响。结果 1μmol/LAs2O3 使细胞内多种蛋白酪氨酸磷酸化减少,而且BCR/ABL蛋白自身酪氨酸磷酸化亦减少,但0 .1 μmol/LAs2O3 对蛋白酪氨酸磷酸化的影响不明显;As2O3 对蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP) 活性未见明显影响;As2O3 下调JAK2 蛋白的表达,但对STAT1 和STAT2 蛋白的表达以及STAT1 蛋白酪氨酸磷酸化无影响;As2O3 亦不影响凋亡相关蛋白Bcl2、BclxL/S、Bax、ICH1L、p53、PARP的表达,As2O3 亦使K562 细胞的PML蛋白降解。结论 As2O3 可能通过减少细胞内某些蛋白,尤其是BCR/ABL蛋白酪氨酸磷酸化和( 或)下调JAK2 蛋白的表达而干扰BCR/ABL致癌信号的传导,引起K562 细胞凋亡和抑制其生长。 相似文献
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抗PML—RARα反义核酸对NB4细胞形态,PML—RARα mRNA及蛋白质?… 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨抗PML-RARα反义核酸(FUAS)对NB4细胞的分化、PML-RARα mRNA表达及PML/PML-RARα蛋白细胞内定位的影响。方法 以NB4细胞为研究对象,细胞形态观察采用Wright染以法;PML-RARαmRNA表达采用RT-PCR法;PML/PML-RARα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果 FUAS处理后第5天,细胞出现部分分化。处理后24,72,120小时,PML- 相似文献
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PML—RARα转基因小鼠发生急性早幼粒细胞白血病 总被引:2,自引:0,他引:2
为了从整体水平上研究PML-RARα融合蛋白的致白血病作用,建立了仅在髓系细胞中表达PML-RARα融合基因的转基因小鼠。通过表型分析发现一个单系的3只hCG-PML-RARα转基因小鼠在1-5个月时发生急性早幼粒细胞白血病,从而说明MPL-RARα融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用。 相似文献
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细胞凋亡相关基因与白血病 总被引:2,自引:0,他引:2
细胞凋亡是当前生命科学研究的热点之一,凋亡相关基因bcl-2,P53,c-myc,ICE家族,APO=-1/Fas,bcr-abl,PML-RARα等涉及白血病发病机制,治疗和耐药,通过调控凋亡相关基因促进白血病细胞凋亡,可能是治疗白血病的新途径。 相似文献
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氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究 总被引:76,自引:1,他引:76
目的:了解氧化砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的细胞和分子机制。方法:以早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞等为研究对象,利用流式细胞仪,DNA电泳,Northern、Western印迹,免疫组化等手段,观察As2O3对APL的作用。结果:As2O3能显著诱导NB4细胞凋亡,而不影响HL-60和U937的生长和存活。氧化砷能有效降低NB4细胞中bcl-2基因的表达,而对其它几种凋亡相关基因(包括p53、c-myc、bax和bcl-XL)的mRNA水平无影响。结论:这可能是As2O3诱导NB4细胞凋亡的分子机制之一。 相似文献
10.
作者应用筑巢式逆转录/多聚酶链反应(RT-PCR)对34例儿童急性早幼粒细胞白血病(APL,M3)患者进行PML-RARa融合基因的检测,发现18例初发患者标本中均有融合基因转录本;13例经全反式维甲酸(ATRA)诱导缓解(CR)后的患者中,12例仍可检测到融合基因的表达;同时对16例巩固化疗后的患者进行微量残留病(MRD)的检测:8例融合基因持续阴性或未次阴性的患者,除l例不久复发外,余均处于良好的CR状态;而8例融合基因持续阳性或未次阳性的患者,7例已复发,其中3例分别是在PCR阳性结果后3,3及4个月复发的。以上结果表明PML-RARa基因检测在儿童APL的诊断,疗效评价及MRD监测中同样是一个快速、准确且灵敏的方法。 相似文献
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V Lallemand-Breitenbach J Zhu F Puvion M Koken N Honoré A Doubeikovsky E Duprez P P Pandolfi E Puvion P Freemont H de Thé 《The Journal of experimental medicine》2001,193(12):1361-1371
Promyelocytic leukemia (PML) is the organizer of nuclear matrix domains, PML nuclear bodies (NBs), with a proposed role in apoptosis control. In acute promyelocytic leukemia, PML/retinoic acid receptor (RAR) alpha expression disrupts NBs, but therapies such as retinoic acid or arsenic trioxide (As2O3) restore them. PML is conjugated by the ubiquitin-related peptide SUMO-1, a process enhanced by As2O3 and proposed to target PML to the nuclear matrix. We demonstrate that As2O3 triggers the proteasome-dependent degradation of PML and PML/RARalpha and that this process requires a specific sumolation site in PML, K160. PML sumolation is dispensable for its As2O3-induced matrix targeting and formation of primary nuclear aggregates, but is required for the formation of secondary shell-like NBs. Interestingly, only these mature NBs harbor 11S proteasome components, which are further recruited upon As2O3 exposure. Proteasome recruitment by sumolated PML only likely accounts for the failure of PML-K160R to be degraded. Therefore, studying the basis of As2O3-induced PML/RARalpha degradation we show that PML sumolation directly or indirectly promotes its catabolism, suggesting that mature NBs could be sites of intranuclear proteolysis and opening new insights into NB alterations found in viral infections or transformation. 相似文献
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全反式维甲酸与三氧化二砷对NB4细胞CD44v6表达的调节 总被引:1,自引:0,他引:1
黏附分子CD44v6与急性髓系白血病(AML)疾病进展密切相关。本研究探讨全反式维甲酸(ATRA)及三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞CD44v6及其相关的PI3K/Akt信号通路的影响。应用显微镜观察检查和流式细胞术检测NB4细胞的分化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色流式细胞术检测NB4细胞凋亡;实时RT-PCR检测NB4细胞CD44v6 mRNA的表达;Western blot检测NB4细胞CD44v6蛋白的表达及PI3K/Akt信号通路的变化。结果显示:在ATRA诱导NB4细胞分化过程中,CD44v6的转录明显受抑制,但CD44v6蛋白表达无明显增减,PI3K/Akt信号通路被激活。在As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中,CD44v6的转录水平及蛋白表达均明显下调,PI3K/Akt信号通路受抑。结论:ATRA与As2O3对NB4细胞CD44v6表达的影响不同。此研究结果为从干预白血病细胞和造血微环境相互关联角度进一步揭示ATRA和As2O3的作用机制奠定了实验基础。 相似文献
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槲皮素对白血病细胞中PML基因及蛋白表达的影响和定位的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。方法 经全反式维甲酸(ATRA)、槲皮素处理后的NB4、HL-60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞分内分布定位采用免疫荧光技术;PML mRNA表达的检测采用RT-PCR法。结果 (1)ATRA处理后,NB4和HL-60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经槲皮素处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。(2)ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白恢复定位,HL-60、K562细胞内PML蛋白定位分布无变化;槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白聚积于POD结构,随后降解,在HL-60及K562细胞,PML蛋白发生相似改变。(3)ATRA、槲皮素对各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论 在不同诱导剂刺激下,PML在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡、控制细胞生长的作用。 相似文献
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二甲基酰胺及环孢菌素A加强砷剂诱导早幼粒细胞白血病细胞系NB4凋亡 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 观察线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放剂二甲基酰胺(diamide)和抑制剂环孢菌素A对三氧化二砷(As2O3)诱导的NB4细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的二甲基酰胺、环孢菌素A和As2O3单独或联合处理急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞。通过细胞形态学观察、基因且DNA电泳、Annexin-V含量及细胞DNA含量分布等鉴定细胞凋亡。应用流式细胞仪检测罗丹明123(Rh123)的染色强度测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。结果 二甲基酰胺和环孢菌素A均明显增加As2O3诱导的NB4细胞凋亡。同时,As2O3诱导的NB4细胞ΔΨm下降也因二甲基酰胺和环孢菌素A的联合处理而加强。在1μmol/L As2O3处理72h的NB4细胞,27.9%的细胞ΔΨm下降,而两者共同处理时,ΔΨm下降的细胞达59.7%和42.2%。结论 As2O3诱导的ΔΨm破坏可能涉及到组成MPT的重要分子,尤其是腺嘌呤转动蛋白相关分子的巯基氧化。 相似文献
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PML-RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷诱导的NB4细胞凋亡中的作用研究 总被引:8,自引:0,他引:8
为研究PML-RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷(As2S3)诱导的人早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡中的作用,本研究应用细胞形态观察、流式细胞术测定及DNA电泳等方法观察三硫化二砷对NB4细胞的诱导凋亡作用,用染色体G显带技术、反转录PCR及Western印迹测定这一过程中PML-RARα融合基因及其表达产物、野生型RARα蛋白的变化。结果表明,三硫化二砷在0.5-2μmol/L之间能诱导NB4细胞凋亡,在此过程中PML-RARα融合基因无明显变化,但PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白明显减少。结论提示PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的降解在三硫化二砷诱导的NB4细胞凋亡过程中可能起了重要作用。 相似文献
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三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节 总被引:40,自引:1,他引:39
目的探讨细胞内巯基、维甲酸、Caspase酶与三氧化二砷诱导细胞凋亡之间的关系。方法采用NB4、HL60细胞为体外模型,观察不同巯基化合物、维甲酸及Caspase酶抑制物对三氧化二砷诱导细胞凋亡的影响。结果①乙酰半胱氨酸能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,二巯基硫氨(BSO)则增强三氧化二砷诱导的细胞凋亡,单巯基甘油,二巯基丙醇对三氧化二砷诱导的细胞凋亡无影响;②Caspase抑制剂ZVAD.fmk可阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,而YVAD.fmk不能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡;③在NB4细胞,维甲酸与三氧化二砷有拮抗作用,但在HL60细胞中可产生协同作用。结论①三氧化二砷通过与细胞内游离巯基结合,进而改变细胞内信号传导,选择性激活Caspase酶,导致细胞凋亡;②维甲酸对三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节作用呈细胞特异性。 相似文献
18.
维甲酸、砷剂及柔红霉素对NB4细胞组织因子表达的影响 总被引:16,自引:1,他引:15
目的 探讨全反式维甲酸( A T R A) 、三氧化二砷( As2 O3) 及柔红霉素( D N R) 对急性早幼粒细胞白血病( A P L) 细胞株 N B4 细胞组织因子( T F) 表达的影响。方法 用复钙时间检测 N B4 细胞的促凝活性( P C A) ;用 E L I S A 方法检测其 T F 抗原;用逆转录聚合酶链反应( R T P C R) 检测 T Fm R N A的转录水平。结果 A T R A 和 As2 O3 均呈时间依赖的方式下调 N B4 细胞的 P C A、 T F 抗原水平以及 T F m R N A的转录;而 D N R 处理 N B4 细胞的 P C A及 T F 抗原在早期上调,至24 ~48 小时达到最大值。对 P C R 产物测序,发现 A P L 细胞 T F 第5 个外显子缺失的转录本。结论 A T R A 和 As2 O3 均可下调 A P L 细胞 T F的表达并降低其 P C A,改善 A P L患者的弥散性血管内凝血( D I C) 出血症状; As2 O3 和 D N R 对 A P L凝血障碍不同效应的作用机制至少部分与药物对 A P L细胞 T F 表达和 P C A 的不同调节作用有关。 相似文献
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两种早幼粒细胞白血病融合维甲酸受体α的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:就配基-受体、受体-DNA和蛋白质-蛋白质相互作用,以及蛋白质的亚细胞定位等方面,对早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα)与早幼粒细胞白血病锌指-维甲酸受体α(PLZF-RARα)融合蛋白的生物学功能进行比较。方法:采用受体放射配基结合分析、受体-DNA结合分析及免疫荧光技术。结果和结论:PML-RARα与PLZF-RARα融合蛋白有相似的配基结合亲和力;两者都能以同二聚体形式结合维甲酸反应元件(RAREs);都能与维甲类X受体(RXR)结合,提示PML-RARα和PLZF-RARα在急性早幼粒细胞白血病(APL)的发病中有共同的分子基础。但是,两者在某些特性方面又有所不同,如:PML-RARα和PLZF-RARα结合RAREs的相对强度有所差异;两者在与RXR形成复合物的行为以及亚细胞定位方面亦不尽相同;尤为重要的是,两者可分别通过与PML和PLZF形成异源复合物而阻断PML和PLZF蛋白质所介导的不同调节途径。因此,PML-RARα与PLZF-RARα之间的这些差异,可能部分解释伴t(11;17)的APL患者对全反式维甲酸诱导分化治疗耐药的原因。 相似文献
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As2O3和/或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27^Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)和/或转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27^Kip1、cyclin E及内源性TGF—β1 mRNA水平的变化及其意义。用MTT法检测As2O3对NB4细胞的细胞毒性及IC50用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT—PCR检测P27^Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平。结果表明:As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡;As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系,24小时的IC50约为12μmol/L,48小时的IC50约为5μmol/L,72小时的IC50约为3μmol/L。As2O3和/或TGF—β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞,5μmol/L As2O3使NB4细胞阻滞在G2/M期,5ng/ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期,两者联合处理组主要使S期阻滞。As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27^Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调,而cyclin E的mRNA表达下调;联合处理组结果显示TGF—β1可增强As2O3上述作用。结论:As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;As2O3及外源性TGF—β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27^Kip1高表达以诱导细胞凋亡;TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达,或者通过上调P27^Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性,从而导致NB4细胞周期阻滞。 相似文献