维甲酸诱导HL-60细胞Fas蛋白表达

目的：探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和９顺式维甲酸（９ｃｉｓＲＡ）对ＨＬ６０细胞Ｆａｓ表达水平及维甲酸对抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡敏感性的影响。方法：用流式细胞仪检测ＨＬ６０细胞膜Ｆａｓ蛋白表达水平；分别采用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪检测抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡。结果：ＨＬ６０细胞Ｆａｓ弱表达。经１０－６ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ或９ｃｉｓＲＡ分别预处理４天后，ＨＬ６０细胞Ｆａｓ表达水平及对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的敏感性均显著提高。９ｃｉｓＲＡ提高ＨＬ６０细胞对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的敏感性的能力强于ＡＴＲＡ。结论：维甲酸可上调ＨＬ６０细胞表达Ｆａｓ，这可能与维甲酸诱导ＨＬ６０细胞分化相关。进一步深入探讨其分子机制，将为肿瘤治疗，特别是自体骨髓移植中骨髓净化提供新方法     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

三氧化二砷对HL-60细胞及NB4细胞端粒酶活性的调节

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对ＨＬ－６０细胞及ＮＢ４细胞端粒酶活性的调节作用。方法 利用透射电镜、流式细胞仪、半定量端粒重复扩增、－银染色等手段,检测细胞的分化、凋亡,ｂｃｌ－２表达及端粒酶活性。结果 低浓度Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０及ＮＢ４细胞的诱导分化作用不及全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）,但对其端粒酶活性的下调作用却比ＡＴＲＡ强烈和迅速。较高浓度Ａｓ２Ｏ３在有效诱导两种细胞凋亡过程中,伴随粒酶活     

逆转录病毒介导的反义bcl—2序列促进足叶乙甙诱导的白血病？…

探讨逆转录病毒介导的反义ｂｃｌ－２序列对细胞凋亡的诱导作用,方法：ＰＡ３１７细胞包装逆转录病毒,病毒转导Ｊｕｒｋａｔ细胞后用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及蛋白表达水平;用流式细胞仪计数及ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡中bcl—2,c—myc基因表达水平的变化

阿糖胞苷诱导ＨＬ－６０细胞凋亡中ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因表达水平的变化仇志根马伴吟杨毅吴王月现已证明，阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。我们采用Ａｒａ－Ｃ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，并观察了凋亡调控基因ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ表达...     

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的：了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的细胞和分子机制。方法：以早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４细胞等为研究对象，利用流式细胞仪，ＤＮＡ电泳，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹，免疫组化等手段，观察Ａｓ２Ｏ３对ＡＰＬ的作用。结果：Ａｓ２Ｏ３能显著诱导ＮＢ４细胞凋亡，而不影响ＨＬ－６０和Ｕ９３７的生长和存活。氧化砷能有效降低ＮＢ４细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，而对其它几种凋亡相关基因（包括ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ、ｂａｘ和ｂｃｌ－ＸＬ）的ｍＲＮＡ水平无影响。结论：这可能是Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞凋亡的分子机制之一。     

逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡

目的：探讨逆转录病毒介导的反义ｂｃｌ２序列对细胞凋亡的诱导作用。方法：ＰＡ３１７细胞包装逆转录病毒，病毒转导Ｊｕｒｋａｔ细胞后用ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ及蛋白表达水平；用流式细胞仪计数及ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。结果：转染反义ｂｃｌ２序列可使内源性ＢＣＬ２蛋白表达下降，提高白血病细胞株对足叶乙甙（Ｖｐ１６）的敏感性，促进细胞凋亡。结论：反义ｂｃｌ２序列能促进Ｖｐ１６诱导的白血病细胞凋亡，为ｂｃｌ２反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。     

抗bcl－2核酶在HL－60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用，开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的“锤头型”核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＺ）基因定向克隆于真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ，构成ｐＤＯＲ－ＲＺ重组体。通过脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，把ｐＤＯＲ－ＲＺ导入ＨＬ－６０细胞。用Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ印迹，ＲＮＡ斑点杂交法观察ＲＺ基因在ＨＬ－６０细胞内表达，并通过电镜、流式细胞仪（ＦＣＭ），光镜和ＤＮＡ电泳观察ＲＺ对ＨＬ－６０细胞的影响。结果：①ＲＺ在转染ＨＬ－６０后７２小时得以表达，细胞内ｂｃｌ－２蛋白合成受到抑制。②在ＦＣＭ图谱上可见到明显的凋亡峰，形态观察ＲＺ处理的ＨＬ－６０细胞呈典型的凋亡形态。③足叶乙甙（促凋亡）敏感性试验表明，与未转染的细胞和转染空载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的细胞相比，转染ｐＤＯＲ－ＲＺ的细胞ＤＮＡ电泳易出现梯状条带。结果说明ＲＺ基因通过逆转录病毒表达载体导入ＨＬ－６０细胞后可成功地表达并抑制ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的合成，并促进ＨＬ－６０细胞凋亡     

WT1基因表达对K562、HL-60细胞增殖作用的研究

目的：探讨ＷＴ１基因反义ＲＮＡ对髓系白血病细胞生长增殖和细胞凋亡的影响及作用机制。方法：用ＷＴ１基因反义ＲＮＡ培养Ｋ５６２、ＨＬ６０细胞，用氮蓝四氮唑盐染色、流式细胞仪检测、逆转录聚合酶链反应等方法观察细胞增殖、凋亡、细胞动力学和基因表达情况。结果：ＷＴ１反义ＲＮＡ可以特异性抑制Ｋ５６２细胞增殖，诱导Ｋ５６２、ＨＬ６０细胞凋亡；对ＨＬ６０细胞的增殖无影响，对ＷＴ１、ｂｃｌ２、ｍｄｍ２基因表达无显著影响。结论：ＷＴ１基因与白血病细胞的增殖、凋亡密切相关，对白血病细胞凋亡的影响与ｐ５３、ｂｃｌ２基因无关。     

神经酰胺在诱导HL-60细胞凋亡中的作用研究

目的：观察神经酰胺对ＨＬ６０细胞凋亡产生的影响、凋亡相关基因ｂｃｌ２变化及与蛋白激酶Ｃ（ＣＰＫ）途径的关系,探讨其在细胞凋亡过程中可能的调节作用。方法：采用ＤＮＡ凝胶电泳、细胞荧光染色、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）等技术对细胞进行凋亡鉴定及ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达分析。结果：外源性及内源性神经酰胺类药物可诱导ＨＬ６０细胞产生典型的凋亡改变,明显下调ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达,且与刺激药物呈时间、剂量上的依赖性;ＣＰＫ途径激活剂佛波酯（ＰＭＡ）、二酰基甘油单独作用无诱凋作用,但加入内源性ＣＰＫ抑制剂神经鞘氨醇,即可产生凋亡特有的ＤＮＡ梯形降解。结论：神经酰胺类药物诱导的ＨＬ６０细胞凋亡信号,可通过调节抑凋基因ｂｃｌ２表达降低而产生效应,且与ＣＰＫ途径的抑制密切相关     

六亚甲基二乙酰胺对HL60细胞分化和凋亡的影响

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（HMHA）诱导HL60细胞分化和凋亡的作用。方法：流式细胞仪（FcM）检测HL60细胞分化抗原CD11b、CD14和CD68抗原表迭，Annexin V／H染色法测定HMBA时HL60细胞凋亡的作用，FCM检测HMBA对于HL60细胞细胞周期的影响。结果：HMBA作用72h后，HL60细胞CD11b抗原表达明显上调，表明HMBA诱导HL60细胞向成熟粒系分化；同时HMBA具有很弱的诱导HL60细胞凋亡的作用；HMBA作用后HL60细胞被阻滞于细胞周期的G0／G1期。结论：HMBA对HL60细胞的作用主要是促进分化，诱导凋亡不是主要作用机制；HMBA阻滞HL60细胞于G0／G1期，这种细胞周期阻滞作用可能是HMBA促分化作用的基础。     

维甲酸诱导多种肿瘤细胞凋亡相关基因克隆的研究

目的应用基于聚合酶链式反应(PCR)技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤凋亡相关基因,验证维甲酸调控生物细胞增殖、分化,诱导多种肿瘤细胞凋亡的作用。方法以全反式维甲酸(all-transretinoicacid)诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡,在此基础上,采用基于PCR技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤细胞凋亡相关基因。结果在维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡过程中,有TNF、泛素、热休克蛋白和C-erbB-2基因参与,并成功克隆出多条可能与凋亡密切相关的未知基因,均被GenBank收录,登录号为AF174394,AF144056,AF141882。结论这种基于PCR技术的改良消减杂交方法对于差异表达基因的克隆是十分有效的。     

维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与 hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究

为了探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导HL—60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT，c—myc和bcl—2　mRNA表达的变化规律及其意义，复制HL—60细胞的诱导分化模型，在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR—ELISA方法测定端粒酶活性，采用RT—PCR方法检测hTERT，c—myc和bcl—2　mRNA表达水平。结果显示，在ATRA诱导HL－60细胞分化过程中，端粒酶活性水平逐渐下降，hTERT　mRNA表达下调的同时c—myc和bcl—2　mRNA表达亦下调，且hTERT　mRNA下调早于端粒酶活性水平下降。结论：全反式维甲酸诱导的HL—60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT，c—myc及bcl—2　mRNA表达下降有关。     

bcl-2在HL-60细胞分化和凋亡过程中的表达

细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞 Fas,FasL及Bcl-2的表达和凋亡

为了观察骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓CD34+ 细胞Fas ,FasL和Bcl 2的表达和凋亡情况并探讨这些抗原的表达和细胞凋亡的关系。采用流式细胞术测定了 2 6例MDS和 10例急性髓系白血病 (AML)患者及 6例非血液病患者 (对照 )骨髓CD34+ 细胞的Fas,FasL和Bcl 2表达率和细胞凋亡率。结果显示 ,各型MDS患者CD34+ 细胞Fas和FasL表达率较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,Bcl 2的表达率除难治性贫血 /环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RA/RAS)与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )外 ,难治性贫血伴有原始细胞增多 (RAEB)和转变中的难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB t)患者均明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;各型MDS间CD34+ 细胞Fas的表达率相近 ,而Bcl 2的表达率却存在非常显著性差异 ,即RA/RAS 相似文献   

小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

目的 研究小剂量亚硒酸钠（2－5μmol/L）与全反式维甲酸（ATRA）联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法 采用膜联蛋白V（Annexin-V)荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸（PS）外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞术检测粒系分化细胞表达特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞PS外翻率为1．2％，5μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞48h后PS外翻率为0.8%,0.1μmol/L ATRA诱导48h后PS外翻率为2．0％，与对照组相比，差异均无显著性,而两者联合作用NB4细胞24，36，48h后的PS外翻率分别达到18.3%,25.9%,50.0%,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量（2μmol/L）亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用0．1μmol/L的ATRA钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用单独使用0．1μmol/L的ARTA相比，CD11b表达阳性细胞率进一步增加，NBT还原能力也进一步增强。结论 小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。     

三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节

目的探讨细胞内巯基、维甲酸、Ｃａｓｐａｓｅ酶与三氧化二砷诱导细胞凋亡之间的关系。方法采用ＮＢ４、ＨＬ６０细胞为体外模型,观察不同巯基化合物、维甲酸及Ｃａｓｐａｓｅ酶抑制物对三氧化二砷诱导细胞凋亡的影响。结果①乙酰半胱氨酸能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,二巯基硫氨（ＢＳＯ）则增强三氧化二砷诱导的细胞凋亡,单巯基甘油,二巯基丙醇对三氧化二砷诱导的细胞凋亡无影响;②Ｃａｓｐａｓｅ抑制剂ＺＶＡＤ．ｆｍｋ可阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,而ＹＶＡＤ．ｆｍｋ不能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡;③在ＮＢ４细胞,维甲酸与三氧化二砷有拮抗作用,但在ＨＬ６０细胞中可产生协同作用。结论①三氧化二砷通过与细胞内游离巯基结合,进而改变细胞内信号传导,选择性激活Ｃａｓｐａｓｅ酶,导致细胞凋亡;②维甲酸对三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节作用呈细胞特异性。     

全反式维甲酸诱导白血病细胞分化对brd7基因表达的影响

为了探讨brd7基因与白血病细胞分化的关系及其在白血病细胞分化中的作用,本研究采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60和K562细胞系分化,通过Wright-Giema染色在显微镜下观察细胞形态学变化,应用流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b的表达,以鉴定细胞分化程度,并在此基础上通过Western blot检测brd7基因在诱导分化前和细胞分化过程中蛋白表达水平的变化。结果发现,ATRA具有抑制HL-60细胞生长的作用,并可诱导HL-60细胞向粒系分化,在ATRA诱导细胞分化过程中HL-60细胞表面CD11b的表达水平逐渐上调,BRD7蛋白表达随着HL-60细胞的分化而增加;ATRA对K562细胞无诱导分化作用,brd7的表达也无明显变化。结论:随着HL-60细胞的分化,brd7基因表达上调,其机制有待进一步阐明。