维甲酸诱导HL—60细胞分化与细胞周期的关系

研究全反式维甲酸（RA）在体外诱导人髓系白血病细胞系（HL-60）分化过程中细胞周期的改变。利用流式细胞术动态测定RA在体外诱导HL-60细胞分化过程中细胞周期的改变。结果发现：（1）在RA与IL-60细胞共培养48小时内,S G2/M期比例无明显变化,但S期细胞的比例改变与RA的浓度有关,在10^-6 mol/L RA浓度S期细胞比例先出现一过性升高,继而持续下降,在10^-5 mol/L浓度S期细胞比例表现为持续性下降;（2）重培养试验证明：S G2/M和S期细胞比例的下降与成熟分化细胞的增加相一致;（3）RA诱导HL-60细胞成熟分化并不是在一个时间点上同时进入分化状态,而一量细胞开始进入成熟分化,即使在无RA存在的情况下,细胞仍能分化至成熟。结论提示：RA与HL-60细胞必须相互作用一定时间后才能触发细胞成熟分化,S期细胞的比例改变与RA药浓度有关,一量细胞开妈进入成熟分化,即使在无RA存在的情况下,细胞仍能分化至成熟。     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

维甲酸诱导HL-60细胞Fas蛋白表达

目的：探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和９顺式维甲酸（９ｃｉｓＲＡ）对ＨＬ６０细胞Ｆａｓ表达水平及维甲酸对抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡敏感性的影响。方法：用流式细胞仪检测ＨＬ６０细胞膜Ｆａｓ蛋白表达水平；分别采用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪检测抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡。结果：ＨＬ６０细胞Ｆａｓ弱表达。经１０－６ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ或９ｃｉｓＲＡ分别预处理４天后，ＨＬ６０细胞Ｆａｓ表达水平及对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的敏感性均显著提高。９ｃｉｓＲＡ提高ＨＬ６０细胞对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的敏感性的能力强于ＡＴＲＡ。结论：维甲酸可上调ＨＬ６０细胞表达Ｆａｓ，这可能与维甲酸诱导ＨＬ６０细胞分化相关。进一步深入探讨其分子机制，将为肿瘤治疗，特别是自体骨髓移植中骨髓净化提供新方法     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡中bcl—2,c—myc基因表达水平的变化

阿糖胞苷诱导ＨＬ－６０细胞凋亡中ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因表达水平的变化仇志根马伴吟杨毅吴王月现已证明，阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。我们采用Ａｒａ－Ｃ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，并观察了凋亡调控基因ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ表达...     

抗氧化剂槲皮素地人白血病HL—60细胞凋亡作用

槲皮素(ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ,Ｑｕｅ)是一种存在于多种植物中的黄酮类化合物,有较强的抗氧化作用[1]。以往的研究结果表明,Ｑｕｅ可抑制多种肿瘤细胞的生长,且可加强某些抗癌药物的抗癌作用[1,2];Ｑｕｅ对白血病细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用[3]。因而,Ｑｕｅ被认为是颇具应用前景的抗癌药物或抗癌辅助药物,但Ｑｕｅ的作用机制尚未阐明。我们的研究结果显示,Ｑｕｅ可有效诱导人白血病ＨＬ60细胞发生凋亡,且引发抗凋亡基因ｂｃｌ2的蛋白发生降解。材料和方法1　试剂　Ｑｕｅ、噻唑蓝(ＭＴＴ)及碘化丙锭(ＰＩ)为Ｓｉｇｍａ公司产品,其它常用试剂…     

c—myc反义寡脱氧核苷酸诱导人髓质白血症细胞系HL—60细胞凋亡

为研究c-myc硫代反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞系HL-60诱导细胞凋亡的作用,将人工合成的长度分别为18mer和15mer的硫代反义寡脱氧核苷酸（AspoI和AspoⅡ)转染HL-60细胞,用流式细胞术检测c-Myc蛋白及DNA倍体分析,RT-PCR检测c-myc mRNA水平,电镜观察凋亡细胞的超微结构,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA降解片段。研究结果发现,经AspoI5μmol/L和10μmol/L作用后c-Myc蛋白分别降低23.8%和45.4%。经AspoⅡ10μmol/L作用后下降38.4%,RT-PCR显示AspoI和AspoⅡ组c-myc mRNA表达明显减少。DNA倍体分析AspoI10μmol/L作用48和72小时细胞凋亡率分别为23.97%和52.6%;AspoⅡ10μmol/L作用48和72小时后细胞凋亡率分别为28.8%和45.19%;而空白对照和正义寡脱氧核苷酸组均未出现凋亡细胞。电镜观察两个反义寡脱氧核苷酸μmol/L作用后均出现细胞固缩,染色质边集,胞浆浓缩等凋亡细胞的改变。反义寡脱氧核苷酸10μmol/L作用48小时后均出现典型的DNA降解片段。本研究结果说明,c-myc反义寡脱氧核苷酸是高特异性的基因药物,对HL-60细胞抑制c-myc mRNA的表达,减少c-Myc蛋白合成,并诱导HL-60细胞凋亡。     

蟾蜍灵对HL—60细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（ｂｕｆａｌｉｎ）对人白血病细胞的作用及其机制。方法 应用ＭＴＴ比色法观察蟾蜍灵对细胞的抑制作用。荧光显微境和透射电镜观察细胞结果色的改变,ＤＮＡ交电泳１、原位缺口标记法和流式细胞术等分析细胞凋亡。结果 ①蟾蜍灵明显抑制ＨＬ－６０细胞的生长,半数抑制浓度（ＩＣ５０）约为０．０２５μｍｏｌ／Ｌ;②典型的细胞形态学改变、ＤＮＡ片段化和亚Ｇ１峰的检出等证实蟾蜍灵能诱导白血     

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL—60细胞Rb基因表达及其蛋白磷酸化的影响

亚硒酸钠和维甲酸联合对ＨＬ－６０细胞Ｒｂ基因表达及其蛋白磷酸化的影响刘新光于树玉维甲类可诱导某些癌变细胞向正常细胞逆转或分化，但长期服用有一定的毒副作用。而与其它药物合并使用，可降低毒性，提高疗效。我们以前的实验结果表明，亚硒酸钠与维甲酸（ＲＡ）联合...     

足叶乙甙诱导HL-60细胞凋亡过程中电化学行为的研究

目的研究药物诱导白血病细胞凋亡中的电化学变化及其意义。方法使用电化学传感器检测经足叶乙甙（Ｖｐ１６）诱导的ＨＬ６０细胞凋亡。结果２～２００μｇ／ｍｌＶｐ１６作用于ＨＬ６０细胞２４小时的过程中,随着药物剂量的增大,细胞峰值电流逐渐降低,Ｖｐ１６２μｇ／ｍｌ时即可观察到细胞电化学活性较对照组下降,２０μｇ／ｍｌ时明显下降。以Ｖｐ１６２００μｇ／ｍｌ诱导细胞凋亡,通过ＤＮＡ含量分析显示在２,３,４小时细胞凋亡率为１０．５％～２０．０％,用电化学传感器方法检测细胞电化学活性改变差异明显,峰值电流从１．８μＡ降至０４μＡ,４小时时峰值电流降至用药前的１／５。结论在细胞凋亡早期启动阶段的电化学信号改变具有一定的早期意义和蓄积性。     

柴胡皂甙d上调HL-60细胞糖皮质激素受体mRNA并诱导细胞凋亡

目的　观察柴胡皂甙d(SSd)对HL 6 0细胞糖皮质激素受体 (GR)mRNA表达的调节作用以及对细胞凋亡的影响。方法　选用从柴胡中提取的单体成分SSd ,以3 H 胸腺嘧啶掺入法观察SSd对细胞生长的抑制作用 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术分析细胞凋亡 ,用Northernblot分析GRmRNA的改变。结果　经SSd作用后 ,HL 6 0细胞3 H 胸腺嘧啶掺入率明显降低 ,呈时间和剂量依赖关系 ,10 μg/mlSSd处理 48小时作用最明显 ,6 0小时时出现典型的DNA片段梯形带 ,流式细胞仪分析细胞阻滞于G1期并出现凋亡峰 ;GRmRNA表达增加。结论　SSd可上调HL 6 0细胞GRmRNA表达并诱导细胞凋亡。     

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法运用四唑蓝（MTT）法和彗星电泳法检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制及促凋亡作用;应用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达。结果（1）2-甲氧雌二醇在10～50μM浓度范围内作用72h以及30μM2-甲氧雌二醇在作用24、48、72h后对HL60白血病细胞有增殖抑制作用,这种作用呈时间-剂量依赖关系。（2）2-甲氧雌二醇在作用浓度为10、30、50μM时,HL60白血病细胞凋亡率分别为8．20％、28．20％、45．30％,与阴性对照组（1．00％）差异有统计学意义;30μM2-甲氧雌二醇在作用24、48、72h后,HL60白血病细胞凋亡率分别为3．71％、17．72％、43．58％,48、72h作用时间组与阴性对照组（1．00％）差异有统计学意义。（3）30μM2-甲氧雌二醇作用72h后的细胞,Bcl-2蛋白的表达较对照组显著减少。结论2-甲氧雌二醇具有对HL60白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用,Bcl-2蛋白表达下调在此过程中可能发挥着重要的作用。     

Fas基因在rhG-CSF诱导白血病细胞凋亡过程中的作用

目的探讨了Ｆａｓ基因是否参与重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧＣＳＦ）对白血病细胞的诱导凋亡过程。方法利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）介导的基因转染技术将Ｆａｓ基因转入ＨＬ６０细胞中,并经原位杂交、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及流式细胞术（ＦＣＭ）证实已成功建立了Ｆａｓ高表达的ＨＬ６０细胞株,用ＦＣＭ对Ｆａｓ基因在ｒｈＧＣＳＦ诱导白血病细胞凋亡过程中的作用进行了探讨。结果相同浓度的ｒｈＧＣＳＦ作用相同时间后转染的ＨＬ６０细胞凋亡率较未转染的ＨＬ６０细胞凋亡率明显增加,且随ｒｈＧＣＳＦ作用时间延长,Ｆａｓ在ＨＬ６０细胞中的表达逐渐增加。结论Ｆａｓ基因是凋亡诱导基因,ｒｈＧＣＳＦ诱导白血病细胞凋亡依赖Ｆａｓ径路传递凋亡信号。     

黄酮联合阿霉素协同诱导HL60/ADR细胞凋亡机制的研究

目的:探究黄酮在体外对多药耐药细胞系HL60/ADR的影响及联合阿霉素后对细胞生长抑制和凋亡的作用机制,探讨中药在白血病化疗中扶正、增效的可能性。方法:用CCK-8法检测黄酮和阿霉素对HL60/ADR细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡率,并在光镜下观察细胞形态变化;蛋白印迹法检测药物作用后凋亡信号通路蛋白表达的情况;流式细胞仪检测药物作用后HL60/ADR线粒体跨膜电位的变化。结果:黄酮能显著抑制HL60/ADR细胞的增殖,且其抑制细胞增殖效应呈现浓度-时间依赖性;不同浓度的黄酮及联合阿霉素1.5μg/mL(20%抑制浓度即IC20值)后对细胞的抑制作用更明显,具有协同和相加作用。75μg/mL和100μg/mL黄酮能促进HL60/ADR细胞凋亡,而黄酮联合阿霉素的促凋亡作用更显著。蛋白信号通路研究显示,单药黄酮及两药联合能使HL60/ADR细胞线粒体膜电位下降,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达明显下调,促凋亡蛋白Bim、Bad、Bax明显增加,激活caspase途径;同时磷酸化的P-JNK蛋白表达水平升高,而P-ERK明显下降。结论:黄酮联合阿霉素可通过线粒体跨膜电位的下降,依赖caspase活化调控Bcl-2家族中Bim、Bad和Bax蛋白表达,下调ERK细胞保护通路并上调JNK应激相关通路,最终协同抑制HL60/ADR细胞增殖并诱导其凋亡。     

氨肽酶抑制剂Bestatin通过激活半胱天冬酶3诱导HL-60细胞凋亡

目的 研究半胱天冬酶3在国产氨肽酶N抑制剂Bestatin(商品名百士欣,BS）诱导人白血病细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法 用光学显微镜观察细胞形态结构的改变,通过DNA片段原位末端标记法及流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。用发色底物法检测细胞半胱天冬酶3活性。Rhodamin(Rh)123染色后,采用FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果 典型的细胞形态改变、DNA片段化、DNA末端原位标记及FCM结果,均证实BS能诱导HL－60细胞凋亡。凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖关系。BS诱导细胞凋亡过程中,半胱天冬酶3活性明显升高,而AC0DEVD－CHO能抑制BS诱导的细胞凋亡。经BS处理的HL－60细胞出现线粒体跨膜电位（ΔΨm)下降。结论 BS通过激活半胱天冬酶3而诱导白血病细胞凋亡。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与分化的影响及其机制

目的：探讨二十碳五烯酸（EPA）联合视黄酸（RA）对HL－60细胞的增殖与分化功能的影响及其机制。方法：MTT比色法测定细胞增殖功能；硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验鉴定细胞分化；RT－PCR半定量分析视网膜母细胞瘤（RB）mRNA表达；Western blot法检测RB 基因的蛋白质（PRB）的表达。结果：EPA单独用药组细胞增殖抑制率为24．38％，RA单独用药组为35．74％，EPA＋RA组为42．75％；EPA＋RA组细胞分化能力约为对照组的5．9倍，而RA组为2．6倍，EPA组仅为1．3倍；EPA组RB基因表达与对照组比较，差异无显著性，RA组RB基因表达降低，EPA与RA联合应用组则最低,各实验组PRB去磷酸化水平均增加。结论：EPA和RA联合应用对HL－60细胞中RB基因表达及PRB磷酸化的改变，可能是EPA协同RA抑制HL－60细胞增殖和诱导分化的重要分子机制。     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

Regulation of desaturase expression in HL60 cells

The expression of delta 5 desaturase (D5D), delta 6 desaturase (D6D) and delta 9 desaturase (D9D) was determined by RT‐PCR in the human promyelocytic cell line HL60. During 72?h of culture with 10?% FBS, D5D and D6D were upregulated 5 to 6‐fold, whereas D9D approximately doubled. The addition of fatty acids (FAs) to the culture medium suppressed upregulation of all desaturases. N‐3 and n‐6 FA appeared to be more effective than n‐9 or saturated FA. When FAs were added after 72?h, further upregulation during the next 24?h was suppressed for nearly all desaturases and FAs tested, except for D5D when oleic acid (OA) or stearic acid (SA) was added. In cells cultured with restricted amounts of FBS, desaturase expression increased with decreasing concentrations of FBS. Cellular FA content decreased by 60?% in the neutral lipid fraction, whereas that of the phospholipid fraction decreased by 10?% during 72?h of culture. The largest decrease occurred in the sum of n‐3 and n‐6 FA of the neutral lipid fraction, which was reduced by 83?%, whereas the content of these FAs in the phospholipid fraction decreased by 32?%. The results indicate that when the supply of FA to HL60 cells is limited, the intracellular content of n‐3 and n‐6 FA decreases and this leads to upregulation of the desaturases, particularly D5D and D6D. Since HL60 cells resemble human leukocytes, the results suggest that desaturase expression in leukocytes may be exploited as a biomarker for FA status.