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1.
维甲酸诱导HL-60细胞Fas蛋白表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和9顺式维甲酸(9cisRA)对HL60细胞Fas表达水平及维甲酸对抗Fas抗体诱导的细胞凋亡敏感性的影响。方法:用流式细胞仪检测HL60细胞膜Fas蛋白表达水平;分别采用形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪检测抗Fas抗体诱导的细胞凋亡。结果:HL60细胞Fas弱表达。经10-6mol/LATRA或9cisRA分别预处理4天后,HL60细胞Fas表达水平及对抗Fas抗体诱导凋亡的敏感性均显著提高。9cisRA提高HL60细胞对抗Fas抗体诱导凋亡的敏感性的能力强于ATRA。结论:维甲酸可上调HL60细胞表达Fas,这可能与维甲酸诱导HL60细胞分化相关。进一步深入探讨其分子机制,将为肿瘤治疗,特别是自体骨髓移植中骨髓净化提供新方法 相似文献
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为探讨rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用rhGM-CSF孵育的HL-60细胞由VP-16诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因bcl-2和fas的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测DNA的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl-2和fas的表达,实验结果显示,rhGM-CSF可抑制VP-16诱导的HL-60细胞的凋亡,它加强了VP-16对bcl-2表达的下调作用,抑制了VP-16对fas表达的上调作用,由此推测,rhGM-CSF可能是通过下调fas表达降低HL-60细胞对VP-16的敏感性。 相似文献
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逆转录病毒介导的反义bcl—2序列促进足叶乙甙诱导的白血病?… 总被引:6,自引:0,他引:6
探讨逆转录病毒介导的反义bcl-2序列对细胞凋亡的诱导作用,方法:PA317细胞包装逆转录病毒,病毒转导Jurkat细胞后用RT-PCR及Western印迹法检测bcl-2 mRNA及蛋白表达水平;用流式细胞仪计数及DNA电泳检测细胞凋亡。 相似文献
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阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡中bcl—2,c—myc基因表达水平的变化 总被引:11,自引:0,他引:11
阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡中bcl-2、c-myc基因表达水平的变化仇志根马伴吟杨毅吴王月现已证明,阿糖胞苷(Ara-C)通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。我们采用Ara-C诱导HL-60细胞凋亡,并观察了凋亡调控基因bcl-2、c-myc表达... 相似文献
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氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究 总被引:76,自引:1,他引:76
目的:了解氧化砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的细胞和分子机制。方法:以早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞等为研究对象,利用流式细胞仪,DNA电泳,Northern、Western印迹,免疫组化等手段,观察As2O3对APL的作用。结果:As2O3能显著诱导NB4细胞凋亡,而不影响HL-60和U937的生长和存活。氧化砷能有效降低NB4细胞中bcl-2基因的表达,而对其它几种凋亡相关基因(包括p53、c-myc、bax和bcl-XL)的mRNA水平无影响。结论:这可能是As2O3诱导NB4细胞凋亡的分子机制之一。 相似文献
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逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:探讨逆转录病毒介导的反义bcl2序列对细胞凋亡的诱导作用。方法:PA317细胞包装逆转录病毒,病毒转导Jurkat细胞后用RTPCR及Western印迹法检测bcl2mRNA及蛋白表达水平;用流式细胞仪计数及DNA电泳检测细胞凋亡。结果:转染反义bcl2序列可使内源性BCL2蛋白表达下降,提高白血病细胞株对足叶乙甙(Vp16)的敏感性,促进细胞凋亡。结论:反义bcl2序列能促进Vp16诱导的白血病细胞凋亡,为bcl2反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。 相似文献
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为消除白血病细胞中bcl-2基因对细胞凋亡的抑制作用,开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对bcl-2mRNA的“锤头型”核酶(Ribozyme,RZ)基因定向克隆于真核表达载体pDOR-neo,构成pDOR-RZ重组体。通过脂质体Lipofectin介导的DNA转染法,把pDOR-RZ导入HL-60细胞。用South-ern印迹,RNA斑点杂交法观察RZ基因在HL-60细胞内表达,并通过电镜、流式细胞仪(FCM),光镜和DNA电泳观察RZ对HL-60细胞的影响。结果:①RZ在转染HL-60后72小时得以表达,细胞内bcl-2蛋白合成受到抑制。②在FCM图谱上可见到明显的凋亡峰,形态观察RZ处理的HL-60细胞呈典型的凋亡形态。③足叶乙甙(促凋亡)敏感性试验表明,与未转染的细胞和转染空载体pDOR-neo的细胞相比,转染pDOR-RZ的细胞DNA电泳易出现梯状条带。结果说明RZ基因通过逆转录病毒表达载体导入HL-60细胞后可成功地表达并抑制HL-60细胞bcl-2蛋白的合成,并促进HL-60细胞凋亡 相似文献
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目的:探讨WT1基因反义RNA对髓系白血病细胞生长增殖和细胞凋亡的影响及作用机制。方法:用WT1基因反义RNA培养K562、HL60细胞,用氮蓝四氮唑盐染色、流式细胞仪检测、逆转录聚合酶链反应等方法观察细胞增殖、凋亡、细胞动力学和基因表达情况。结果:WT1反义RNA可以特异性抑制K562细胞增殖,诱导K562、HL60细胞凋亡;对HL60细胞的增殖无影响,对WT1、bcl2、mdm2基因表达无显著影响。结论:WT1基因与白血病细胞的增殖、凋亡密切相关,对白血病细胞凋亡的影响与p53、bcl2基因无关。 相似文献
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神经酰胺在诱导HL-60细胞凋亡中的作用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察神经酰胺对HL60细胞凋亡产生的影响、凋亡相关基因bcl2变化及与蛋白激酶C(CPK)途径的关系,探讨其在细胞凋亡过程中可能的调节作用。方法:采用DNA凝胶电泳、细胞荧光染色、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术对细胞进行凋亡鉴定及bcl2mRNA表达分析。结果:外源性及内源性神经酰胺类药物可诱导HL60细胞产生典型的凋亡改变,明显下调bcl2mRNA表达,且与刺激药物呈时间、剂量上的依赖性;CPK途径激活剂佛波酯(PMA)、二酰基甘油单独作用无诱凋作用,但加入内源性CPK抑制剂神经鞘氨醇,即可产生凋亡特有的DNA梯形降解。结论:神经酰胺类药物诱导的HL60细胞凋亡信号,可通过调节抑凋基因bcl2表达降低而产生效应,且与CPK途径的抑制密切相关 相似文献
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六亚甲基二乙酰胺对HL60细胞分化和凋亡的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HMHA)诱导HL60细胞分化和凋亡的作用。方法:流式细胞仪(FcM)检测HL60细胞分化抗原CD11b、CD14和CD68抗原表迭,Annexin V/H染色法测定HMBA时HL60细胞凋亡的作用,FCM检测HMBA对于HL60细胞细胞周期的影响。结果:HMBA作用72h后,HL60细胞CD11b抗原表达明显上调,表明HMBA诱导HL60细胞向成熟粒系分化;同时HMBA具有很弱的诱导HL60细胞凋亡的作用;HMBA作用后HL60细胞被阻滞于细胞周期的G0/G1期。结论:HMBA对HL60细胞的作用主要是促进分化,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA阻滞HL60细胞于G0/G1期,这种细胞周期阻滞作用可能是HMBA促分化作用的基础。 相似文献
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维甲酸诱导多种肿瘤细胞凋亡相关基因克隆的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的应用基于聚合酶链式反应(PCR)技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤凋亡相关基因,验证维甲酸调控生物细胞增殖、分化,诱导多种肿瘤细胞凋亡的作用。方法以全反式维甲酸(all-transretinoicacid)诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡,在此基础上,采用基于PCR技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤细胞凋亡相关基因。结果在维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡过程中,有TNF、泛素、热休克蛋白和C-erbB-2基因参与,并成功克隆出多条可能与凋亡密切相关的未知基因,均被GenBank收录,登录号为AF174394,AF144056,AF141882。结论这种基于PCR技术的改良消减杂交方法对于差异表达基因的克隆是十分有效的。 相似文献
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维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与 hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为了探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导HL—60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT,c—myc和bcl—2 mRNA表达的变化规律及其意义,复制HL—60细胞的诱导分化模型,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR—ELISA方法测定端粒酶活性,采用RT—PCR方法检测hTERT,c—myc和bcl—2 mRNA表达水平。结果显示,在ATRA诱导HL-60细胞分化过程中,端粒酶活性水平逐渐下降,hTERT mRNA表达下调的同时c—myc和bcl—2 mRNA表达亦下调,且hTERT mRNA下调早于端粒酶活性水平下降。结论:全反式维甲酸诱导的HL—60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT,c—myc及bcl—2 mRNA表达下降有关。 相似文献
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细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。 相似文献
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骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞 Fas,FasL及Bcl-2的表达和凋亡 总被引:4,自引:0,他引:4
为了观察骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓CD34+ 细胞Fas ,FasL和Bcl 2的表达和凋亡情况并探讨这些抗原的表达和细胞凋亡的关系。采用流式细胞术测定了 2 6例MDS和 10例急性髓系白血病 (AML)患者及 6例非血液病患者 (对照 )骨髓CD34+ 细胞的Fas,FasL和Bcl 2表达率和细胞凋亡率。结果显示 ,各型MDS患者CD34+ 细胞Fas和FasL表达率较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,Bcl 2的表达率除难治性贫血 /环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RA/RAS)与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )外 ,难治性贫血伴有原始细胞增多 (RAEB)和转变中的难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB t)患者均明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;各型MDS间CD34+ 细胞Fas的表达率相近 ,而Bcl 2的表达率却存在非常显著性差异 ,即RA/RAS 相似文献
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小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究小剂量亚硒酸钠(2-5μmol/L)与全反式维甲酸(ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法 采用膜联蛋白V(Annexin-V)荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达,NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞术检测粒系分化细胞表达特异抗原CD11b表达,NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞PS外翻率为1.2%,5μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞48h后PS外翻率为0.8%,0.1μmol/L ATRA诱导48h后PS外翻率为2.0%,与对照组相比,差异均无显著性,而两者联合作用NB4细胞24,36,48h后的PS外翻率分别达到18.3%,25.9%,50.0%,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量(2μmol/L)亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力,但其与0.1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用0.1μmol/L的ATRA钠没有诱导NB4细胞分化的能力,但其与0.1μmol/L的ATRA联合使用单独使用0.1μmol/L的ARTA相比,CD11b表达阳性细胞率进一步增加,NBT还原能力也进一步增强。结论 小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。 相似文献
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三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节 总被引:40,自引:1,他引:39
目的探讨细胞内巯基、维甲酸、Caspase酶与三氧化二砷诱导细胞凋亡之间的关系。方法采用NB4、HL60细胞为体外模型,观察不同巯基化合物、维甲酸及Caspase酶抑制物对三氧化二砷诱导细胞凋亡的影响。结果①乙酰半胱氨酸能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,二巯基硫氨(BSO)则增强三氧化二砷诱导的细胞凋亡,单巯基甘油,二巯基丙醇对三氧化二砷诱导的细胞凋亡无影响;②Caspase抑制剂ZVAD.fmk可阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,而YVAD.fmk不能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡;③在NB4细胞,维甲酸与三氧化二砷有拮抗作用,但在HL60细胞中可产生协同作用。结论①三氧化二砷通过与细胞内游离巯基结合,进而改变细胞内信号传导,选择性激活Caspase酶,导致细胞凋亡;②维甲酸对三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节作用呈细胞特异性。 相似文献
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为了探讨brd7基因与白血病细胞分化的关系及其在白血病细胞分化中的作用,本研究采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60和K562细胞系分化,通过Wright-Giema染色在显微镜下观察细胞形态学变化,应用流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b的表达,以鉴定细胞分化程度,并在此基础上通过Western blot检测brd7基因在诱导分化前和细胞分化过程中蛋白表达水平的变化。结果发现,ATRA具有抑制HL-60细胞生长的作用,并可诱导HL-60细胞向粒系分化,在ATRA诱导细胞分化过程中HL-60细胞表面CD11b的表达水平逐渐上调,BRD7蛋白表达随着HL-60细胞的分化而增加;ATRA对K562细胞无诱导分化作用,brd7的表达也无明显变化。结论:随着HL-60细胞的分化,brd7基因表达上调,其机制有待进一步阐明。 相似文献