AO/EB荧光染色法测定阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡

ＡＯ／ＥＢ荧光染色法测定阿糖胞苷诱导ＨＬ－６０细胞凋亡陈丽娟盛瑞兰汪承亚朱广荣细胞凋亡与肿瘤的发生和治疗之间的关系是近年来国际上研究的热点，目前细胞凋亡的检测方法有ＤＮＡ凝胶电泳法、电子显微镜法、染料透过法、ＴＵＮＥＬ法和流式细胞仪法等。我们用染料透...     

c—myc反义寡脱氧核苷酸诱导人髓质白血症细胞系HL—60细胞凋亡

为研究c-myc硫代反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞系HL-60诱导细胞凋亡的作用,将人工合成的长度分别为18mer和15mer的硫代反义寡脱氧核苷酸（AspoI和AspoⅡ)转染HL-60细胞,用流式细胞术检测c-Myc蛋白及DNA倍体分析,RT-PCR检测c-myc mRNA水平,电镜观察凋亡细胞的超微结构,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA降解片段。研究结果发现,经AspoI5μmol/L和10μmol/L作用后c-Myc蛋白分别降低23.8%和45.4%。经AspoⅡ10μmol/L作用后下降38.4%,RT-PCR显示AspoI和AspoⅡ组c-myc mRNA表达明显减少。DNA倍体分析AspoI10μmol/L作用48和72小时细胞凋亡率分别为23.97%和52.6%;AspoⅡ10μmol/L作用48和72小时后细胞凋亡率分别为28.8%和45.19%;而空白对照和正义寡脱氧核苷酸组均未出现凋亡细胞。电镜观察两个反义寡脱氧核苷酸μmol/L作用后均出现细胞固缩,染色质边集,胞浆浓缩等凋亡细胞的改变。反义寡脱氧核苷酸10μmol/L作用48小时后均出现典型的DNA降解片段。本研究结果说明,c-myc反义寡脱氧核苷酸是高特异性的基因药物,对HL-60细胞抑制c-myc mRNA的表达,减少c-Myc蛋白合成,并诱导HL-60细胞凋亡。     

HL-60细胞早期凋亡中端粒酶hTERT基因表达的变化

端粒酶活性在正常体细胞(生殖细胞和造血细胞除外)受到严格的抑制,而在98%的永生化细胞系和约90%的包括造血组织肿瘤在内的恶性肿瘤细胞中重新活化,其催化亚基的编码基因为ｈＴＥＲＴ[1,2]。近年来有关端粒酶的研究虽然已经较为深入,但关于药物诱导细胞凋亡过程中端粒酶催化亚基ｈＴＥＲＴ基因表达的研究尚未见报道。我们采用定量逆转录聚合酶链反应(ＲＴＰＣＲ)技术,对足叶乙甙(Ｖｐ16)诱导ＨＬ60细胞出现早期凋亡前后的端粒酶催化亚基ｈＴＥＲＴ的ｍＲＮＡ表达变化进行了探讨。材料和方法1　细胞株　ＨＬ60细胞株源自中国科学院上海细胞生…     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

抗氧化剂槲皮素地人白血病HL—60细胞凋亡作用

槲皮素(ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ,Ｑｕｅ)是一种存在于多种植物中的黄酮类化合物,有较强的抗氧化作用[1]。以往的研究结果表明,Ｑｕｅ可抑制多种肿瘤细胞的生长,且可加强某些抗癌药物的抗癌作用[1,2];Ｑｕｅ对白血病细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用[3]。因而,Ｑｕｅ被认为是颇具应用前景的抗癌药物或抗癌辅助药物,但Ｑｕｅ的作用机制尚未阐明。我们的研究结果显示,Ｑｕｅ可有效诱导人白血病ＨＬ60细胞发生凋亡,且引发抗凋亡基因ｂｃｌ2的蛋白发生降解。材料和方法1　试剂　Ｑｕｅ、噻唑蓝(ＭＴＴ)及碘化丙锭(ＰＩ)为Ｓｉｇｍａ公司产品,其它常用试剂…     

9—顺式维甲酸诱导HL—60细胞凋亡

目的：检测９－顺式维甲酸（９－ｃｉｓＲＡ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的能力，并探讨其分子机制。方法：应用形态学观察、ＤＮＡ电泳、流式细胞仪分析检测细胞凋亡，应用流式细胞仪检测ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２含量。结果：９－ｃｉｓＲＡ可以诱导ＨＬ－６０细胞在分化后发生典型的凋亡。在ＨＬ－６０细胞分化和凋亡的过程中ｂｃｌ－２含量逐渐下降。９－ｃｉｓＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡能力和降低ｂｃｌ－２表达的能力均显著强于全反式维甲酸（Ａ－ＴＲＡ）。结论：９－ｃｉｓＲＡ具有诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。ｂｃｌ－２表达水平的降低可能是经诱导分化成熟的白血病细胞走向凋亡的重要条件。     

蟾蜍灵对HL—60细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（ｂｕｆａｌｉｎ）对人白血病细胞的作用及其机制。方法 应用ＭＴＴ比色法观察蟾蜍灵对细胞的抑制作用。荧光显微境和透射电镜观察细胞结果色的改变,ＤＮＡ交电泳１、原位缺口标记法和流式细胞术等分析细胞凋亡。结果 ①蟾蜍灵明显抑制ＨＬ－６０细胞的生长,半数抑制浓度（ＩＣ５０）约为０．０２５μｍｏｌ／Ｌ;②典型的细胞形态学改变、ＤＮＡ片段化和亚Ｇ１峰的检出等证实蟾蜍灵能诱导白血     

阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡时线粒体膜电位变化

为研究阿糖胞苷(Ara-C)诱导HL-60细胞凋亡时线粒体膜电位(△Ψm)的变化及相互关系,采用Rhodamine123染色及流式细胞术检测HL-60细胞线粒体膜电位变化;流式细胞仪、AO/EB染色检测HL-60细胞凋亡.结果显示Ara-C作用于HL-60细胞6小时时出现细胞线粒体膜电位下降,当Ara-C浓度为0.05 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为117.9±7.6,100.9±7.7,87.6±10.7,不同时间荧光强度差异有显著性(p＜0.05);当Ara-C浓度为0.1 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为111.9±10.1,86.6±9.2,68.4±12.2,不同时间差异有显著性(p＜0.05);不同浓度组在12、24小时时比较有显著性差异(p＜0.05).当Ara-C浓度为0.05 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞凋亡率分别为(41.2±3.0)%,(53.7±5.1)%,(65.8±2.6)%,不同时间差异有显著性(p＜0.01);当Ara-C浓度为0.1 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞凋亡率分别为(45.7±4.1)%,(58.2±4.3)%,(70.1±2.3)%,不同时间差异有显著性(p＜0.01);不同浓度Ara-C在相同时间凋亡率无差别.HL-60细胞线粒体膜电位变化与其凋亡率呈高度负相关,当Ara-C浓度为0.05 mg/ml时,r=-0.89,p＜0.01;当Ara-C浓度为0.1 mg/ml时,r=-0.76,p＜0.01.结论阿糖胞苷在诱导HL-60细胞凋亡时伴有线粒体膜电位下降,两者呈显著负相关.线粒体膜电位下降可能是阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的重要机制之一.     

钙离子在VP—16诱导HL—76细胞凋亡的作用

为了研究Ｃａ＾２＋在ＶＰ－１６（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡中的作用,采用流式细胞术,激光共聚焦显微镜和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法进行观察,结果显示,ＶＰ－１６可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,并可引起细胞内Ｃａ＾２＋浓度的增加,细胞外钙离子螯合剂ＥＧＴＡ不抑制其诱导的细胞凋亡,而细胞内钙离子螯合剂ＢＡＰＴＡ－ＡＭ可抑制此过程,并且可抑制细胞色素Ｃ的释放,实验结果提示,Ｃａ＾２＋在细胞凋亡和细胞色素Ｃ的释放过程中起重要的作用。     

阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制研究

为了研究阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制，采用Giemsa染色、光学显微镜下观察HL60细胞的形态学变化，琼脂糖凝胶电泳检测DNA凋亡带，细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果显示：实验组自培养8小时起，细胞开始变形，Giemsa染色可见核膜裂解，染色质呈紫红色或蓝紫色，出现典型的凋亡小体；DNA凝胶电泳见典型的梯形条带；在细胞凋亡的同时伴有Bcl-2蛋白表达明显下降，而Bax蛋白表达明显升高，Bcl-2／Bax比值下降。结论：阿糖胞苷可明显地诱导HL60细胞凋亡，同时伴有Bcl乏蛋白表达降低、Bax蛋白升高。Bcl-2／Bax比值下降可能是阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的主要机制之一。     

环孢霉素A对威猛诱导HL—60细胞凋亡的增强作用

我们在拓扑异构酶Ⅱ抑制剂威猛（Ｖｍ２６）体外诱导ＨＬ６０细胞凋亡的实验中加环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）,观察ＣｓＡ对Ｖｍ２６诱导ＨＬ６０细胞凋亡的调节作用。材料和方法１细胞培养ＨＬ６０细胞用含体积分数为１０％的小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基,在３７℃...     

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导HL—60细胞凋亡的影响

采用端粒酶聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR ELISA)的方法,检测人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)处理HL-60细胞前后端粒酶活性的改变,并进一步通过姬姆萨染色及流式细胞术方法,分析HL-60细胞的端粒酶活性受到抑制后顺铂对HL60细胞凋亡的影响.结果显示hTERT基因ASODN作用于HL60细胞后,端粒酶活性表现逐渐下降;hTERT ASODN与顺铂联合可诱导HL-60细胞出现一系列特征性的凋亡细胞的形态学变化;hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞24小时再加入顺铂,用流式细胞术测定凋亡细胞的百分率明显高于正义寡核苷酸(S)DN)联合顺铂作用组和单用顺铂作用组(P＜0.01).然而,hTERT基因的ASODN下调HL-60细胞的端粒酶活性以后,再用DNR和Ara-c处理不能加速HL-60细胞的凋亡.以上的结果表明了端粒酶活性的下调可选择性促进顺铂诱导HL-60细胞凋亡.     

细胞色素C诱导白血病细胞株HL-60凋亡效应的分析

凋亡是具有独特的细胞形态变化并有重要生物学意义的细胞死亡方式 ,它可使有害细胞或多余细胞从生物体中被清除。目前已证实 ,在哺乳动物细胞凋亡过程中 ,位于线粒体膜内侧的细胞色素Ｃ移位到细胞质 ,从而激活某些蛋白酶 ,导致凋亡的发生[1 ] 。国内已有关于在非细胞体系中研究细胞色素Ｃ诱导细胞凋亡的报道[2 ] ,我们利用细胞色素Ｃ直接作用于髓系白血病细胞株ＨＬ 6 0 ,证实了不同浓度细胞色素Ｃ可诱发ＨＬ 6 0细胞出现增殖、凋亡、坏死三种不同效应。同时还发现细胞色素Ｃ诱导ＨＬ 6 0细胞凋亡伴有细胞浆钙离子浓度的升高。材料和方法1　…     

人外周血树突状细胞抗HL—60细胞活性探讨

人外周血树突状细胞抗ＨＬ－６０细胞活性探讨张吉才缪继武杨宁尹兰珍树突状细胞（ＤＣ）是一种重要的免疫辅助细胞。近年来，大量临床研究发现：肿瘤组织内ＤＣ浸润的程度与肿瘤患者的预后密切相关，但这些研究均局限于原位。体外观察ＤＣ抗肿瘤活性及其对ＬＡＫ细胞杀瘤...