白血病抑制因子在正常早孕、稽留流产蜕膜绒毛中表达的初步临床研究

目的探讨白血病抑制因子（LIF）在正常早孕、稽留流产蜕膜绒毛组织中的表达,及其与稽留流产发生的关系。方法采用免疫组化技术-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接（SP）法对白血病抑制因子（UF）在2组妇女绒毛蜕膜组织中的表达进行组织学定位和表达强弱度分析。通过病理图像分析仪对图片进行观察,并运用所附分析系统软件测量各组平均光密度值（IOD）。采用放射免疫法检测正常早孕妇女（正常早孕组,20例）、稽留流产患者（稽留流产组,25例）血清人绒毛膜促性腺激素（β—hCG）及孕酮（P）水平。结果（1）孕酮及hCG水平在2组孕妇间的比较：正常早孕组孕妇血清中孕酮、hCG水平分别为（37．5±15．2）ng／mL、（9005,8±2134．9）mIU／L,稽留流产组孕妇分别为（19．1±11．6）ng／mL、（3120．3±1213．2）mIU／L,两组孕妇血清孕酮、hCC水平比较,有显著性（P〈0．01）;（2）LIF平均相对含量在2组孕妇蜕膜、绒毛组织中的比较：正常早孕组孕妇分别为0．38±0．15,0．36±0．11;稽留流产组孕妇分别为0．20±0．17,0．18±0．13。正常早孕组与稽留流产组比较,差异有显著性（P〈0．05）。结论LIF在稽留流产蜕膜绒毛组织中的表达量降低,可能是导致hCG及孕酮分泌下降,最终造成稽留流产的原因之一。     

稽留流产患者绒毛和蜕膜组织中Survivin及Fas蛋白表达意义的研究

目的分析正常早孕妇女和稽留流产患者绒毛及蜕膜组织中survivin和Fas蛋白的表达及意义。方法用免疫组化法检测正常早孕妇女和稽留流产患者绒毛和蜕膜组织中survivin和Fas蛋白的表达。结果 Survivin表达早孕组绒毛显著高于稽留流产组绒毛(P0.05),但早孕组蜕膜与稽留流产组相比无显著性差异(P0.05),早孕绒毛组织Survivin的最大阳性强度显著高于蜕膜组织(P0.05)。Fas蛋白表达稽留流产组蜕膜显著高于绒毛及早孕蜕膜(P0.05)。结论Survivin和Fas蛋白在稽留流产过程中可能发挥重要作用。     

FADD、Caspase-3与稽留流产的关系探讨

目的探讨FADD及Caspase-3在稽留流产绒毛滋养细胞中的表达及其关系。方法随机选取早孕稽留流产组35例（实验组）和正常早孕绒毛组30例的绒毛（对照组）检测两组绒毛滋养层细胞FADD和Caspase-3表达。结果FADD和Caspase-3在两组滋养层细胞中均有阳性表达,表达部位均以合体滋养层细胞为主。FADD和Caspase-3在稽留流产组绒毛滋养细胞中表达明显强于对照组,差异有显著性意义（P〈0.01）。结论Fas凋亡途径可能是滋养层细胞凋亡的主要凋亡途径,FADD、Caspase-3是滋养层细胞凋亡中重要的促凋亡因子,滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。     

直接法检测稽留流产患者绒毛染色体的应用与评价

目的探讨直接法检测稽留流产患者绒毛染色体的应用价值与方法评价。方法通过直接法绒毛染色体核型分析检测229例稽留流产患者绒毛染色体,其中胚胎期稽留流产组132例,胎儿期稽留流产组97例;非高龄组185例,高龄组44例。结果直接法绒毛染色体检测成功率为61．6％（141／229）,核型异常率为56．0％。染色体异常的类型以常染色体三体发生率最高,占异常核型的35．4％（28／79）。胚胎期稽留流产组中绒毛标本检测成功率与胎儿期稽留流产组有显著差异（P〈0．05）;非高龄组染色体核型异常率与高龄组没有显著差异（P〉0．05）。结论直接法检测绒毛染色体核型检出率较低,更适合于胚胎期稽留流产患者。     

主动免疫治疗对URSA患者外周血sHLA—G的表达影响的研究

目的检测URSA患者经主动免疫治疗前后外周血中sHLA—G的水平表达，为主动免疫治疗对URSA患者疗效评价提供一定的理论及方法学依据。方法将研究对象分为四组，URSA组、URSA主动免疫治疗组、正常早孕组及正常未孕组。用ELISA法定量检测样本中sHLA—G的表达情况，RT—PCR半定量检测外周血中sHLA—G的表达情况。结果（1）正常早孕组血清中sHLA—G的表达水平显著高于原因不明性流产组以及正常未孕组（P〈0．05）；URSA患者主动免疫治疗组sHLA—G的表达水平高于原因不明性流产组以及正常未孕组（P〈0．05），与正常早孕组相比无统计学意义（P〉0．05）；（2）RT—PCR半定量检测显示URSA组及正常未孕组sHLA—G表达均低于正常早孕组及治疗组（P〈0．05）。结论淋巴细胞主动免疫治疗可以提高外周血中sHLA—G的表达，主动免疫治疗能够有效治疗URSA妊娠后的流产患者。     

复发性自然流产患者绒毛滋养细胞FasL的表达

目的探讨复发性自然流产患者(RSA)绒毛滋养细胞FasL的表达与正常者有无差异。方法应用免疫组化和RT-PCR法,检测RSA患者和正常早孕妇女的绒毛滋养细胞FasL在蛋白水平和mRNA水平的表达,并进行图象分析和比较。结果免疫组化结果显示,绒毛合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆和胞膜上均有FasL表达,FasL在2组的定位无差异,但正常组绒毛滋养细胞FasL表达(PU=18.03±4.69)强于RSA组(PU=13.59±3.73),P<0.050。RT-PCR结果表明RSA组绒毛组织FasL在mRNA水平的表达为0.18±0.05,低于正常组0.27±0.06,差异有显著性意义(P<0.01)。结论不明原因RSA患者的绒毛滋养细胞FasL表达弱于正常者,滋养细胞FasL的表达减少可能在复发性自然流产中起重要作用。     

卵泡抑素样蛋白1在不明原因稽留流产患者血清、绒毛与蜕膜组织中的表达及意义

目的探讨不明原因稽留流产患者外周血和绒毛蜕膜组织卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的表达及其临床意义。方法选取2014年1月-2015年12月我院诊治的不明原因稽留流产患者30例为实验组(n=30),另选取自愿要求终止妊娠的健康早孕妇女30例为对照组(n=30)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组外周血中FSTL1水平,通过先进的荧光定时PCR技术,检测两组绒毛、蜕膜组织中Fstl1 mRNA的表达水平。结果实验组血清FSTL1高于对照组,差异具有统计学意义(t=10.63,P0.001);实验组绒毛蜕膜组织中Fstl1 m RNA的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论不明原因稽留流产患者血清及绒毛蜕膜组织中FSTL1表达水平明显升高,FSTL1可能在稽留流产发生发展中有一定作用。     

稽留流产与相关基因蛋白表达的关系研究

目的比较正常早孕组和稽留流产组两类妊娠女性的胎盘绒毛、蜕膜组织中Bcl-2、Bax基因蛋白表达情况,分析Bcl-2、Bax基因蛋白表达情况及其二者比值与胎盘绒毛、蜕膜组织中细胞凋亡的作用关系,为探索预防稽留流产发生相关的有效干预措施参考。方法搜集整理近年在北京航天总医院就诊的正常早孕和稽留流产女性93例,利用免疫组化学染色方法检测胎膜绒毛、蜕膜组织中Bcl-2、Bax基因蛋白表达情况,并定量分析其统计量、秩和检验以及相关性三类统计结果。结果无论是绒毛还是蜕膜组织,稽留流产组的Bax基因蛋白表达情况都要高于正常早孕组(0.21±0.37和0.1±0,0.5±0.79和0.14±0.18);绒毛组织两组的Bcl-2基因蛋白表达情况相近(2.95±0.31和2.94±0.42),但是稽留流产Bcl-2和Bax的比值要低于正常早孕组(26.92±8.55和29.41±4.2);蜕膜组织,稽留流产组的Bcl-2基因蛋白表达情况以及Bcl-2和Bax的比值均高于正常早孕组(2.48±0.9和1.47±1.02,18.66±13.09和14±10.22)。结论孕妇稽留流产原因与细胞凋亡相关基因高表达有关。     

米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响

探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl—2和caspase-3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法：将105例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组，即米非司酮流产组(55例)及人工流产组(50例)。采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl—2和caspase-3的表达。结果：米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl—2的表达率分别为54．6％和88．0％；caspase-3的表达率分别为89．1％和42．0％。米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl—2呈低表达(P＜0．01)，caspase-3呈高表达(P＜0．01)。结论：Bcl—2和caspase-3在米非司酮诱导的早孕绒毛滋养层细胞凋亡的信号传导中起关键作用。     

子宫内膜、正常早孕和自然流产蜕膜组织中△Np63的表达

目的观察△Np63蛋白在自然流产蜕膜组织中的表达，探讨△Np63在胚泡植入和早期妊娠维持中的作用。方法收集自然流产的蜕膜27例组织（其中胚胎停止发育23例、习惯性流产1例及不全流产3例），正常早孕蜕膜66例，非妊娠期子宫内膜组织57例（其中增生期33例，分泌期24例），用SP免疫组化染色法观察△Np63的表达。结果△Np63广泛表达于腺上皮和间质细胞中。增生期和分泌期子宫内膜中△Np63主要表达在腺上皮，蜕膜组织中△Np63在间质蜕膜细胞中的有较强的表达。流产组△Np63蛋白阳性率为55．6％，明显低于增生期的90．9％、分泌期的87．5％及正常早孕组的86．4％（P〈0．05）。△Np63高表达率在分泌期组及流产组分别为16．7％和11．2％，明显低于增生期的63．6％和正常早孕组的57．6％（P〈0．01）。结论△Np63可能参与子宫内膜的生理周期变化，并与子宫内膜向早孕蜕膜组织转化及维持早孕关系密切。     

米非司酮流产蜕膜组织中白血病抑制因子表达的研究

目的探讨早孕妇女米非司酮药物流产与非药物人工流产的蜕膜组织中白血病抑制因子（LIF）表达的差异,分析米非司酮的致流产作用与LIF维持妊娠作用之间的关系。方法运用免疫组织化学技术检测23例米非司酮流产妇女蜕膜组织LIF蛋白的表达,并与20例非药物人工流产蜕膜组织进行对照。结果LIF蛋白在所有蜕膜标本中均有表达,其表达强度在米非司酮流产蜕膜组织和非药物人工流产蜕膜组织中无明显差异（P〉0.05）。结论米非司酮对早孕蜕膜组织中LIF的表达可能无明显影响。     

解聚素和金属蛋白酶19在早孕绒毛中的表达及其与自然流产的相关性研究

目的通过对解聚素和金属蛋白酶19（ADAM19）在早孕自然流产和正常早孕绒毛中表达的研究,探讨其在妊娠过程中的作用及其与流产的关系。方法早期妊娠和难免流产的绒毛组织各30例,应用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化物酶法,检测ADAM19的表达。结果在正常妊娠的绒毛中,ADAM19主要表达在细胞膜上,在细胞滋养细胞、细胞滋养层细胞柱中均有较强的表达,表达强度均强于合体滋养细胞;在流产组绒毛中,ADAM19在细胞滋养细胞、细胞滋养层细胞柱中的表达均明显低于正常绒毛组,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论ADAM19在妊娠早期滋养细胞的侵入中有重要的作用,早期流产的发生与绒毛中ADAM19水平下降有关。     

妊娠4～9周孕妇血清雌二醇变化与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠4～9周孕妇血清雌二醇（E2）变化与妊娠结局的关系。方法选择在本院就诊的妊娠4～9周的孕妇,根据孕妇妊娠结局分为正常妊娠组和胚胎停育组,正常妊娠组又根据有无复发性流产病史者分为两组,各组按孕周又分为6个亚组。采用化学发光分析法检测各组孕妇血清E2水平,并进行比较分析。结果正常妊娠组妊娠4～9周孕妇每周血清E2水平随妊娠周数增加而增加,有复发性流产病史的患者和无复发性流产的患者各孕周E2水平的变化差异无统计学意义（P〉0.05）;而胚胎停育组随孕周增加呈下降趋势。与正常妊娠组的相应孕周两两比较胚胎停育组各个孕周孕妇血清E2水平相应均数显著偏低（P〈0.05）。结论胚胎停育孕妇各孕周血清E2水平均显著下降,提示E2可能是维持早期妊娠的重要因素之一。     

Abortion is associated with increased expression of FasL in decidual leukocytes and apoptosis of extravillous trophoblasts: a role for CRH and urocortin

Human reproduction is remarkably inefficient, with more than half of spontaneous conceptions failing to complete the first trimester. However, little is known on the molecular events that take place at the implantation site during abortion. Here, we examined the hypothesis that the expression of the proapoptotic Fas/FasL system at the implantation site is impaired in abortions. We found that, in contrast to normal pregnancy, abortive deciduas contain leukocytes that are positive for FasL and extravillous trophoblasts (EVTs), which show increased expression of Fas and increased rates of apoptosis. In addition, the neuropeptides, corticotropin-releasing hormone and urocortin, were elevated in placental material obtained from abortions. In vitro, these peptides induced the expression of FasL in decidual lymphocytes (DL) obtained from elective termination of pregnancy placentas and thus potentiated the cells' ability to induce Fas-mediated apoptosis in an EVT-based hybridoma cell line. Finally, DL from abortion sites effectively induced apoptosis of EVT without prior treatment. It is possible that these events may impede successful early placentation and thus contribute to the pathophysiology of human abortion.     

紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及其意义

背景：Occludin蛋白是否在人早孕期胚泡植入中发挥作用,目前尚不能确定。 目的：探讨紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及意义。 方法：早孕的正常人流绒毛组织和稽留流产绒毛组织各30例,用半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在各组绒毛组织中的表达。 结果与结论：紧密连接蛋白Occludin主要表达在于绒毛外的合体滋养细胞的胞浆,胞核和少许间质,细胞滋养细胞Occludin表达低。半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在正常人流和稽留流产绒毛组织中均有表达,前者的表达低于后者,但差异无显著性意义(P > 0.05)。说明紧密连接蛋白Occludin在绒毛组织有表达,细胞滋养细胞Occludin低表达可能是细胞滋养细胞极性消失的原因之一,参与细胞滋养细胞浸润能力形成,但胚胎发育停滞并不单是细胞滋养细胞侵润能力不足引起。     

复发性自然流产患者主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的研究

目的研究复发性自然流产(RSA)患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平,探讨Fas/FasL系统与RSA的发病关系以及主动免疫治疗对RSA患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的影响。方法收集2009年6月至2010年4月在汕头大学医学院附属粤北人民医院妇产科门诊就诊的早孕期RSA患者12例,未孕期RSA患者15例作为研究组,采用荧光标记流式细胞分析技术分别检测主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas、FasL表达水平,选择同期正常早孕妇女15例,正常未孕妇女15例作为对照组,比较各组Fas、FasL表达水平的差异。结果 (1)未孕组中,RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas的表达水平均比正常妇女高,NK细胞FasL表达水平比正常妇女低(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比无明显差异(P>0.05);(2)早孕组中,RSA患者外周血NK细胞Fas、FasL的表达水平均比正常妇女低,CD8+T细胞Fas表达水平比正常妇女高(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比则无明显差异(P>0.05);(3)主动免疫治疗后RSA患者(早孕组和未孕组)外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas表达水平均较治疗前下降,FasL表达水平均较治疗前上升,差异有统计学意义(P<0.05),CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平与治疗前相比无明显差异(P>0.05)。结论 (1)外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas表达升高,FasL表达不足是导致RSA发生的重要免疫学因素之一。(2)主动免疫治疗可能通过改变RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas/FasL表达水平,改善细胞凋亡状态而取得疗效。     

sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A在稽留流产中的表达及意义

目的研究可溶性FMS样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)在稽留流产中的表达及意义。方法选取2015年6月至2017年6月在重庆市两江新区第一人民医院接受治疗的稽留流产患者40例纳入稽留流产组;早期流产患者40例纳入早期流产组;另外选取进行体检的健康妊娠期产妇20例作为正常组。收集3组研究对象的绒毛组织,采用免疫组化染色处理,酶联免疫吸附测定sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A表达,并在显微镜下观察其阳性表达情况。结果正常组sFlt-1表达水平显著低于早期流产组和稽留流产组(P<0.05);稽留流产组sFlt-1表达水平低于早期流产组(P<0.05)。正常组IGFBP-3、PAPP-A表达水平显著高于早期流产组和稽留流产组(P<0.05);稽留流产组患者IGFBP-3、PAPP-A表达水平高于早期流产患者(P<0.05)。sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A三项联合检测敏感度、准确度高于sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A单一检测,特异度低于sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A单一检测(P<0.05)。结论sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A联合检测对稽留流产的诊断价值较高,sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A的异常表达参与了稽留流产的发展,为稽留流产的治疗提供一定的理论基础。     

自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及相关基因的表达

目的 通过比较正常妊娠模型小鼠及自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达,从细胞及分子水平探讨自然流产的发病机制.方法建立正常妊娠模型CBAXBALB/c和自然流产模型CBAXDBA/2.用免疫组化SABC法测定两组模型孕13 d蜕膜细胞Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达,并通过MIAS-2000医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析,其结果用平均灰度值表示;同时应用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL)测定两组模型孕13天蜕膜细胞凋亡情况.结果与正常妊娠模型相比,自然流产模型蜕膜细胞Bcl-2蛋白的表达降低(P＜0.01);Bax蛋白的表达明显升高(P＜0.01);FasL的表达明显升高(P＜0.01);Fas的表达两组比较无明显差异(P＞0.05).蜕膜细胞凋亡指数(AI),自然流产模型明显高于正常妊娠模型(P＜0.01).结论 早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常是自然流产的机制之一,Bcl-2/Bax,Fas/FasL途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素.     

血清中TNF-α和IL-10与原因不明复发性流产的关系研究

目的本实验通过检测不明原因复发性流产(URSA)患者和健康早孕者外周血清中TNF-α及IL-10的水平,探讨TNF-α及IL-10与URSA是否存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008-2010年在杭州市第一人民医院门诊患者。年龄25~35周岁,孕龄<12周,将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择30例。用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在统计学差异。结果 1.血清中TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);2.血清中IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1.血清中TNF-α可作为判断URSA的参考指标;2.TNF-α可能参与URSA的发生发展。