分泌抗MCG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗ＭＣＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立周昌奎蓝兰张云峰＊＊（福建省计划生育科学技术研究所，福州３５００１１＊福建省立医院生物治疗中心＊＊福建省福港生物工程研究中心）谢弘王放（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）以苯甲酸－丙酮一步法，从...     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建…

以亲和层析技术和纯化的肾综合征出血热病毒结构蛋白为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞，然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ间接法选出２株分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。     

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６￣１．２×１０＾－３，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状     

分泌抗精氨酸加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道利用杂交瘤技术制备了抗精氨酸加压素单克隆抗体,通过鉴定,证明所得抗体稳定性好,对精氨酸加压素有较强的特异性结合,对赖氨酸加压素和催产素基本无反应。用免疫双扩散技术还证明所得抗体属小鼠IgM类。     

抗单链DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

凋亡细胞内由于组蛋白 ＤＮＡ的稳定性受到破坏或染色质受到修饰 ,使得凋亡细胞的ＤＮＡ对热变性敏感。在适宜条件下 ,凋亡细胞的ＤＮＡ能被热变性为具有足够长度、形成一定构像的单链ＤＮＡ(ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ ,ｓｓＤＮＡ) ,从而被ｓｓＤＮＡ特异的单克隆抗体 (ｍＡｂ)染色 ;而非凋亡细胞的ＤＮＡ则不被热变性 ,或变性的ＤＮＡ部分不足以形成与抗ｓｓＤＮＡｍＡｂ结合的单链构象决定簇。因此 ,用抗ｓｓＤ ＮＡｍＡｂ能敏感、特异地检测到凋亡细胞[1 ,2 ] 。目前 ,国外此项研究已取得较大成果 ,并有产品的试剂盒销售 ,…     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。     

抗人全T细胞单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株的建立

通过融合大鼠免疫细胞株IR983F和经T细胞株HPB—ALL免疫大鼠脾细胞,获得分泌单克隆抗体LO—CD6a的杂交瘤细胞株。实验证实,LO—CD6a是人全T细胞特异性的。     

前列腺特异性抗原的纯化及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的:制备抗人前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen,PSA)单克隆抗体.方法:利用盐析、离子交换和凝胶过滤的方法,从人精液中纯化前列腺特异性抗原,采用SDS-PAGE和游离前列腺特异性抗原定量试剂盒联合检测目的蛋白的纯度和含量,用纯化的PSA抗原免疫BALB/c小鼠,按常规的细胞融合与杂交瘤细胞的筛选方法,并对杂交瘤细胞产生的抗体进行了亚型、亲和力、特异性鉴定.结果:获得分泌抗-PSA单克隆抗体的杂交瘤细胞系15株,亲和力高,特异性和稳定性较好,亚型鉴定一株为IgG2a,其余均为IgG1.结论:本次制备的前列腺特异抗原单克隆抗体可用于临床PSA-ELISA诊断试剂的研发.     

人酸性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备

以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，获得一株稳定分泌抗ｈａＦＧＦ的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，基ＤＮＡ含量为脾细胞与ＳＰ２／０细胞ＤＮＡ含量之和，所分泌抗体为小鼠ＩｇＧ１亚类，免疫印迹显示：此单抗只与大肠杆菌中的ｈａＦＧＦ有结合，与牛ａＦＧＦ则没有结合反应。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

本文运用杂支瘤技术，成功地建立了６株能稳定分泌小鼠杭重组人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｂ９Ｄ１０、１ＧＳＦ１０、２Ｃ８Ｃ１、２Ｅ４Ｆ６、３Ｃ６Ｅ１１、７Ｄ２Ｃ７）。试验结果表明，６株单抗均为１ｇＧ类，且特异性强，能分别识别不同的抗原结合位点，相对亲和力２Ｅ４Ｆ６单抗最高，１ＧＳＦ１０最低，为今后Ｇ－ＣＳＦ单抗的应用打下了基础。     

抗约氏疟原虫子孢子单克隆抗体的制备及鉴定

本实验应用细胞融合技术,首次在国内建立了5株分泌抗约氏鼠疟(BY265)子孢子单克隆抗体的杂交瘤细胞系MS1-5。鉴定结果表明:(1)MS1-5能使子孢子表面染以三种着色方式的特异性荧光,其抗体活性能被全虫子孢子所阻断。(2)各株单抗之间对抗原能产生竞争性抑制,提示MS1-5是针对子孢子表面同一个抗原决定簇的。(3)免疫印渍结果表明,MS1、3、4、5均识别分子量为40Kd的CSP蛋白,除此之外,MS2、4尚能与72和64Kd的蛋白结合。根据它们同样能与MS1、3、5竞争结合抗原的事实,推断MS1-5能识别存在于不同分子上的共同抗原位点。     

抗早孕因子单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立分泌抗EPF(Early pregnancy factor,早孕因子)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单抗并鉴定.方法用本实验室已纯化的早孕和肿瘤源性EPF作为抗原刺激Balb/c小鼠,用免疫后的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合,经4次克隆化,获得可稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,注入Balb/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-A亲和层析纯化,SDS电泳和Western-blot等方法分析纯化结果.结果融合后获得一株稳定分泌抗EPF抗体的细胞株(C3D11),克隆化后,获得稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,将增殖后的细胞注射Balb/c小鼠腹腔获得腹水型单抗,以亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析显示纯化后去掉了大部分杂蛋白,免疫印迹分析抗体纯度较高,与抗原匹配性良好.结论本研究制备的EPF单克隆抗体为特异性抗EPF抗体.     

抗NPM1单克隆抗体的制备

目的 制备并鉴定NPM1单克隆抗体.方法 利用纯化的NPM1融合蛋白作为抗原,通过常规的细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法筛选能出产生抗NPM1单克隆抗体的阳性细胞株,对抗NPM1单克隆抗体的特性进行分析.结果 筛选出1株产生抗NPM1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,产生的抗体为IgGl亚类,效价达1∶720000;纯化后经SDS-PAGE显示两条蛋白条带,纯度达95％以上,相对分子质量约为50000和25000,与单一抗体重链、轻链分子大小相符.免疫组化证实,纯化的2G7抗NPM1单克隆抗体可检测出NPM1在结直肠癌表达,阳性位点为细胞核.结论 制备的抗NPM1单克隆抗体可用于NPM1蛋白功能的研究与临床检测.     

抗精脒单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文用鼠×鼠细胞杂交瘤技术首次建立了抗多胺（精脒）单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以此杂交瘤经体外组织培养扩大，并注入同系小鼠腹腔，产生的腹水中抗体滴度达１：１０６。单抗的类别是ＩｇＧ１。单价抗体是由分子量５２ｋＤ和２７ｋＤ组成的复合体。这个单克隆抗体可用于癌症的快速诊断和预后随访。     

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.     

单克隆抗体相对亲和力和特异性的测定

在单克隆抗体的制备中,亲和力和特异性的测定是非常重要的。实验证明单抗的特异性不是绝对的,我们也发现在免疫酶组化染色过程中,当单抗浓度达到一定水平时会出现交叉反应,即抗3型(或7型)腺病毒单抗与7型(或3型)腺病毒出现反应。因此有必要测定单抗特异性,以便筛选高特异性的单抗。     

抗人心肌肌球蛋白轻链单克隆抗体的制备及鉴定

用常规方法免疫得到的抗人心肌肌球蛋白轻链(CM-LC)的抗血清,常与骨骼肌及平滑肌肌球蛋白轻链有较强的交叉反应。单克隆抗体因系特异地识别CM-LC上的单一抗原决定簇,因而能克服这一困难。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术已经得到四株分泌抗人CM-LC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其中三株(1G_6、2B_4、2F_6)进行了克隆。它们与人骨骼肌及平滑肌肌球蛋自轻链的交叉反应分别为2F_6 28.6％及15.6％;2B_4 45％及81％;1G_6对二者的交叉反应均为81％。2F_6属小鼠IgG亚类IgG_3;2B_4及1G_6则均为IgG_1。