O6-苄基鸟嘌呤逆转人脑胶质瘤对BCNU耐药性的研究

目的 探讨提高BCNU为代表的CENUs对Mer 脑胶质瘤化疗疗效的途径。方法 采用MTT法及测定肿瘤生长观察O^6-苄基鸟嘌呤（O^6-BG)预处理Mer 人脑胶质瘤细胞及荷Mer 脑胶质瘤裸小鼠对BCNU疗效的影响。结果 O^6-BG能提高BCNU对Mer 胶质瘤细胞T98G的敏感性2．2倍，对Mer-细胞SHG－44无增敏作用，10μmol/L O^6-BG预处理2小时即能明显抑制MGMT活性，≥50μmol/L时能完全抑制MGMT活性；O^6-BG毒性极低，100μmol/L时细胞生存率＞95％。O^6-BG BCNU组较空白对照组延缓肿瘤生长34．16天，而单纯BCNU组延缓生长18天（P＜0．01），且O^6-BG BCNU组中还见到肿瘤暂时性退缩。结论 O^6-BG通过抑制MGMT活性，能逆转Mer 人脑胶质瘤细胞对BCNU的耐药性，提高BCNU时效，因而可望作为化疗增敏剂与BCNU联合使用。     

MGMT基因甲基化在胶质瘤化疗及预后中的意义

化疗是恶性脑肿瘤的重要辅助治疗手段之一,然而其临床效果尚不理想。肿瘤对化疗药物的耐药是影响化疗效果的重要原因。DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）在肿瘤耐药中的作用比较明确,而MGMT的表达与MGMT基因的甲基化状态密切相关。本文总结有关研究的新进展,对MGMT基因甲基化与胶质瘤化疗及预后的相关性进行综述,为实现恶性胶质瘤预见性、个体化化疗,改善病人预后等提供理论依据。     

替莫唑胺改变人胶质瘤细胞系U251耐药机制的体外研究

目的 建立替莫唑胺耐药人胶质瘤细胞系,探讨其耐药性变化规律及耐药机制,以期为临床优化药物化疗方案提供理论依据.方法 采用分步诱导法使人胶质瘤细胞系U251对替莫唑胺耐药,磺酰罗丹明B比色法检测细胞耐药指数和存活率;Western blotting法检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达水平,以及倍增替莫唑胺终浓度后MGMT表达水平.结果 成功建立替莫唑胺耐药U251/TR细胞,在替莫唑胺初始诱导剂量0.25μg/ml、终浓度16.00μg/ml培养液中,U251/TR细胞半数抑制浓度为(220.87±2.34)μmol/L,约为U251细胞[(33.12±1.52)μmol/L]的7倍(t=-116.542,P=0.000),其耐药指数约为7;U251/TR细胞MGMT表达水平为(1.47±0.30),较U251细胞(0.19±0.03)明显升高(t=-20.230,P=0.000).与溶媒对照组比较,经倍增替莫唑胺终浓度诱导的U251/TR细胞仍呈现增殖抑制现象,以体外培养第3天时最为明显(P=0.000);MGMT表达水平相应降低(均P=0.000),呈现自身克服耐药现象.结论 采用分步诱导法可于体外成功建立替莫唑胺耐药人胶质瘤细胞系.MGMT表达水平升高是导致U251/TR细胞对替莫唑胺耐药的主要机制,替莫唑胺可以通过自身消耗MGMT而改变U251/TR细胞的耐药特性,发挥抗耐药作用.     

O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶与脑肿瘤化疗

O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在脑肿瘤对氯乙基亚硝脲类药物(CENUs)化疗耐药中起重要作用。MGMT含量低的脑肿瘤.对CENUs敏感,而MGMT含量高的脑肿瘤对CENUs耐药。通过灭活MGMT可以逆转脑肿瘤对CENUs耐药,提高化疗敏感性。     

MGMT在恶性胶质瘤中的表达对替莫唑胺化疗预后的影响

目的 通过检测肿瘤组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)的表达,探讨其对恶性胶质瘤替莫唑胺化疗预后的影响,以期为个体化化疗方案的选择提供临床依据.方法 经病理学确诊为恶性胶质瘤患者60例,使用免疫组织化学方法检测肿瘤组织MGMT表达,根据表达情况分为MGMT阴性组和MGMT阳性组;所有患者均接受手术治疗及术后常规放射治疗和替莫唑胺化疗,并对其长期随访,进行无进展生存时间、实体肿瘤客观疗效和药物安全性的评定.结果 肿瘤组织MGMT表达阴性者(-～±)为33例,MGMT表达阳性者(+～++)为27例;应用替莫唑胺化疗6个疗程末,MGMT阴性组客观有效率(CR+PR)为20/33,明显高于MGMT阳性组的5/27;MGMT阴性组平均无进展生存时间为(18±6.42)个月,明显长于MGMT阳性组的(9.0±1.91)个月,两组间差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 替莫唑胺化疗方案的疗效与MGMT在肿瘤组织中的表达程度密切相关,MGMT的检测对于指导恶性胶质瘤患者制定个体化化疗方案具有重要意义.     

脑胶质瘤MGMT表达与体外药敏相关性及其临床意义

目的研究胶质瘤体外药物敏感性与肿瘤细胞DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）的表达之间的相关性。方法①对手术中取得的胶质瘤组织进行原代细胞培养，采用MTT法对七种目前临床常用的脑胶质瘤化疗药物在血浆峰浓度下进行体外药物敏感性测定。②采用免疫组化二步法，检测了同组36例人脑胶质瘤标本MGMT的表达，将检测结果与同-标本来源者的药敏结果进行相关性分析。结果人脑胶质瘤标本MGMT表达阳性率为72.2％，其表达水平与BCNU、DDP、Me—CCNU这三种化疗药物血浆峰浓度下对肿瘤细胞的抑制率（IR）呈显著性负相关（P〈0．05），而与其它四种药物（Elemene、VCR、VM-26和VP-16）则无这种相关性（P〉0．05）。结论当患者肿瘤细胞MGMT阳性表达时，将与BCNU、DDP、Me—CCNU等烷化剂类化疗药物耐药，临床化疗时应避免使用此类药物；检测肿瘤MGMT表达可以作为不具备体外药敏试验条件下的补充．可为脑胶质瘤化疗方案制定提供参考。     

MGMT-04多肽在人脑胶质瘤原代细胞中模拟抗TMZ耐药作用的实验研究

目的 研究多肽MGMT-04模拟O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤原代细胞系SHG-140中抗替莫唑胺(TMZ)耐药的实验.方法 首先设计穿膜肽MGMT-04,并加以FITC示踪,再通过免疫荧光定位MGMT-04多肽可以到达细胞核发挥作用.通过流式细胞术检测各处理组SHG-140细胞凋亡的比例,...     

MGMT阳性恶性脑胶质瘤病人的化疗(附51例体会)

O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6- methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)可使DNA烷基化损伤得到修复,是恶性胶质瘤对亚硝脲类药物及新药替莫唑胺(temozolomide,TMZ)产生耐药的主要原因。研究表明67.2%至     

人脑胶质瘤干／祖细胞系SU-2放射耐受及其相关机制的初步研究

目的研究胶质瘤干细胞在胶质瘤耐受放射中的作用,为克服恶性胶质瘤放射耐受寻找新的干预靶点。方法干细胞培养条件下培养自建人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2,以及人脑胶质瘤细胞系U251和SHG-44,观察不同剂量直线加速器照射前后细胞形态变化、Hoechst 33342-细胞和CD133 细胞比例、肿瘤细胞存活率和裸小鼠致瘤率等项指标,并以实时荧光定量PCR方法检测人脑胶质瘤细胞系U251和人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2照射前后MGMT基因表达水平。结果当照射剂量为1～15Gy时,人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2中的Hoechst 33342-细胞和CD133 细胞比例明显增加,高达18.73%和13.70%,细胞存活率升高、致瘤率(8/8)增加、侵袭性增强,MGMT基因表达水平轻度升高。结论经一定剂量的X线照射后,胶质瘤干细胞因具有强于其他肿瘤细胞的放射耐受性而出现选择性存活且细胞比例升高,其生物学特性如细胞存活率、体内致瘤率增加,侵袭性增强。可能与胶质瘤干细胞DNA损伤修复能力提高有关,确切的分子学机制值得进一步深入研究。     

MGMT表达在胶质瘤对烷化剂耐药中的作用

恶性脑胶质瘤是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,包括小分子、脂溶性、能穿过血脑屏障的烷化剂的化疗方案,使部分病人的生存期明显延长。烷化剂的化疗效果同MGMT(O6-methylguanine-DNA methyltransferase MGMT)基因启动子甲基化沉默了MGMT表达相关,因此,阻断其修复能力可使烷化剂更有效。其表达可由甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组化(IHC)、血清MGMT活性检测等方法直接或间接测定。MGMT基因启动子甲基化水平可作为识别病人对烷化剂敏感性的指标,并以此指导临床治疗。     

新诊断胶质瘤MGMT基因启动子甲基化水平定量分析

目的 探讨新诊断胶质瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子甲基化（简称MGMT甲基化）水平的变化。方法 回顾性分析2016年1月至2019年6月郑州大学附属肿瘤医院神经外科收治的225例新诊断胶质瘤的临床资料,定量分析MGMT甲基化。结果 新诊断胶质瘤MGMT甲基化水平为（23.68±14.88）%,阳性率89.33%。≥40岁病人MGMT甲基化水平[（24.89±15.67）%]显著高于<40岁病人[（19.85±11.31）%;P<0.05]。少突胶质细胞瘤MGMT甲基化水平[（30.41±12.99）%]显著高于其他类型的胶质瘤[星形细胞瘤为（20.81±13.53）%、少突星形细胞瘤为（23.00±8.21）%、胶质母细胞瘤为（23.39±17.85）%;P<0.05]。胶质瘤MGMT甲基化水平与病人年龄呈正相关（r=0.135,P<0.05）,而与病人性别和肿瘤级别无明显关系（P>0.05）。结论 新诊断胶质瘤MGMT甲基化水平与病人与年龄正相关,少突胶质细胞瘤MGMT甲基化水平明显高于其他类型胶质瘤     

影响替莫唑胺治疗脑胶质瘤效果的非病理级别因素初步探讨

目的探讨影响替莫唑胺治疗脑胶质瘤效果的非病理级别因素。方法31例恶性胶质瘤患者符合纳入与排除标准,手术完全切除者17例,非完全切除者14例。依纳入时间分为前期组(10例)和后期组(21例),前期组施行替莫唑胺常规剂量[150～200mg/(m2·d)]化疗方案;后期组根据O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)检测结果分别采用替莫唑胺常规剂量和小剂量[50mg/(m2·d)]化疗方案。结果31例患者随访6～27个月,17例肿瘤完全切除者均存活,其手术后放射治疗及药物化疗效果与MGMT表达水平无明显相关性(P>0.05)。14例非完全切除患者,治疗客观有效率为42.86%(6/14,3例完全缓解、3例部分缓解),疾病控制率为57.14%(8/14,3例完全缓解、3例部分缓解,2例病情稳定);另有5例肿瘤进展,1例肿瘤假性进展。肿瘤进展和假性进展者MGMT表达均呈阳性,MRS分析提示肿瘤进展者手术部位存在高水肿区和高乳酸代谢区。结论脑胶质瘤的组织病理学类型是影响替莫唑胺化疗效果的主要因素,在非完全切除患者中,化疗后达到完全缓解者以间变性少突胶质细胞瘤为主;而近期肿瘤进展者以胶质母细胞瘤为主。于替莫唑胺化疗之前对非完全切除者进行MGMT检测和手术部位局部水肿程度及乳酸水平评估,有利于提高治疗效果。     

MGMT反义RNA对人脑胶质瘤耐药性逆转的研究

目的 利用反义技术逆转胶质瘤的耐药性。方法 模拟临床亚硝基脲类药物的用药程序，在体外建立由DNA修复蛋白O^6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）介导的人脑胶质瘤耐药细胞系U251－BCNU，并行细胞药性检测和细胞MGMTmRNA表达的分析，观察MGMT反义RNA对U251/BCNU细胞MGMT表达的调节作用及对U251／BCNU细胞BCNU敏感性的影响。结果 经过反复总共5次的用药过程，首次在体外建立了对BCNU具有稳定抗性的U251／BCNU，其对BCNU的耐受程度约为U251的17倍；RT－PCR结果显示，U251／BCNU细胞有MGMTmRNA的表达。MGMT反义RNA表达载体 LMT5SN和pLaMTSN能够在一定程度上降低U251／BCNU细胞中MGMT mRNA的表达水平，提高其对BCNU的敏感性。结论 MGMT反义RNA能够在一定程度上抑制MGMT的表达水平，提高肿瘤细胞对亚硝基脲类药物的敏感性。     

替尼泊甙联合司莫司汀治疗脑胶质瘤疗效与MGMT表达关系的研究

目的 通过观察脑胶质瘤中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)的表达状态,探讨MGMT在脑胶质瘤中的表达与替尼泊甙(VM-26)联合司莫司汀(Me-CCNU)方案化疗疗效之间的关系. 方法 对资料完整的47例经病理证实的脑胶质瘤患者进行回顾性研究,对患者的胶质瘤病理石蜡切片采用免疫组化法检测MGMT的表达,然后分析MGMT的表达与患者生存率之间关系. 结果 本组患者MGMT阳性表达率为40.4%.MGMT阴性表达组3年生存率为66.7%,平均总生存时间为(67.861±10.094)月;MGMT阳性表达组为52.6%,平均总生存时间为(47.263±7.983)月,比较差异均无统计学意义(P>0.05).11例患者出现I度的骨髓抑制现象,6例患者出现胃部不适、呕吐、腹泻、食欲不振等消化系统症状. 结论 VM-26联合Me-CCNU化疗方案可以有效克服脑胶质瘤中MGMT所带来的化疗耐药性问题,且该方案的毒副作用不大,是一个有效的化疗方案.     

胶质瘤MGMT基因启动子甲基化研究及应用进展

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是一种DNA修复酶,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是近年研究较多的胶质瘤相关分子标志,既是评价胶质瘤对烷化剂是否敏感的重要分子标志,也是胶质瘤患者预后评价及复发与假性进展鉴别的重要参考指标。尤其是老年恶性胶质瘤患者,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是指导其分子分型和制定个性化治疗方案的重要参考依据。本文对MGMT蛋白功能,以及MGMT基因启动子CpG岛甲基化在指导胶质瘤治疗、判断预后及鉴别复发与假性进展中的应用进行概述。     

MGMT、Caspase-3蛋白在胶质瘤中的表达及预后分析

目的探讨MGMT、Caspase-3蛋白表达水平与胶质瘤患者生存预后的关系。方法运用免疫组织化学方法检测75例不同病理级别胶质瘤组织和10例正常脑组织MGMT、Caspase-3表达情况,分析两者与胶质瘤患者临床病理特征及预后的相关性。结果 MGMT、Caspase-3在胶质瘤中的表达均高于正常脑组织,差异有统计学意义。MGMT、Caspase-3表达水平与患者的年龄、性别、术前KPS评分、病理级别无关联。两者表达情况与恶性胶质瘤患者的生存期关系用KaplanMeier生存曲线表示,结果表明MGMT表达水平与患者预后呈负相关(P0.05),Caspase-3表达水平与患者预后无相关性(P0.05)。MGMT和Caspase-3两者表达呈负相关(r=-0.230,P=0.047)。结论 MGMT表达与胶质瘤预后有关,可作为胶质瘤预后的生物学指标之一,Caspase-3表达与胶质瘤预后无关,但与MGMT有关联。     

MGMT表达指导下的恶性脑胶质瘤预见性化疗近期疗效分析

目的评价根据O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT)表达指导的恶性脑胶质瘤化疗的近期疗效和毒副反应。方法经手术后病理确诊的恶性脑胶质瘤患者28例,用免疫组织化学方法检测肿瘤组织MGMT蛋白表达,对MGMT表达阳性者采用不含亚硝脲类和替莫唑胺的方案进行化疗,MGMT表达阴性者用药不受限。按WHO疗效评价标准评价近期疗效。不良反应评价按美国国立癌症研究所评价标准。结果28例中有4例进行了两个方案化疗,共32化疗例次进入疗效评价。5例次完全缓解(complete response,CR),6例次部分缓解(partial response,PR),12例次稳定(stable disease,sD),9例次进展(progressive disease,PD)。客观有效率(CR PR)为35%,疾病控制率(CR PR SD)为73%。化疗的主要剂量限制性毒性为骨髓抑制。非血液学毒性主要为恶心呕吐和脱发。结论对恶性脑胶质瘤病人在化疗之前检测MGMT蛋白表达,指导选择化疗方案,可以明显提高近期化疗疗效(有效率35%,传统亚硝脲类药物对恶性胶质瘤的有效率仅20%),毒副反应耐受性好。     

胶质瘤干细胞抗凋亡和多重耐药基因的表达

目的 从人脑胶质瘤组织中分离、培养胶质瘤干细胞,并探讨其生物学特性及其抗凋亡和多重耐药基因的表达差异.方法 人脑胶质瘤组织经过原代细胞培养后,用无血清培养方法获得胶质瘤干细胞球,用10%的胎牛血清培养诱导分化,分化前后分别做nestin、tubulin-β、GFAP免疫细胞化学荧光染色,并观察胶质瘤干细胞形态学改变.同时,应用实时荧光定量PCR技术检测livin,livinot,livinβ,survivin,MRPI和MRP3 mRNA的表达.结果 有2例分离培养出干细胞球体,这些球体具有典型的干细胞特性,nestin染色为阳性;在无血清培养基中呈悬浮球样生长,能够自我更新和增殖,在有血清培养基中能够分化,tubulin-β、GFAP染色为阳性.胶质瘤干细胞球livin、livinα、livinβ、survivin和MRP-1 mRNA表达量比较胶质瘤组织表达量都有不同程度的升高,而MRP-3mRNA表达量降低.结论 胶质瘤干细胞抗凋亡和MRP-1基因表达量较胶质瘤表达量有不同程度的升高,提示胶质瘤干细胞比较其同源的胶质瘤细胞具有更强的耐药性,这可能是肿瘤耐药的机制.     

胶质母细胞瘤MGMT基因启动子甲基化与蛋白表达

目的 研究新发胶质母细胞瘤中肿瘤不同部位MGMT基因启动子甲基化及其蛋白表达关系及区域差异性.方法 在30例新发胶质母细胞瘤肿瘤不同部位采取2～4块标本,其中5例在术中神经导航引导下采取.甲基化特异性PCR(MSP)法检测标本中MGMT基因启动子甲基化状况,免疫组化法(IHC)检测组织切片MGMT蛋白表达情况.结果 43.56%(44/101)检测肿瘤组织中出现MGMT基因启动子甲基化,免疫组化检测(阴性,细胞弱着色＜10%或细胞无着色;弱阳性,10%≤细胞着色≤50%;强阳性,细胞着色＞50%)发现MGMT蛋白表达情况分别为阴性(32.67%),弱阳性(43.56%),强阳性(23.76%).MGMT基因启动子甲基化与其蛋白表达无明显相关性(x2=2.905,P=0.088).在肿瘤不同取材部位组织之间57%的患者(17/30)MGMT蛋白表达水平与37%患者(11/30)启动子甲基化存在不均一性.结论 MGMT基因启动子甲基化可能不是MGMT蛋白表达的惟一调节因素.同一肿瘤不同取材部位组织MGMT蛋白表达与其基因启动子甲基化水平不均一性的结果 质疑了单一取材标本的检测结果 及其对临床治疗方案选择的指导意义.