变形链球菌对EAhy926细胞Toll样受体2和4及白细胞介素6和8表达的影响

目的 观察变形链球菌对EAhy926细胞Toll样受体2和4的表达及炎性细胞因子白细胞介素6和8分泌的影响,初步探讨Toll样受体表达与细胞因子产生之间的关系.方法 变形链球菌作用于EAhy926细胞,RT-PCR法检测EAhy926细胞Toll样受体2和4及白细胞介素6和8的mRNA表达;流式细胞术检测EAhy926细胞表面Toll样受体2和4的表达;细胞生物活性法和ELISA分别检测EAhy926细胞白细胞介素6和8的分泌;抗体阻断实验观察Toll样受体2和4的表达与白细胞介素6和8产生间的关系.结果 将变形链球菌作用于EAhy926细胞6 h,Toll样受体2和4的mRNA表达与加入的细菌量呈一定的剂量依赖关系,以细菌与细胞作用比例为100:1时,Toll样受体2和4的mRNA表达量最高(P<0.05).变形链球菌能诱导EAhy926细胞(100:1)Toll样受体2和4的mRNA和蛋白水平表达增强,在6 h达到高峰,12 h后又逐渐下降(P<0.01).结论 变形链球菌可上调EAhy926细胞Toll样受体2和4的表达,促进炎性细胞因子白细胞介素6和8的产生;白细胞介素6和8的产生与Toll样受体2和4的表达上调密切相关.     

氯胺酮对急性肺损伤大鼠HMGB1及TLR4表达的影响

目的研究氯胺酮对急性肺损伤大鼠肺组织中高迁移率族蛋白(HMGB1)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法创建大鼠脓毒症致急性肺损伤模型,随机分为对照组、脓毒症组、氯胺酮组。观察建模后大鼠的一般状态。于6h、12h、24h颈椎脱臼法处死大鼠,取肺组织,HE染色显微镜下观察大鼠肺组织结构改变。RT-PCR法检测大鼠肺组织HMGB1及TLR4表达的变化。结果对照组大鼠健康正常,肺组织结构清晰;脓毒症组大鼠30min后逐渐出现肺损伤症状,肺组织结构破坏;氯胺酮组大鼠肺损伤症状轻微,组织破坏程度轻。脓毒症组与氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4的表达均高于对照组;随着建模时间延长,脓毒症组及氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4表达均逐渐升高,且氯胺酮组两者的表达均低于脓毒症组。结论氯胺酮能够减轻脓毒症所致的急性大鼠肺损伤,这可能与其降低了肺组织的HMGB1、TLR4表达相关。     

糖尿病肾病尿毒症患者血清对体外培养的THP-1细胞生长及TLR4表达的影响

设置5种浓度血清（2．5％、5％、10％、15％、20％）及3个时间点（6h、12h、24h）的培养体系,用MIT法检测细胞增殖情况,光学显微镜下观察细胞形态变化,RT-PCR法检测不同浓度和时间的DN尿毒症患者血清对THP-1细胞TLR4mRNA表达的影响。结果5％浓度的血清更适宜THP-1细胞生长≥15％后产生明显负效应。时间点以12h更利于THP-1细胞增殖,与MTT结果较吻合。结论5％浓度的尿毒症患者血清对体外培养的THP-1细胞增殖有促进作用,且以12h作用最为显著。     

益生菌对伪膜性肠炎TLR4表达的影响及意义

目的探讨益生菌对伪膜性肠炎患者TLR4表达的影响及意义。方法 22例伪膜性肠炎患者随机分成两组:常规治疗组和益生菌治疗组。观察两组的症状改善时间和副作用的发生率。收集伪膜性肠炎患者的外周血,提取单个核细胞,采用RT-PCR的方法检测TLR4的表达量,观察益生菌对其表达的影响。结果 (1)益生菌治疗组平均症状改善时间为(9.4±3.2)d,明显短于常规治疗组的(12.6±3.8)d。益生菌治疗组副作用发生率为9.1%,明显低于常规治疗组的27.3%(P<0.05)。(2)伪膜性肠炎患者TLR4表达量为0.732±0.085,明显高于健康对照组0.092±0.020(P<0.01)。经治疗有效后TLR4的表达明显下降,益生菌治疗组下降尤为明显,为0.306±0.057(P<0.05)。结论益生菌能有效治疗伪膜性肠炎,其机制可能与下调TLR4的表达有关。     

生大黄对急性胰腺炎TLR4受体表达的影响及临床意义

目的 探讨生大黄对急性胰腺炎(AP)患者TLR4受体表达的影响及临床意义.方法 纳入2010年1月-2011年12月在我院诊治的64例AP患者,其中48例为轻型急性胰腺炎(MAP),16例为重症急性胰腺炎(SAP).随机分成2组:常规治疗组和生大黄治疗组.收集其临床资料并留取治疗前后外周血各4 ml,提取单个核细胞,半定量PCR检测其TLR4的表达.收集20例健康体检者外周血作为对照.结果 (1)对照组外周血TLR4仅少量表达,AP患者治疗前外周血TLR4的表达量较对照组明显增高,SAP的TLR4表达明显高于MAP(P ＜0.05).(2)生大黄治疗组MAP/SAP的平均症状改善时间(9.2±3.8)/(18.6±5.2)d,明显短于相应常规治疗组(13.6±4.6)/(24.8±6.5)d(P＜0.05).(3)MAP/SAP患者经治疗有效后TLR4表达明显下降,生大黄组MAP/SAP的TLR4的下降程度明显高于相应的常规治疗组(P＜0.05).结论 TLR4受体的表达程度可用于评估AP的严重程度,生大黄治疗AP的机制可能与下调TLR4的表达有关.     

丙泊酚对LPS刺激人单核细胞分泌TNF-α及TLR4表达的影响

将不同浓度丙泊酚作用于脂多糖(LPS)激活的人外周血单核细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的水平,流式细胞仪检测单核细胞表面TLR4的表达变化.结果 随丙泊酚浓度的升高,LPS刺激单核细胞引起的TLR4表达逐渐降低.相关分析示,TNF-α与TLR4表达呈正相关.证实丙泊酚可抑制LPS刺激单核细胞引起的TNF-α释放,且呈剂量依赖性;其机制可能为降低单核细胞TLR4的表达.     

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响.方法 以实时荧光定量PCR（Real-time FQ-PCR）技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原＋LPS/ES抗原组和LPS＋ LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化.结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受.     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的EA.hy926细胞Bcl-2表达的影响

目的研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(EA.hy926)Bcl-2表达的影响。方法苦荞麦总黄酮作用于高浓度软脂酸刺激下的EA.hy926细胞,RT-PCR技术检测Bcl-2 mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组相比较,苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组之间无显著差异(P>0.05)。结论苦荞麦总黄酮可以促进EA.hy926细胞Bcl-2基因及蛋白的表达发挥抑制凋亡的作用。     

牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨牛蒡子苷元(ATG)抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响。方法通过脑内注射Ⅲ型肺炎链球菌建立脑膜炎大鼠模型,并随机分为模型组、ATG低(ATG-L)、中(ATG-M)、高(ATG-H)剂量组以及ATG-H+重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组,另取正常大鼠为对照组,10只/组。治疗结束后,对各组大鼠进行神经系统评分;分离大鼠脑组织,检测其病理变化、含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及神经元细胞凋亡,同时检测HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05);ATG-L组、ATG-M组、ATG-H组小鼠神经系统评分均较模型组显著增加(均P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TUNEL荧光染色阳性细胞数量、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65均较对照组显著下降(均P<0.05);ATG-H+rHMGB1组较ATG-H组神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05)。结论ATG可抑制肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

TLR4对人乳腺癌细胞MCF-7放射敏感性的影响

目的初步探讨Toll样受体(TLR4)对人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响。方法将体外培养的MCF-7细胞分为假照组和5 Gy照射组,将其各自分为空白对照组、TAK242阻滞组和LPS刺激组,采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性,用Annexin V凋亡试剂盒检测其凋亡率,用流式细胞术观察细胞周期进程的变化,用克隆形成实验计算其细胞存活分数。结果 5 Gy照射后MCF-7细胞的增殖活性明显降低(P<0.05),与对照组相比,TAK242阻滞TLR4后MCF-7细胞增殖活性更加降低(P<0.05),而LPS刺激TLR4后MCF-7细胞增殖活性明显升高(P<0.05)。MCF-7细胞受照后G2/M期细胞显著多于对照组(P<0.01),G0/G1期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞变化不明显(P>0.05)。5 Gy照射后MCF-7细胞的凋亡率明显高于假照组(P<0.01),与对照组相比,阻断TLR4后其凋亡率明显升高(P<0.05),而激动TLR4后其凋亡率明显降低(P<0.05)。5 Gy照射后MCF-7细胞的存活分数明显降低(P<0.05),与对照组相比,阻滞TLR4后MCF-7细胞存活分数明显降低(P<0.05),而激动TLR4后MCF-7细胞存活分数显著升高(P<0.05)。结论 TLR4能够增强人乳腺癌MCF-7细胞的辐射敏感性,可致细胞G2期阻滞,但其机制需要进一步探讨。     

Toll样受体4对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响.方法 小鼠随机分为3组,分别为假手术组和缺血再灌注组、TLR4阻断组,各组又分1、2、3、4 d 4个时间点组.采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western印迹检测皮质TLR4蛋白、干扰素-β(IFN-β)蛋白表达量,免疫组化方法检测TRIF表达变化.结果 缺血再灌注组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05).结论 缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少,提示TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制.     

Hydroxyethyl Cellulose Promotes the Mucin Retention of Herbal Extracts Active against Streptococcus mutans

Streptococcus mutans is considered a major cariogenic bacterium. Most anti-cariogenic dentifrices are limited by a short exposure time. The aim of the present study was to test the hypothesis that adding a mucoadhesive agent to the formulation may increase its bioavailability and efficacy. We tested the effect of adding hydroxyethyl cellulose (HEC) to an herbal extract solution containing lavender, echinacea, sage, and mastic gum, which have been previously shown to be effective against Streptococcus mutans. Mucin-coated wells were treated with four test solutions: saline, herbal extracts, herbal extracts with HEC, and chlorhexidine. The wells were incubated with Streptococcus mutans and studied for biofilm formation (Crystal violet assay), acid production (lactate assay), acid tolerance (ATPase assay), and exopolysaccharide (EPS) production using fluorescent microscopy. The results showed that the addition of HEC to the herbal extract solution caused a significant reduction in Streptococcus mutans biofilm formation, lactic acid production, and EPS quantity (p < 0.001). These results suggest that HEC may be a beneficial added excipient to herbal extracts in an anti-cariogenic formulation.     

汉滩病毒感染EA.hy926细胞上调固有免疫相关分子表达的研究

目的　探讨汉滩病毒（hantaan virus, HTNV）感染EA.hy926细胞诱导抗病毒固有免疫相关分子的表达,为建立HTNV感染的细胞模型提供依据。方法　将HTNV感染EA.hy926细胞,利用间接免疫荧光和实时荧光定量PCR技术于不同感染时间段,检测EA.hy926细胞中模式识别受体、细胞因子及抗病毒相关分子的mRNA表达水平。结果　HTNV感染EA.hy926细胞后,随着感染时间的持续,核蛋白mRNA相对表达倍数显著上调,且不同感染时间段差异具有统计学意义（P＜0.05）;与未处理组相比,HTNV感染EA.hy926后,Toll样受体3、RIG-I和MDA5模式识别受体mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,IL-6、IL-10、IFN-β和CCL5细胞因子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,ISG15、MxA、OAS1、IFITM1和IFITM3抗病毒相关分子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）。结论　HTNV感染EA.hy926细胞后,可上调抗病毒固有免疫相关分子的表达,该细胞可以作为体外HTNV感染的细胞模型。     

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠CD14、TLR4表达的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)大鼠肝组织CD14、TLR4表达的影响.方法:♂ Wistar大鼠100只随机分成空白组、CCl4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6 wk.CCl4组予微量CCl4腹腔注射,每周2次.造模4 wk后将模型组随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组.予等效剂量清肝活血方及拆方ig 2 wk.检测血清ALT,AST水平:留取肝脏标本进行HE染色.RT-PCR检测肝组织CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达,免疫组织化学染色检测肝组织CD14表达,Wlestern blot检测肝组织TLR4蛋白表达.结果:与模型组比较,清肝活血方及其拆方均可明显改善ALD大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度(0.67±0.50,2.15±1.28,1.38±1.06 vs4.56±0.73,均P<0.01).清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平(725.65±111.02 vs884.68±177.54,P<0.05),清肝方和活血方无明显作用;清肝方、活血方、清肝活血方均可明显降低ALD大鼠血清AST水平(2383.81±888.18,2158.93±922.85,2001.90±519.27vs 3210.98±640.63.P<0.01或0.05),组间比较无显著差异.清肝方及清肝活血方能显著降低模型大鼠CD14 mRNA表达(1.46±0.52,1.10±0.40 vs 2.67±0.66,均P<0.01).活血方作用不明显,清肝活血方优于活血方.清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4 mRNA表达(1.91±0.03,2.11±0.03,1.53±0.01 vs 2.37±0.03,均P<0.01),组间比较无显著差异.清肝活血方显著降低模型大鼠肝组织CD14表达(13 392.28±9287.54vs 32 288.89±15 631.03,P<0.01).清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4表达(1.06±0.10,1.19±0.05,0.98±0.12 vs 1.40±0.11,均P<0.01).结论:清肝活血方及其拆方发挥对ALD的防治作用,其作用机制可能与降低CD14、TLR4基因和蛋白的表达有关.     

复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠toll样受体2,4基因表达的影响

[目的]观察复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠toll样受体2,4（TLR2,TLR4）基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能作用机制。[方法]用三硝基苯磺酸（TNBS）制备UC大鼠模型,将52只SD实验大鼠随机分为正常对照（空白）组、模型组、柳氮磺胺吡啶（SASP）组（500 mg/kg）,复方青黛颗粒低（600 mg/kg）、中（900 mg/kg）、高（1 200 mg/kg）剂量组,从造模后第3天开始分别每天灌胃给药1次至实验结束,第14 d（灌胃10 d后）,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测TLR2、TLR4的基因表达水平。[结果]模型组TLR2、TLR4基因相对表达量均明显高于空白组（P〈0.01）;复方青黛颗粒中、高剂量组TLR2相对表达量及高剂量组TLR4相对表达量与SASP组比较差异均无统计学意义,但均明显低于模型组（均P〈0.05）。[结论]复方青黛颗粒能有效治疗TNBS诱导的UC模型大鼠,可能与复方青黛颗粒抑制TLR2、TLR4基因表达有关。     

感染旋毛虫小鼠不同时期TLR2/TLR4 mRNA表达量及血清炎性因子的变化

目的 探讨旋毛虫感染对小鼠不同组织细胞TLR2/ TLR4（Toll样受体）表达量及血清炎性因子的影响.方法 分别取感染前、后不同时期小鼠心肌、肺及腹腔巨噬细胞,应用半定量PCR方法检测TLR2/ TLR4 mRNA相对表达量,同时应用ELISA方法对血清相关炎性因子进行检测.结果 随着旋毛虫感染时间的变化,TLR4和TLR2在心肌、肺和腹腔巨噬细胞上的表达略有不同,但大致呈双峰状.旋毛虫感染初期4d左右,TLR2/ TLR4 mRNA表达均有不同程度升高,之后降低,14 d左右,心肌与肺TLR升高,巨噬细胞TLR则继续下降,在21 d左右,心肌TLR表达量达到最高值,且与对照组差异显著（P＜0.05）,肺组织TLR呈下降趋势,巨噬细胞TLR表达升高,之后下降并趋于稳定.感染鼠的血清中炎性因子IL 2和NO的表达量显著升高（P＜0.05）,而TNF-α、IL-10和IL-12的表达量则显著降低（P＜0.05）,IL-6的表达量变化不明显.结论 旋毛虫感染可引起小鼠心肌、肺和巨噬细胞上的Toll样受体TLR2/TLR4表达发生变化,继而调节相关细胞因子分泌也发生变化,这种变化与旋毛虫生活史不同阶段抗原及其引起的宿主免疫反应和组织器官损伤具有一定相关性.     

益生菌对实验性结肠炎大鼠Toll样受体4表达的影响

目的 观察两种益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌)对溃疡性结肠炎的大鼠结肠黏膜Toll样受体4(TLR4)及TNT-α的变化及影响.方法 采用三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导溃疡性结肠炎大鼠模型.观察和评估其结肠黏膜的大体和组织学变化.以免疫组化方法检测TIR4、TNF-α的表达,以蛋白免疫印迹法检测蛋白表达.结果 造模后结肠组织中可见大量炎性细胞浸润,杯状细胞减少,隐窝脓肿形成.与正常对照组相比,模型组结肠组织TLR4的表达显著增加(P＜0.01).TNF-α表达显著升高(P＜0.01);与益生菌组相比,模型组结肠组织TLR4的表达显著减少(P＜0.01),TNF-α表达显著减少(P＜0.01).其两种菌相比差异不大(P＞0.05).结论 从免疫机制的视角观察到益生菌可能通过抑制Toll样受体4表达从而减少炎性因子TNF-α产生.     

变形链球菌重组表面蛋白(rA-P)人源单链抗体的筛选及其活性检测

目的从PDNA5噬菌体抗体库中筛选变形链球菌重组表面蛋白的人源噬菌体单链抗体,将其表达制备非融合单链抗体,并探讨其生物学特性。方法用变形链球菌重组表面蛋白rA-P包被免疫试管,对pDAN5噬菌体抗体库进行5轮亲和免疫筛选制备抗rA-P蛋白的噬菌体单链抗体,并将其感染大肠杆菌HB2151,用IPTG诱导表达非融合性单链抗体,非融合性单链抗体包涵体复性后用Western blot检测其生物活性。结果筛选得到13株抗rA-P蛋白的噬菌体单链抗体;用HB2151表达的非融合性单链抗体分子量为30kD,表达量达菌体蛋白的30%,Western blot检测显示,复性后的非融合性单链抗体能与rA-P蛋白发生特异性抗原抗体反应,证明表达的非融合性单链抗体有生物活性。结论成功地利用噬菌体抗体库技术筛选、表达制备有生物活性的抗变链菌表面蛋白的人源单链抗体。