白介素29体外抗乙肝病毒作用

目的研究白介素29(IL-29)体外抗乙肝病毒的效果。方法从RNA水平探讨了IL-29抗乙肝病毒的效果。RT-PCR分析IL-29诱导抗病毒蛋白MxA、2′,5-′OAS、PKR和RNase L mRNA水平表达;同时Western blot分析IL-29激活的信号通路以探讨其抗乙肝病毒的机理。结果IL-29能明显降低HepG2.2.15细胞中乙肝病毒mRNA的水平,且能够上调抗病毒蛋白MxA和2′,5-′OAS的mRNA表达并激活ERK1/2、AKT信号途径。结论在HepG2.2.15细胞中IL-29有显著的抗乙肝病毒作用。     

地塞米松在中性粒细胞弹力酶致气道黏液高分泌中的作用机制

目的探讨糖皮质激素在中性粒细胞弹力酶(NE)引起气道黏液高分泌中的作用机制。方法用NE刺激A549细胞,给予地塞米松处理后,以分裂原激活的蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)特异性抑制剂Ro-31-8220、糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU-486为干预因素。采用RT-PCR法检测黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA和MKP-1 mRNA的表达,ELISA法检测细胞中MUC5AC蛋白含量,Western blotting法检测磷酸化细胞外调节激酶(ERK)水平和MKP-1蛋白的表达。结果 NE刺激后引起MUC5AC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组,同时伴随P-ERK水平的增高;给予地塞米松处理后,上述指标的水平明显降低,同时MKP-1的蛋白及mRNA水平增高;而给予Ro-31-8220或RU-486干预后,ERK及MUC5AC蛋白、MUC5AC mRNA水平则增高,而MKP-1的蛋白及其mRNA水平降低。结论NE可通过ERK信号通路引起气道黏液的高分泌,而地塞米松可阻断这一过程,这是通过上调MKP-1的水平使ERK去磷酸化失活而实现的,且MKP-1的上调呈GR依赖性。     

IL-10抑制脂多糖诱导的Hela细胞IL-15和IL-6转录

目的研究IL-10对脂多糖(LPS)诱导的Hela细胞IL-15mRNA和IL-6 mRNA表达的影响,分析其激活的信号转导通路。方法培养的Hela细胞,经不同浓度的LPS及IL-10单独或联合处理后,提取细胞总RNA和总蛋白,RT-PCR分析IL-15和IL-6转录水平的变化,Westernblot分析信号转导通路蛋白变化。结果RT-PCR分析得知①1ng～10μgLPS刺激Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平均明显上调(与对照组比较:P<0.01),且存在剂量依赖关系,100ng/mL时达峰值;100ng/mLLPS刺激Hela细胞0～24h,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平亦明显上调(与对照组比较:P<0.01),24h内存在时间依赖关系,12h时达峰值。②单独IL-10(10ng/mL)作用于Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA没有明显变化(与对照组比较:P>0.05)。不同浓度的IL-10(1,10,100ng/mL)均下调100ng/mLLPS诱导的Hela细胞IL-15 mRNA和IL-6 mRNA的表达,且浓度越高IL-10抑制作用越明显。Western blot分析显示LPS主要通过磷酸化信号蛋白PI3K/AKT和ERK1/2上调IL-15和IL-6转录,IL-10能阻断AKT的磷酸化而对ERK1/2的磷酸化没有影响。结论IL-10可抑制LPS诱导的炎症细胞因子IL-15和IL-6的转录,这可能与其阻断AKT的磷酸化有关,因而,IL-10可能应用于某些临床感染性疾病的预防和治疗。     

ERK1/2通路参与大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞ETB受体上调表达

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在血管平滑肌细胞内皮素-1 B型受体(ET_B)上调中的作用。方法用大鼠肠系膜上动脉离体培养模型，以敏感的离体小血管张力描记技术记录血管张力变化，实时PCR定量ET_B受体mRNA，PhosphoELISA法测定细胞内磷酸化的ERK1/2蛋白水平。结果大鼠肠系膜上动脉培养3 h，细胞内ERK1/2蛋白磷酸化水平明显增高，培养24 h ET_B受体mRNA表达水平显著上调，选择性ET_B受体激动剂蛇毒类似物(sarafotoxin 6c，S6c)引起的收缩增强；与特异性ERK1/2通路阻滞剂SB386023共同孵育24 h，S6c引起的最大收缩E_max明显下降，ET_B受体mRNA水平也显著降低。结论ERK1/2信号转导通路参与大鼠肠系膜上动脉离体平滑肌细胞ET_B受体上调过程。     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

高糖激活PI3K/AKT/mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达

目的探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株(HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25mmol·L-1)刺激HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达;Western blot检测OPN、p-AKT、p-S6、Raptor和Rictor蛋白表达。结果高糖刺激呈时间依赖性上调HK-2细胞OPN表达,其中,OPN mRNA在刺激48h后达高峰;OPN蛋白表达在72h达到最高。此外,高糖刺激激活PI3K/AKT/mTORC1信号通路。利用PI3K特异性抑制剂LY294002、mTORC1特异性抑制剂rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR通路后,HK-2细胞的OPN表达明显降低。进一步,siRNA敲低Raptor降低HK-2细胞中OPN蛋白的表达,而敲低Rictor对OPN蛋白表达无影响。结论高糖通过激活PI3K/AKT/mTORC1通路上调HK-2细胞OPN的表达。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

雌激素受体α在六氟双酚A诱导细胞外调节蛋白激酶激活中的作用研究

目的研究六氟双酚A(bisphenol AF,BPAF)诱导T47D乳腺癌细胞中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)激活的分子机制,探讨雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)在BPAF诱导ERK激活过程中的作用。方法通过蛋白免疫印迹实验(Western Blot)检测ERK磷酸化水平,研究BPAF对ERK磷酸化的诱导作用。运用表达ERαshRNA的慢病毒感染细胞,下调表达ERα,研究ERα在BPAF激活ERK过程中的作用。结果Western Blot结果显示,BPAF在浓度为50 nmol/L时即可诱导ERK磷酸化水平显著升高(P0.05),并且随着剂量的升高呈现出剂量-效应关系。当BPAF浓度达到1μmol/L时ERK磷酸化水平达到最高(P0.05)。BPAF诱导ERK激活时间效应实验中,BPAF处理细胞5~60 min时,ERK磷酸化水平均显著升高(P0.05),在BPAF处理细胞15 min时,ERK磷酸化水平达到最高。在运用表达ERαshRNA的慢病毒感染细胞后,ERα的表达水平显著降低(P0.05)。与正常细胞相比,在下调表达ERα的细胞中,BPAF对ERK磷酸化的诱导作用显著降低(P0.05)。结论 BPAF能够诱导ERK磷酸化,并且呈现剂量-效应关系。ERα在BPAF诱导的ERK激活过程中起到重要作用。     

丁酸钠和曲古抑菌素A促进K562细胞分化机制的研究及其对比

目的　探讨丁酸钠与曲古抑菌素A(TSA)促进K5 6 2细胞分化的机制 ,并对比二者的异同。方法　台盼蓝拒染实验观察药物对细胞生长曲线的影响 ;四氮唑盐还原试验和细胞表面分化抗原检测观察药物对细胞的分化作用 ;流式细胞仪分析细胞周期 ;RT PCR和WesternBlot分别检察细胞周期蛋白在mRNA和蛋白质水平的表达。结果　丁酸钠和TSA分别将细胞主要阻滞于G0 /G1期和G2 期 ;丁酸钠下调cyclinD1mRNA的水平基本上不影响其蛋白质的表达 ,上调cyclinD3蛋白质表达水平基本上不影响其mRNA的水平 ;TSA与丁酸钠的作用相同 ;二者均可以在mRNA和蛋白质水平刺激K5 6 2细胞 p2 1的表达。 结论　丁酸钠和TSA促进K5 6 2的分化是通过诱导 p2 1和cyclinD3蛋白质的表达而完成的 ,丁酸钠和TSA均有望成为治疗慢性髓系白血病的药物。     

干燥综合征患者外周血淋巴细胞Toll样受体4CD14的表达

目的探讨干燥综合征(SS)患者外周血淋巴细胞Toll样受体(TLR)4、CD14的表达。方法分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和流式细胞仪检测TLR4、CD14mRNA和蛋白的表达。结果 SS患者外周血单个核细胞TLR4、CD14mRNA和蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);初发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平明显高于缓解组(P<0.05);复发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平与缓解组相比明显增高(P<0.05);复发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平与初发组相比无统计学意义(P>0.05)。结论①SS患者外周血淋巴细胞高表达TLR4和CD14,且与病情活动相一致;②脂多糖(LPS)-TLR4信号传导途径参与了SS的发病机制。     

Bradykinin promotes Toll like receptor-4 expression in human gingival fibroblasts

Bacterial infections are a potent mechanism for enzymatic generation of kinins such as bradykinin (BK), a universal mediator for inducing inflammatory reaction by associating with the B2 receptor and stimulating liberation of arachidonic acid and synthesis of prostaglandin E2 (PGE2). In this study we evaluate the role of bradykinin in regulating the expression of TLR4 receptor in human gingival fibroblasts. We examine the ability of bradykinin to modulate inflammatory response of human gingival fibroblasts to Gram-negative components and evaluated the role of Toll-like receptors (TLR)-4 in the co-operation between bradykinin and bacterial pathogens. We show that treatment with bradykinin promotes TLR4 receptor expression in human gingival fibroblasts (HGF) and amplifies inflammatory responses to the bacterial components of Gram-negative bacteria. The TLR4 expression induced by bradykinin was blocked with Hoe 140, a B2R antagonist. When HGF cells were incubated with BK resulted of an increased in cyclooxygenase-2 (COX-2) expression and prostaglandin E2 synthesis. Bradykinin and lipopolysaccharide, a specific TLR4 ligand stimulated COX-2 expression. In other series of experiments we found that ERK, phosphatidylinositol-3 kinase, protein kinase C and NFkB are involved in BK promoted-increased in TLR4 expression. The results demonstrate that bradykinin up-regulates the expression of TLR4 and promotes an additive increase in inflammatory responses to lipopolysaccharides.     

羟基红花黄色素A对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶-1(MKP-1)基因转录及蛋白表达之间的关系。方法 HSYA 10μmol.L-1和ox-LDL 35 mg.L-1与VSMC共培育48 h,MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)观察ERK1/2和MKP-1基因表达,Western印迹法观察ERK1/2和MKP-1蛋白表达。结果与ox-LDL 35 mg.L-1模型组比较,加入HSYA 10μmol.L-1组细胞存活率明显下降,G0/G1期细胞明显增多,ERK1 mRNA表达下降了42.2%(P<0.01),MKP-1 mRNA显著增加了86.9%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达降低了39.9%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了80.6%(P<0.01);加入PD98059 10μmol.L-1组,细胞存活率明显降低了58.3%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达下降了45.9%(P<0.01);p-ERK1/2蛋白表达下降了45.9%(P<0.01);PD98059 10μmol.L-1+HSYA 10μmol.L-1同时加入,细胞生存率下降了61.9%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达进一步减少(P<0.01),MKP-1 mRNA增加了110%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达下降了51.2%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了62.4%(P<0.01)。结论 HSYA通过增强MKP-1蛋白表达、降低p-ERK1/2蛋白活性和抑制细胞周期运转的机制抑制VSMC增殖。     

科罗索酸上调Bax表达诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探讨科罗索酸对宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用。方法不同浓度(10～50μmol·L~(-1))科罗索酸处理宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞活性,SPSS12.0统计软件包计算半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测法检测凋亡酶caspase-3活性,western blot检测细胞蛋白Bax、Bcl-2表达。结果科罗索酸抑制宫颈癌Hela细胞活性随药物浓度及时间的增加而增高,24、48及72 h的IC_(50)分别为45、34、28μmol·L~(-1)。科罗索酸诱导Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),凋亡酶活性也明显高于对照组(P<0.01),科罗索酸可上调Bax而不影响Bcl-2的表达。结论科罗索酸可抑制宫颈癌Hela细胞活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白表达有关。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞周期和PCNA表达的影响

目的观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AAFLS增殖的分子机制。方法制备AA大鼠模型,应用流式细胞仪分析rhEndostatin对AA FLS细胞周期的影响;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法,定量分析rhEn-dostatin对AA大鼠滑膜组织PCNA mRNA及蛋白表达的影响。结果与正常组相比,AA FLS G1期细胞减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞增加(P<0.01);AA大鼠滑膜组织PCNA mRNA和蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。与AA模型组相比,rhEndostatin治疗组细胞G1期比例增加(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.01);滑膜组织PCNA mRNA和蛋白表达减少(P<0.01)。结论rhEn-dostatin可引起AA FLS细胞周期G1期阻滞,该作用可能与其抑制AA FLS PCNA表达有关。     

金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的调节机制研究

目的：研究金茵清热口服液（JYQR）对人外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样2受体（TLR2）信号通路免疫调节作用机制。方法：体外分离、培养人PBMC,设空白对照组和JYQR组,JYQR组加入JYQR刺激PBMC,与空白组经37℃,5% CO₂培养24 h后,分别提取各组PBMC中总RNA、总蛋白、细胞上清液,RT-PCR和Western Blot法检测空白对照组和JYQR组PBMC中相关信号分子TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-α的分泌水平;分别设空白对照组：不作处理;JYQR组：JYQR 2.015 mg·mL^-1;TLR2激动剂组：Pam3CSK4 300 ng·mL^-1;TLR2抑制剂组：OxPAPC 30 μg·mL^-1+JYQR 2.015 mg·mL^-14组,提取核蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测IRF3和NF-κB p65的核转位情况。结果：与空白对照组相比,JYQR组中TLR2、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA表达水平分别上调5.93倍、1.77倍、2.95倍、1.43倍（^*P<0.05,^**P<0.01）;MyD88、TRAF6蛋白的表达分别上调1.26倍、1.24倍（^*P<0.05）,IRAK4和IRF3的相对表达水平差异无统计学意义;细胞因子IL-1α、IL-6的表达下调55%、61%,TNF-α、IFN-α的分泌水平上调4.3倍、2.9倍（^*P<0.05,^**P<0.01）。JYQR预处理PBMC后,IRF3及NF-κB核转位增加,但是经过TLR2抑制剂预处理后,IRF3和NF-κB的核转位减弱;相反,TLR2激动剂预处理可以进一步上调IRF3和NF-κB的核转位。结论：金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的作用机制可能是通过MyD88依赖型信号通路激活中、下游的IRAK4、TRAF6、IRF3以及NF-κB调控终端效应因子发挥免疫调节作用。     

赖氨酰氧化酶样-4与丝氨酸蛋白酶基因在人宫颈癌细胞中的表达

目的探讨赖氨酰氧化酶样-4(LOXL4)和丝氨酸蛋白酶(Matriptase)在三株人宫颈癌细胞中的表达情况。方法采用qRT-PCR及Western blot方法检测三株体外培养的宫颈癌细胞株Hela、ME180、HCC94中赖氨酰氧化酶样-4和Matriptase mRNA的表达及LOXL4蛋白的翻译水平。结果 LOXL4 mRNA在三株人宫颈癌细胞中存在不同程度的表达,蛋白翻译水平与mRNA基因表达一致,以Hela表达为最高,ME180次之,HCC94表达最低;而ME180和HCC94中MatriptasemRNA相对表达丰度分别是Hela的4.09倍和12.40倍。结论本研究成功建立了LOXL4及Matriptase在体外培养宫颈癌细胞中表达的检测平台,LOXL4、Matriptase的相对表达水平可能与宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力有关。     

HHT对CNE-2Z细胞caspase-3的蛋白和mRNA表达的影响

目的　了解高三尖杉酯碱 (HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的caspase 3蛋白和mRNA表达的影响。方法　分别用HHT 0 (对照 )、0 12 5、0 2 5、0 5、1mg·L-1处理CNE 2Z细胞 8h ,采用WesternBlot分析caspase 3酶原蛋白表达的变化 ,用半定量RT PCR检测caspase 3mRNA表达的改变。结果　随HHT处理浓度的增加 ,caspase 3酶原的蛋白表达的减少具有统计学意义 (P <0 0 1) ,而caspase 3mRNA的表达的增高具有统计学意义 (P <0 0 1)。 0 2 5、0 5、1mg·L-1HHT处理组caspase 3酶原的蛋白表达均明显低于对照组 (P <0 0 1) ,1mg·L-1HHT处理组caspase 3mRNA的表达明显高于对照组(P <0 0 1)。结论　HHT可剂量依赖性地下调caspase 3酶原的蛋白表达 ,剂量依赖性地上调caspase 3mRNA的表达 ,HHT处理CNE 2Z细胞过程中可能有caspase 3的活化     

双苯氟嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制研究

目的研究双苯氟嗪(d ipfluzine,D ip)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(card iac fibrob lasts,CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用MTT法检测D ip对CFB增殖的影响;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪技术检测细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;免疫组织化学染色方法,观察心肌成纤维细胞经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)蛋白的表达。结果①在一定浓度范围内,D ip能明显抑制AngⅡ诱导CFB的增殖和胶原合成(P<0.05或P<0.01)。②CFB细胞G0/G1期百分率随D ip浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随D ip浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。③D ip能降低PCNA蛋白表达,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.01)。④D ip能够明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化结果显示D ip(10、100μmol.L-1)组ERK1和cPKCα阳性表达低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论D ip通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原的增加而起到了抗心肌纤维化的作用,其抗纤维化作用与其降低TGF-β1基因表达以及抑制cPKCα、ERK1通路有关。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导卵巢癌细胞系p16基因去甲基化及其表达

目的观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的卵巢癌细胞CAOV3p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨卵巢癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控。方法应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7mol/L,5×10-7mol/L,1×10-6mol/L,5×10-6mol/L)处理体外培养的卵巢癌细胞CAOV3后,甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(MSP)法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态,RT-PCR法及Western-blot法检测用药前后细胞中p16 mRNA及蛋白表达的变化。结果p16基因在卵巢癌细胞系CAOV3中启动子区呈异常甲基化状态,在 mRNA及蛋白水平低表达。经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,其 mRNA及蛋白表达显著增强(P<0.01)。结论启动子区异常甲基化是卵巢癌细胞p16基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂-5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态,从而调控p16基因表达。