三羟基异黄酮对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及侵袭作用的影响

目的 观察5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及侵袭作用的影响,探讨其抗纤维化作用的机制.方法 以25、50、100μmol/L浓度Genistein处理体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,3H-脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成,Transwell小室趋化运动模型检测细胞侵袭能力.结果 Genistein作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成作用降低,细胞的侵袭能力显著下降.随着药物浓度增加,对细胞的这种抑制作用也增强.结论 Genistein具有体外抗瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化与侵袭的作用,可成为治疗病理性瘢痕及纤维化疾病的有效药物.     

5-氨基酮戊酸光动力疗法对瘢痕成纤维细胞的作用研究

研究5- 氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对瘢痕成纤维细胞的作用及其机制,为临床运用ALA-PDT 治疗瘢痕疙瘩提供理论依据。方法取人瘢痕成纤维细胞原代培养,并将生长状态无明显差异的瘢痕成纤维细胞随机分为空白对照组、磷酸盐缓冲液（PBS）组以及6 个不同浓度的5- 氨基酮戊酸（ALA）培养液组。每组给予635 nm 发光二极管（LED）激光器照射。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测 ALA-PDT 对瘢痕成纤维细胞增殖的影响,并应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）和Western blot 检测各组瘢痕成纤维细胞中胶原蛋白Ⅲ（Collagen Ⅲ）mRNA 水平和蛋白表达水平。结果与空白对照组及PBS组比较,CCK-8 结果表明,ALA-PDT 能抑制瘢痕成纤维细胞生长,其抑制作用随着ALA 浓度增加逐渐增强,当ALA 浓度为0.500 mmol/L时抑制作用最明显。RT-PCR 和Western blot结果表明,随着ALA 浓度增大,CollagenⅢ mRNA 水平和蛋白表达水平逐渐下降,当ALA 溶液浓度达到0.500 mmol/L 时下降至最低值。结论ALA-PDT 能有效抑制瘢痕成纤维细胞增殖,抑制作用在ALA 浓度为0.500 mmol/L 时最强。ALA-PDT 可能是通过抑制瘢痕成纤维细胞中CollagenⅢ的合成,进而抑制瘢痕疙瘩的形成。     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

大黄素抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成及细胞周期的研究

目的 检测大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,探索大黄素防治瘢痕的机制.方法 进行人增生性瘢痕成纤维细胞的体外培养,将不同浓度的大黄素作用于细胞,以3H-脯氨酸掺入法检测成纤维细胞胶原合成的情况,并以流式细胞术检测成纤维细胞的细胞周期.结果 在不同浓度组大黄素的处理下,人增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成呈现出抑制的趋势;大黄素可以提高细胞G1期比例,而降低S期和G2期比例.结论 大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成有显著的抑制作用,其机制和细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖有关.     

黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响.方法 不同浓度黄芪总苷液(10、20、40ng/mL)干预瘢痕疙瘩成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时(real-time) PCR测定成纤维细胞凋亡抑制基因survivin及细胞凋亡因子p53及Bcl-2的表达;Western blot检测成纤维细胞survivin、p53及Bcl-2蛋白水平表达.结果 MTT法检测发现,与对照组(不加黄芪总苷液)比较,各黄芪总苷液各浓度组细胞490 nm处吸光度(A)值明显降低,瘢痕疙瘩细胞增殖均明显受抑制且呈剂量依赖性(P＜0.05).real-time PCR及Western blot检测结果显示,黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡相关因子survivin、Bcl-2有不同程度的抑制作用,对P53有不同程度的促进作用,且呈浓度依赖性.结论 黄芪总苷液能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,调控其凋亡,从而达到有效治疗瘢痕疙瘩的效果.     

IRF3调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质表达的研究

目的通过观察干扰素调节因子3（IRF3）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质表达的作用,探讨IRF3在皮肤纤维化中的调控机制。方法取行瘢痕疙瘩切除手术的10例患者的术中切除的瘢痕疙瘩组织为研究材料,另择8例外科手术患者的正常皮肤组织为对照,培养两者的成纤维细胞。采用real-timeRT-PCR、Westernblot检测成纤维细胞IRF3mRNA、蛋白表达水平,转染siRNAs-IRF3后IRF3蛋白水平;检测TGF-茁1诱导后瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖情况,细胞外基质Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）、a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）I型胶原与TGF-茁受体Ⅰ、Ⅱ,及TGF-茁1信号通路调节蛋白p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3表达水平。结果IRF3在瘢痕疙瘩组织中表达显著上调。下调IRF3的表达,显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并抑制collagenⅠ、a-SMA的表达,同时抑制TGF-茁1诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞的TGF-茁受体Ⅰ、Ⅱ的表达。下调IRF3的表达亦抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3表达水平。结论IRF3表达下调通过抑制TGF-茁1/Smad信号通路,抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质的表达。IRF3或为治疗瘢痕疙瘩新的靶点。     

羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响

目的观察羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响。方法人增生性瘢痕标本取自整形患者。采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并用ELISA方法检测羟基喜树碱干预下体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量。结果各剂量浓度（63、125、250、500、1000ng/mL）羟基喜树碱均抑制人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌,随着作用浓度的升高,抑制强度增加,但与作用时间无明显关系。结论羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌有明显的抑制作用,对防治增生性瘢痕有一定意义。     

抗转化生长因子β_1(anti-TGF-β_1)对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨抗转化生长因子β1(anti-TGF - β1)对瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及意义。方法　用电镜观察anti-TGF - β1作用后瘢痕成纤维细胞的形态学变化 ,以及用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法检测anti-TGF - β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成的影响。结果　anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。anti -TGF - β1能抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,在一定范围内 (10 μg/ml)呈剂量 -效应关系。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。结论　anti-TGF - β1能中和TGF - β1,促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ;提示anti-TGF - β1的应用可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径。     

积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

目的 探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。方法 采用光镜、电镜、∧3H－TdR、∧3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。结果 积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,布且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。结论 积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

人参皂苷Rg3对培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性的影响

目的：研究人参皂苷Rg3(GS-Rg3)对体外培养人瘢痕疙瘩的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度GS-Rg3(25、50、100和200 mg·L^-1)在不同作用时间(24、48和72 h)对成纤维细胞增殖活性的影响。 结果：与对照组相比GS-Rg3对瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,随着时间延长及浓度增加,抑制作用有增加趋势。最大抑制浓度为100 mg·L^-1。 结论：GS-Rg3对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,且随着时间延长及浓度增加,其抑制作用增强。     

黄芩素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在增殖、凋亡的影响,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法 MTT法测定黄芩素干预后瘢痕疙瘩成纤维细胞的活力和乳酸脱氢酶的含量;Annexin V-FITC分析成纤维细胞在干预后的细胞凋亡率;蛋白印迹实验检测凋亡蛋白表达水平的变化。结果黄芩素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有抑制作用(P0.01),抑制效应呈剂量依赖性,作用24 h后,黄芩素50μM组抑制率为65%,IC50值为(31.34±0.29)μM;黄芩素还可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,黄芩素25μM组凋亡率达22.7%,和对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);但不影响乳酸脱氢酶的含量。黄芩素作用后明显降低线粒体膜电位,上调凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3和裂解半胱天冬酶9的表达,裂解半胱天冬酶8的表达不受影响。结论黄芩素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩生长。     

黑布药膏对兔耳增生陛瘢痕治疗作用的组织形态学研究

目的：观察黑布药膏对兔耳增生性瘢痕组织的影响。方法：成年大耳白兔24只,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,对比研究在瘢痕形成过程中黑布药膏对瘢痕形态及瘢痕增生指数的影响。结果：光镜下见黑布药膏能明显抑制成纤维细胞增殖及降低胶原纤维的含量。黑布药膏能降低瘢痕增生指数,与模型对照组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：黑布药膏可抑制免耳增生性瘢痕组织增生。     

芦荟多糖对体外培养人成纤维细胞增殖和分泌透明质酸与羟脯氨酸的影响

目的：观察芦荟多糖对体外培养人成纤维细胞增殖及其分泌透明质酸与羟脯氨酸水平的影响,并探讨其在创面愈合过程中的可能作用机制。方法：将体外培养人成纤维细胞随机分为芦荟多糖组（25、50、100、200和400rag／I。）和对照组。通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况,流式细胞技术检测细胞周期,吖啶橙-溴乙锭（acridine orange-ethidium bromide,AO-EB）染色法检测细胞生存状况,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出率检测细胞损伤程度,^3H脯氨酸掺入法观察细胞胶原合成情况,酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌透明质酸和羟脯氨酸的水平。结果：各个浓度芦荟多糖均能促进细胞增殖,并于细胞培养的第5天达到高峰。与对照组相比,各个浓度芦荟多糖组G0／G1期细胞所占百分率显著下降,而G2／M期和S期细胞所占百分率显著上升（P〈0．01）;AO—EB染色显示各浓度芦荟多糖组细胞核着绿色荧光并呈正常结构,未发生死亡或凋亡;各个浓度芦荟多糖组LDH漏出率均呈不同程度的下降（P〈0．05）;芦荟多糖能明显促进细胞内胶原合成及透明质酸和羟脯氨酸的分泌（P〈0．05）。结论：芦荟多糖可通过促进人成纤维细胞增殖和透明质酸与羟脯氨酸等细胞外基质的分泌,加速创面愈合。     

莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的 研究莪术醇（curcumol）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法 用不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）处理瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）作为不同浓度莪术醇组;用20 μmol/L 蛋白激酶（ERK）信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐（ISO）和160 mg/L莪术醇处理KF细胞,记为curcumol 160 mg/L+ISO组,Western blot检测KF细胞中增殖蛋白（Cyclin D1、PCNA）、纤维化标记蛋白（Col1A1、Col3A1、α-SMA）、凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3）、ERK信号通路蛋白（p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf）表达水平,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果 不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量,抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达,抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达,提高Bax、cleaved caspase-3表达量,抑制KF细胞增殖、胶原合成,促进细胞凋亡,抑制ERK信号通路（P<0.05）。ERK信号通路激活剂ISO（20 μmol/L）可逆转莪术醇（160 mg/L）对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论 莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖（CF）和胶原合成的影响,并探讨其是否通过cAMP/PKA通路进行介导抗纤维化作用。方法：①细胞分离培养与鉴定：用酶消化法分离细胞,差速贴壁法纯化获得心室肌成纤维细胞为材料,用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。②检测方法：WST-1比色法测定细胞增殖情况,放射免疫法测定Ⅲ型胶原前胶原末端肽（PCⅢ）的含量。结果：①与空白组比较,Ang-（1-7）组呈浓度依耐性抑制基础状态下CF和PCⅢ分泌（P〈0.05）;②在TGF-β1诱导状态下,与TGF-β1组比较,Ang-（1-7）＋TGF-β1组呈浓度依耐性抑制FBC增殖和PCⅢ分泌（P〈0.05）;③与Ang-（1-7）比较,Ang-（1-7）＋H-89组基础状态下抑制CF增殖和PCⅢ分泌能力减弱（P〈0.05）;④在TGF-β1诱导状态下,H-89（PKA抑制剂）能阻断Ang-（1-7）对CF的增殖和胶原合成的抑制作用。结论：1.Ang-（1-7）对基础状态下或TGF-β1诱导下CF增殖和胶原合成均具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。②Ang-（1-7）是通过PKA介导抑制TGF-β1诱导CF增殖及胶原合成。     

Effects of connective tissue growth factor antisense oligonucleotides on the proliferation and collagen synthesis of the cultured human keloid fibroblasts in vitro

Keloid ,akindofcommonlyseenpathologicalscarinclinicalpractice ,characterizedascontinuousinfiltratinggrowthwithhighpostoperativerecurrencerate ,isakeyre searchtopicinthefieldofplasticsurgery .However,thepathogenesisofkeloidisnotclear.Connectivetissuegrowthfactor (CTGF)isthecytokinethatplaysaveryim portantroleinthecourseoffibrosis ,anditsexcessiveex pressionmaybeinvolvedinsomefibroticdiseasessuchasscleroderma ,renalfibrosis ,pulmonaryfibrosis,arterio sclerosis[1] .Inourstudy ,weusedantisensest…     

血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质的影响

目的：研究血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化可能的作用机制。方法：采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast,CF）,建立AngⅡ诱导的心肌纤维化模型。实验分组为：空白对照组,AngⅡ组,5%、10%、15%血府逐瘀汤组和缬沙坦组。空白对照组以对照组鼠血清温育,其余各组先以AngⅡ10-6mol/L刺激24h后,再分别以对照组鼠血清,5%、10%、15%血府逐瘀汤含药血清,缬沙坦含药血清温育24h。采用四氮唑蓝比色法检测CF增殖,羟脯氨酸法检测胶原含量,放射免疫法检测细胞培养上清中透明质酸（hy-aluronic acid,HA）和Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ,PCⅢ）水平,酶联免疫吸附测定法检测上清中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达。结果：与空白对照组比较,AngⅡ10-6mol/L作用CF24h显著上调CF增殖指数和DNA合成（P〈0.01）,增加胶原含量（P〈0.01）,增加上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。与AngⅡ10-6mol/L相比,血府逐瘀汤含药血清下调CF增殖指数和DNA合成,降低胶原含量（P〈0.05）,减少上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。结论：AngⅡ能够促进CF增殖及细胞外基质合成,具有促进心肌纤维化作用;血府逐瘀汤能改善心肌纤维化,机制可能与抑制AngⅡ诱导CF增殖,抑制细胞外基质胶原蛋白、HA、PCⅢ及FN合成有关。     

重组人生长激素对腹壁嵌顿疝腹横筋膜胶原蛋白代谢影响的研究

目的:探讨腹股沟嵌顿疝腹横筋膜胶原蛋白的变化及重组人生长激素(rhGH)对腹股沟嵌顿疝患者胶原蛋白代谢的影响。方法:32例腹股沟斜疝患者按疝的类型分为两组:斜疝组、斜疝嵌顿组,以16例成人非疝患者作为对照组,分别于术中腹横筋膜取材,进行测定胶原含量及观察rhGH对腹横筋膜内成纤维细胞生成胶原蛋白的影响。结果:三组间比较,胶原含量均差异显著,0.016g/LrhGH浓度下斜疝组、嵌顿疝组与对照组A值比较有显著差异,在0.160g/L、0.600g/L浓度rhGH下斜疝组、嵌顿疝组与对照组A值比较,无显著差异。结论:低浓度rhGH具有促进腹壁成纤维细胞合成胶原蛋白的作用。     

瘢痕疙瘩组织中胶原合成情况的研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度积累的形成原因。方法 用透射电镜观察瘢痕疙瘩的超微结构。用ABC法免疫组化检测瘢痕疙瘩中新合成的胶原。用地高辛标记的人Ⅰ型前胶原al(Ⅰ）cDNA探针与从瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中提取RNA进行斑点杂交。结果 在超微结构上,多数瘢痕疙瘩成纤维细胞拥有丰富的高度发达的粗面内质网。斑点杂交结果显示瘢痕疙瘩组织中Ⅰ型胶原mRNA水平升高。免疫组化染色显示瘢痕疙瘩中成纤维细胞有丰富的Ⅰ型前胶原表达。结论 在活跃增生的瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是瘢痕疙瘩中胶原过度积聚的重要原因。