双歧杆菌完整肽聚糖对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化的调控作用研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、侵袭和迁移能力的调控作用,阐明WPG抑制结肠癌细胞EMT从而影响肿瘤转移的分子机制。方法常规培养结肠癌细胞株SW480,分为NC组(阴性对照组)、EMT组(TGF-β1诱导EMT组)、EMT+WPG组、WPG组。给予WPG(116μg/ml)孵育48 h后,western-blot法检测EMT相关标志蛋白E-cadherin、Vimentin及转移相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达,transwell检测细胞的侵袭及转移能力。结果 TGF-β1诱导SW480细胞中EMT发生。与NC组相比,EMT组E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达升高(P=0.004 8、0.002 6、0.000 4),而Vimentin表达降低(P=0.000 7),且增加了SW480细胞的侵袭(P=0.001 3)及迁移数量(P0.01);经WPG处理后(EMT+WPG组)E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达降低(P=0.013、0.031 5、0.000 9),而Vimentin表达升高(P=0.000 1),且细胞侵袭(P=0.012 1)及迁移数量减少(P0.01)。单纯给予WPG对SW480细胞中E-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达及对细胞侵袭及迁移无影响(P=0.518、0.238、0.281、0.315 3)。结论双歧杆菌完整肽聚糖能抑制结肠癌细胞株SW480的EMT进程,降低结肠癌细胞的侵袭及转移能力。     

染料木黄酮对人甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、侵袭等的影响

目的探讨染料木黄酮对人甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、粘附、侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法利用MTT法检测不同浓度的染料木黄酮对SW579细胞增殖的影响;分别采用粘附、侵袭、迁移实验观察染料木黄酮作用后与肿瘤转移相关的细胞粘附、侵袭及迁移能力的变化;实时荧光定量PCR检测染料木黄酮对SW579细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2) mRNA水平的影响。结果与对照组相比,染料木黄酮对SW579细胞有促进增殖的作用,而对SW579细胞的粘附、侵袭、迁移和mRNA表达具有抑制作用。结论 40、80和160μmol/L染料木黄酮均可抑制SW579细胞的侵袭迁移能力,其作用机制可能与其抑制MMP-2基因的表达有关。     

5F对人绒癌JAR细胞株侵袭转移能力的影响

目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞侵袭、转移、黏附的影响及MMP-9、VEGF表达的变化。方法:用不同浓度的5F作用JAR细胞,MTT比色法,Transwell小室,细胞黏附实验观察其增殖、侵袭、迁移、黏附能力的变化;Western blot方法检测5F对JAR细胞MMP-9、VEGF表达水平的影响。结果:作用6 h,5F能抑制JAR细胞的增殖、转移、侵袭、黏附,其抑制率呈剂量效应(P<0.05)。5F作用24 h JAR细胞,MMP-9、VEGF蛋白表达水平能明显下调。结论:5F能抑制JAR细胞的侵袭、转移、黏附并下调MMP-9、VEGF蛋白表达水平。     

SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的探讨SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RTPCR及Western blot检测舌癌组织及癌旁组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达;培养人舌癌细胞系Tca8113,将细胞分为对照组、SDF-1组、SDF-1+AMD3100组、AMD3100组,Western blot检测四组细胞CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达,CCK8试验检测四组细胞增殖,Transwell小室检测四组细胞迁移和侵袭数。结果舌癌组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);SDF-1组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于另外三组(P0.01);SDF-1+AMD3100组CXCR4蛋白表达显著低于对照组和SDF-1组;MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭与对照组差异不显著(P0.05),但均显著低于SDF-1组;CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于AMD3100组(P0.01);AMD3100组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著低于另外三组(P0.01)。结论 SDF-1和CXCR4在舌癌组织高表达,SDF-1可上调CXCR4在人舌癌细胞系Tca8113的表达,其过程能被AMD3100减弱。SDF-1/CXCR4可促进细胞的增殖、侵袭和迁移,此过程可被AMD3100抑制。     

甘草素对B16F10黑色素瘤细胞侵袭转移的抑制作用及其机制探讨

目的研究甘草素(liquirigenin,LQ)对黑色素瘤B16F10侵袭转移的抑制作用及分子机制。方法采用四甲基氮唑兰MTT比色法检测甘草素对B16F10细胞存活力的影响;划痕实验检测甘草素对细胞迁移的影响;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法分析甘草素对侵袭转移相关蛋白和信号通路的影响。结果在无毒剂量下,甘草素能明显抑制B16F10细胞的侵袭转移能力,并且随着浓度增加,其细胞的迁移和侵袭逐渐减弱;甘草素能通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9蛋白表达。结论甘草素可能通过阻碍PI3K/PTEN/AKT信号通路传导,下调MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制黑色素瘤B16F10细胞的侵袭转移。     

非诺贝特对人肺腺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对人肺癌A549细胞生长、迁移侵袭能力的影响及其可能机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,分别用0、12.5、25、50、75、100μmol/L非诺贝特处理细胞,阴性对照组为0μmol/L非诺贝特浓度组;MTT法检测不同药物浓度作用下肺癌A549细胞的生长抑制情况;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测非诺贝特对肺癌A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR法检测A549细胞中PPARα(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors alpha)、MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2)、MMP-9、Timp-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、Timp-2m RNA的表达情况。结果非诺贝特能够抑制A549细胞生长,呈时间-剂量关系(P0.05);细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示非诺贝特能够降低A549细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR结果提示非诺贝特能够上调PPARα、Timp-1、Timp-2m RAN表达,下调MMP-2、MMP-9 m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论非诺贝特能够抑制肺癌A549细胞生长、迁移及侵袭能力,其机制可能与PPARα、MMPs、Timps有关。     

NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞Snail、MMP-2表达的影响

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞Snail、MMP-2表达的影响,探讨选择性COX-2抑制剂NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞侵袭力的影响机制。方法:以不同浓度的NS-398作用于人卵巢癌细胞,MTT法测定NS-398药物的浓度对SW626细胞的生长抑制作用,实时荧光定量PCR法分别检测NS-398作用于人卵巢癌细胞株SW626的Snail以及MMP-2的mRNA的表达水平,免疫细胞化学在蛋白水平定性检测Snail以及MMP-2的表达情况。结果:MTT法测定结果显示:NS-398对SW626细胞有明显的生长抑制作用,并呈剂量依赖性和时间依赖性;RT-PCR半定量结果显示:NS-398可使人卵巢癌细胞株SW626Snail蛋白和MMP-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降,呈浓度依赖关系(P<0.05),各实验组相比较有统计学意义(P<0.05)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398能够抑制人卵巢癌细胞株SW626的Snail蛋白和MMP-2表达,使Snail以及MMP-2表达下调,这可能是其抑制人卵巢癌细胞株SW626肿瘤细胞侵袭力的机制之一。     

异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的探讨异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法分别以30、60和120μg/ml异丙酚处理Eca109细胞,采用平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达情况。结果 30μg/ml异丙酚对Eca109细胞的克隆形成能力无显著影响,但60和120μg/ml异丙酚能够显著抑制Eca109细胞克隆形成能力;异丙酚能够呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的侵袭和迁移,且抑制MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论异丙酚能够抑制食管癌Eca109细胞的侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

普伐他汀对人肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭能力影响的初步研究

目的 观察普伐他汀(Pra)抑制肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭、运动的作用及机制.方法 培养HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度Pra对HepG2细胞增殖的抑制效应,并与对照组作比较.以Matrigel侵袭实验和迁移实验检测Pra对HepG2细胞的侵袭、运动能力的影响;p38活性试剂盒测定p38活性;Western印迹法测定磷酸化p38(p-p38)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)、RhoC及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达.结果 MTT比色法及Matrigel侵袭和迁移实验显示,Pra明显抑制HepG2细胞增殖及侵袭、运动能力;Pra可抑制p38活性,并抑制p-p38、RhoC及MMP-2表达,同时上调MKP-1表达.以0.01 g/LPra组为例,其抑制HepG2细胞增殖率为(89.51±9.55)%,对照组为100.00%(F=19.76,P＜0.05);对p38活性的影响:0.01g/L Pra组为p38活性为(87.45±8.22)%,对照组为100.00%(F=22.29,P＜0.05).结论 Pra通过抑制p38活性及p-p38表达、提高MKP-1表达,抑制肝癌HepG2细胞株增殖,并通过下调RhoC及MMP-2表达,抑制其侵袭、运动能力.     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

蛇葡萄素对大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响

目的研究蛇葡萄素在体外对人大肠癌细胞株SW480增殖及凋亡的影响。方法采用不同浓度的蛇葡萄素处理SW480细胞后,利用MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western-blot检测Bcl-2蛋白水平。结果不同浓度的蛇葡萄素均能抑制SW480的细胞的增殖,低浓度与高、中浓度组对细胞增殖抑制情况有显著性差异(p<0.05),而中、高浓度组间无显著性差异(p>0.05)。低、中、高浓度蛇葡萄素均能有效诱导SW480细胞凋亡,低浓度与高、中浓度组对细胞诱导效果有显著性差异(p<0.05),而中、高浓度组间无显著性差异(p>0.05),Western-blot显示Bcl-xL的表达显著下调(p<0.05);Bax、Bid、Caspase-3、p-Capase-9及Caspase-9的表达显著上调(p<0.05)。结论蛇葡萄素能抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其凋亡,其对凋亡的诱导作用主要是通过Bcl-2家族蛋白实现的。     

慢病毒介导HMGN5基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的观察慢病毒介导的高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 RT-qPCR法检测人卵巢上皮细胞株IOSE及4株不同卵巢癌细胞中HMGN5的表达情况,将HMGN5 shRNA慢病毒载体转染至人卵巢癌细胞SKOV3中,RT-qPCR和Western blot检测SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测沉默HMGN5基因对细胞增殖能力的影响,划痕实验检测沉默HMGN5基因对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测沉默HMGN5基因对细胞侵袭能力;Western blot检测SKOV3细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果与卵巢上皮细胞株IOSE相比,HMGN5在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、HO-8910、Caov3中的表达明显升高(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,sh-HMGN5组SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显下降(P<0.05),细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论沉默HMGN5可能通过阻碍Wnt/β-catenin信号通路的激活抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的：观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法：采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果：白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase 3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论：白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase 3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。     

二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞增殖的抑制

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人胰腺癌细胞株Patu8988和SW1990生长的作用。方法采用MTT法检测DHA作用后Patu8988和SW1990细胞的增殖,流式细胞术检测DHA作用后Patu8988和SWl990细胞的凋亡、细胞周期和肿瘤相关蛋白环氧合酶2（COX-2）的表达量。结果DHA作用人胰腺癌细胞株24、48、72h后,细胞的增殖受到明显抑制（P〈0．01）,同时DHA能诱导细胞凋亡,随着作用时间延长和作用剂量增加,效果越明显。50μg／ml DHA作用24h后,胰腺癌细胞的COX-2表达量下降（P〈0．05）。结论DHA能有效地抑制胰腺癌细胞增殖,同时诱导细胞凋亡,可能与COX-2在胰腺癌细胞中的表达下调有关。     

原儿茶酸对小鼠乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响北大核心CSCD

目的研究原儿茶酸（protocatechuic acid,PCA）对小鼠乳腺癌细胞（4T1）增殖和转移的影响。方法体外培养4T1细胞。实验分组：溶剂对照组（DMSO）和PCA组（浓度为1、10、100、250、500、1000nmol／L）。MTT法检测PCA对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell小室法观察PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法和荧光定量PCR法分析PCA对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白和mRNA表达的影响。结果1～1000nmol／LPCA对4T1细胞增殖无影响;500、1000nmol／LPCA能够抑制4T1细胞的迁移和侵袭,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;PCA对4T1细胞MMP-2蛋白和mRNA表达均无影响。结论PCA能够抑制小鼠乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与MMP-2无关。     

小檗碱对卵巢癌SKOV3细胞S1P/S1PR1通路调控作用及对血管生成的影响

目的 探讨小檗碱(BBR)对卵巢癌SKOV3细胞血管生成的影响及对鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1P/S1PR1)通路调控作用,为临床研究提供理论参考。方法 将卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照(Control)组、BBR不同浓度(5、10、25、50、100 mmol/ml)处理干预SKOV3细胞组,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;划痕实验及Transwell小室法分别观察各组细胞的迁移及侵袭能力;管腔实验检测各组细胞血管生成情况;Western blot检测各组细胞通路蛋白S1P和S1PR1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-8(IL-8)、金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶-2(MMP-2)相对表达水平。结果 与Control组相比,5、10、25、50、100 mmol/ml BBR组人卵巢癌细胞株SKOV3癌细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),侵袭和迁移能力、S1P、S1PR1、MMP-9、MMP-2、VEGF和IL-8蛋白相对表达水平均明显降低(P<0.05),且BBR不同浓度组呈剂量依赖性。结论 BBR可下调S1P/S1PR1通路相关蛋白表达,抑制人卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移及血管生成。     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖 迁移 侵袭的影响及机制研究

目的 探究扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用扶正合剂进行干预。将anti-miR-NC、anti-miR-210分别转染至MDA-MB-231细胞；将miR-NC、miR-210 mimics分别转染MDA-MB-231细胞，再使用扶正合剂处理细胞。CCK-8检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-210表达，Western blot检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与正常对照组(0.56±0.05)比较，乳腺癌细胞组OD值明显上调，为(0.96±0.09),差异有统计学意义(t=11.655,P=0.000);与乳腺癌细胞组比较，扶正合剂组OD值显著降低，为(0.32±0.03),差异有统计学意义(t=20.239,P=0.000)。正常对照组迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白及MMP-9蛋白表达水平分别为(62.31±5.30)个、(70.33±8.26)个、(0.25±0.02)、(0....     

MTSS1基因对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的探讨MTSS1基因在骨肉瘤组织中的表达情况,对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 qRT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别检测骨肉瘤组织及其对应的癌旁组织样本中MTSS1的mRNA和蛋白表达水平。构建MTSS1表达载体在骨肉瘤细胞株MG63中过表达MTSS1,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验分别检测对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测MMP2和MMP9的表达情况。结果骨肉瘤组织中MTSS1 mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织。MTSS1高表达能够抑制MG63细胞的增殖,抑制细胞凋亡。MTSS1表达上调显著降低细胞的迁移和侵袭能力。MG63细胞中过表达MTSS1可以降低MMP2和MMP9的表达。结论 MTSS1基因在骨肉瘤中低表达,MTSS1能够降低MG63细胞的增殖并促进细胞凋亡,可能通过抑制MMP2和MMP9的表达调控骨肉瘤的侵袭和转移。