大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1／Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。     

雷帕霉素抑制大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏结缔组织生长因子的表达

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）在肾脏间质纤维化发病机制中的意义,探讨雷帕霉素对其的调节作用。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）动物模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹动态观察梗阻侧肾脏及假手术组结缔组织生长因子mRNA和蛋白的表达,并于第7、14天观察雷帕霉素对CTGF和纤维连接蛋白（FN）表达的作用。结果模型组及雷帕霉素组梗阻侧肾脏CTGF均明显增加（均P〈0．01）,雷帕霉素组比模型组的CTGF mRNA在第7天表达减少（P〈0．05）,CTGF蛋白在第7天（P〈0．05）、14天（P〈0．01）表达下调并且纤维连接蛋白的表达在第7天也下调（P〈0．05）。结论输尿管梗阻后肾脏CTGF mRNA和蛋白表达明显增加,在UUO早期雷帕霉素对CTGF、FN有一定的抑制作用,从而改善肾间质纤维化。     

补肾活血方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中HGFmRNA表达变化的影响

目的:建立肾间质纤维化大鼠模型,动态观察模型大鼠肾功能、肾组织中HGFmRNA的表达变化及补肾活血方对其影响,探讨补肾活血方治疗慢性肾功能衰竭的可能作用机制.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组,除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管梗阻的方法建立肾间质纤维化大鼠模型;分别于UUO术后3、7、14、21、28 d观察造模大鼠血肌酐、尿素氮的动态变化;采用RT-PCR法,观察造模大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响.结果:与假手术组比较,造模大鼠血清肌酐、尿素氮浓度呈进行性增高,P＜0.05或P＜0.01;HGFmRNA表达于UUO术后第3天开始增加,于第14天达高峰,P＜0.05或P＜0.01,随后随时间延长表达逐渐渐弱.与模型组比较,各给药组大鼠肾功能改善,P＜0.05或P＜0.01;各时间点HGFmRNA的表达呈不同程度增加,P＜0.05或P＜0.01.结论:补肾活血方可以改善肾间质纤维化大鼠肾功能;可以提高肾组织中HGFmRNA的表达,防治肾间质纤维化.     

MicroRNA-29c在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达及意义

目的:观察microRNA-29c(miR-29c)在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达变化,探讨其是否参与肾间质纤维化及其可能机制.方法:高通量测序技术和实时荧光定量PCR检测miR-29c在UUO大鼠术后1d和3d肾脏组织中的表达情况.使用生物信息学预测miR-29c靶mRNA,对其靶mRNA进行Gene Ontology和pathway分析.结果:UUO大鼠术后1 d和术后3d手术侧肾组织miR-29c表达下调,Co1 I mRNA和FN mRNA的表达升高.预测靶mRNA经分析后获得miR-29c有统计学意义的10个靶mRNA,其中6个编码细胞外基质蛋白.结论:miR-29c在大鼠UUO模型早期的肾组织中表达下调,可能通过促进细胞外基质堆积参与肾间质纤维化的发生发展.     

抗纤灵方对大鼠单侧输尿管梗阻所致肾纤维化的防治作用

目的：探讨中药抗纤灵方对大鼠单侧输尿管结扎（UUO）所致肾纤维化的防治作用及机制。方法：用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗组以抗纤灵方在造模的同时开始灌胃,1次／d,共4周。治疗的第2周末检测BUN、Scr含量等指标,观察肾功能变化;第4周末采用HE染色、丽春红染色观察。肾组织病理变化和胶原纤维沉积变化;采用RT-PCR法观察梗阻肾皮质C-Met、HGF、Erk1 mRNA表达。结果：模型组大鼠BUN、Scr明显升高;肾小管和间质的结构基本消失,呈现弥漫的细胞增殖;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润;肾组织C-Met mRNA表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药抗纤灵方治疗组肾脏炎性细胞浸润及间质损伤均轻于模型组;BUN含量显著降低,Scr含量趋向正常;肾组织C-Met mRNA表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。ERK总基因水平的表达在假手术组、模型组及中药治疗组之间比较无明显差异。结论：抗纤灵方可能与抑制肾组织C-Met mRNA表达并增加抗肾纤维化的细胞因子HGF mRNA表达来改善大鼠梗阻性肾间质纤维化及肾功能有关。     

大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化与TGFβ1 mRNA表达的关系

探讨转化生长因子β１在单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化中的作用,方法应用原位杂交,生化分析及病理形态学观察等技术,研究ＵＵＯ术后１、３、７、１４、２１ｄ不同时相肾皮质中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达与小管间质病变,羟脯氨酸代谢的关系。结果ＵＵＯ肾组织中羟脯氨酸含量农渐增加及间质面积增宽,伴ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增高。结论ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增加是ＵＵＯ致肾间质纤维化的重要原因之一。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

大鼠输尿管梗阻后肾炎中的P-选择素表达及意义

目的　探讨粘附分子P-选择素在单侧输尿管梗阻后肾炎中的作用。方法　建立单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,观察肾组织病理改变和P-选择素在肾组织中的表达,以及抗P-选择素单克隆抗体(单抗)对其影响。结果　大鼠UUO第1d即见间质以单核巨噬细胞为主的炎细胞浸润和p-选择素在小管间质表达;第3d间质炎细胞增多,P-选择素明显表达;第7d间质炎细胞浸润达高峰伴间质水肿,而P-选择素表达下降。抗P-选择素单抗治疗组炎细胞浸润减轻,P-选择素表达减弱。结论　 P-选择素在UUO早期参与介导以单核巨噬细胞为主的炎细胞在肾间质浸润及肾间质损害,抗P-选择素单抗对此具有一定治疗作用。     

大鼠输尿管梗阻后肾炎中的P-选择素表达及意义

目的：探讨粘附分子Ｐ－选择素在单侧输尿管梗阻后肾炎中的作用。方法建立单侧输尿管梗阻（ＵＵＯ）动物模型,观察肾组织病理改变和Ｐ－选择素在肾组织中的表达,以及抗Ｐ－选择素单克隆抗体（单抗）对其。结果大鼠ＵＵＯ第１ｄ即见间质以单核巨噬细胞为主的炎细胞浸润和Ｐ－选择素在小管间质表达;第３ｄ间质炎细胞增多,Ｐ－选择素明显表达,第７ｄ间质炎细胞浸润达高峰伴间质水肿,而Ｐ－选择表达下降,抗Ｐ－选择素单抗治疗组炎     

银杏叶提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响及机制

目的探究银杏叶提取物(GBE)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及机制。 方法随机选取20只SD大鼠作为Sham组,54只SD大鼠UUO建模成功后随机均分为模型组、GBE组和厄贝沙坦组。观察各组大鼠肾组织病理变化,比较各组大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平及肾组织纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col-I)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。 结果与Sham组比较,其他组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著升高,SOD水平及HGF表达显著下降(P＜0.05)。与模型组比较,GBE组和厄贝沙坦组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著下降,SOD水平及HGF表达显著升高(P＜0.05)。GBE组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平低于厄贝沙坦组,SOD高于厄贝沙坦组(P＜0.05)。 结论GBE可抑制UUO大鼠RIF发生及进展,保护肾功能,其机制可能与纠正HGF/TGF-β1平衡失调有关。     

阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的观察阿魏酸哌嗪（Piperazine ferulate，PF）对单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction，UUO）模型大鼠肾小管间质的转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α—SMA）和Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ，ColⅠ）表达水平的影响，初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制。方法将24只大鼠分为假手术（Sham—operated rats，SOR）组、UUO组、氯沙坦（Angiotensin Ⅱ receptor blocker，ARB）组和PF组。运用免疫组化技术半定量分析实验第14天各组大鼠肾组织中TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达水平。结果免疫组化结果表明SOR组TGF-β1、α—SMA和ColⅠ均为少量表达，UUO组大鼠上述表达明显增加；ARB组和PF组TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达均低于UUO组，但高于SOR组，两治疗组之间差异无统计学意义。结论阿魏酸哌嗪可以降低肾小管间质TGF-β1、α—SMA和ColⅠ的表达水平，延缓肾小管间质纤维化的进程。     

肝细胞生长因子缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化的机制。方法 18只Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组。rhHGF(500μg-1．kg-1．d^-1)大鼠皮下注射21d后,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA表达水平;Western杂交检测α-SMA蛋白的表达;底物酶谱法检测MMP2、9的活性;判断纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 HGF能明显降低梗阻肾TGF-β1 mRNA和α-SMA蛋白表达,增加MMP2、9的活性,降低肾组织羟脯氨酸的含量。结论 HGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化,有望成为临床治疗梗阻性肾病的方法之一.     

福辛普利联合氯沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏肝细胞生长因子表达的影响

目的 :观察福辛普利联合氯沙坦对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾脏肝细胞生长因子 (HGF)表达的影响 ,探讨其对肾间质纤维化的保护作用机制。方法 :雌性SD大鼠 30只 ,随机均分为 5组 ,分别为C组 (假手术组 ) ,UUO组 (手术组 ) ,UUO +ACEI组 (福辛普利干预组 ) ,UUO +ARB组 (氯沙坦干预组 ) ,UUO +ACEI+ARB组 (福辛普利联合氯沙坦干预组 )。药物干预组分别于术前 1d及术后给予福辛普利 (10mg·kg-1·d-1) ,氯沙坦 (5 0mg·kg-1·d-1) ,福辛普利联合氯沙坦 (剂量同前 )混悬液灌胃 ,假手术组及手术组每d灌胃同体积生理盐水。各组动物分别在术后第 14d应用鼠尾血压计测量收缩压再处死并收集 3ml血标本及处死前 2 4h尿液 ,留取右侧肾脏。 2 4h尿送检尿肌酐、尿蛋白 ,血标本送检肌酐。光镜下观察肾皮质、间质细胞增生及纤维化改变。用免疫组化方法检测术后第 14d梗阻侧肾脏HGF、转化生长因子 (TGF - β1)、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的改变。结果 :①血压及生化检查 :与假手术组相比 ,UUO组及各药物干预组大鼠收缩压、肌酐清除率、2 4h尿蛋白定量均无明显变化 (P >0 .0 5 )。②大鼠肾组织的病理学改变 :与假手术组相比 ,HE及Masson染色均显示UUO 14d间质增宽 ,肾小管上皮细胞萎缩 ,管腔扩张 ,弥漫的单核、淋巴细胞     

安体舒通对单侧输尿管结扎大鼠肾脏的抗氧化保护作用

目的:探讨醛固酮受体拮抗剂安体舒通对大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的抗氧化保护作用.方法:Wistar 大鼠行左侧输尿管结扎术,分为UUO模型组(n=11)和安体舒通治疗组(n=12),同时设假手术对照组(n=7).术后第14天处死各组大鼠,进行HE和Masson染色,观察肾脏病理变化;比色法测定肾组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;放免法测定血浆和组织醛固酮(ALD)含量.结果:UUO模型组与假手术组比较,肾脏病理改变加重,肾组织MDA含量明显升高,SOD含量显著下降,血浆和组织ALD含量明显升高(P＜0.05).安体舒通组与UUO组大鼠比较,肾间质纤维化显著减轻,肾组织MDA含量明显降低,SOD含量显著升高,血浆和组织ALD含量下降(P＜0.05).结论:安体舒通可能减少单侧输尿管梗阻肾组织脂质过氧化物的产生,同时增加抗氧化酶的含量,从而改善UUO大鼠氧化应激所致的肾间质纤维化.     

犬单侧输尿管梗阻再通术后肾功能恢复的动态观察

目的  对不同时点输尿管梗阻再通术后肾功能恢复情况做动态观察。方法  将24只犬随机分成3组,行左输尿管结扎制作输尿管梗阻模型。分别在梗阻后第1、4、8周行输尿管再通术,于梗阻术前、后及再通术后2周、4个月进行放射性核素（99mTc DTPA）显像,观察梗阻肾功能恢复的影像变化,并计算肾小球滤过率。结果  输尿管梗阻1周组犬行再通术后肾功能可完全恢复到正常水平;4周组犬行再通术后肾功能仅能有部分恢复;8周组犬行再通术后未观察到肾功能恢复。结论  输尿管梗阻时间是影响犬肾功能恢复的关键因素,越早行输尿管再通术,肾脏的功能恢复越好。     

CD47在单侧输尿管梗阻大鼠模型中调控血管生成的作用研究

目的 探讨整合素相关蛋白CD47在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中对血管调控的作用.方法 将SD大鼠随机分为2组：UUO组50只和假手术组（SOR） 25只.UUO组随机选取10只分别于术后3、7、14、21和28天处死,;SOR组随机选取5只于按相同时间点处死.行HE染色观察肾间质病理学改变;免疫组化技术观察CD34、VEGF、TSP-1、CD47的表达.结果 UUO组呈进行性肾间质纤维化改变,包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润以及CD34、VEGF表达下降（P＜0.05）;肾小管损伤评分、TSP-1、CD47的表达水平升高（P＜0.05）.相关分析显示CD47的表达与CD34的表达呈负相关（r=-0.925,P＜0.01）,与VEGF表达也呈负相关（r=-0.946,P＜0.01）.结论 CD47与其配体TSP-1结合,可能通过调控内皮细胞VEGF信号的传导,参与UUO大鼠模型RIF过程中血管病变的发生发展.     

1,25-二羟维生素D_3对大鼠肾间质纤维化的作用研究

目的：研究1,25-二羟维生素D3〔1,25-（OH）2D3〕对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法：45只大鼠随机分为假手术组（n=15）、UUO组（n=15）和1,25-（OH）2D3干预组（n=15）,建立UUO大鼠肾间质纤维化模型,干预组于术后第1天起每天腹腔注射1,25-（OH）2D3,假手术组及UUO组腹腔注射等量生理盐水。分别于术后第3天、第7天和第14天处死大鼠,每次5只,取梗阻侧肾脏行HE、Masson染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化标记,观察肾损伤程度和肾间质纤维化程度;取血测定肌酐和尿素氮水平观察肾功能;处死前1天收集24 h尿液,检测尿中蛋白含量。结果：与假手术组相比,UUO组和干预组各时间点HE、Masson染色和α-SMA表达变化明显,呈逐渐加重趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）;肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白含量术后第3和第7天时表现为升高,术后第14天时出现下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。与UUO组相比,干预组各时间点各项指标变化明显改善,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：1,25-（OH）2D3可抑制UUO大鼠肾间质纤维化进程,改善肾功能。     

PAX2小干扰RNA在UUO大鼠体内的筛选与鉴定

目的梗阻性肾病是由于泌尿道机构和（或）功能改变,阻碍尿液的排出,导致肾实质病理和功能损害的临床综合征。病理学特征主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化。文中通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,筛选及鉴定有效抑制肾间质纤维化大鼠肾组织PAX2基因表达的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列。方法制作单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）模型,光镜下观察肾组织病理形态学变化;针对大鼠PAX2 mRNA序列全长（mRNA:NM₀01106361）,设计合成4对siRNA干扰序列和阴性对照序列,为了观察体内转染同时合成FAM标记的阴性对照,以invivo jetPEI体内转染试剂为载体转染至UUO大鼠肾被膜下,利用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测肾组织PAX2 mRNA及蛋白表达。结果通过HE和Masson染色观察到UUO模型3 d后肾纤维化表现;UUO模型转染3 d后,荧光显微镜观察到肾小管周围存在绿色荧光,4对干扰序列均有不同程度的抑制肾皮质PAX2 mRNA及蛋白的表达,其中siRNA3位点对PAX2干扰效果最强,mRNA及蛋白抑制分别达到55%和81%。结论成功筛选出1对有效抑制肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞PAX2表达siRNA,为深入研究肾纤维化的发病机制提供新的手段。