雾化吸入BCG对预防哮喘小鼠气道炎性反应的初步研究

目的探讨卡介苗(BCG)雾化吸入对变应性哮喘的预防作用及其与支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)的关系。方法昆明小鼠40只,随机分成3组,正常对照组、哮喘模型组及预防组。预防组又分为致敏前BCG预防组,激发时BCG预防组和地塞米松预防组。预防组经处理后,与哮喘模型组期制作哮喘模型。观察小鼠气道壁炎症变化,并收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定BALF中细胞总数,嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数,用酶联免疫法测定BALF中IFN-γ的含量。结果哮喘模型组BALF中细胞总数和嗜酸细胞数显著高于正常对照组(P<0.01),BALF中IFN-γ水平显著低于正常组(P<0.01);致敏前BCG预防组、地塞米松预防组BALF中细胞数、EOS细胞数显著低于哮喘组,而IFN-γ水平显著高于哮喘组(P<0.01-0.05)。激发时BCG预防组各项指标与哮喘组相比无明显变化。结论雾化吸入BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎性反应,早期吸入BCG对哮喘小鼠有预防作用。     

舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症及气道重构的影响

目的 研究舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠炎症及气道重构的影响.方法 将30只雄性小鼠随机分成卵白蛋自(OVA)致敏致哮喘组(A组)、舒利迭干预组(B组)、正常对照组(C组).用OVA进行致敏和激发,建立哮喘模型.收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)计数,采用医学图像分析软件测定支气管各项指标;HE染色观察组织形态学变化.结果 正常对照组、哮喘组、舒利迭干预组的EOS分别是(0.54±0.16)、(6.82±0.5 7)、(3.19±0.66)×10<'5>/m1,A组气道壁炎性细胞计数、气道平滑肌面积、气道内壁面积均明显高于C组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),B组各项指标均明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B组与C组比较各项均有升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).结论 舒利迭雾化吸入不仅可明显抑制哮喘小鼠的气道炎症反应,还可明显减轻气道重构的程度.     

虫草多糖对OVA过敏性哮喘鼠气道炎症和气道高反应的影响

目的 观察虫草多糖是否具有抗过敏性哮喘的作用。方法 建立小鼠哮喘模型,第0,14天,分别腹腔注射OVA及其佐剂,自21 d时开始雾化吸入OVA一次,连续14 d,吸入OVA前0.5 h,观察组予虫草多糖100 mg·kg^-1灌胃,阳性药物腹腔注射地塞米松。最后一次OVA雾化吸入后12 h进行气道高反应实验,之后收集支气管灌洗液进行细胞计数、分类、ELISA和RT-PCR检测,取左下肺组织做病理及免疫组化,观察肺组织炎症改变。结果 ①哮喘组气道反应性较正常组显著增高,虫草多糖治疗组气道反应性显著降低（P〈0.05）。②病理组织分析哮喘组支气管和小血管周围显示明显的嗜酸性粒细胞浸润,支气管黏液分泌增加;虫草多糖治疗组支气管和小血管嗜酸性粒细胞浸润程度明显减轻,支气管黏液分泌减少。③哮喘组BALF中出现大量嗜酸性粒细胞,虫草多糖治疗组较哮喘组嗜酸性粒细胞明显减少（P〈0.05）。④哮喘组支气管灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13较正常组显著增加,虫草多糖治疗组较哮喘组明显降低（P〈0.05）。⑤哮喘组肺组织中IL-4、IL-5、IL-13 mRNA表达增加,虫草多糖治疗组较哮喘组表达降低。结论 虫草多糖治疗可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道嗜酸性粒细胞炎症及粘痰蛋白的分泌。     

红霉素对支气管哮喘大鼠Clara细胞及CC16表达的影响

目的探讨红霉素对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织Clara细胞数量和Clara细胞分泌蛋白-16(CC16)表达的影响。方法用卵白蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,随机分为正常对照组、哮喘组、红霉素组、地塞米松组。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,光镜下观察肺组织病理学变化;ELISA方法检测BALF中CC16含量,用免疫组化的方法检测肺组织中Clara细胞表达变化。结果与正常对照组相比,哮喘组大鼠支气管及血管周围、肺间质内有嗜酸性粒细胞(EOS)及其他炎性细胞浸润,黏液腺增生,黏膜皱折增多,黏膜上皮细胞脱落,可见气道黏液栓,而红霉素组和地塞米松组上述现象明显减轻。肺组织Clara细胞计数显示,哮喘组大鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞数明显少于正常对照组,而红霉素组和地塞米松组较哮喘组均有所增加(P<0.05)。哮喘组EOS百分比(EOS%)显著高于对照组(P<0.01),红霉素组和地塞米松组的EOS%均低于哮喘组(P<0.01)。BALF中CC16含量,哮喘组明显低于正常对照组(P<0.01),而红霉素组和地塞米松组均高于哮喘组(P<0.05)。结论哮喘时肺组织中Clara细胞及CC16的表达减少,红霉素可通过上调肺组织中Clara细胞及CC16的表达来发挥抗炎作用。     

p38蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响

目的观察特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响。方法BALB/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组。通过原位分子杂交和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-4、IL-5 mRNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4、IL-5含量以及肺组织IL-4、IL-5mRNA的表达较正常对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.01);SB203580干预组小鼠上述指标较哮喘模型组小鼠明显降低,差异亦具有显著性(P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻。结论SB203580能降低气道炎症细胞的聚集和炎症介质的表达。抑制p38 MAPK的活性可能成为哮喘治疗的新途径。     

脐带间充质干细胞减轻哮喘小鼠气道炎症的研究

目的研究脐带间充质干细胞对鸡卵清蛋白诱导的哮喘小鼠模型气道炎症的抑制作用。方法将48只6⁸周龄雌性BALB/c小鼠随机分为四组,单纯哮喘组(OVA组),干细胞治疗组(MSC组),地塞米松治疗组(DM组)及生理盐水对照组(NS组)。23 d后,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数总细胞数、嗜酸粒细胞数;取肺组织行病理切片HE染色观察气道周围炎细胞浸润情况。同时免疫组织化学法观察IL-17蛋白在各组小鼠肺组织中的表达。结果同其他各组相比,单纯哮喘组肺泡灌洗液和肺组织中有大量炎性细胞浸润,而地塞米松治疗组、干细胞治疗组气道炎细胞浸润明显减轻(P<0.05),两个治疗组之间无明显差异(P>0.10)。与此结果相一致,MSC组、DM组中,炎性因子IL-17表达较OVA组明显减少(P<0.05),而DM组IL-17表达与MSC组相比无明显差异(P>0.10)。结论脐带间充质干细胞能够明显抑制鸡卵清蛋白诱导的哮喘小鼠气道炎症。     

桔梗总皂苷调控Th17/Treg免疫失衡改善哮喘模型小鼠气道炎症

目的 探究桔梗总皂苷是否通过介导Notch通路对哮喘Th17/Treg平衡进行调控。方法 48只BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,桔梗总皂苷低、中、高剂量组(15,30,60 mg·kg^-1)和地塞米松组,每组8只。雾化吸入卵清蛋白建立小鼠哮喘模型,药物干预8周后,测定小鼠气道高反应性。取材支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞计数、ELISA检测、HE、PAS及Masson染色,流式细胞术检测小鼠肺组织Th17、Treg细胞百分比及Th17/Treg比值变化情况,qPCR检测小鼠肺组织Notch1、Jagged1、RORγt、Foxp3表达水平,Western blotting检测小鼠肺组织中Notch1、Jagged1、Hes1及RORγt、Foxp3、IL-10、IL-17蛋白表达情况。结果 与模型组相比,桔梗总皂苷中、高剂量组小鼠气道阻力减小,BALF中炎性细胞数量及炎性因子IL-4、IL-5、IL-13含量降低,血清IL-17、IL-6、IgE含量降低,BALF中INF-γ及血清中IL-10含量水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。HE、PAS及Masson结果显示,桔梗总皂苷高剂量组及地塞米松组能够显著缓解炎性细胞浸润及支气管膜破坏情况,减少杯状细胞增生,同时减轻组织胶原纤维散出程度。流式细胞术结果显示,桔梗总皂苷中、高剂量组Th17细胞数量及Th17/Treg占比均显著减少,Treg细胞数量显著增加(P<0.05或P<0.01)。qPCR及Western blotting结果显示,桔梗总皂苷给药处理后小鼠肺组织Notch1、Jagged1、RORγt mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1、RORγt、IL-10、IL-17蛋白的表达水平均显著降低,Foxp3 mRNA及Foxp3蛋白的表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论 桔梗总皂苷能够介导Notch通路对哮喘Th17/Treg平衡进行调控,从而起到减轻气道炎症,抑制哮喘发作的作用。     

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道炎症及信号转导子和转录激活子6（STAT6）表达的影响

目的：研究寡核甘酸免疫刺激序列（CpG oligonucleotides,CpG ODN）对急性支气管哮喘小鼠气道炎症及信号转导子和转录激活子6（STAT6）表达的调控作用。方法：将32只雄性BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松干预组和CpG ODN干预组,建立急性哮喘气道炎症模型。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数、嗜酸粒细胞（EOS）分类计数;取左叶肺组织切片做HE染色观察气道和肺组织炎症改变;用免疫组织化学法检测气道上皮组织中STAT6表达。结果：哮喘组小鼠BALF中细胞总数、EOS绝对值显著高于对照组（P〈0．05）,地塞米松组和CpG ODN组上述炎症细胞计数比哮喘组明显减少（P〈0．05）。HE染色示地塞米松组和CpG ODN组小鼠肺组织炎症程度较哮喘组减轻。STAT6在气道上皮细胞表达,哮喘组气道上皮细胞中STAT6表达较对照组增强,地塞米松组和CpG ODN组STAT6表达与哮喘组比较有明显减少（P〈0．05）,较对照组增加。支气管上皮细胞STAT6蛋白表达与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关（r=0．748）,而地塞米松组和CpG ODN组之间的作用无统计学差异（P〉0．05）。结论：应用地塞米松和CpG ODN均可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症,CpG ODN可能通过下调肺组织中STAT6蛋白的过度表达,从而抑制依赖于STAT6/IL-4通路的急性气道炎症,减轻哮喘的症状。     

氨溴索对哮喘大鼠炎性因子的影响及其作用机制

目的:研究氨溴索对哮喘大鼠气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、模型组、治疗组。模型组、治疗组卵清蛋白(OVA)致敏。治疗组致敏同时给予腹腔注射氨溴索50 mg.kg-1.d-1。各组动物于最后一次雾化吸入后24 h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。行BALF中炎症细胞总数、PMN计数及细胞分类计数。取BALF上清液,应用酶联免疫吸附试验法测定IL-8水平。HE染色观察肺组织病理改变,免疫组织化学技术观察NF-κBp65、MMP-9、MPO在肺组织中的表达。结果:(1)模型组显示支气管、血管周围大量炎性细胞浸润,治疗组显示支气管痉挛及炎性细胞浸润明显减轻。(2)模型组BALF中炎性细胞及PMN计数、IL-8显著高于对照组(P<0.01)。治疗组BALF中炎性细胞及PMN计数、IL-8显著低于模型组(P<0.01)。(3)模型组肺组织中NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著高于对照组(P<0.01)。治疗组大鼠肺组织中NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著低于模型组(P<0.01)。结论:氨溴索可能是通过抑制转录因子NF-κB的活化,继而下调IL-8、MMP-9、MPO等的表达,减少PMN为主的炎症细胞在气道内的浸润,对哮喘患者发挥治疗作用。     

阿奇霉素对哮喘致敏大鼠气道炎症及Th1/Th2失衡的调节作用

目的:探讨阿奇霉素对哮喘(OVA)致敏大鼠气道炎症及Th1/Th2失衡的调节作用。方法:SD大鼠40只,随机分为生理盐水组、哮喘模型组、地塞米松组以及阿奇霉素组,每组10只。利用卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)/Al(OH)3致敏与OVA雾化吸入激发建立大鼠过敏性气道炎症模型,收集肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数。采用ELISA法测定肺泡灌洗液中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达情况。光镜观察肺组织病理结构变化。结果:OVA模型大鼠肺泡灌洗液中的中性粒细胞、淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞含量明显增加;HE染色观察肺组织病理结构出现明显的支气管上皮脱落、杯状细胞增生,支气管周围嗜酸性粒细胞明显浸润现象;BALF中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达均明显高于生理盐水对照组(P<0.05)。阿奇霉素则显著降低肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞含量;明显改善支气管上皮脱落、杯状细胞增生,支气管周围嗜酸性粒细胞浸润现象;BALF中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达也明显低于OVA模型大鼠(P<0.05)。结论:阿奇霉素通过调节Th1/Th2失衡对过敏性哮喘的气道炎症具有明显的治疗作用。     

Imiquimod, a toll-like receptor 7 ligand, inhibits airway remodelling in a murine model of chronic asthma

1. Imiquimod, a synthetic Toll-like receptor (TLR) 7 ligand, has been shown to attenuate airway inflammation and airway hyperresponsiveness (AHR) in acute murine models of allergic asthma. In the present study, we investigated the effect of imiquimod on allergen-induced airway remodelling in chronic experimental asthma. 2. Ovalbumin (OVA)-sensitized mice were chronically challenged with aerosolized OVA for 8 weeks. Some mice were exposed to an aerosol of 0.15% imiquimod daily during the period of OVA challenge. Twenty-four hours after the last OVA challenge, mice were evaluated for the development of airway inflammation, AHR and airway remodelling. The levels of total serum IgE and Th2 cytokines (interleukin (IL)-4, IL-5 and IL-13) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and the expression of transforming growth factor (TGF)-beta1 protein in lungs were measured by ELISA and immunohistochemistry, respectively. 3. The results demonstrated that imiquimod significantly inhibited chronic inflammation, persistent AHR and airway remodelling in chronic experimental asthma. In addition, imiquimod reduced levels of total serum IgE and BALF Th2 cytokines and diminished expression of TGF-beta1 in remodelled airways. 4. In summary, the results of the present study indicate that imiquimod may attenuate the progression of airway inflammation and remodelling, providing potential in the treatment of asthma.     

Evaluation of imiquimod for topical treatment of vaccinia virus cutaneous infections in immunosuppressed hairless mice

Imiquimod is an immune response modifier prescribed as a topical medication for a number of viral and neoplastic conditions. We evaluated the antiviral activity of imiquimod against vaccinia virus (WR strain) cutaneous infections in immunosuppressed (with cyclophosphamide) hairless mice when administered after virus exposure. Primary lesions progressed in severity, satellite lesions developed, and infection eventually killed the mice. Once daily topical treatment with 1% imiquimod cream for 3, 4, or 5 days were compared to twice daily topical treatment with 1% cidofovir cream for 7 days. Survival time of mice in all treated groups was significantly prolonged compared to placebo controls. The mean day of death for the placebo group, 3-day imiquimod, 4-day imiquimod, 5-day imiquimod, and cidofovir groups were 15.5, 20.0, 20.5, 19.5, and 20.5 days post-infection, respectively. All treatment groups showed significant reductions in primary lesion size and in the number of satellite lesions. The cidofovir and 4-day imiquimod treatments delayed the appearance of lung virus titers by 3 and 6 days, respectively, although cutaneous lesion and snout virus titers were not as affected by treatment. Benefits in survival and lesion reduction were observed when imiquimod treatment was delayed from 24, 48, and 72 h post-infection. However, increasing the treatment dose of imiquimod from 1% to 5% led to a significant decrease in antiviral efficacy. These results demonstrate the protective effects of topically administered imiquimod against a disseminated vaccinia virus infection in this mouse model.     

地塞米松对哮喘动物模型支气管平滑肌MLCK表达的影响

目的观察地塞米松(DXM)对哮喘动物模型支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响,探讨MLCK在哮喘发病中的作用。方法24只♂SD大鼠,随机等分为正常对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以卵蛋白(OVA)诱发大鼠支气管哮喘模型。地塞米松组大鼠于每次激发前1h给予腹腔注射地塞米松0.5mg·kg-1。用免疫组织化学法和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果免疫组织化学法分析显示DXM组大鼠支气管平滑肌MLCK的表达低于哮喘模型组(P<0.05),但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。同时,免疫印迹法检测也表明哮喘模型组大鼠smMLCK表达高于正常对照组及地塞米松组。结论MLCK参与支气管哮喘的发病,地塞米松通过下调哮喘大鼠支气管平滑肌MLCK表达,可能是糖皮质激素治疗哮喘的一种机制。     

雷公藤多苷对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损作用机制研究

目的 探究雷公藤多苷(TWP)对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的作用及其机制.方法 按照体重将BALB/c小鼠随机分成5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组,每组8只.正常组小鼠除外,其他小鼠背部及右耳外涂咪喹莫特62.5 mg诱导银屑病模型.造模同时,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,实验组分别用低、中、...     

三氧化二砷对实验性小鼠支气管哮喘气道重塑及TGF-β1、VEGF表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对支气管哮喘气道重塑的影响。方法将实验BALB/c小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、地塞米松治疗组和As2O3治疗组,模型组通过腹腔注射卵白蛋白（OVA）致敏及反复雾化OVA吸入激发8周,建立支气管哮喘气道重塑动物模型,地塞米松和As2O3治疗组每次雾化吸入前分别给予地塞米松2 mg/kg和As2O34 mg/kg腹腔内注射。应用HE染色,观察支气管、肺组织的病理形态改变,应用图像分析系统测定气道重塑指标,应用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中的转化生长因子β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组肺组织中的TGF-β1和VEGF mRNA表达水平。结果模型组小鼠经过8周过敏原激发后,肺组织病理学发生了较典型的哮喘样改变;地塞米松组和As2O3组小鼠的肺部组织病理学改变较模型组为轻,两组之间无显著差异。模型组小鼠肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA表达均增强;与模型组相比,地塞米松组和As2O3组肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA的表达均较弱,但仍强于正常对照组。结论致敏后给予8周过敏原激发可成功建立小鼠哮喘气道重塑模型;地塞米松和As2O3治疗均可抑制哮喘的气道重塑过程,其作用机制可能与抑制TGF-β1、VEGF的表达有关。     

糖皮质激素与β_2-受体激动剂小剂量吸入治疗哮喘的疗效观察

目的观察糖皮质激素与β2-受体激动剂小剂量吸入治疗哮喘的临床疗效。方法随机选取2007年10月—2012年10月收治的哮喘患者100例,分为观察组与对照组。观察组采用糖皮质激素（布地奈德）与β2-受体激动剂（特布他林）小剂量吸入治疗;对照组单用糖皮质激素（布地奈德）常规剂量维持治疗;对两组基本治疗情况进行比较分析。结果观察组患者总有效率为98.0%,对照组患者总有效率为88.0%;观察组未见明显不良反应,对照组不良反应出现率为6.0%。结论糖皮质激素与β2-受体激动剂小剂量吸入治疗哮喘临床效果显著,安全可靠,值得推广应用。     

布地奈德/福莫特罗治疗轻、中度哮喘临床研究

目的:比较低剂量的布地奈德/福莫特罗(信必可都保)与中等剂量的布地奈德干粉(普米克都保)吸入治疗成年轻、中度哮喘患者的临床疗效和安全性。方法:62例哮喘患者分为A、B组,A组吸入信必可都保,B组吸入普米克都保,对照观察日间症状、夜间症状、最大呼气流量(PEF)、速效β2受体激动药使用次数的变化和不良反应。结果:2组治疗后日间症状和夜间症状(夜间憋醒次数)均有显著改善,速效β2受体激动药用量减少,PEF值及肺功能均有明显改善,且组间比较差异显著,不良反应轻微。结论:联合吸入低剂量的糖皮质激素和长效β2受体激动药为控制哮喘的较佳方案。加入低剂量长效β2受体激动药的疗效优于单一提高糖皮质激素的用量。     

Establishing the phenotype in novel acute and chronic murine models of allergic asthma

Allergic asthma is a chronic disease of the airways, with superimposed acute inflammatory episodes which correspond to exacerbations of asthma. Two novel models of allergic asthma have been developed in mice receiving the same allergen sensitisation, but with acute or chronic allergen exposures, the latter to mimic the human situation more closely. Ovalbumin-sensitised mice were challenged by ovalbumin inhalation twice on the same day for the acute model, and 18 times over a period of 6 weeks for the chronic model. Lung function was monitored in conscious, unrestrained mice immediately after the last challenge for up to 12 h. Airway responsiveness to inhaled methacholine and serum antibody levels were determined 24 h after challenge. Bronchoalveolar inflammatory cell recruitment was determined at 2 or 24 h.Acute and chronically treated mice had similar early and late asthmatic responses peaking at 2 h and 7---8 h, respectively. IgE and IgG antibody levels, compared with naïve mice, and eosinophil infiltration, compared with naïve and saline challenge, were elevated. Airway hyperresponsiveness to methacholine was observed 24 h after challenge in both models. The acute model had higher levels of eosinophilia, whereas the chronic model showed hyperresponsiveness to lower doses of methacholine and had higher levels of total IgE and ovalbumin-specific IgG antibodies.Both novel murine models of allergic asthma bear a close resemblance to human asthma, each offering particular advantages for studying the mechanisms underlying asthma and for evaluating existing and novel therapeutic agents.