复方苦参碱对烧伤后人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的观察复方苦参碱对人烧伤后增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同含量的复方苦参碱,24h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶(LDH)为指标观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性。结果不同含量的复方苦参碱均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,含量在300μg.ml-1以下无明显的细胞毒作用。结论复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

增生性瘢痕中成纤维细胞生物学功能变化与微血管病理改变的研究

目的 探索增生性瘢痕中成纤维细胞的生物学功能变化与微血管病理改变的关系.方法 首先取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织进行HE染色观察,分离和培养瘢痕和正常皮肤中成纤维细胞,ELISA分别测定2种来源的成纤维细胞在转移生长因子(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、内皮素-1(ET-1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌水平的变化,再采用Transwell 共培养模式,观察增生性瘢痕中成纤维细胞对血管内皮细胞增殖的影响.结果 HE染色可见正常皮肤微血管数目较少,胶原疏松.增生期瘢痕胶原致密,微血管数目增多,微血管狭长扭曲,甚至闭塞.ELISA检测结果发现,增生性瘢痕中成纤维细胞TGF-β1、bFGF、PDGF、ET-1和VEGF分泌水平明显高于正常皮肤来源的成纤维细胞.另外,Transwell 共培养结果发现,增生性瘢痕来源的成纤维细胞具有显著促进血管内皮细胞增殖的作用.结论 增生性瘢痕中微血管的病理改变与成纤维细胞大量产生TGF-β1、FGF、PDGF、ET-1和VEGF等因子有关.     

肌成纤维细胞在皮肤瘢痕形成过程中的作用

目的 探讨表达α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞在皮肤增牛性瘢痕中的作用.方法 免疫组织化学法检测皮肤增牛性瘢痕中α-SMA的表达;通过细胞培养,检测成纤维细胞与肌成纤维细胞羟脯氨酸含量并进行比较;ELISA法分别检测成纤维细胞与肌成纤维细胞Ⅲ型前胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1含量并进行比较.结果 正常皮肤组织只有血管平滑肌细胞表达α-SMA,其他真皮细胞几乎不表达,增生性瘢痕皮肤组织中,α-SMA染色阳性细胞大大增加,比例高达96.89%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01);肌成纤维细胞羟脯氨酸含量较正常成纤维细胞显著增高(P<0.01);肌成纤维细胞Ⅲ型前胶原含量较成纤维细胞显著增高(P<0.05);肌成纤维细胞TGF-β1含量较正常成纤维细胞显著增高(P<0.01);肌成纤维细胞纤维连接蛋白含量较成纤维细胞显著增高(P<0.05).结论 肌成纤维细胞是造成增生性瘢痕的最关键细胞.     

PCI后新生血管内膜的形成和增生及其机制——血管紧张素Ⅱ及其受体作用的实验研究

目的　本项目通过建立球囊损伤大鼠髂动脉制作内膜增生模型 ,对体外培养的VSMC生物学特性进行检测 ,采用ATR基因转染VSMC等技术 ,在器官、细胞、亚细胞、分子水平探讨RAS主要成分AngⅡ及其受体亚型在PCI后新生血管内膜形成和增生中的作用 ,重点研究AngⅡ及其受体亚型在VSMC迁移、增生和凋亡中的作用及其机制 ,为临床应用抑制RAS的方法防治RS提供确切的理论依据。方法　①在体动物实验 :用球囊损伤方法制作大鼠髂动脉损伤后内膜增生的动物模型 ,利用受体放射性配基结合分析方法、电镜、原位杂交及流式细胞术等技术 ,并以此实验平台研究比较增生内膜中RAS有关成份活性变化、AngⅡ受体表达变化、VSMC增殖和凋亡特性变化 ,以了解这些变化与内膜增生的关系。②细胞学实验 :通过体外培养VSMC研究不同AngⅡ浓度以及干预剂作用等条件下AngⅡ受体表达变化 ,了解其变化对VSMC增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响 ,特别是对近年来受到重视的VSMC迁移的影响作用。③基因转染研究 :通过构建AT2 R基因的腺病毒载体转染体外培养的大鼠主动脉VSMC ,建立表达AT2 R的细胞模型 ,研究VSMC表达AT2 R后其生...     

转化生长因子-β1Ⅱ型受体同源序列1对瘢痕疙瘩中成纤维细胞胶原合成的影响

目的　初步探讨转化生长因子 - β1(TGF - β1)Ⅱ型受体同源序列 1(TRH1)的生物学功能。　方法　根据已知序列合成TRH1多肽 ,以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞 ,分别于蛋白水平和mRNA水平检测该多肽对TGF - β1所诱导的细胞胶原合成的拮抗作用。　 结果　TRH1可以明显抑制TGF - β1所诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成及细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结论　TRH1可能通过模拟TGF - β1Ⅱ型受体的结构来竞争性结合TGF - β1,从而拮抗或降低了TGF -β1对细胞的诱导作用。     

P物质对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨P物质(SP)对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞．采用细胞爬片免疫组织化学方法检测在SP及SP受体拮抗剂Spantide作用下不同成纤维细胞PCNA、bcl-2、bax的表达。结果 SP可促进不同成纤维细胞PCNA、bcl-2的表达．同时抑制其bax的表达。在SP作用下．瘢痕疙瘩成纤维细胞PCNA、bcl-2表达的增强程度及bax表达的受抑程度显著强于增生性癜痕成纤维细胞和正常成纤维细胞．而增生性癜痕成纤维细胞又强于正常成纤维细胞。Spantide可以完全或部分拮抗SP对不同成纤维细胞的作用,结论 SP通过调控成纤维细胞凋亡相关基因的表达参与病理性瘢痕形成,该作用由SP受体介导。     

神经酰胺和p53在AngⅡ诱导内皮细胞凋亡过程中的作用

目的 探讨AngⅡ诱导内皮细胞凋亡过程中神经酰胺和p53的作用及相互关系.方法 体外培养脐静脉内皮细胞,分别用血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)拮抗剂氯沙坦、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)拮抗剂PD123319、神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉素B1(FB1)、p53抑制剂PFT-α预处理细胞,再加入AngⅡ,24h后与对照组(用双蒸水预处理细胞)比较,观察细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot检测各组p53表达情况.结果 PD123319和FB1能显著抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡,而氯沙坦和PFT-α则不能抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡.FB1和PFT-α可以抑制p53的mRNA和蛋白表达.结论 AngⅡ通过AT2受体和神经酰胺诱导内皮细胞凋亡.神经酰胺在AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡过程中起重要作用,且可能经过p53诱导凋亡.     

血管紧张素Ⅱ2型受体在心血管系统的研究进展

肾素一血管紧张素系统(RAS)是心血管活动重要的体液调节系统,在维持水、电解质平衡及调节血压中起着关键作用.血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)是该系统中最重要的介质,通过与其特异性受体结合而产生相应的生理效应.在心血管系统中Ang Ⅱ受体主要包括AT1R和AT2R两种亚型.AT1R在人体内广泛分布并介导AngⅡ绝大多数作用,如收缩血管、增强心肌收缩力、促进血管增生和心肌肥厚、参与炎症反应等,而目前对AT2R的功能则了解甚少,但是越来越多的实验研究表明AT2R激活后具有拮抗AT1R功能的作用,如AT2R参与抑制不同组织细胞的生长和增殖,促进细胞的分化、凋亡,调节水盐代谢和神经细胞的活动.     

Ⅰ型前胶原基因反义核酸对增生性瘢痕作用的量效关系

目的了解Ⅰ型前胶原基因反义寡聚核苷酸对人增生性瘢痕的作用,探讨增生性瘢痕的基因治疗。方法选择120只裸鼠建立增生性瘢痕动物模型,将模型随机分为空白对照组(C组,6只)、RPMI1640组(R组,6只)、反义寡聚核苷酸1(ASONs1)治疗组(54只)及反义寡聚核苷酸2(ASONs1)治疗组(54只),后两组又分为25,50,100μg/100μl三个剂量组,每个剂量组又分为治疗7,10,14d3组;分别合成位于Ⅰ型前胶原基因5'端翻译区域21bp的ASONs1和位于第1个外显子与第1个内含子之间22bpASONs2,用微注射法分别将两基因片段作用于动物模型,通过测定增生性瘢痕Ⅰ型胶原含量变化、瘢痕体积变化以及运用光、电镜研究不同剂量反义寡聚核苷酸的抑制作用。结果ASONs1和ASONs2能使瘢痕体积缩小,在治疗10,14d后,瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量降低,与C组和R组比较,差异有显著性意义(P<0.05);光、电镜下见瘢痕结构疏松,胶原纤维变小,成纤维细胞的粗面内质网和线粒体减少,而C组和R组无明显变化。结论ASONs1和ASONs2能够有效抑制Ⅰ型胶原蛋白的合成,从而抑制瘢痕增生。Z     

衰老大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的变化及缬沙坦的调控作用

为观察老年肾脏肾素-血管紧张素系统（RAS）随增龄的改变及长期应用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（AT1RA）后的影响，将雄性Wistar大鼠分为青年组、老年组及缬沙坦治疗组，测定肾素、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平、AngⅡ受体AT1αRmRNA、AT1bRmRNA及AT2RmRNA的表达。结果发现，与青年组比较，老年大鼠血浆肾素、AngⅡ水平明显下降，肾组织AngⅡ则明显升高，应用缬沙坦后肾组织AngⅡ水平进一步升高；老年大鼠肾脏AT1αRmRNA、AT1bRmRNA表达下调，AT2RmRNA表达则上调，应用缬沙坦可上调AT1αRmRNA，但对AT1bRmRNA及AT2RmRNA表达无影响。研究表明，老年大鼠肾脏局部AngⅡ水平升高，两型ATR的基因表达与青年鼠相比则发生了不同改变；缬纱坦使老年大鼠肾组织AngⅡ水平升高，同时阻断了AT1R的作用，而AT2RmRNA水平未发生改变，有利于加强AT2R的作用。     

转化生长因子—β1Ⅱ型受体同源序列1对瘢痕疙瘩中成纤维细胞？…

目的 初步探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）Ⅱ型受体同源序列１（ＴＲＨ１）的生物学功能。方法 根据已知序列合成ＴＲＨ１多肽,以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞,分别于蛋白水平和ｍＲＮＡ水平检测该多肽对ＴＧＦ－β１所诱导的细胞胶原合成的拮抗作用。结果 ＴＲＨ１可以明显抑制ＴＧＦ－β１所诱导的颜瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成及细胞Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ的表达。结论 ＴＲＨ１可能通过模拟ＴＧＦ－β１Ⅱ型受体的结     

血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和醛固酮（Ald)对培养的心脏成纤维细胞胶原合成量、胶原酶活力的影响,培养SD大鼠心脏成纤维细胞,以在狼星红法测定胶原合成总量;竞争ELISA法测定Ⅰ型胶原含量;荧光分光光度法测定胶原酶活性。结果显示：心脏成纤维细胞在10^-9——10^-7mol/L的AngⅡ作用下,胶原合成总量较对照组有显著增加,其中AngⅠ型胶原含量也较对照组有显著增加;在此浓度范围内,AngⅡ显著抑制培养细胞分泌的前胶原酶活性;AngⅡ受体拮抗上述作用。实验观察到,在较高浓度下,Ald参增加培养细胞24h(10^-7mol/L)和48h(10^-8——10^-7mol/L)胶原总量;(10^-8——10^-7mol/L) Ald作用24h后,培养基中Ⅰ型胶原含量显著升高;Ald的此作用可被螺旋内酯拮抗;同时,10^-9——10^-7mol/L Ald均可在24h后使培养细胞分泌的前胶原酶活性受到抑制,10^-6mol/L的螺旋内酸不能拮抗此作用。提示：AngⅡ和Ald均能不同程度地促进胶原合成,抑制胶原酶活力,使胶原沉积的净效应增加,从而加速心肌纤维化。     

VS MC转染表达AT2R对AT1R表达的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞 (VSMC)转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)后其 1型受体 (AT1R)表达所受的影响。方法　用同源重建方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV AT2R) ,体外转染VSMC ,分别用流式细胞仪检测AT1R、AT2R细胞转染表达率、免疫组织化学法和免疫荧光法检测其膜表达、RT PCR法和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达。结果　AdCMV AT2R转染后 ,在不同浓度AngⅡ刺激下AT1R、AT2R在VSMC的细胞转染表达率如下表。如果表明随着转染表达时间延长 ,AT2R细胞表达率呈显著增加趋势 ,4 8小时最高表达率达 89.5 1% ,AngⅡ作用与否及不同浓度AngⅡ作用对AT2R表达无显著影响。而转染前后AT1R表达相对较稳定 ,受不同浓度AngⅡ作用 ,其表达明显呈增加趋势。AT2R峰值表达时 ,免疫组织化学法和免疫荧光法检测其膜表达结果也提示AT2R表达随转染表达时间延长显著增加 ,转染前后AT1R表达无明显变化 ,在一定浓度范围内 ,AngⅡ刺激对AT2R表达无显著影响 ,却显著增加AT1R的膜表达。RT PCR法和蛋白...     

重组核心蛋白多糖对人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增及生物学活性的影响

目的　观察重组核心蛋白多糖 (Decorin)对人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖和生物学活性的影响 ,以探讨Decorin在增生性瘢痕形成和成熟中的作用。　方法　分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别加入不同质量浓度 (0 .0 1,0 .1,2 ,10 μg/ml)的重组Decorin ;培养 12 ,2 4 ,4 8h用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐 (MTT)法测定细胞增殖速度 ;培养 4 8h用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 ;收集细胞培养上清 ,ELISA法检测TGF - β1蛋白水平 ,放射免疫方法检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白 (PCⅠ、PCⅢ )含量。　结果　 2 ,10 μg/ml的Decorin可有效抑制正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的增殖 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,明显增加两种细胞处于G1期的百分比(P <0 .0 1) ;并抑制细胞分泌转化生长因子 (TGF) - β1和PCⅠ、PCⅢ ,下调PCⅠ /PCⅢ比值。实验组和对照组 (未加重组Decorin)均未检测到终末期凋亡细胞。　结论　Decorin可抑制正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及其生物学活性 ,可能在预防增生性瘢痕形成和促进瘢痕成熟中起一定的作用。     

模拟失重大鼠动脉血管紧张素受体基因表达的研究

目的：探讨模拟失重下大鼠不同部位动脉血管紧张素受体mRNA表达是否发生变化。方法：大鼠被随机分为模拟失重组（SUS）与同步对照组（CON），采用尾部悬吊大鼠模型模拟失重影响。用逆转录-聚合酶链式反庆（RT-PCR）技术观察比较模拟失重下大鼠不同部位动脉血管紧张素两型受体基因表达的变化。结果：大鼠颈总动脉，腹主动脉及股动脉组织均有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的AT1a，AT1b及AT2受体mRNA的表达；而基底动脉组织则只有AT1a和AT1bmRNA的表达。模拟失重4周大鼠颈总动脉、腹主动脉、股动脉及基底动脉组织AngⅡ的AT1a、AT1b和AT2受体mRNA的表达，较对照大鼠均无显著变化。结论：模拟失重引起大鼠动脉血管结构与功能的变化可能不是通过血管紧张素受体的变化实现的。     

电离辐射诱导犬胆管成纤维细胞凋亡及防治胆管损伤后瘢痕增生的研究

目的探讨电离辐射诱导犬胆管成纤维细胞凋亡及防治胆管损伤后狭窄关系。方法将103Pd放射性支架,放射性活度为125×104kBq,和普通支架分别植入犬肝外胆管内,取出胆管标本,用DNA凝胶电泳检测成纤维细胞凋亡和透射电镜观察凋亡细胞形态和DNA的变化;并用计算机图像检测系统检测两组胆管腔面积。结果103Pd放射性支架明显抑制犬胆管组织中增生性瘢痕成纤维细胞生长,并出现典型的细胞凋亡特征,即出现凋亡小体、DNA梯状条带等。而且,103Pd放射性支架犬肝外胆管无明显狭窄,普通支架组犬胆管未出现成纤维细胞凋亡,胆管有明显狭窄。结论103Pd放射性支架诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡是防治胆管损伤后由于增生瘢痕导致胆管狭窄的重要机理之一。     

放射性肺纤维化起始部位的探讨

探讨早期放射性肺纤维化的始动部位及其变化规律。方法大鼠右胸部行单次照射，吸收剂量分别为０，１５，３０Ｇｙ，照后又分为１，３，５月组。用生化法检测肺羟脯氨酸；用偏振光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原；用免疫组化法检测血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）分布。结果肺纤维化程度与照射剂量和照后时间有关；Ⅰ、Ⅲ型胶原比例随纤维化程度加大而增加；增生的胶原纤维起自细小支气管和细小动脉外膜的成纤维细胞，肺泡间隔中Ⅰ型胶原取代Ⅲ型胶原；间质成纤维细胞和巨噬细胞ＡⅡ免疫组化阳性。结论照射可刺激肺间质成纤维细胞增生，Ⅰ型胶原取代Ⅲ型胶原；间质细胞中ＡⅡ的表达与合成可能对此过程有一定的促进作用。     

维拉帕米及尼卡地平对瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的:研究钙离子拮抗剂维拉帕米及尼卡地平对体外培养的瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响,同时对两种药物疗效进行比较,讨论两种药物的作用特点.方法:向对数生长期的增生性瘢痕成纤维细胞及瘢痕疙瘩成纤维细胞中加入不同浓度的两种药液,培养48小时后进行羟脯氨酸比色试验,并将OD值依公式换算成羟脯氨酸含量,进行统计学比较.结果:维拉帕米及尼卡地平组随着用药浓度的提高,细胞形态变化越来越明显,两种成纤维细胞显示出类似的形态学特点;与对照组比较,两药均可以降低培养上清液中羟脯氨酸的含量,且随用药浓度增加,羟脯氨酸含量进一步下降,高(100μmol/L)低(10μmol/L)浓度组均有显著性差异(p<0.05),同时两药作用特点也有所不同.结论:维拉帕米和尼卡地平均可降低增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的胶原含量,抑制胶原合成,对于增生性瘢痕,尼卡地平抑制作用略强于维拉帕米,而对于瘢痕疙瘩,则维拉帕米的抑制作用略强于尼卡地平.     

长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法 纳入2019－2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞.采用qRT-PCR从组...