邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax表达的影响.方法 用浓度为0、25、50、100 μmol/L的DEHP作用于原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞24 h,逆转录(RT)PCR法检测滋养细胞凋亡相关基因Bcl-2和bax的mRNA表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2和bax的蛋白表达水平;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法和双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡情况.结果 (1)Bcl-2表达水平:当DEHP浓度为0、25、50、100 μmol/L时,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1.00±0.05、1.03±0.04、1.04±0.03、1.04±±0.04,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白表达水平分别为0.11±0.02、0.11±0.04、0.12±0.02、0.12±0.03,分别比较,差异也无统计学意义(P>0.05).(2)bax表达水平:当DEHP浓度为50、100 μmol/L时,bax mRNA表达水平分别为0.96±0.04、1.02±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.81±0.05)比较,差异有统计学意义(P<0.05),bax蛋白表达水平分别为0.63±0.04、0.81±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.23±0.05)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(3)细胞凋亡率:浓度为50、100 μmol/L的DEHP作用24 h后,双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡率分别为(18.8±2.6)%和(20.3±2.0)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(10.6±1.4)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法检测细胞滋养细胞凋亡率为(18.1±4.6)%和(19.5±1.2)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(11.2±3.1)%]比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 DEHP可通过增加细胞凋亡相关基因bax的表达,促进细胞滋养细胞凋亡,但对Bcl-2的表达无明显影响.     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响。方法:用胰蛋白酶消化后再经流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞进行原代培养及鉴定。细胞分为MXC(1μmol/L,3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h和48h。用侵袭小室检测每组各时间点的侵袭能力,Western blot检测各组各时间点MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1表达,RT-PCR法检测MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞侵袭能力呈时间剂量依赖型下降,MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达下降,MMP-9、MMP-2表达下降,TIMP-2、TIMP-1表达增高。MMP-2及其mRNA下降程度与MXC有时间剂量效应。结论:MXC可通过改变基质金属蛋白酶及其抑制物的比例降低绒毛外滋养细胞侵袭能力。     

白血病抑制因子对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的调节

目的:研究白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和MMPs组织抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:以不同浓度的LIF作用于体外培养的细胞滋养细胞,于2h、4h、12h收集细胞。用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达。结果:LIF对人早孕滋养细胞MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达无明显作用。LIF作用4h和12h,实验组MMP-9 mRNA明显上升(P<0.01),并呈明显剂量依赖关系。结论:LIF可以在一定的时间和剂量范围内促进滋养细胞MMP-9的表达。推测LIF可能通过节制性调节MMPs的表达,进而分解子宫内膜细胞外基质,介导滋养细胞的入侵。     

缺氧调控滋养细胞MMP-9/TIMP-1表达及侵袭能力的体外研究

目的:探讨缺氧对滋养细胞的生长、MMP-9/TIMP-1基因表达以及侵袭能力的影响。方法:滋养细胞在正常及二氯化钴(CoCl2)所致化学缺氧条件下的培养。MTT法检测正常及缺氧条件下滋养细胞的生长状况。细胞爬片确定MMP-9/TIMP-1在滋养细胞中的定位及缺氧前后的蛋白表达。荧光定量PCR检测滋养细胞中MMP-9和TIMP-1基因表达。Transwell侵袭模型检测滋养细胞的侵袭能力变化。结果:(1)MMP-9和TIMP-1均表达于滋养细胞的包膜和胞浆。在缺氧条件下,MMP-9和TIMP-1蛋白表达均呈上调趋势,且在缺氧48h时最明显(P0.01);(2)150、300μmol/L CoCl2均可显著抑制滋养细胞的增殖,其中300μmol/L抑制作用更明显,与150μmol/L比较,差异有统计学意义(P0.01);(3)缺氧条件下,MMP-9和TIMP-1的基因表达均增加,以48h最为显著;但MMP-9/TIMP-1比值降低,以72h最显著(P0.01);(4)缺氧后滋养细胞侵袭力显著降低(P0.05)。结论:缺氧能抑制滋养细胞增殖、促进滋养细胞分泌MMP-9和TIMP-1,但MMP-9/TIMP-1比值降低,使滋养细胞的侵袭力减弱。     

胚胎停育绒毛组织中TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的表达及意义

目的:探讨TGF-β1、MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达在胚胎停育发病机制中的作用。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常人工流产(20例)和胚胎停育(25例)患者绒毛组织中TGF-β1、MMP-9与TIMP-1 mRNA的表达量。结果:(1)与对照组相比,实验组绒毛中TGF-β1 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达量降低(P<0.05),而MMP-9 mRNA表达量升高(P<0.05);(2)绒毛组织中TGF-β1 mRNA与MMP-9 mRNA的表达呈负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:胚胎停育患者绒毛组织TGF-β1、MMP-9以及TIMP-1 mRNA表达有明显改变;TGF-β1表达的降低可能上调MMP-9表达,通过破坏MMPs/TIMPs动态平衡,最终导致胚胎停育发生。     

蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

目的:探讨蜕膜基质细胞条件培养液(DSCM)对滋养细胞浸润力的影响。方法:体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集DSCM处理早孕滋养细胞系(B6Tert)。应用浸润实验分析B6Tert细胞浸润力的改变,采用RT-PCR与明胶酶谱技术检测B6Tert细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达变化。结果:DSCM浓度较低时(占细胞培养液5%),可促进B6Tert细胞的浸润力与该细胞MMP-2mRNA及pro-MMP-2的表达;反之,高浓度的DSCM(20%)则抑制滋养细胞的浸润力与MMP-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。DSCM不影响B6Tert细胞中MMP-9的表达。结论:早孕DSCM可能通过调节滋养细胞中MMP-2的表达影响滋养细胞的浸润能力。     

蜕膜基质细胞培养液对滋养细胞增殖、凋亡及浸润的影响及对浸润作用机制的研究

目的:探讨早孕蜕膜基质细胞培养液(DSCM)对滋养细胞增殖、凋亡以及浸润能力的影响及对浸润功能的作用机制。方法:原代分离、培养并鉴定人早孕蜕膜基质细胞,收集并制备成不同浓度的DSCM,采用噻唑兰(MTT)、Annexin V-FITC、Transwell方法检测不同浓度的DSCM对滋养细胞增殖、凋亡、浸润能力的影响,采用RT-PCR及明胶酶谱法检测滋养细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的改变。结果:得到纯度大于90%的蜕膜基质细胞。随着DSCM的浓度增高(5%DSCM,20%DSCM,50%DSCM,100%DSCM)细胞的吸光度值增高、凋亡率减少、浸润细胞数增多(P0.05)。不同浓度的DSCM组MMP-2及MMP-9 mRNA、蛋白的变化与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:早孕DSCM可以促进滋养细胞增殖,抑制凋亡,并通过上调滋养细胞对MMP-2与MMP-9的表达来促进其浸润功能。     

KiSS-1基因在孕早期绒毛组织中表达的初步研究

目的 研究早孕绒毛中KiSS—1基因mRNA的表达及定位，探讨其与滋养细胞浸润的关系。方法 采用半定量RT—PCR对100例(分为8个孕周组)正常早孕绒毛组织中KiSS—1mRNA的表达水平进行检测，并采用原位杂交方法进行其组织学定位。结果 在整个孕早期绒毛组织中均有KiSS—1基因表达，孕5周时表达最低，至9-12周达高峰。KiSS—1mRNA表达与妊娠天数呈直线正相关。原位杂交法检测结果提示孕早期KiSS—1mRNA在滋养细胞胞浆中的表达随孕周增加而增强。结论以KiSS—1基因在滋养细胞表达随孕周增长而增加，提示该基因在调控早孕滋养细胞的浸润行为中起重要的作用。     

MMP-2、TIMP-1和TIMP-2在胚胎停育绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:探讨MMP-2,TIMP-1和TIMP-2与胚胎停育的关系。方法:选取胚胎停止发育妇女为病例组,另设同期正常早孕自愿要求流产的妇女为对照组,分别留取其绒毛和蜕膜组织标本,采用半定量RT-PCR法对标本MMP-2,TIMP-1和TIMP-2 mRNA转录水平进行分析。结果:在绒毛标本中,MMP-2和TIMP-1 mRNA在病例组中表达水平显著低于对照组(P<0.01);而TIMP-2mRNA表达水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。在蜕膜标本中,病例组TIMP-1 mRNA的表达水平显著低于对照组(P<0.01)。而MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MMP-2,TIMP-1和TIMP-2的差异表达可能参与了胚胎停育的发生发展。     

II型核受体PPARγ和金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在早孕胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨II型核受体的过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9与细胞滋养细胞浸润的关系。方法:采用免疫组织化学、实时RT-PCR和免疫印迹技术检测早孕早期(孕6-8周,A组)和早孕晚期(孕11-12周,B组)绒毛组织中PPARγ、MMP-2和MMP-9mRNA及蛋白的表达。结果:PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2和MMP-9蛋白阳性颗粒主要存在于绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且A组绒毛PPARγ表达量高于B组(P<0.05),而MMP-2和MMP-9表达量在B组高于A组(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,-0.68,P<0.01);且在A组MMP-2表达量多于MMP-9,而B组则MMP-9多于MMP-2,但无显著性差异。结论:PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的,为深入探讨PPARγ及其配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。     

上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术对保留生育功能的价值

目的:探讨上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术(LEEP)在宫颈疾病治疗中的可行性,评价其对年轻患者保留子宫及生育功能的价值。方法:回顾性分析2010年1月至2014年4月在复旦大学附属妇产科医院就诊,因宫颈LEEP术后切缘阳性或术后随访复发、无法在门诊行常规LEEP而行上推膀胱直肠后再次LEEP的38例患者的临床资料。结果:38例患者均顺利完成了上推膀胱直肠后再次LEEP,术中均未出现膀胱、直肠损伤等并发症。手术时间38±7分钟,术中出血量20±5 ml,住院天数2.7±0.6天;其中1例患者术前病理检查为宫颈高度鳞状上皮内瘤变,术后升级为原位鳞癌合并原位腺癌行全子宫切除术,37例患者(97.4%)成功保留子宫,随访至今1例术后12个月低度鳞状上皮内瘤变行宫颈激光治疗,余均未见宫颈病变复发。12例患者有生育意愿,7例患者已成功妊娠,6例已分娩。结论:上推膀胱直肠后再次LEEP安全可行,可实现未生育妇女及年轻妇女保留子宫及生育能力的意愿。     

Responsiveness of gynecologic tumors to chemotherapeutic agents in the 6-day subrenal capsule assay

Various gynecologic malignancies have been tested in the 6-day subrenal capsule assay, which is an in vivo test of human tumor responsiveness to drug therapy. Fresh surgical explants of ovarian, endometrial, and cervical tumors were implanted as 1-mm³ fragments under the renal capsule of normal mice and tested against a spectrum of clinically active agents. Regardless of the site of origin, human tumors showed variations in growth rate when implanted under the renal capsule that appeared to reflect both the growth potential characteristic of each tumor as well as the heterogeneity of the cell populations comprising each tumor. An average of 60% of tumors showed positive growth and 11% demonstrated no measurable change in size. The response rates of 18 ovarian, 28 endometrial, and 20 cervical carcinomas to clinically active chemotherapeutic agents were determined. A range of responses, in terms of drugs indicated to be active and of the degree of responsiveness to active agents, was obtained with each histologic type. Response rates varied from 6% to tamoxifen in cervical carcinomas to 80% to 5-fluorouracil in ovarian carcinomas. The results of this study support the variability in chemotherapy responsiveness observed clinically with gynecologic tumors and suggest the feasibility of using the subrenal capsule assay as a predictive test.