人工细胞微囊材料壳聚糖的实验研究

用自制材料壳聚糖取代进口材料聚赖氨酸制作海藻酸钠－壳聚糖－海藻酸钠人工细胞。以此法包埋肝细胞可以降低成本，又可保持微囊通透性能。经ＰＲＭＩ－１６４０培养液培养１７天，微囊肝细胞能释放尿素、ＧＰＴ及低分子量蛋白质。将微囊肝细胞植入体内或血液灌流可用以治疗急性肝功能衰竭，并可扩展到包埋其他生物细胞及药物。     

血管冻存过程中的应力分析

为了预测血管组织低温保存过程中所受到的机械损伤,本文建立了一维对称具有同心孔的圆筒模型,模拟计算了降温过程壁面温度随时间的变化;冻结过程中体积膨胀和组织内温度分布不均引起的热应力随时间变化及其在壁面的分布．本文计算了热应力在径向、周向和轴向的分布,径向应力小于周向应力和轴向应力;由相变引起的应力大于由温度分布不均引起的应力;主要考虑了降温速率的影响,降温速率越高,组织内部所受热应力越大;当降温速率是１Ｋ／ｍｉｎ时最大周向应力为０．１２Ｍｐａ,降温速率为１２Ｋ／ｍｉｎ时最大周向应力为０．６Ｍｐａ;当热应力超过血管组织所能承受的极限值时,在血管壁上会产生裂纹;使组织受到损伤。     

微囊化细胞冻存的研究进展

背景:细胞微囊化为细胞大规模、高活性体外培养及长期存储提供了新的途径,低温保存是目前保存细胞的重要方法,技术日新月异,复苏细胞在临床和基础研究中的应用越来越多。目的:分析近年来微囊化细胞冻存的相关研究,对微囊化细胞冻存技术的发展作一总结。方法:以微囊,冻存为检索词,检索中国期刊网(1979/2010)及维普数据库(1989/2010),限定文章语言种类为中文;以Cryopreservation,Microencapsule为检索词,检索PubMed数据库(1979/2010),限定文章语言种类为English。纳入含有微囊化细胞冻存的研究,排除其他形式细胞冻存的研究,结果以各种细胞微囊化后进行冻存处理后产生作用为指标,共检索到43篇文献。结果与结论:随着生物人工肝与以及其他细胞移植研究的深入,对微囊化细胞的需要量将显著增加,微囊化细胞的低温保存技术已成为保正其顺利应用的关键技术之一。目前,微囊化细胞的低温保存技术已经开展了不少研究,有多项研究结果表明复苏后微囊化细胞的存活率和生物学功能都能保持较好的水平,但相关机制仍未完全阐清,各种冻存方法还需要优化。     

谷维素-壳聚糖缓释微囊的制备

背景：壳聚糖具有良好的生物相容性和生物可降解性,可作为优良的药物控缓释及靶向载体、黏膜吸附剂、吸收促进剂。目前市场上尚未见有关谷维素的缓释制剂,也未见相关的文献报道。 目的：考察谷维素-壳聚糖缓释微囊的制备工艺。 方法：采用凝聚法以自制离心筛制粒机制备了谷维素-壳聚糖缓释微囊,并考察了产品的载药量和包封率。 结果与结论：实验制备的谷维素-壳聚糖缓释微囊载药量为47.68%,包封率为76.45%,微囊大小均匀、光洁度与成形度好。凝聚法制备工艺简单易行,稳定,重现性好,结果说明,利用天然高分子多糖类物质壳聚糖来包封谷维素是切实可行的,谷维素-壳聚糖缓释微囊具有进一步开发和应用价值。     

腺垂体细胞培养及低温冻存研究

垂体移植目前依就是解决垂体功能低下的有效治疗手段.垂体细胞的培养及低温冻存是垂体移植研究中的基础.本文对腺垂体培养的发展过程及目前的现状进行了简要的回顾和概括,对低温冻存的理论发展过程做过综述,同时从腺垂体移植发展的角度对垂体细胞培养及垂体移植工作的意义前景做了展望.     

大鼠冻存卵巢组织自体异位移植后长期功能评估

目的 评估成年大鼠冻存卵巢组织自体异位移植后的长期生殖、内分泌功能. 方法 78只Wistar成年大鼠,随机分为假手术组(1组,15只)、新鲜组织移植组(2组,24只)、冻存组织移植组(3组,24只)、去势组(4组,15只).将去势后成年大鼠的新鲜卵巢组织及冻存卵巢组织自体异位移植于肾被膜下,分别于移植后5、8、10个月处死各处理组1/3数量动物,取卵巢及子宫组织作组织学检查.通过阴道脱落细胞学检查、动情期雌、孕激素水平监测评估移植后卵巢组织的生殖内分泌功能. 结果 所有动物模型中,新鲜及冻存卵巢组织移植后都可观察到存活组织块.2、3组动情期雌、孕激素水平与假手术组无显著性差异(P>0.05),且均明显高于去势组(P<0.01).冷冻复苏后组织与新鲜组织各级卵泡构成比无显著性差异(P>0.05),各组不同时间取得的卵巢组织各级卵泡构成比相比较均无显著性差异(P>0.05).移植后5个月,2、3组原始卵泡明显减少,分别为假手术组的59.1%和54.5%. 结论 小块卵巢组织可耐受冻融过程;冻存卵巢组织自体肾被膜下移植后,卵巢组织形态无明显改变,原始卵泡总数虽然明显减少,但有成熟卵泡发育并排卵,并能长期维持生殖内分泌功能.     

药物控释用海藻酸钠、壳聚糖、明胶的研究进展

由于许多药物如肽或蛋白质药物,物理化学性质不稳定,在胃肠道中极易降解.因此,在口服释药设计中,pH敏感水凝胶如海藻酸钠、壳聚糖和明胶作为药物控制释放载体日益引起人们的关注.将针对三种天然高分子材料的来源、结构、性能及共混改性展开讨论.     

深低温冻存时限对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

探讨深低温冻存不同时限后复苏对成骨细胞生物学特性的影响。取新生SD大鼠颅骨,胶原酶消化法培养成骨细胞。采用活细胞数、成骨细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性的测定等对深低温冻存1、3、6个月后复苏的成骨细胞和新鲜培养的细胞进行了比较。发现各组成骨细胞在细胞增殖功能、碱性磷酸酶活性方面均无显著性差异(P>0.05)。深低温冻存6个月后复苏组成骨细胞活细胞数与冻存1、3月后复苏组及新鲜培养的细胞组相比,活细胞数降低,有显著性差异(P<0.05),深低温冻存1、3个月后复苏组的活细胞数与新鲜培养的细胞组相比无显著性差异(P>0.05)。实验结果表明:较长时间深低温冻存能减少复苏后成骨细胞的活细胞数。但经深低温冻存后复苏的细胞仍保持成骨细胞原有的生物学特性。     

微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存及其活性评价

目的　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞 (bovinechromaffincell,BCC)的冻存方法 ,为临床推广微囊人工生物细胞技术移植异种细胞奠定基础。方法　微囊化牛肾上腺髓质细胞冻存以二甲基亚砜为保护剂 ,循序缓慢降温 (4℃ ,1h ,- 2 0℃ 2h ,- 5 0℃过夜 ,液氮 ) ,复苏时迅速将冻存管放入 37℃水浴中。通过检测其基础儿茶酚胺分泌量和在高钾 (5 8mmol/L)、乙酰胆碱 (10 -4mol/L)刺激下的分泌量来观察其功能活性。结果　冻存复苏后微囊BCC保留了儿茶酚胺的分泌功能 ,基础与刺激分泌量分别为 (3.2 0 7± 0 .35 0 )ng/ml和 (12 .4 96± 2 .30 2 )ng/ml,大约为冻存前微囊牛肾上腺髓质细胞分泌量的 80 % ;同时刺激后儿茶酚胺分泌增加 (P <0 .0 1)。结论　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存方法 ,通过功能检测证明该方法是有效和成功的     

经冻存的APA微囊牛肾上腺髓质细胞功能研究

目的观察海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊牛肾上腺髓质细胞经液氮冻存前后的微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能变化。方法APA微囊牛肾上腺髓质细胞(牛嗜铬细胞,bevine chromaffin cell,BCC)的冻存以DMSO为保护剂,冻存采取循序缓慢降温,复苏采取快速复温。通过微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌量检测观察细胞功能变化。结果与冻存前相比,冻存复苏后的APA微囊BCC形态及细胞活性无明显变化,儿茶酚胺分泌量约为冻存前的80%。结论经冻存复苏的APA微囊BCC仍然保持了较好的形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能。     

卵母细胞深低温保存的策略分析

背景：卵母细胞具有特殊而复杂的低温生物学性质,致使卵母细胞在深低温保存中易受到多因素的损伤而影响复温后的存活率、受精率和受精后发育潜能。 目的：综述卵母细胞深低温保存技术的研究进展,阐明存在的技术缺陷以及解决问题的思路与研究路线。 方法：以“卵母细胞,深低温保存/慢速冷冻,玻璃化”为中文捡索词,以“oocyte, cryopreservation/slow freezing, vitrification”为英文检索词,在中国知网(CNKI)期刊全文数据库和PubMed数据库检索2004 年1月至2014年10月有关卵母细胞深低温保存文献,排除陈旧性、重复性研究,最终纳入41篇文献进行综述。 结果与结论：慢速冷冻、玻璃化方法深低温保存卵母细胞得到较好的临床应用,但复温存活率、受精能力、发育能力损伤等仍困扰医生们。卵母细胞深低温保存技术的进一步完善或突破在于对深低温保存技术环节的细化、卵母细胞低温生物学特性的研究以及相关技术的创新,如深低温保护剂选择、冷冻载体的改进、卵母细胞时相选择、卵母细胞体外成熟技术、卵巢组织保存与移植等。     

低温冷冻对精子膜功能的影响

目的评价低温冷冻对精子膜功能的影响,为冻精的临床利用提供理论指导。方法用精子尾部低渗肿胀试验(hypoosmotic swelling test,HOST),比较冷冻前后及不同冷冻方法间精子尾部的低渗肿胀率,以评估低温冷冻对精子膜功能的影响。结果精尾低渗肿胀率在冷冻前为63．9±10．4％,经速冻法冷冻后为17．3±8．3％,经缓冻法冷冻后为 27．7±11．4％,任意二者间比较结果均有显著差异(P<0．01)。结论低温冷冻破坏了精子膜的功能完整性;降温速度越快,精子膜的功能完整性下降越显著。在冷冻前后进行精子尾部低渗肿胀试验,具有重要的临床意义。     

低温冷冻对人精子顶体超微结构的影响

目的评价低温冷冻及不同冷冻方法对人精子顶体超微结构的影响。方法将人的精子分别用速冻法及缓冻法冷冻1年：在冷冻前后分别用电镜观察精子顶体的超微结构，比较冷冻前后及不同冷冻方法间顶体超微结构的变化。结果顶体超微结构相对正常（异常）的精子在冷冻后显著减少（增加）；速冻法与缓冻法相比，顶体超微结构相对正常（异常）的精子减少（增加）更显著。结论低温冷冻将对人精子顶体的超微结构造成损害；缓冻法对人精子顶体超微结构的损害较轻。     

卵巢组织冷冻保存的研究进展

卵巢冷冻技术可保存卵巢中大量的生殖细胞,将冷冻的卵巢组织解冻移植后可恢复卵巢的内分泌功能和生育能力,是癌症患者保存生育能力的一个理想途径。在该技术中诸多因素,如冷冻保护剂(CPA)、冷冻载体、皮质块大小以及冷冻方法等均影响着卵巢冷冻保存的效果;且目前尚缺乏高效、统一和标准的技术程序,因而限制了该技术在临床和科研中的广泛使用。为优化该技术程序,改善冷冻后卵巢功能的恢复情况,本文对影响该技术使用效果的一些因素进行了论述。     

改善卵母细胞冷冻损伤的研究进展

卵母细胞的冷冻保存是女性生育力保存最具前景的技术。但由于卵母细胞特殊的生理结构,极易在冷冻过程中受到损伤。因此改进冷冻方法,添加冷冻保护剂(包括细胞骨架稳定剂和抗氧化剂)可以改善冷冻损伤,增加发育潜能,同时对于冷冻技术的运用有着重要意义。     

卵巢早衰患者生育能力体外冷冻保存选择研究进展

卵巢作为具有排卵和内分泌功能的女性器官,对女性性征发育维持以及生育能力起着至关重要的作用。由于各种原因导致的卵巢早衰,剥夺了许多女性的生育权利。而现代辅助生殖技术的发展,使如何避免卵巢早衰,保存生育能力成为热点。冷冻技术的广泛成功应用,使生育能力保存成为现实。无论是胚胎,或是卵子（包括成熟和未成熟卵子）,抑或是卵巢组织（包括皮质和整体卵巢）体外冷冻保存,都各具优势。如何选择,则依据患者自身情况及生殖中心现有水平决定。     

冻融胚胎移植30周期分析

目的探讨冷冻胚胎复活情况及妊娠.方法对2001年9月～2003年9月在本中心实施体外授精胚胎移植失败,再次行冻融胚胎移植30周期28人进行回顾性分析.结果 30周期28人共冷冻胚胎150个,复活91个,复活率60.7%,妊娠8例,冷冻胚胎的妊娠率28.6%,周期妊娠率26.7%.结论冻融胚胎移植能增加一次取卵的总妊娠率,降低多胎率.     

低温冻存对成人骨髓间质干细胞生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对骨髓间质干细胞（MSCs）其生物学特性的影响，探讨MSCs理想的保存方法。 方法： 体外分离培养、扩增正常成人骨髓MSCs,在5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护剂条件下，分别采用二步法和程控降温冻存方法低温保存3月，以台盼蓝拒染回收率(TBR)、MSCs生长曲线、MSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测，比较两种不同的冻存方法对MSCs生物学特性的影响。 结果： 程控降温冻存后MSCs活力优于二步法［TBR（87.67±2.52）％ vs （79.00±3.61）％，P<0.05］。多因素方差分析显示MSCs代数和冻存方法均是影响冻存后MSCs增殖的重要因素。两种冻存方法中P8代细胞的增殖能力明显劣于P1代细胞（P<0.01）或P4代细胞（P<0.01）。MSCs程控冻存后增殖能力与冻存前无差异（P<0.05），优于二步法冻存后的增殖能力（P<0.05）。 程控冻存后MSCs稳定表达CD29、CD44、CD166（与冻存前比较，P>0.05）。而二步法冻存后细胞CD29表达下降（与冻存前比较，P<0.05）。两种冻存方法对MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元细胞分化没有显著影响，与冻存前比较，P>0.05。 结论： 采用5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护液和程控降温的冻存体系，可较完整保持MSCs生物学特性，是深低温保存MSCs的理想方案。     

冷冻保存对人类精子顶体完整性及超微结构的影响

目的探讨冷冻保存对人类精子顶体完整性及超微结构的影响.方法 2 0例正常生育力精液标本(A组)和27例不育症精液标本(B组)行冷冻保存.应用荧光标记豌豆凝集素法检测冷冻前、后精子顶体完整率.采用透射电镜观察冷冻精子头部超微结构的改变 (n=3).结果解冻后A和B组的顶体完整率与冷冻前的比较均有显著性下降(P<0.01) ,且B组的降低程度明显大于A组.透射电镜观察到冷冻精子头部超微结构发生不同程度的损伤,浆膜和顶体膜出现肿胀、破损,顶体结构异常改变显著增多,顶体内容物丢失,甚至顶体帽缺失.结论冷冻-解冻过程对精子顶体造成了损伤,引起顶体完整率降低和超微结构改变.