单纯疱疹病毒Ⅰ型SM44株和17Syn^＋株用作跨神经元追踪示踪…

单纯疱疹病毒Ⅰ型已被证明是一个很有前途的跨神经元追踪物，它可被轴突顺行或／和逆行运输，还可被跨神经传递；病毒的株不同，其运输方向亦可不同。本文研究了此病毒ＳＭ４４株和１７Ｓｙｎ＾＋株在鼠脑内跨神经元传递的方向性和可靠性。结果提示：此两株病毒均能被跨能神经元传递，并且以顺行跨神经元传递为主，因而可被作为示踪物用于跨神经追踪研究。     

用单纯疱疹病毒I型跨神经元输送对大鼠小脑纤维联系的研究

实验选用ＳＤ大鼠２３只，分别在小脑前、后叶定位定量注射单纯疱疹病毒Ｉ型存涤２－５天或１０天后灌杀取脑切片，经抗ＨＳＶ１血清行组织化学ＡＢＣ法反应。结果显示，免疫阳性神经元呈类似Ｇｏｌｇｉ样染色，胞体和树突标记清晰。注射部位不同或术后动物存活时间不同，其标细胞出现的数量和部位同。１．后叶注射后１天可出现小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞及缝核群，网状结构，室周灰质，丘脑腹外侧核发现标记细胞。２．前叶注射后３天     

疱疹病毒用于跨神经元追踪研究

七十年代兴起的神经追踪法极大地丰富了人们对脑内神经元联系通路的认识。HRP、PHA-L等示踪剂可通过轴浆流顺行或逆行运输，以显示单个神经元的轴突、轴突分校及与之相连的神经元胞体。但它们只能标记某一级神经元的分布，不能显示两个或两个以上神经元间的连接情况[1]。WGA、W     

单纯疱疹病毒Ⅰ型感染胎鼠原代神经元细胞模型的建立

目的 建立单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染胎鼠原代皮质神经元细胞模型。方法 取孕14～16d昆明小鼠皮质神经元进行细胞培养并感染HSV-Ⅰ。观察倒置光学显微镜下神经元形态变化，并应用流式细胞仪检测二者的百分比。应用间接免疫荧光方法观察正常及病毒感染组神经元和星形胶质细胞的变化。用特异性HSV-Ⅰ荧光抗体检测神经元受染情况，并利用MTT比色实验检测细胞活性。结果 原代培养神经元数量、形态良好。用阿糖胞苷抑制星形胶质细胞生长后，神经元纯度较高。培养3d时加入HSV-Ⅰ感染神经元，HSV-Ⅰ特异性免疫荧光反应阳性，受染神经元形态变化，活性降低。结论 HSV-Ⅰ可直接感染原代培养神经元细胞，为进一步研究单纯疱疹病毒脑炎的发病机制提供了较好的体外模型。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型SM44株胸苷激酶基因的克隆及序列测定

为了分离、克隆单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）ＳＭ４４株胸苷激酶基因（ＴＫ）,采用原代兔婴肾细胞培养ＨＳＶ－Ｉ ＳＭ４４株病毒,提取病毒核酸作为模板,设计了ＨＳＶ－１ ＴＫ基因的上、下游引物,在引物的５‘端分别引入ＢａｍＨ１和ＥｃｏＲ１限制性内切酶位点,通过ＰＣＲ方法扩增出ＴＫ基因,经ＢａｍＨ Ｉ／ＥｃｏＲ １双酶切与ＰＵＣ１９质粒载体相连接,构建重组体转化受体菌ＪＭ１０９,通过筛选和酶切鉴定,获得     

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

背景：单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。 目的：利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。 方法：分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,构建一株带有Loxp位点的重组HSV-1框架载体HSVLoxp。构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT培养基筛选出阳性毒株后用GDNF引物做PCR鉴定,扩增培养后测定滴度。 结果与结论：成功构建pHV-TK-GFP质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01。成功构建HSV-1框架载体HSVLoxp及穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF基因,并将其转移到了HSV-1基因组上,成功构建了表达GDNF的单纯疱疹病毒HSV-1载体,测定其滴度约为2.25×10⁶ IU/mL。     

小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型脑内再激活感染的实验研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型初次感染后能够在外周神经节和中枢神经系统潜伏下来 ,应激很容易诱发外周神经节病毒的活化。本实验以过热做为应激源 ,观察机体在热应激后脑组织是否也存在活化的病毒 ,以及病毒再激活感染的特征。1　材料和方法1 1　潜伏感染的建立　雌性BALB c小鼠 6 5只 ,3     

单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎心肌细胞凋亡的研究

目的：观察单纯疱疹病毒1型（HSV-1）病毒性心肌炎（VMC）心肌细胞凋亡，探讨VMC发病机制。 方法： 将120只小鼠随机分成感染组（60只），病毒稀释液RPMI组（30只），自然组（30只）。给感染组每只小鼠接种滴度TCID50为10-4 HSV-1vero细胞液0.1 mL，给病毒稀释液RPMI组每只小鼠接种RPMI-1640液0.1 mL，自然组小鼠不做任何接种。然后分批分期处死小鼠，取心肌组织做光镜、TUNEL、电镜检查。 结果： 感染组小鼠全程VMC占38%，心肌细胞凋亡阳性鼠占33%；第6-8 d VMC达60%，心肌细胞凋亡阳性鼠达47.4%；第6 d心肌细胞凋亡阳性率达高峰。病毒稀释液RPMI组、自然组未发现VMC和心肌细胞凋亡。 结论： 心肌细胞凋亡可能是HSV-1 VMC的发病机制之一。     

单纯疱疹病毒I型SM44株胸苷激酶基因的克隆及序列测定

为了分离、克隆单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－Ｉ） ＳＭ_(４４)株胸苷激酶基因（ＴＫ），采用原代兔婴肾细胞培养ＨＳＶ－ＩＳＭ_(４４) 株病毒，提取病毒核酸作为模板，设计了 ＨＳＶ－ＩＴＫ基因的上、下游引物，在引物的 ５’端分别引入 ＢａｍＨＩ和 ＥｃｏＲ Ｉ 限制性内切酶位点，通过ＰＣＲ方法扩增出 ＴＫ基因，经ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ双酶切与 ＰＵＣ１９质粒载体相连接，构建重组 体转化受体菌ＪＭ１０９，通过筛选和酶切鉴定，获得ＨＳＶ－ＩＳＭ_(４４) ＴＫ基因阳性克隆，行全序列测定分析，与ＨＳＶ－ＩＣＬ１０１ 株 ＴＫ基因同源性为 ９９．０２％，存在 １１个核苷酸和 ７个氨基酸的差异。 ＨＳＶ－ＩＴＫ基因的克隆成功，为该基因应用于恶 性肿瘤的自杀基因治疗奠定了基础。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gG在毕赤酵母表达系统中的表达及抗原性分析

目的 构建单纯疱疹病毒gGl-毕赤酵母表达系统并初步分析表达产物的抗原活性.方法 以HSVI病毒增殖物为模版,用PCR扩增HSV-1gGl基因全序列,将目的序列插入载体pPIC9K,测序后电转化GS115菌株进行G418筛选、甲醇诱导表达,用SDS-PAGE方法跟踪分析表达条件,用ELISA方法检测目的蛋白的抗原活性.结果 DNA测序、凝胶电泳、ELISA试验结果表明pPIC9K-HSVgGI载体构建成功,G418压力筛选得到的重组酵母菌株可分泌表达目的蛋白gGl,蛋白可与特异性抗体发生结合反应.结论 构建了HSV一1 gGl酵母表达系统,表达的目的蛋白gGl具有抗原活性.     

TORCH与优生：Ⅱ．羊水细胞、绒毛、畸胎组织及宫颈分泌物等单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的PCR检查

我室应用聚合酶链反应(PCR)技术，采用自行设计和合成的三条引物(一条为两型共同引物，两条为两型特异引物)蛆成一个反应扩增体系，对63例羊水或绒毛、14例畸胎组织、100例宫颈分泌物及50例宫颈石蜡包埋切片进行单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的检测，其阳性率分别为4．8%，14．3%，16%及10%。阳性标本中90%是HSV—Ⅱ，10％为HSVⅠ型或Ⅰ Ⅱ型混合感染。提示：HSV—Ⅱ感染与胎儿先天性畸形有关，与宫颈组织炎性浸润、细胞过度增生也有关系。     

单纯疱疹病毒体外诱导特异性抗体应答的实验研究

用灭活的单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ１）为致敏原，体外诱导成人外周血淋巴细胞产生特异性抗体应答，特异性抗体诱生水平与血清抗体无相关性（Ｒ＝０．４５，Ｐ＞０．０５），抗体类型为ＩｇＧ。同法致敬新生儿淋巴细胞则不能诱生任何类型的特异抗体，表明此体外抗体应答属继发性免疫应答。特异性抗体应答有明显的ＨＳＶ１抗原剂量依赖性，且需要Ｔ、Ｂ细胞的相互作用。ＨＳＶ１体外致敏的实验研究，为探讨正常和疾病状态下体外特异性抗体应答和免疫调节提供一个有用的实验模型。     

Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体的构建及序列分析

目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D成熟肽基因毕赤酵母表达载体,并对序列进行分析,为进行高抗原性的真核表达重组gD蛋白奠定基础.方法PCR扩增HSV1-gD成熟肽基因,将该段基因克隆于pGEM-T克隆载体,转化鉴定后,与巴斯德毕赤酵母表达载体(pPIC9K)酶切连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选测序确定构建了pPIC9K-gD的真核表达载体,对克隆的序列进行分析,预测表达产物的理化特性及抗原性.结果获得了重组的酵母表达载体pPIC9K-gD.测序结果证实为HSV1-gD成熟肽基因,序列分析其高度保守,预测蛋白分子量为40.52 ku,pI为7.67,包含完整成熟肽分值达1.7的多个抗原决定簇.结论成功构建了HSV1-gD成熟肽基因的毕赤酵母表达载体.     

大鼠视交叉上核与室旁核的联系──病毒跨神经元顺行追踪研究

本实验采用假狂犬病毒（猪疱疹病毒）作为跨神经元追踪示踪物，对下丘脑视交叉上核与下丘脑室旁核的联系进行了研究．实验大鼠于摘除双侧颈上交感神经节后，向单侧眼球内注入假狂犬病毒，术后动物分别存活48、56、72及96h．结果显示：56h组仅在视交叉上核内有极少数的细胞被病毒感染；72h组机交叉上核内被病毒标记的细胞增多，定劳核内也出现了被病毒感染的神经元，主要集中在背内侧帽区；96h组在室旁核内被病毒感染的神经元增加，除背内侧帽区外，其它亚孩也出现了被病毒感染的神经元；各实验组的亚室旁带未见有被病毒标记的神经元．以上表明视交叉上核的传出纤维直接投射到室旁核，两核团神经无间可能存在有直接的突触联系．     

病毒跨神经元追踪、免疫荧光双标法和免疫组化ABC法在视交叉上核（SCN）研究中的应用

视交叉上核（Suprachiasmaticnucleus，SCN）的生物钟功能．依赖于其内部以及与视网膜节细胞之间存在的复杂的神经联系．但以往对脑内神经元间联系的研究所采用的示踪物，如辣根过氧化物酶、植物凝集素、各种荧光染料等，只能在某一级神经元内部被顺行或逆行运输，因而难于显示     

单纯疱疹病毒2型糖蛋白D和CCL19佐剂融合重组DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果

目的通过比较简单混合和融合重组的单纯疱疹病毒2型糖蛋白D(herpes simplex virus type 2 glycoprotein D, HSV-2 gD)联合分子佐剂CCL19的DNA疫苗对免疫小鼠的免疫应答及免疫保护效果的差异, 揭示融合重组疫苗的保护作用。方法利用基因重组技术构建HSV-2 gD和CCL19单独表达及融合表达的DNA疫苗, 经测序、Western blot和ELISA验证后, 肌肉注射免疫BALB/c小鼠两次, 免疫后定期收集血清和阴道灌洗液, 分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞及直肠组织。通过终点法ELISA、体外中和试验、免疫组织化学染色、趋化试验、阴道攻毒试验、荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度, 比较两种形式的疫苗免疫后小鼠的体液免疫、细胞免疫应答和免疫保护作用的差异。结果融合重组的pgD-IZ-CCL19质粒可在体外正常表达gD蛋白和CCL19蛋白, 但pCCL19-IZ-gD质粒的CCL19蛋白表达量比pgD-IZ-CCL19少。免疫pgD-IZ-CCL19的小鼠能产生比pgD+pCCL19组更高水平的血清IgG抗体、阴道灌洗液IgA...     

人乳头瘤病毒、沙眼衣原体和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染与宫颈疾病的相关性研究

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-Ⅱ)感染与宫颈疾病的关系.方法 采用核酸分子快速杂交基因分型技术对598例宫颈脱落细胞进行HPV感染基因型分型测定,同时应用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测CT和HSV-Ⅱ两种病原体的感染情况.结果 HPV、CT和HSV-Ⅱ的阳性检出率分别为24.9％、9.2％和8.9％,且随着宫颈病变程度加重而逐渐增高,宫颈炎组和宫颈癌病变组三种病原体的感染率差异均有统计学意义.HPV感染以高危型为主(占77.9％),低危型为22.1％.HPV高危型和阴性组比较两种病毒的感染率有统计学差异(CT:x2=26.97,P＜0.05;HSV-Ⅱ∶x2=65.93,P＜0.05).各宫颈病变组均有多病毒混合感染情况出现,其中宫颈癌组混合感染率为22.2％.结论 HPV、CT和HSV-Ⅱ感染与宫颈癌的发生密切相关,多病原体混合感染会促进宫颈癌的发生.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型和人乳头瘤病毒的感染与人工流产术后不孕症的关系

目的探讨性传播病毒和不孕症的关系。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对６０例人工流产术后不孕症妇女和３９例正常妇女进行了生殖道单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）和人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的检测。结果不孕组和对照组ＨＳＶ２的阳性检出率分别是８０．０％和２５．５％，两组间有极显著性差异（Ｐ＜００１）；ＨＰＶ的阳性率分别是５３３％和３３３％，两组间无显著性差异（Ｐ＜０．０５）；ＨＳＶ和ＨＰＶ在两组中的混合感染的阳性率分别是４３．３％（２６／６０）和２３．１％（９／３９），两者有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。表明ＨＳＶ２或ＨＳＶ２和ＨＰＶ的混合感染与人工流产术后不孕症有显著的相关性，很可能是不孕的原因之一。两组９９份标志中，ＨＳＶ２和ＨＰＶ混合感染的阳性率为３５．３５％，统计学分析表明，ＨＳＶ２和ＨＰＶ感染与不孕有极显著的相关性χ＝１２．５，Ｐ＜０．０１。结论ＨＳＶ２和ＨＰＶ的感染和不孕症相关     

EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒和柯萨奇病毒感染和多发性硬化复发关系的研究

目的 探讨0EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒-1(HSV-1)、柯萨奇病毒B组Ⅰ-Ⅵ型近期活动性感染和复发.缓解型多发件硬化(RR MS)复发的关系.方法 采用酶联免疫吸附法检测34例RR MS患者和200名正常对照者血浆EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒-1、柯萨奇病毒B组Ⅰ-Ⅵ型IgM抗体,比较病例组和对照组间上述病毒近期活动性感染率的差别,并对病例组病毒近期活动性感染者和无活动性感染者的临床资料进行分析比较.结果 两组问EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒-1及柯萨奇病毒B组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ型IgM抗体阳性率的差异无统计学意义.RR MS组和对照组间柯萨奇病毒B组Ⅳ型、Ⅴ型IgM抗体阳性的差异有统计学意义(分别为3/34和0/200,P<0.05;2/34和0/200,P<0.05).病例组中任一病毒近期活动性感染者和无活动性感染者相比,其年龄、病程、发作次数、入院体温、血白细胞分类计数(中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)、糖皮质激素应用与否及EDSS分值间的差异均无统计学意义.结论 RR MS患者复发期柯萨奇病毒B组Ⅳ型、Ⅴ型近期活动性感染率较高,但近期病毒活动性感染和症状的严重度无关,未发现EBV、CMV、HSV与RR MS复发的关系.     

单纯疱疹病毒2型糖蛋白D和CCL28佐剂双顺反子重组DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果

目的研究内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IRES)序列连接抗原-佐剂的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2, HSV-2)DNA疫苗对免疫小鼠的保护作用。方法利用IRES重组构建HSV-2包膜糖蛋白D(glycoprotein D, gD)和CCL28佐剂双表达DNA疫苗pgD-IRES-CCL28和pCCL28-IRES-gD, 经测序验证, 肌肉注射免疫BALB/c小鼠2次后, 定期收集小鼠的血清和阴道灌洗液样品, 分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞和直肠黏膜组织。通过终点ELISA法检测免疫后小鼠的抗原特异性抗体滴度, 采用体外中和试验检测免疫后及攻毒后血清和阴道灌洗液中的中和抗体滴度, 采用脾细胞和肠系膜淋巴结细胞趋化试验和直肠组织的免疫组织化学染色检测组织和器官内的CCL28响应性免疫细胞变化。对免疫后小鼠进行阴道攻毒试验, 采用荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度的方法评估各组小鼠抵抗病毒感染的能力。通过与1∶1混合的单独表达gD和CCL28的DNA疫苗(pgD+pCCL28)的...