PMP22基因在恶性肿瘤中的研究进展

摘 要：近年来多项研究发现外周髓鞘蛋白-22（peripheral myelin protein-22,PMP22）调控细胞生长周期、细胞粘附、凋亡等过程,在多种恶性肿瘤中异常表达。PMP22异常表达与乳腺癌、胃癌、胰腺癌、骨肉瘤等恶性肿瘤的发生发展密切相关,可能对恶性肿瘤的临床治疗及预后判断具有重要价值。     

环指蛋白43基因及其在消化系统肿瘤中的功能

环指蛋白43(RNF43)是一种重要的泛素链接酶.作为Wnt信号通路中的拮抗蛋白,RNF43具有重要的抗肿瘤作用.RNF43突变后会引起Wnt信号通路的异常激活,进而促进细胞的侵袭、转移与增殖.除此之外,在临床抗肿瘤的研究中发现,RNF43与Wnt通路相互作用的位点有望作为肿瘤治疗的分子靶标.近年来,随着相关研究的逐渐深入,RNF43的分子结构及其与Wnt通路中相关蛋白的作用机制已经逐渐明确.而在临床研究中,RNF43蛋白的类似物及相关疫苗也显示出RNF43在肿瘤治疗中的重要地位.     

MAGE基因mRNA在肺癌细胞中的表达

目的　检测MAGE 1、 2、 3、 4基因在肺癌细胞及癌旁正常肺组织中mRNA的表达水平。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 3 5例肺癌患者肿瘤组织和癌旁正常肺组织进行MAGE 1、 2、 3、 4mRNA表达检测。结果　 3 5例肺癌肿瘤标本中MAGE 1、 2、 3、 4的阳性表达率分别为 2 2 .9% ( 8/3 5 )、62 .9% ( 2 2 /3 5 )、3 7.1% ( 13 /3 5 )、77.1% ( 2 7/3 5 ) ;四种基因至少有一种表达的几率是 85 .7% ( 3 0 /3 5 ) ;两种或两种以上同时表达几率是 71.4% ( 2 5 /3 5 )。癌旁正常肺组织四种基因均不表达。MAGE基因的表达在肺腺癌和鳞癌 ,在不同分期的非小细胞肺癌间无差异 ,并且与淋巴结转移与否无关 (P >0 .0 5 )。结论　MAGE 1、 2、 3、 4在肺癌组织中有较高比例的表达 ,癌旁正常肺组织中无表达。这提示MAGE抗原用于肺癌的主动免疫治疗具有良好的前景     

Bnip3基因的表达调控及其与肿瘤的关系

Bnip3基因属于Bcl-2基因家族BH3-only亚家族,是一种线粒体促凋亡基因,是缺氧诱导因子（HIF）的下游应答基因之一。在缺氧条件下,Bnip3可诱导细胞发生凋亡或自噬,目前研究发现Bnip3与多种肿瘤发生发展及治疗密切相关,针对Bnip3基因的分子靶向治疗与放化疗联合,在肿瘤治疗上有较好的应用前景。     

基因芯片在乳腺癌研究中的应用与进展

乳腺癌的发生和发展是一个多因素、多阶段相互作用的复杂过程.利用基因芯片技术可以检测乳腺癌组织的基因表达谱,现综述基因芯片技术在乳腺癌的发生学、生物学特性及预后等方面的应用与新进展.     

一个具有肿瘤转移抑制基因活性的人DNA序列

目的 分离鉴定人类肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列,探讨转移表型逆转的分子生物学机制。方法 应用Ｉｎｔｅｒ Ａｌｕ ＰＣＲ技术,将导入正常人肺基因组ＤＮＡ片段后转移表型抑制细胞株中的人源性ＤＮＡ片段扩增出来,对其中的７００ｂｐ左右ＤＮＡ片段进行核苷酸序列分析,并在ＧｅｎＢａｎｋ序列数据库进行类似性检索。将该ＤＮＡ再次转染高转移小鼠瘤细胞株,通过体内、体外转移相关性实验,验证其是否具有抑制高转移小鼠     

乳腺癌中的p53基因mRNA高表达的研究

应用反转录-半定量PCR技术检测47例乳腺癌组织中p53基因mRNA表达，并与临床预后因素进行统计学分析。结果发现：在乳腺正常腺体中有稳定的p53mRNA中度表达，而在乳腺癌组织中，p53mRNA呈高表达者为40．4％（19／47），且以在ER阴性的乳腺癌中增高明显（P＜0．05）。本文提示：p53基因在人类乳腺癌形成和肿瘤演进过程中起重要的作用，p53mRNA高表达的病人浸润性强、预后差。反转录一半定量PCR技术具有快速、简单、敏感可适于临床大规模应用之优点。     

ZNRF3在甲状腺肿瘤组织中的表达以及在甲状腺癌细胞中的功能研究

目的 检测ZNRF3基因在不同分化程度甲状腺癌组织标本和细胞中的表达情况并探讨其在甲状腺癌中的作用.方法 应用免疫组织化学技术检测35例乳头状甲状腺癌和10例低分化甲状腺癌组织中ZNRF3蛋白的表达.RT-PCR检测ZNRF3基因在乳头状甲状腺癌TPC-1和低分化甲状腺癌8505C细胞株中的表达.通过慢病毒沉默TPC-1细胞中的ZNRF3基因,CCK-8与Transwell分别检测ZNRF3基因沉默后TPC-1细胞株增殖和侵袭迁移情况.结果 免疫组织化学和RT-PCR分别检测发现,ZNRF3基因在乳头状甲状腺癌组织及细胞株中的表达明显高于低分化甲状腺癌组织及细胞,差异有统计学意义(4.83±0.44∶3.13±0.59,t=2.20,P＜0.05;1.01 ±0.06∶0.21 ±0.04,t=11.80,P＜0.01).将TPC-1细胞株中ZNRF3基因沉默后,通过CCK-8检测细胞增殖发现,细胞培养72 h后细胞增殖能力显著增强,差异有统计学意义(0.96±0.10∶0.64±0.05,t=3.19,P＜0.05);并且Transwell检测细胞侵袭与转移发现,细胞侵袭(0.12±0.01∶0.09±0.00,t=5.48,P＜0.01)与迁移能力(0.22±0.01∶0.17±0.01,t=4.58,P＜0.05)有所增强,差异有统计学意义.结论 ZNRF3在乳头状甲状腺癌中的表达高于低分化甲状腺癌,ZNRF3在甲状腺肿瘤的发生发展中为抑癌基因.     

miR-218在子宫颈癌组织中的表达及预测的靶基因的生物信息学分析

目的 探讨miR-218在子宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-218在子宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础.方法 利用miRNA芯片技术检测3份子宫颈癌组织及3份正常子宫颈组织中miRNA表达谱,用实时定量聚合酶链反应（PCR）法在55例子宫颈组织中进行验证.通过生物信息学预测miR-218的靶基因,并对其靶基因进行基因本体（G0）功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析.结果 芯片结果显示子宫颈癌组织中有15个miRNA表达上调（＞2倍）,10个miRNA表达下调（＜0.5倍）,其中miR-218下调最明显.miR-218预测靶基因集合功能富集于生物学调控、蛋白代谢、细胞迁移和黏附、细胞分化等生物学过程,以及蛋白结合、连接酶活性等分子功能上;KEGG通路分析涉及癌通道、黏附连接、胰岛素信号通路、凋亡等信号转导通路及前列腺癌、急性和慢性髓系白血病等疾病通路.结论 miR-218在子宫颈癌组织中呈低表达,miR-218预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

HOXC基因在肿瘤中的表达与作用

HOXC基因簇作为同源盒(HOX)基因家族的一员,在多种器官中均有表达,具有调控基因表达、细胞分化和机体形态发生的功能,而其功能的异常与白血病、乳腺癌、肾细胞癌、前列腺癌等肿瘤的预后密切相关.     

抑制消减杂交与基因芯片技术及其联合应用

抑制消减杂交(SSH)与基因芯片技术是筛选差异表达基因的新方法,因其快速、高效等特点而得以广泛应用。SSH或基因芯片技术单独使用存在不同程度的缺陷或不足,但若将两种技术结合,则能充分发挥各自优势,并能最大限度弥补其不足,从而成为较为理想的克隆系统。     

肝细胞癌细胞诱导和体外培养的大鼠肝星状细胞基因差异表达

目的 从基因水平了解肝细胞癌(HCC)内的星状细胞(HSC)与正常肝HSC的异同.方法 密度梯度离心分离HSC,用大鼠HCC细胞株CSF的条件培养基诱导HSC活化.cDNA微阵列比较静止、体外培养活化和诱导活化HSC之间22 012个基因的表达,并通过实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和Western blot检测进行验证.结果 与静止HSC相比,体外培养HSC共有1672个基因差异表达,包括促炎症因子、细胞表面受体、黏附分子、信号转导分子、免疫因子等,其中1012个基因上调,660个基因下调.肿瘤诱导活化HSC有711个基因差异表达,其中420个基因上调,291个基因下调,有一部分基因表达与体外培养相同,部分基因如Raf1、Rac2、Adam17、Wnt6、MMP-9和TNF等,呈特异性表达.real-time RT-PCR和Western blot检测结果与cDNA微阵列检测结果相符.结论 HCC细胞可特异性驱动HSC的活化,诱导活化的HSC在HCC细胞的浸润和转移中可能起重要作用.瘤内活化的HSC应作为研究HSC生物学功能的标准.     

新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长机制初探

目的探讨新基因pp3774在NIH/3T3细胞生长调节中的可能机制.方法用pp3774-HA融合表达质粒通过脂质体法转染NIH/3T3细胞,G418筛选,建立稳定细胞系,并用RT-PCR检测pp3774 在NIH/3T3细胞中mRNA水平的表达状况;利用Atlas cDNA array分析pp3774的异位表达对NIH/3T3细胞基因表达谱的影响;用RT-PCR方法验证Atlas cDNA array杂交结果.结果 pp3774超表达可以明显下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dp1等基因的表达,同时可上调PI3K p85α、FGF7、MMP2等基因的表达.上述基因表达的改变可能通过调控细胞周期实现pp3774对NIH3T3细胞的生长抑制.结论新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长可能与pp3774基因下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dp1的表达有关.     

凋亡相关基因在喉鳞癌中的表达概况

目的了解凋亡相关基因在喉鳞状细胞癌中的表达概况，探寻其在喉鳞癌及正常喉组织中的表达差异及意义。方法提取喉鳞癌及癌旁正常喉组织的总RNA，采用Ampolablaleing—LRP方法，分别将上述提取的RNA合成生物素标记的cDNA探针。将合成的探针与细胞凋亡GEArray Q芯片膜（96个凋亡相关基因）进行杂交。采用化学发光方法，并用X感光片记录喉鳞癌标本和对照标本的基因信号表达强弱。将X光片感光点转化成TIFF图形文件，使用ScanAlyze和GEArray Analyzer软件进行资料分析。结果利用基因芯片杂交筛选的方法，在所分析的与凋亡相关的96个基因中，survivin、bcl-2、TNF-β／Lta、TNF-α等23个基因在喉鳞癌组织中表达上调；hak、hax、hik、p53等22个基因表达下调。结论通过细胞凋亡GEArray Q芯片膜杂交筛查的方法发现，在喉鳞癌中抑制凋亡的基因表达上调，促进凋亡的基因表达下调，这些基因改变组成了喉鳞癌特异的与凋亡相关的基因表达谱，为全面系统地研究喉鳞癌中与凋亡相关基因表达情况，及探讨喉鳞癌的发病机制提供了有益的线索。     

Plunc基因研究进展

近年发现的Plunc基因具有明显的组织表达特异性,参与了肿瘤的发生、发展、转移过程,可能作为某些肿瘤的相关基因候选者或分子诊断标记,但其对肿瘤功能影响及其具体的作用机制目前还不很清楚.     

Grb2-SH3抑制剂peptidimer-c对K562细胞凋亡相关基因表达的影响

 目的　分析peptidimer-c对K562细胞基因表达谱的影响,初步探讨peptidimer-c诱导K562细胞凋亡和抑制生长的可能机制。方法　应用锥虫蓝染色法计数经不同浓度peptidimer-c分别作用不同时间后的K562活细胞数;通过透射电子显微镜观察peptidimer-c作用前后K562细胞的超微结构;应用Human U133 Plus 3.0基因表达谱芯片检测peptidimer-c作用前后K562细胞的差异表达基因;并用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片结果。结果　peptidimer-c能诱导K562细胞凋亡和抑制生长,peptidimer-c作用于K562细胞后引起大量基因表达的变化,差异表达基因有529个,其中上调455个,下调74个,影响细胞凋亡的基因包括JUN、AXUD1、TNFRSF10B等表达明显上调;RT-PCR验证选取的15个基因的表达差异与芯片结果一致。结论　peptidimer-c可通过上调肿瘤坏死因子及其受体家族成员和JUN家族,启动K562细胞凋亡。     

高转移肝癌MHCC97细胞中JAK/STATs通路相关分子表达的研究

目的：干扰素α能明显抑制裸鼠MHCC97肝癌移植瘤的生长，但对该细胞的增殖无影响。本研究着重探讨导致MHCC97细胞对干扰素α无应答的分子机理。方法：用RT—PCR、免疫印迹及核苷酸测序等方法研究MHCC97细胞中JAK／STATs通路上干扰素α受体、irf9、stαtj及stat2基因的转录和蛋白的表达。结果：MHCC97细胞构成性转录和翻译statl、stat2分子；虽同时转录一定量的irf9 mRNA，但检测不到相应的蛋白；测序分析发现irf9基因的核苷酸组成存在几个点突变。结论：由irf9基因突变所引起的JAK／STATs信号转导功能的不完整，可能是该细胞对干扰素α增殖抑制无应答的分子原因之一。     

二氯化钴对腺病毒基因表达的影响

目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响. 方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2 处理后,Western 印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率. 结果:适当浓度的CoCl2 (0.4和0.08 μg/mL) 能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4 μg/mL CoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制.0.4 μg/mL CoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平; Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达.结论:CoCl2 能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关.     

microRNA 与骨肉瘤的研究进展

骨肉瘤是好发于儿童和青少年的骨恶性肿瘤,它的第二个好发高峰是在70～80岁的老年人[1]。在美国,每年新发的骨肉瘤患者约为900例[2]。美国癌症中心的数据显示,骨肉瘤患者的5年生存率约为53.9%[3]。新辅助化疗的应用使得骨肉瘤的5年生存率有了明显提高,但是仍有一部分患者对化疗不敏感,同时肿瘤的复发和转移一直是治疗的难题。虽然骨肉瘤相对于其它肿瘤而言较为少见,但是由于它的高致死率和致残率,有关骨肉瘤的基础研究和临床治疗策略一直是医学界的研究热点。之前的研究已经发现骨肉瘤细胞中存在多种遗传学改变,包括染色体结构的异常、缺失等以及肿瘤抑制基因的突变。DNA 的甲基化等表观遗传学的改变也会导致骨肉瘤的发生。尽管有关骨肉瘤的基础研究层出不穷,但是有关microRNAs （ miRNAs ）在骨肉瘤的发生和发展过程中所起的作用仍不是十分明确[4]。