转染VEGF165基因抑制兔动脉损伤后内膜增生

目的：观察局部转染血管内皮生长因子165（VEGF165）基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制。 方法： 采用显微外科手术方法，建立兔右髂外动脉损伤模型。将105只新西兰大白兔随机分为3组，每组35只。A组为生理盐水对照组，B组为脂质体介导的pBudCE4.1转染组，C组为脂质体介导的pBudCE4.1/VEGF165转染组。用微注射器将各种转染液注入损伤的血管壁，每组按实验终点（术后2、3、7、14和28 d）分为5个亚组，每个亚组7只兔。于术后各实验终点，取损伤段的血管用于病理组织学检查、电镜观察、RT-PCR和免疫组化染色检查。 结果： 术后各时点C组血管内膜厚度和内膜面积均显著小于A组和B组（P<0.01），术后28 d时C组管腔狭窄率平均比A组和B组低51.6%和49.8％。术后各时点C组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和血管壁VEGF165阳性细胞率明显高于A组和B组（P<0.01）。C组血管壁血管内皮细胞（VEC）修复和生长增殖速度明显快于A组和B组。A组和B组间无明显差异。 结论： 局部转染VEGF165基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄，为将来血管内膜增生的基因治疗奠定基础。     

损伤血管内膜增生的研究

血管损伤后内膜增生（IH）是血管外科重建、血管腔内治疗术后发生狭窄或闭塞的主要原因，也是血管外科长期以来拯待解决的难题。有关的研究一直是血管外科临床和基础研究的重点。     

反义凝血酶受体基因表达抑制大鼠动脉内膜损伤后内膜增生

目的 了解凝血酶及其受体在血管损伤后动脉内膜增生中的作用,以进一步阐明经皮冠状动脉血管腔内成形术（PTCA）后再狭窄的发生机制,为寻找再狭窄的防治途径提供线索。方法 采用球囊导管损伤动脉内膜的方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型。用纳米粒子包装凝血酶受体重组反义基因质凿pLXSN/ATR,用保护灌注的方法局部定位转染损伤后的大鼠颈动脉。结果 PCR检测发现重组基因整合,RNA斑点杂交观察到实验组大鼠颈动脉壁内有重组反义凝血酶受体基因表达,正义凝血酶受体基因的表达受到明显抑制,反义基因转染组新生内膜,中膜比例降低了40．9％。结论 反义凝因酶受体重组基因转基因表达对大鼠颈动脉球囊损伤后动脉内膜的增生具有抑制作用,提示凝血酶及其受体在PTCA后再狭窄过程中有重要作用,为再狭窄的防治提供了新的线索。     

组织因子途径抑制物基因局部转染对兔颈总动脉损伤后内膜增生及P53表达的影响

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因局部转染对兔颈总动脉损伤处内膜增生及P53表达的影响。方法36只新西兰纯种雄性大白兔颈总动脉损伤后随机分生理盐水组?复制缺陷型腺病毒(AdLacz)组和包载TFPI目的基因复制缺陷型腺病毒(AdTFPI)组。每组12只。术后14d处死动物,取损伤血管进行检测分析。免疫组化染色观察TFPI在转染局部的表达成功;颈总动脉损伤处抽提总RNA,半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定P53mRNA表达;同时对颈总动脉病变最明显的取材标本进行HE染色,光学显微镜下观察血管内膜增生,以计算机图像分析系统分析血管内膜?中膜面积和腔面积。结果AdTFPI组家兔的颈总动脉损伤处血管内膜的增生显著受抑制?内膜/中膜面积比值下降;生理盐水组?AdLacz组和AdTFPI组P53mRNA的相对值分别为1.31±0.14、1.27±0.11和4.21±0.87,P53在AdTFPI组表达增强,与前两者相比有显著差异性。结论TFPI基因局部转染显著抑制颈总动脉损伤处血管内膜的增生并增强P53表达。     

选择性清除单核／巨噬细胞对血管损伤后内膜增生影响的研究

目的应用脂质体输送系统选择性清除单核／巨噬细胞，探讨血管损伤后抑制内膜增生的有效途径。方法采用反相蒸发技术将clodronate用脂质体包裹，在36只大鼠颈动脉损伤模型前1d、损伤后6d，分别尾静脉注射15mg／kg体重的脂质体包裹clodronate（112组。12只）、clodronate溶液（FC组，8只）、等量生理盐水（saline组，9只）或等量空脂质体（EL组，7只），14天后颈总动脉切片行HE、VG染色，用图象分析软件测定颈动脉管腔面积、增生内膜面积、中膜面积，并计算增生内膜与中膜面积比值（N／M）、管腔狭窄率（％）。另取10只大鼠尾静脉注射荧光标记的脂质体包裹clodronate（5只）或等量荧光标记的空脂质体（5只），颈总动脉损伤后1天下腔静脉抽血分离白细胞，并取颈总动脉、肝脏、脾脏，冰冻切片后在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光物质分布。结果包裹、未包裹clodronate的脂质体、罗丹明标记脂质体的平均直径分别为（213±20）nm、（（198±14）nm、（209±19）nm，包裹率17．6％-19．0％，脂质体中clodronate浓度（7．6±1．1）mg／ml；各组大鼠损伤动脉内膜均有明显增生，但LC组血管内膜增生明显较其它3组明显减轻，表现为N／M、管腔狭窄率（％）明显低于其它3组相应值（P〈0．01）；FC组或EL组对血管内膜增生无明显影响（与saline组比，P〉0．05）。各组间颈总动脉中膜面积无明显差别。尾静脉注射荧光标记脂质体48h后，大鼠左颈总动脉、静脉血中白细胞、脾脏、肝脏中可以发现单核／巨噬细胞中有荧光标记物积聚，其中LC组大鼠上述组织中荧光标记物较EL组者明显减少，表明脂质体包裹clodronate可明显减少体内单核／巨噬细胞数量。结论通过clodronate的脂质体输送系统将巨噬细胞暂时灭活、清除，可以预防血管损伤后的血管再狭窄。     

AT2R基因在体转染抑制大鼠颈动脉新生内膜增生

目的: 探讨AngⅡ 2型受体（AT2R）基因在体转染对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法:大鼠颈动脉球囊损伤后，局部转染AT2R重组腺病毒载体（pAdCMV/AT2R）或空病毒载体（pAd-GFP），于术后7、14和21 d用RT-PCR、免疫组织化学及HE染色方法，进行AT2R、AngⅡ 1型受体(AT1R)、PCNA在颈动脉壁中表达的变化及定量组织形态学分析；免疫荧光双标染色和激光共聚焦技术检测血管中AT2R与PCNA表达的关系。结果: pAdCMV/AT2R转染后，大鼠颈动脉AT2R的表达水平显著高于未转染组和pAd-GFP组(P<0.01)，21 d时仍维持较强表达。在14 d时pAdCMV/AT2R组PCNA阳性表达率显著低于未转染组和pAd-GFP组［(27.29±5.81)% vs ( 72.25±4.47)%、(68.43±9.12)%，P<0.01］，在AT2R表达阳性的部位PCNA表达阴性。在21 d时，pAdCMV/AT2R组的内膜面积与中膜面积比显著低于未转染组和pAd-GFP组(0.78±0.06 vs 1.44±0.22、1.36±0.21, P<0.01)，pAd-GFP组和未转染组间无显著差异（P>0.05）；各组颈动脉AT1R表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: AT2R基因在体转染可抑制球囊损伤后大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖和新生内膜增生，AT2R基因转染后表达并发挥其生物学作用时，AT1R和AT2R之间不存在表达量上此起彼伏的关系，可能是建立在信号转导基础上的功能调节关系。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对血管损伤后新生内膜增生的影响

背景：一氧化氮能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,而一氧化氮合酶是其合成的关键酶,有关一氧化氮合酶基因体内转染对平滑肌细胞及动脉粥样硬化血管损伤后内膜增生影响少有报道。 目的：观察内皮型一氧化氮合酶 (endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因体内局部转染对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。 方法：建立动脉粥样硬化Wistar大鼠颈动脉球囊损伤模型,建模后随机分成空白对照组、AdCMV-lacz对照组和AdCMV-eNOS组,分别将PBS,AdCMV-lacz和AdCMV-eNOS体内转染至以上3组大鼠的损伤血管壁。转染2周后培养并鉴定损伤局部平滑肌细胞,并用RT-PCR法检测各组损伤及转染后血管平滑肌细胞eNOS mRNA的表达,同时观察转染后不同时期新生内膜增生的影响。 结果与结论：AdCMV-eNOS组的颈总动脉血管平滑肌细胞可表达eNOS mRNA。3组大鼠转染后1和3个月,AdCMV-eNOS组内膜/中膜面积比值低于空白对照组和AdCMV-lacz对照组(P < 0.01)。结果显示,eNOS基因体内转染损伤后血管可以抑制血管新生内膜增生,减少再狭窄发生率。     

氟伐他汀抑制球囊损伤后兔的血管内膜增殖

目的：探讨兔髂动脉急性损伤后，氟伐他汀对血管内膜增殖的抑制作用及机制。 方法： 给新西兰大耳白兔行右髂动脉球囊导管内膜剥脱术，术后灌胃予氟伐他汀（8 mg·kg-1·d-1）治疗28 d，术前、术后3 h及3 d用放射免疫法测定血清中内皮素-1、血栓素A2和前列环素浓度；28 d后HE染色观察血管内膜增生情况，免疫组织化学方法检测细胞外基质的变化。结果： ① 兔髂动脉急性损伤后血清内皮素-1及血栓素A2浓度即明显增加，前列环素水平则显著下降；氟伐他汀治疗显著抑制内皮素-1和血栓素A2的升高；提高血清前列环素的水平；② 氟伐他汀治疗减轻了内膜TGF-β1的过度表达及细胞外基质（FN、LN）的沉积；③ 氟伐他汀显著抑制了内膜的增殖和肥厚。结论：氟伐他汀治疗抑制血管损伤后血栓的形成，减轻了内膜的增殖及内膜中细胞外基质的沉积。     

抗骨桥蛋白抗体抑制血管内膜增生的实验研究

目的：探讨抗骨桥蛋白（OPN）抗体对大鼠血管内皮剥脱术后内膜增生的抑制效果及其机制。 方法： 利用球囊导管建立大鼠颈总动脉-主动脉血管内皮剥脱模型，通过尾静脉注射兔抗鼠OPN多克隆抗体后，利用明胶酶图分析、Western blotting、免疫组织化学等方法观察血管内膜厚度、基质转换酶类和粘附分子表达活性。 结果： 血管内膜剥脱大鼠给予抗OPN抗体后，血管内膜的增生受到明显抑制，内膜与中膜面积之比（I/M）降低（P<0.05），管腔狭窄程度减轻。血管壁 MMP-2和TIMP-2的表达量无明显变化但MMP-2活性显著下降（P<0.05）。而且，抗OPN抗体对血管新生内膜的OPN表达水平也无明显影响。 结论： 抗OPN抗体通过阻断骨桥蛋白功能，减缓细胞外基质降解而有效抑制血管内膜增生。     

动脉粥样硬化大鼠血管损伤后局部组织学结构的变化

目的建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型，了解血管成形术后再狭窄的发生规律及病理机制。方法在大鼠动脉粥样硬化病变的基础上，使用2F球囊导管损伤大鼠左侧颈总动脉，观察术后不同时期内膜、中膜增生的动态改变；对血管壁增殖的细胞进行鉴定；观察血管壁平滑肌细胞表型标志物SMα—actin表达的变化。结果损伤后7天薪生内膜开始形成，至3月时内膜增厚达最大，管腔明显狭窄，损伤动脉壁可见细胞大量增殖，大部分为平滑肌细胞。损伤早期血管壁表达SMα—actin减少，至损伤后期逐渐恢复至原有水平。结论应用球囊导管可以成功建立大鼠血管损伤动物模型，损伤后新生内膜增生导致管腔狭窄，平滑肌细胞的表型改变、迁移及增殖是内膜过度增生的病理基础。     

靶向转染纳米tPA基因预防狗冠脉搭桥术吻合口血栓形成和再狭窄的研究

目的探讨构建的白蛋白纳米组织型纤溶酶原激活物（tPA）基因质粒超声微泡载体靶向转染心肌组织预防冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。方法建立狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄模型,制备tPA基因白蛋白纳米超声微泡,超声波靶向转染心肌并获得tPA表达,观察对吻合口局部血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和PDGF-BmRNA表达以及内膜增生的影响。结果成功靶向心肌转染tPA基因并获得了tPA基因有效表达。显著减少了动脉搭桥吻合口血栓形成,抑制率100%。抑制冠状动脉吻合口处内膜细胞表达PCNA和PDGF-B mRNA。显著减少局部血管内膜厚度、内膜面积,使吻合口狭窄率减少68.29%。结论白蛋白纳米-超声微泡载体靶向转染tPA基因可预防狗冠状动脉搭桥术后吻合口血栓形成和再狭窄,这为人冠状动脉搭桥术吻合口血栓形成和再狭窄的防治提供实验基础。     

A novel model of accelerated intimal hyperplasia in the pig iliac artery

There is no good animal model of large artery injury-induced intimal hyperplasia (IH). Those available are reproducible, providing only a few layers of proliferating cells or have the disadvantage of the presence of a metallic stent that complicates histology evaluation. This study was designed to develop a new, simple model of accelerated IH based on balloon injury in conjunction with disruption of the Internal Elastic Lamina (IEL) in pig external iliac arteries. Iliac artery injury (n = 24) was performed in 12 Yorkshire pigs divided in two groups: Group I (n = 10), overdistention injury induced by an oversized non-compliant balloon; Group II (n = 14), arterial wall disruption by pulling back an isometric cutting balloon (CB) followed by stretching with a compliant Fogarty Balloon (FB). At two weeks, arteries were processed for morphometric analysis and immunohistochemistry (IHC) for smooth muscle cells (SMC) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). When comparing the two groups, at 2 weeks, arteries of group II had a higher incidence of IH (100%vs. 50%, P = 0.0059), increased intimal areas (2.54 ± 0.33 mm(2) vs. 0.93 ± 0.36 mm(2) , P = 0.004), increased intimal area/Media area ratios (0.95 ± 0.1 vs. 0.28 ± 0.05; P < 0.0001) and decreased lumen areas (6.24 ± 0.44 vs. 9.48 ± 1.56, P = 0.026). No thrombosis was noticed in Group II. Neointima was composed by proliferating SMC located with the highest concentration in the area of IEL disruption (IHC). Arterial injury by pulling back CB and FB induces significant IH in pig iliac arteries by two weeks without thrombosis. This model is superior to the classical overdistention non-compliant model and should be useful and cost-effective for preclinical testing of procedures designed to inhibit IH in large peripheral arteries.     

转染PDGF-B反义核酸和tPA基因预防狗冠脉搭桥术吻合口再狭窄

目的： 探讨联合应用组织型纤溶酶原激活物（tPA）基因质粒和血小板源性生长因子（PDGF-B）反义核酸预防冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。方法： 建立狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄模型，构建tPA基因质粒并设计合成（PDGF-B）反义寡核苷酸，在冠状动脉搭桥术同时以超声波辅助转染心肌细胞和吻合口血管平滑肌细胞，采用常规病理、免疫组织化学、原位杂交以及形态测量方法观察对吻合口局部血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和PDGF-B mRNA表达以及内膜增生的影响。结果： 成功转染tPA基因和（PDGF-B）反义核酸；2种基因联合应用显著抑制血管内膜细胞表达PCNA和PDGF-B mRNA，抑制率分别为65.01%和81.75%；显著减少局部血管内膜厚度、内膜面积和吻合口血栓形成，使吻合口狭窄率显著减少62.63%。结论： 联合转染tPA表达质粒和PDGF-B的反义寡核苷酸在一定程度上抑制猪实验性冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。     

糖尿病兔髂动脉球囊损伤后内膜增生的变化

目的：探讨糖尿病兔髂动脉球囊损伤后内皮再生和内膜增生的关系。方法：26只糖尿病兔和26只正常兔在行髂动脉内皮球囊剥脱术后0、1、2、3、4周，取髂动脉测定新生内皮面积及内膜面积。结果：糖尿病兔组在术后1、2周新生内皮面积明显小于对照组，术后1、2、3、4周新生内膜面积均显著大于对照组。结论：糖尿病兔髂动脉球囊损伤后内膜明显增生，可能与内皮修复延迟有关。     

维甲酸对动脉内皮损伤后血管壁t—PA含量的影响

目的和方法：观察动脉损伤后血管壁中纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）浓度的变化以及分化诱导剂维甲酸对其影响。结果：动脉内皮损伤后１周，血管ｔ－ＰＡ浓度达高峰，此后持续下降，但直至术后４周仍高于正常血管。用维甲酸后，尽管术后１、２周血管ｔ－ＰＡ水平仍高于正常，但于第４周恢复正常，而且ｔ－ＰＡ水平各期均低于未用药损伤血管。结论：促进平滑肌细胞的分化能抑制在体平滑肌细胞ｔ－ＰＡ的表达。     

全反式维甲酸对大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生和血管重塑的影响

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对球囊损伤大鼠腹主动脉内膜增生和血管重塑的影响。方法：复制球囊损伤的大鼠腹主动脉剥脱模型，12只Wistar大鼠随机分为①对照组：6只腹腔内注射intralipid（1 mL/d）；②ATRA组：6只腹腔内注射溶解于intralipid的ATRA（4 mg·kg^-1·d^-1）。球囊损伤14 d后，损伤区域的血管段用10%甲醛固定，然后染色，进行组织学观察。结果：ATRA组新生内膜面积（IA）明显小于对照组，管腔面积（LA）和外弹力膜包绕面积（EEL）则大于对照组。结论：ATRA具有抑制损伤血管的内膜增生和促进有益的血管重塑的作用。     

降钙素基因相关肽基因转导对内皮损伤兔髂动脉血管环舒缩反应的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽（ ＣＧＲＰ） 基因转导兔动脉内膜对其舒缩功能的影响。方法：利用逆转录病毒载体,将ＣＧＲＰ 基因在体转导兔髂动脉内膜,取动脉环做灌流试验,研究其对血管活性物质的反应。结果：转基因血管内皮细胞的增殖较对照组活跃,动脉的内皮依赖性舒张反应较强,１０ －６ｍｏｌ／Ｌ 的乙酰胆碱引起的舒张为３３－０８ ％ ±１０－０１ ％ ,对照组为－ １７－５７ ％ ±５－５９ ％ ,Ｐ＜ ０－０１ 。结论：ＣＧＲＰ 基因转导损伤的免髂动脉内膜可促进内皮细胞增殖,并使动脉内皮依赖性舒张反应改善。     

内源性血红素氧合酶-1/一氧化碳系统对球囊损伤后再狭窄的影响

目的: 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)/一氧化碳(CO)系统对球囊损伤后再狭窄的影响及其可能的作用机制。方法: 家兔随机分为5组(各组10只):对照组、胆固醇组、血红素组、卟啉锌组和假手术组。对照组予普通饮食,其余4组喂饲含1.5%胆固醇饲料,血红素组和卟啉锌组同时分别予氯化血红素或锌原卟啉-9腹腔内注射,2周后实验组行颈总动脉球囊损伤术,术后继续原喂养给药8周。结果: 与对照组比较,胆固醇组颈动脉一氧化氮(NO)生成量、结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性显著降低,而CO生成量、HO-1 mRNA和蛋白表达显著增加,内膜面积和内膜/中膜面积比值增大,均P<0.01。与胆固醇组比较,氯化血红素干预显著增高HO-1 mRNA和蛋白表达,增加CO生成量,同时显著降低ET-1 mRNA和蛋白表达,减小内膜面积和内膜/中膜面积比值,均P<0.01;锌原卟啉-9显著降低HO-1 mRNA和蛋白表达,减少CO生成量,而ET-1 mRNA和蛋白表达显著增高,内膜面积和内膜/中膜面积比值增大,均P<0.01。结论: HO-1/CO系统通过代偿和调节NOS/NO系统以及降低ET-1表达,改善内皮功能和抑制内膜增殖,从而有效阻止再狭窄的发生发展。