低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号转导及转录激活因子基因表达的影响

作者研究了低氧对肺动脉平滑肌细胞中信号转导及转录激活因子 (STATs)基因表达的影响。低氧处理培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,采用半定量RT -PCR方法检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的STAT3和STAT5基因的表达水平。结果显示 :低氧培养 2h肺动脉平滑肌细胞中STAT3、STAT5、mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,与正常组比较均有明显差别。低氧 1 2h组的表达量低于 6h组 ,但高于正常组。研究表明缺氧可以明确促进STATs基因在PASMC的表达 ,缺氧能够激活复合培养的PASMC中白细胞介素 6等细胞因子 ,可能是刺激STATs基因表…     

蛋白激酶Ca mRNA在低氧猪肺动脉平滑肌细胞的表达

蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)参与正常肺血管张力的调控 ,低氧可使肺动脉ＰＫＣ蛋白水平表达增高 ,且可使ＰＫＣ对肺血管张力的调控作用明显增强。作者研究了低氧对肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)在ｍＲＮＡ转录水平表达的影响以及ＰＫＣ对ＰＡＳＭＣ增殖的影响 ,发现慢性低氧动物肺动脉ＰＫＣ在蛋白水平明显高于正常对照组 ,缺氧可使ＰＫＣ酶活性明显上升 ,慢性缺氧时ＰＫＣ对肺血管张力的作用是上调的 ,参与了缺氧性肺血管收缩的发病机制。本研究进一步探讨缺氧对ＰＡＳＭＣＰＫＣ -α核酸水平表达的影响 ,发现常氧情况下ＰＡＳＭＣ有ＰＫＣ -α的…     

低氧时复合培养的肺动脉平滑肌细胞Janus激酶蛋白表达的状况

实验研究了低氧对复合培养的肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)中的Janus激酶 (JanusKinase,JAK)蛋白表达的作用。采用复合胶原酶法培养大鼠PASMC ,再与大鼠肺微血管内皮细胞 (LMEC)进行复合培养 ,免疫细胞化学SABC法检测低氧状况下PASMC中JAK蛋白的表达情况。结果显示 :与正常PASMC弱阳性 ( +)比较 ,低氧处理单独培养PASMC的JAK1、JAK3免疫组化染色 ,胞浆呈深紫蓝色 ,呈极强阳性 ( ) ;低氧处理复合培养的PASMC的JAK1、JAK3免疫组化染色、胞浆呈强阳性 ( )。与对照的正常细胞呈弱阳性 ( +)比较 ,低氧 2h组JAK1和JAK3蛋…     

肺动脉平滑肌细胞对低氧诱导的肺微血管内皮细胞白介素表达的调节及机制

目的 研究低氧对肺微血管内皮细胞(PMVECs)的白细胞介素(IL)6、IL-1β、受体酪氨酸激酶(RTK)和Janus激酶3(JAK3)表达的影响,以及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)在其中的调控作用.方法 单独培养的大鼠PMVECs分为正常(N)组及低氧2h(H2)组、6h(H6)组、12h(H12)组,另设立PMVECs共培养组(与PASMCs共同培养)和单纯培养组,均接受6h或12h的低氧(氧浓度为3%)处理.应用RT-PCR方法 检测IL-6、JAK3的mRNA表达水平,放免法测定培养细胞上清中的IL-6蛋白含量,放射性酶分析法测定细胞膜、胞质中RTK的活性,ELISA法测定细胞培养上清中的IL-1β蛋白含量.结果 低氧刺激后,PMVECs的LL-6、JAK3 mRNA表达及IL-6、IL-1β蛋白含量均增加.与N组比较,低氧处理各组的以上各指标均有所上升(P<0.01),以6h时间点最为明显(P<0.01).胞膜RTK活性在低氧刺激各组明显降低(P<0.01),而胞质RTK活性明显升高(P<0.01),以12h时间点最为明显(P<0.05).在低氧刺激6h后,共培养组的PMVECs内IL-6、JAK3的mRNA表达,以及IL-6、IL-1β蛋白含量均较单纯培养组有所降低(P<0.05);在低氧刺激12h后,共培养组的PMVECs的RTK活性也较单纯培养组降低(P<0.05).结论 低氧可以促进PM-VECs的IL-6 mRNA表达.并能增加IL-6和IL-1β蛋白含量,复合培养情况下PASMCs对此具有下调作用,其机制可能与RTK和JAK涉及的信号转导通路有关.     

低氧对培养不同内径的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

作者分离培养了 3种不同内径的肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣｓ) ,用3Ｈ -ＴｄＲ掺入速率和细胞计数作为细胞增殖的指标 ,观察低氧对其增殖作用的影响。低氧对 3种不同内径的ＰＡＳＭＣｓ(内径分别为 >1 0 0 0 μｍ、50 0 μｍ～80 0 μｍ、30 0 μｍ～ 4 0 0 μｍ)增殖促进作用显著不同 ,其3Ｈ ＴｄＲ掺入速率和细胞计数分别增加 2 3.5%和 1 1 .1 %、60 .0 %和 33.8%、1 4 1 .4 %和 52 .0 %。选择对低氧最敏感的ＰＡＳＭＣｓ(内径为 30 0 μｍ～ 4 0 0 μｍ) ,进一步探讨低氧促ＰＡＳＭＣｓ增殖作用的细胞机制 :钙拮抗剂Ｖｅｒａｐａｉｌ、…     

血管钠肽对低氧性肺动脉高压和肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究血管钠肽（VNP）对慢性低氧性肺动脉高压（HPH）大鼠的治疗作用和肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,并与C型钠尿肽（CNP）和心房钠尿肽（ANP）作比较。方法：采用整体静脉给药、离体血管灌流和PASMC培养等方法,测定肺血流动力学参数、离体肺动脉的等长张力和PASMC增殖的变化。结果：（1）VNP、CNP和ANP都能有效降低HPH大鼠的平均肺动脉压（mPAP),P＜0．05－0．01,除CNP外,VNP和ANP并能明显降低肺血管阻力（PVR）,P＜0．05－0．01,其中VNP降低mPAP和PVR的作用明显大于CNP和ANP。（2）VNP对离体肺支 浓度依赖性舒张作用,该作用不受内皮细胞的影响;但在浴槽内预先加入格列苯脲或普萘洛尔可显著降低肺动脉对VNP和CNP的最大舒张反应（Rmax),P＜0．05－0．01,而对ANP却无明显影响 。（3）VNP能明显抑制低氧介导的PASMC的增殖及DNA合成,其作用明显大于CNP和ANP。结论：VNP对HPH具有显著的治疗作用,它是一个新型、强效、非内皮依赖性的血管松弛多肽和细胞增殖负调控因子。     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞STAT3表达及细胞增殖的影响

目的探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达及细胞增殖的影响。方法采用组织块法原代培养PAsMCS并进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2、6、12和24h STAT 3mRNA和酪氨酸活性水平的变化;。H-TdR掺入法观察缺氧6、12和24h细胞增殖情况。结果缺氧2hSTAT3mRNA表达升高,6h达高峰。12h开始下降,但仍高于常氧组;Western blot定量分析示缺氧6hSTAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h达高峰,24h下降;^3H-TdR掺入法测定结果示PASMCs。H-TdR掺入量在缺氧6h开始增加,随着缺氧时间延长,。H-TdR掺入量逐渐增加,至缺氧24h。HTdR掺入量最高。结论缺氧诱导PASMCs中STAT3 mRNA和蛋白酪氨酸活性水平增加,提示STAT3在缺氧致PASMCs增殖过程中可能发挥重要作用。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

实验研究了低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细介素 6 (IL -6 )表达的影响。低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞 ,采用RT -PCR方法检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的表达水平 ,并测定细胞培养上清液IL -6的活性。结果为低氧复合培养 2h组肺动脉平滑肌细胞中IL -6mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,代氧 1 2h组有所降低 ,但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养 2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL -6的活性明显升高 ,6h组细胞上清中IL -6的活性水平最高 ,1 2h组的活性降低 ,2 4h组的水平低于 2h组。IL -6活性…     

外源性CO对大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移的影响

肺动脉中膜的细胞成分是平滑肌细胞 (ＳＭＣ)。在缺氧肺动脉高压等多种病理条件下 ,肺动脉内膜不同程度受损 ,受直接或间接因素的影响 ,中膜的ＳＭＣ可以向膜迁移并大量增值。近年来研究发现低浓度一氧化碳 (ＣＯ)处理后ＳＭＣ增殖可明显被抑制 ,为了探讨外源性ＣＯ对大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移的影响 ,作者体外培养了大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,用外源性ＣＯ处理 2 4ｈ、4 8ｈ、72ｈ ,检测平滑肌细胞迁移情况。结果显示 :2 4ｈ、4 8ｈ和 72ｈ后未处理的对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移距离分别为 ( 3 3 2 .1 6± 4 9.94 )ｎｍ、( 44 2 .82± 59.…     

低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶 (JAK)基因表达的作用。鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养 ,采用半定量RT -PCR技术检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的JAK1、JAK2 和JAK3基因的表达水平 ,并对PCR产物进行测序。结果显示低氧复合培养 2h组肺动平滑肌细胞中JAK1、JAK2 、JAK3mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,与正常组比较均有明显差别 ,低氧 1 2h组的表达量低于 6h组 ,但高于正常组。RT -PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结果表明 ,缺氧可以明确促进JAK基因在PAS…     

新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨新型内皮素受体拮抗剂ETP-508对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法贴壁原代培养的PASMCs分为4组:常氧组(氧浓度21%),低氧组(氧浓度2%),低氧 BQ-485组(BQ-485的终浓度分别为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L),低氧 ETP-508组(ETP-508的终浓度分别为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)。4组细胞均分别培养24、48、72h后,采用MTT法(波长492nm)检测BQ-485和ETP-508对PASMCs增殖的影响。按上述分组培养细胞48h,采用流式细胞仪测定细胞周期;放免法测定培养上清液中内皮素-1(ET-1)的含量。结果24h时各实验组A值差异不明显;48h时低氧组A值明显增加(P<0.01),低氧 BQ-485组、低氧 ETP-508组在10-8、10-7、10-6mol/L时A值下降,与低氧组比较有统计学意义(P<0.01);72h时低氧组A值仍高于常氧组,但较48h时略下降(P<0.05)。48h时低氧组G2、S期细胞比率、DNA合成增加,与常氧组比较有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与低氧组比较,低氧 BQ-485组、低氧 ETP-508组G2、S期细胞比率下降(P<0.05),G1期细胞增多(P<0.05),DNA合成减少。48h时低氧组ET-1水平增高(P<0.01),给予BQ-485、ETP-508后ET-1水平降低,10-7mol/L BQ-485、10-9mol/L ETP-508可明显降低ET-1水平(P<0.01)。结论ETP-508作为一种新型内皮素受体拮抗剂能抑制低氧培养PASMCs的增殖,减少ET-1的生成,且其作用较BQ-485强。     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞的作用机制

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑机细胞的作用机制。方法：应用免疫组化、流芪细胞仪和同位素测定方法研究了缺氧条件下培养的大鼠肺动脉平滑机细胞（ＰＳＭＣ）的生长特性，测定了缺氧时其游离钙浓度「Ｃａ＾２＋」和环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量变化。结果：①缺氧条件ＰＳＭＣ生长特性有改变；②「Ｃａ＾２＋」明显升高，随时间可持续升高；③ｃＡＭＰ呈现先降后升，ｃＧＭＰ整体水平上升。结论：缺氧可能     

不同因素对肺动脉平滑肌细胞线粒体游离钙的作用效应

目的:通过观察肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)在化学缺氧、细胞膜去极化和血管舒缩活性物质等不同因素作用下线粒体游离钙([Ca2 ]mit)的动态变化特点,探讨:[Ca2 ]mit与缺氧性肺动脉收缩(hypoxia pulmonary artery constriction,HPV)发生之间的关联。方法:分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,负载线粒体钙荧光指示剂Rhod-5F(5μmol/L),分组施加2mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)化学缺氧、18mmol/LKCl、10-6mol/L血管紧张素II(Ang II)和100μmol/L一氧化氮供体(SIN-1)等不同刺激因素,在激光共聚焦扫描显微镜下观察[Ca2 ]mit的动态的变化。结果:用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激,[Ca2 ]mit荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值,继而于100s缓慢回升,逐渐高于起始时荧光强度;向PASMCs加入KCl后,[Ca2 ]mit迅速升高,40s后缓慢下降,于400s后恢复并维持在初始值;向PASMCs加入AngII后,[Ca2 ]mit迅速小幅度升高,于20s时开始降低,于100s时至最低,形成低谷平台,持续至400s时逐渐回升,于600s恢复接近初始水平;向PASMCs加入SIN-1后,[Ca2 ]mit迅速降低,于80s时降至最低,形成低谷平台持续至160s时开始回升,于200s时回升至平稳水平但仍低于初始值。结论:给予PASMCs缺氧、细胞膜去极化、舒缩血管活性物质等刺激,可以引起线粒体Ca2 发生相应变化,线粒体[Ca2 ]mit可能在HPV发生中也起着重要作用。     

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子 1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth musclecells,PASMCs)内低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒(yifeihuoxue granule,YFHXG)含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧+YFHXG组(16.5、3.3、0.66 g/kg)。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧+YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。     

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子-1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterysmoothmusclecells,PASMCs）内低氧诱导因子-1αhypoxiainduciblefactor一1alpha,HIF-1α和活性氧（Feacriveoxygenspecies,ROS）的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒（yifeihuoxuegranule,YFHXG）含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧＋YFHXG组（16．5、3．3、0．66g／kg）。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧＋YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。     

脂多糖对复合培养的肺微血管内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞生长周期的影响

以脂多糖（LPS）处理复合培养的大鼠肺微血管内皮细胞（LMVEC）和肺动脉平滑肌细胞（PASMC），利用流式细胞仪检测LMVEC和PASMC细胞周期的变化。结果发现，单独培养和复合培养时，LPS均能使G1期细胞减少，S G2/M期细胞增多；LPS处理16h后，复合培养组LMVEC和PASMC较单独培养组G1期细胞增多，S G2/M细胞数减少；LPS可使单独培养的LMVEC S期细胞增多。说明LPS可促进LMVEC和PASMC分裂、增殖，二者复合培养可减轻LPS引起的LMVEC和PASMC增殖作用；LMVEC和PASMC在细胞增殖方面存在着复杂的调节关系。     

低氧对肺动脉高压大鼠中介素合成和分泌的影响

中介素（IMD）是近年新发现的一种血管活性肽，有研究表明其有扩血管、降血压的作用，且对缺血心肌、肺组织有保护作用。但对其生理病理研究还处于起步阶段，本文旨在通过制备大鼠低氧性肺动脉高压模型，应用放射免疫法检测低氧大鼠血浆中介素含量，探讨低氧对中介素合成、分泌的影响及中介素在低氧性肺动脉高压中的作用和意义。作者选取成年雄性Wistar大鼠68只，     

低氧高二氧化碳对肺动脉基质金属蛋白酶体系的影响

作者在研究慢性低O2 高CO2 肺动脉高压大鼠模型上 ,测定大鼠肺组织、肺细小动脉MMP -2、MMP -9、TIMP -2的动态变化 ,探讨基质金属蛋白酶体系在慢性低O2 高CO2 性肺动脉高压和肺血管重建中的作用及其作用机制 ,为肺动脉高压的防治提供思路。作者将二级雄性SD大鼠 4 0只 ,随机分成正常组对照组 (A组 )、低O2 高CO2 一周组 (B组 )、2周组 (C组 )与 3周组 (D组 ) ,每组 1 0只。将B、C、D三组动物放入常压低O2 高CO2 舱内 ,吸入气氧浓度为 9%～ 1 1 % ,CO2 浓度为 5 %～ 6 % ,每天 9h ,每周 6天。A组大鼠除吸入空气外 ,其它饲养条…     

低氧高二氧化碳对肺动脉内皮素-1基因表达的影响

慢性阻塞性肺疾病(ＣＯＰＤ)发病的中心环节是肺动脉高压的形成,阐明肺动脉高压的形成机制以及寻求理想抑制肺动脉高压药物一直是ＣＯＰＤ、肺心病防治的重要研究课。作者采用慢性低氧(Ｏ2)高二氧化碳(ＣＯ2)肺动脉高压大鼠模型,研究肺动脉内皮素-1(ＥＴ-1)基因表达变化在肺动脉高压形成和肺血管结构重建中的作用及川芎嗪的影响。将ＳＤ大鼠分为正常对照组(Ａ组)、4周低Ｏ2高ＣＯ2组(Ｂ组)、4周低Ｏ2高ＣＯ2 川芎嗪组(Ｃ组)。采用透射电镜、图像分析、原位杂交等方法,研究4周低Ｏ2高ＣＯ2和川芎嗪对大鼠肺动脉平均压(ｍＰＡＰ)、颈动脉平均…     

慢性缺氧抑制肺动脉平滑肌细胞钾通道活性

为了研究慢性缺氧性肺动脉高压发生机制中钾通道活性改变的作用及其开放剂卡吗克林对钾通道活性的调控作用，本文作者把２０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组１０只和缺氧组１０只，缺氧组大鼠缺氧３周，每天缺氧８小时；运用急性酶分离法对Ｗｉｓｔａｒ大鼠肺动脉平滑肌...