连接蛋白43调控成骨细胞分子机制

连接蛋白43(CX43)是骨细胞中表达最多的缝隙连接蛋白,由CX43构成的缝隙连接或半通道在骨细胞间通讯中发挥至关重要的作用。大量研究表明,CX43可影响骨细胞、成骨细胞的功能,最终影响骨骼的发育和塑形。然而,关于CX43调控骨的分子机制研究较少。该文就CX43调控成骨细胞分子机制作一综述。     

缝隙连接及connexin43在骨质疏松症中的研究进展

缝隙连接(gap junction,GJ)是相邻细胞间传导通讯的一种特殊膜通道结构,缝隙连接在骨组织中各细胞间物质及信号传导通讯中起了重要的作用.本文从缝隙连接通讯(GJIC)及connexin43(Cx43)在骨质疏松及相关疾病的研究进展进行综述.     

不稳定逼尿肌中Cx43的表达及其对细胞间通讯的影响

目的研究Cx43在不稳定逼尿肌细胞中的表达及其对不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯的影响,探讨Cx43与逼尿肌不稳定（DI）的关系。方法采用Western blot法检测正常及不稳定逼尿肌细胞中Cx43蛋白表达。构建Cx43反义真核表达载体,脂质体介导转染体外培养不稳定逼尿肌细胞（转染组）,空载体做对照转染（空载组）。利用划痕标记荧光染料示踪（SLDT）技术观察Cx43表达降低后不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯改变。结果不稳定逼尿肌细胞中Cx43表达显著增高（P〈0．01）,转染反义Cx43组不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯较空载组明显减弱（P〈0．05）。结论抑制Cx43表达可明显降低不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能,Cx43表达增高可能是不稳定逼尿肌发生的重要原因。     

连接蛋白43与睾丸肿瘤相关性的研究进展

由连接蛋白(Cx)构成,缝隙连接(GJ)是相邻细胞间的一种特殊膜结构,它调控着细胞的增殖和分化。研究表明,在多数肿瘤细胞中缝隙连接功能出现减弱或丧失,这种异常常伴随着连接蛋白表达的改变。连接蛋白43是睾丸组织中主要的连接蛋白,现就连接蛋白Cx43在睾丸肿瘤方面的研究进展作一综述。     

黄芩素对小鼠睾丸支持细胞TM4缝隙连接功能的影响

目的 :探讨黄芩素对小鼠睾丸支持细胞TM4缝隙连接功能的影响及相关机制。方法:MTT法检测黄芩素对TM4细胞的毒性作用;细胞接种荧光示踪法测定TM4细胞间荧光传递功能;Western印迹和细胞免疫荧光法分别检测黄芩素对TM4细胞中Cx43总蛋白及胞膜Cx43蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示黄芩素在0~60μmol/L浓度范围内对TM4细胞无毒性作用;细胞接种荧光示踪法结果显示0~20μmol/L的黄芩素可以显著增强TM4细胞荧光传递功能(P0.01);Western印迹结果表明黄芩素在0~20μmol/L时可以显著增加TM4细胞Cx43蛋白的表达(P0.01);细胞免疫荧光法表明,0~20μmol/L的黄芩素可以显著增加TM4细胞膜Cx43蛋白表达。结论:在一定浓度范围内(0~20μmol/L),黄芩素能够通过增加小鼠睾丸支持细胞TM4中Cx43蛋白表达而显著增强细胞缝隙连接功能。     

TGF-β1对大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白43介导缝隙连接通讯功能的影响

目的:观察转化生长因子TGF-β1对成年大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白Cx43表达以及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的影响,旨在探讨TGF-β1对Leydig细胞的影响是否与其改变细胞间GJIC功能相关。方法:将原代培养纯化的Leydig细胞分为6组:实验组分别以1、2、5、10 ng/ml的TGF-β1处理细胞20 h,空白对照组以含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液处理细胞,部分实验中以GJIC抑制剂甘珀酸(Carbenox-olone)处理细胞作为阳性对照组。采用免疫荧光法和Western印迹观察Cx43在细胞中的定位和表达变化,用荧光漂白恢复实验(FRAP)检测细胞间GJIC功能的改变。结果:Cx43表达呈斑点状散在分布于Leydig细胞的胞质和胞膜中,TGF-β1处理20 h后,Cx43在胞质中的表达强度随着TGF-β1浓度的增加较空白对照组明显增强,而其在胞膜中的表达则无明显改变。Western印迹结果显示磷酸化状态的Cx43随着TGF-β1浓度增加表现出较空白对照明显增强的趋势(P<0.05),而非磷酸化状态则无显著差异。FRAP结果显示经5 ng/ml TGF-β1作用20 h后细胞内荧光强度较空白对照明显减弱,具有显著性差异(P<0.01),且其平均荧光恢复率仅为(43.58±1.87)%。结论:TGF-β1可显著下调Leydig细胞间的GJIC功能,这种抑制作用可能通过增加其连接蛋白Cx43在细胞质中的表达,提高其磷酸化水平来实现。     

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞缝隙连接Cx43介导的细胞间通讯

RNA干扰技术的效应分子是小分子短链RNA（siRNA）。本实验拟通过转染Cx43特异性siRNA检测平滑肌细胞Cx43基因表达和细胞间通讯（GJIC）功能。探讨RNA干扰技术在血管平滑肌细胞缝隙连接功能研究中的应用。     

喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响

目的:探讨喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响。方法:体外培养前列腺癌PC3细胞,对比空白对照组、10 mg/ml顺铂对照组及顺铂联合不同浓度(1、2、5、10、15μmol/L)喹啉衍生物PQ1各组PC3细胞增殖情况,通过RT-PCR法及Western印迹法检测各组间细胞缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白表达情况。结果:喹啉衍生物PQ1浓度在1~10μmol/L联合顺铂能明显抑制PC3细胞的体外增殖,随浓度、时间的增加,抑制率相应升高。不同浓度联合药物处理PC3细胞后,Cx43 mRNA及蛋白表达也有不同程度升高。结论:喹啉衍生物可以通过上调前列腺癌PC3细胞间缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白的表达水平来促进前列腺癌PC3细胞的细胞间缝隙连接功能,增强顺铂对前列腺癌PC3细胞的杀伤作用。     

心肌缝隙连接蛋白43侧膜化机制的研究进展

背景 缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是心肌缝隙连接的主要结构,多种心脏病理过程(如缺血/再灌注等)均可使Cx43重分布至侧膜而发生侧膜化.这种侧膜化使缝隙连接脱耦连,导致折返性心律失常,严重影响心脏的功能.目的 旨在从Cx43转运及定位过程来阐述心肌Cx43侧膜化的分子机制.内容 Cx43侧膜化与闰盘处N钙黏蛋白、桥粒、紧密连接蛋白-1(zonulaoccludens-1,ZO-1)等连接蛋白(connexins,Cxs)的解耦连,以及细胞骨架蛋白介导的Cx43重定向转运密切相关;此外,Cx43的磷酸化、乙酰化也参与了侧膜化的过程.从Cxs、细胞骨架蛋白、磷酸化、乙酰化4个方面就Cx43侧膜化的分子机制展开具体讨论.趋向 为进一步研究Cx43侧膜化机制及临床治疗折返性心律失常提供相关思路及分子基础.     

逼尿肌不稳定缝隙连接蛋白基因及其蛋白的表达意义

目的　研究膀胱逼尿肌缝隙连接蛋白 (Cx)基因及其蛋白的表达与逼尿肌不稳定(DI)发生的关系。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术及Western blot方法 ,从转录及翻译水平检测细胞间缝隙连接蛋白基因及其蛋白在DI中的表达变化。结果　DI组Cx43、Cx40mRNA表达水平高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,而Cx45mRNA表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;Cx43蛋白表达量DI组也明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　连接蛋白基因及其蛋白在DI中表达增高 ,提示细胞间兴奋传递增强与DI的发生有关