糖尿病患者外周血白细胞GSK-3及MMSE的测定

目的 检测糖尿病患者外周血白细胞GSK-3的活性以探讨糖尿病患者饼发阿尔茨海默病的可能发病机制。方法选择Ⅱ型糖尿病患者42例及健康体检者31例为对照组。分别检测其外周血白细胞GSK～3的活性;同时测评其MMSE评分;并比较两组酶活性及MMSE评分情况。结果外周血白细胞GSK-3活性糖尿病组明显高于与对照组;而MMSE评分糖尿病组明显低于对照组;差异有显著性意义。结论糖尿病患者外周血白细胞GSK-3的活性明显增高,GSK-3的活性增高可以导致微管相关蛋白tau过度磷酸化及β淀粉样蛋白过度堆聚,从而诱发阿尔茨海默病。     

胰岛素降低糖尿病大鼠大脑皮质β-淀粉样蛋白含量的可能机制

目的探讨胰岛素降低糖尿病大鼠大脑皮质神经元中β淀粉样蛋白(amyloidbeta peptide,Aβ)的可能机制。方法雄性SD大鼠15只,随机分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病+胰岛素组,每组5只。用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,用32P放射性配体结合实验检测3组大鼠大脑皮质神经元中糖原合酶激酶3(GSK3)的活性,酶联免疫吸附(ELISA)法检测Aβ的产量及Western blot检测淀粉样前体蛋白(APP)的表达。结果与对照组[GSK3(1.04±0.11),Aβ40(40.92±5.34)pg/μl,Aβ42(29.64±3.19)pg/μl,APP(1.05±0.08)]相比,糖尿病组GSK3活性(2.02±0.12)和Aβ生成[Aβ40(67.53±11.69)pg/μl,Aβ42(45.02±4.10)pg/μl]明显增加(P<0.01),APP(1.52±0.16)表达增加(P<0.05);应用胰岛素后能明显降低GSK3活性(1.21±0.17,P<0.01)和糖尿病大鼠大脑皮质Aβ[Aβ40(42.96±6.03)pg/μl,P<0.05;Aβ42(31.09±3.94)pg/μl,P<0.01]水平,但APP的表达(1.39±0.13)无明显改变。结论糖尿病大鼠皮质神经元Aβ生成增加,GSK3在这一过程中起着重要作用;胰岛素通过抑制GSK3可降低Aβ的生成。     

Aβ25-35注射诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化

目的　观察大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 5后 ,神经元ser199/ser2 0 2、ser396、thr2 31等位点tau蛋白磷酸化的水平以及糖原合成激酶 3β(GSK 3β)的活性变化 ,探讨Aβ2 5 3 5与tau蛋白异常磷酸化的关系及机制。方法　应用脑立体定向技术给成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 55nmol,术后 14d ,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变 ,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术观察大鼠海马tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的表达水平 ,免疫蛋白印迹技术检测海马GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平变化。 结果　凝聚态Aβ2 5 3 5组神经元纤维走行紊乱、增粗、肿胀 ,密集成宽带状 ,轴突深染。海马神经元tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的阳性表达数 (分别为 38 2± 5 9,10 7 6± 8 4 ,78 4± 3 7)明显高于正常组和生理盐水组 (P <0 0 1) ,GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平亦明显高于正常组和生理盐水组。 结论　海马背侧注射Aβ2 5 3 5可通过激活GSK 3β诱导tau蛋白发生异常磷酸化。     

慢性脑灌注不足对tau蛋白磷酸化及其相关酶表达的影响

神经原纤维缠结(neurofibrillartangles,NFTs)是阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease ,AD)的标志性病理特征之一,tau蛋白的过度磷酸化被认为是NFTs形成的关键[1] 。近年来,脑血管因素在AD中的作用备受关注,但是,它们与AD神经病理之间的关系还不清楚[2 ,3 ] 。我们通过永久性双侧颈总动脉结扎(2VO)制作慢性脑灌注不足(chroniccerebrovascularinsufficiency ,CVI)大鼠模型,观察海马神经元中Ser2 0 2位点磷酸化的tau蛋白(PS2 0 2 tau)、糖原合成酶激酶3β(glycogensynthasekinase 3β,GSK 3β)和蛋白磷酸酯酶2A (proteinphosphatase 2…     

tau蛋白和磷酸化tau蛋白对神经系统疾病的影响

tau蛋白是一种神经元微管相关蛋白,参与轴突微管组装的调节。其磷酸化水平的增高与多种神经退行性疾病息息相关,如阿尔茨海默病、帕金森病、额颞叶痴呆、亨廷顿病,等。有研究表明其与脑血管病的发生发展密不可分。而昼夜节律作为维持机体日常生命活动以及体内稳态的重要调节器,受昼夜节律因子的调节,其紊乱可诱发神经退行性疾病相关致病蛋白的积累和相关致病激素的异常分泌,从而加剧疾病的进展。文中主要围绕磷酸化tau蛋白和昼夜节律对神经系统疾病的影响进行论述。     

硫胺素缺乏引起脑内β淀粉样蛋白沉积和tau蛋白磷酸化的增加

目的：探讨硫胺素缺乏（TD）对脑内β淀粉样蛋白（Aβ）沉积、tau蛋白磷酸化的影响。方法：硫胺素剥夺饮食结合腹腔注射吡啶硫胺制作TD小鼠模型,正常对照组给予正常饮食及腹腔注射生理盐水。造模13d后取脑,行苏木精-伊红染色观察两组小鼠脑内易损区域病理改变,免疫组织化学染色检测脑内Aβ沉积、tau蛋白磷酸化及β-分泌酶（BACE）的表达情况。结果：苏木精-伊红染色显示TD模型组小鼠内侧丘脑出现典型的对称性针尖样出血;免疫组化显示TD模型组小鼠皮质、海马及丘脑均出现Aβ沉积,且丘脑Aβ沉积较皮质及海马更为明显,tau蛋白磷酸化及BACE的阳性细胞数显著增加。正常对照组小鼠苏木精-伊红染色脑内未见病理损伤,皮质、海马及丘脑均未发现Aβ沉积,tau蛋白磷酸化及表达BACE的阳性细胞数均明显低于TD模型组,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：TD可引起Aβ沉积、tau蛋白磷酸化增加等阿尔茨海默病的特征性病理改变,且Aβ沉积可能与上调BACE的表达有关。     

丹参酮ⅡA对β淀粉样蛋白25-35片段的作用及机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导的褐家鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞系抑制中的作用及机制。方法MTT检测丹参酮ⅡA(2μmol/L)对Aβ25-35(20mmol/L)处理过的细胞活性,应用公式(1-实验组平均OD值/对照组OD值)×100%计算细胞抑制率。RT-PCR、westernblot检测细胞内GSK3β及pi GSK3β的表达量。结果丹参酮ⅡA有效的拮抗了Aβ25-35引起的细胞抑制及GSK3β的高表达和低磷酸化。结论Aβ25-35可以引起PC12细胞抑制,而丹参酮可以拮抗Aβ25-35的作用,并且可能是通过GSK3β通路而发挥作用。     

β淀粉样蛋白25-35诱导皮质神经元tau蛋白过度磷酸化

目前阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)研究仍缺乏理想的动物模型,细胞模型通过复制AD的某些分子生化改变,可用于研究AD的发病机制和筛选治疗药物。脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的大量沉积和tau蛋白过度磷酸化是AD的两大主要分子生化改变。淀粉样瀑布学说认为Aβ可直接诱导神经元tau     

阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中tau蛋白及β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对诊断阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的早期诊断价值,寻找AD理想的生物学标志.方法 采用酶联免疫吸附法检测36例AD、24例血管性痴呆患者(vascular dementia,VD)和26名正常对照者(对照组)CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的变化.结果 CSF中tau蛋白平均浓度:AD组(336±126)ng/L,VD组(183±96)ng/L,对照组(98±54)ng/L,AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CSF中Aβ1-42平均浓度:AD组(341β113)ng/L,VD组(457±132)ng/L,对照组(502±167)ng/L,AD组CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组.差异有显著性意义(P<0.05).结论 脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化,不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性,而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标.     

米诺环素改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的机制研究

目的探索米诺环素是否在血管性痴呆导致的认知功能损害发生发展中发挥一定的神经保护作用,并进一步分析参与其中的相关分子机制。 方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组和米诺环素治疗组。结扎双侧颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型,术后腹腔注射米诺环素（25,50 mg/kg）,28 d后进行水迷宫行为学实验检测认知变化,HE染色和Western blotting分析大鼠海马神经细胞凋亡的相关机制。 结果（1）水迷宫认知功能测试显示,米诺环素能够显著缩短血管性痴呆大鼠寻找平台的潜伏期,并且明显延长在目标象限的停留时间,P<0.05为差异具有统计学意义。（2）HE染色显示米诺环素能够显著减轻模型组大鼠海马神经细胞损伤。（3）米诺环素治疗组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值较模型组明显下降,P<0.05为差异具有统计学意义。（4）与模型组相比,米诺环素组磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）及磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达水平明显升高,磷酸化糖原合酶激酶-3β（p-GSK-3β）蛋白表达却显著下降,P<0.05为差异具有统计学意义。 结论米诺环素通过激活PI3K/AKT信号通路,抑制该通路下游靶分子GSK-3β活性,减少海马神经细胞凋亡的发生,在神经细胞保护和改善认知功能障碍中发挥重要作用。     

老年期痴呆患者脑脊液神经元特异性烯醇酶、髓鞘碱性蛋白及tau蛋白含量的研究

为寻求较特异的对阿尔茨海默病(AD)生物学早期诊断指标,并与其它痴呆相鉴别,我们对老年期痴呆患者及精神分裂症患者脑脊液神经元特异性烯醇酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)及tau蛋白含量进行了测定,初步结果如下.     

中重度阿尔茨海默病与血管性痴呆患者脑脊液tau蛋白的预研究

背景：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）患病率高、医疗费用高、照料困难,已成为老龄化社会面临的严重社会、经济问题。迄今,AD的诊断尚无可靠的客观诊断指标。近年来,国内外对AD患者脑脊液生物学标志物的研究甚多,AD患者脑脊液T-tau、P-tau升高已是不争的事实。但是,这些标志物与痴呆严重程度以及随病程进展的关系还有待进一步深入研究。
　　目标：比较中重度阿尔茨海默病（Alzheimer’s dis-ease,AD）与血管性痴呆（vascular demenita,VD）患者脑脊液（cerebrospinal lfuid,CSF）总tau蛋白（total tau,T-tau）和第231位苏氨酸磷酸化tau蛋白（P-tau231）的基线浓度,随访6个月,观察它们在AD患者与对照组之间的差异以及随病程进展的变化。
　　方法：基线期中度AD患者11例（10≤ MMSE ≤20）,重度AD患者10例（MMSE ≤9）以及年龄匹配的重度VD患者7例,其中7例AD与6例VD完成了6个月的随访。用双抗体夹心ELISA检测脑脊液T-tau, P-tau231的浓度。
　　结果：基线期AD组与VD组患者CSF T-tau的浓度分别为470.08（263.58）pg/mL、208.76(42.24）pg/mL,差异有统计学意义（Z=-3.369,p <0.001）;CSF P-tau231的浓度分别为90.94(49.86）pg/mL、42.96（13.10） pg/mL,差异有统计学意义（Z=-3.237,p<0.001）。重度AD与重度VD相比,CSF T-tau（Z=-2.830,p =0.005）、CSF P-tau231（Z =-2.392,p=0.017）的浓度仍有统计学差异,重度AD患者 CSF T-tau、CSF P-tau231的浓度比重度VD患者高。中度AD患者CSF P-tau231（Z=-2.605, p=0.009）的浓度显著高于重度AD患者。6个月随访期间,两组患者脑脊液T-tau、P-tau231浓度的变化均无统计学意义。
　　结论：AD患者脑脊液T-tau、P-tau231与VD相比显著升高。中度AD患者CSF P-tau231显著高于重度AD患者。6个月随访期间两组患者脑脊液T-tau、P-tau231浓度的变化均无统计学意义。     

大鼠海马注射溶血磷脂酸诱导tau蛋白高度磷酸化和凋亡研究

目的研究溶血磷脂酸(LPA)在大鼠体内对海马神经细胞tau蛋白磷酸化水平的影响和诱导神经细胞凋亡的细胞毒性作用.方法将72只SD大鼠分为实验组(n=32)、实验对照组(n=32)和对照组(n=8),利用脑立体定位技术在大鼠双侧海马微量注射溶血磷脂酸、溶剂,于注射后12、24、48和72 h各不同时间点采用免疫组化方法测定该区域神经细胞中ser202位点磷酸化tau蛋白(PS202-tau)的表达,TUNEL技术检测细胞凋亡.结果实验组LPA注射后24 h海马CA4区神经细胞中PS202-tau阳性表达到达高峰,阳性表达高于对照组和实验对照组(P＜0.05).LPA注射后48 h TUNEL阳性细胞数达高峰,每个视野中阳性细胞数多于对照组和实验对照组(P＜0.05).结论LPA在动物整体水平可诱导大鼠海马神经细胞tau蛋白高度磷酸化,并导致神经细胞发生凋亡.     

糖原合成酶激酶3在阿尔茨海默病发病机制中的作用

大量研究报告显示,糖原合成酶激酶-3（glycogen synthase kinase3,GSK3）在阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）发病机制中起着重要的作用。AD患者存在GSK3活性的增强和水平的提高。细胞培养、无脊椎动物和哺乳类动物模型研究发现,GSK3活性增强导致tau的过度磷酸化、AB产生的增加、学习和记忆能力的缺损,同时伴有神经退行性变。GSK3抑制剂能防止AD转基因动物tau的过度磷酸化,使得GSK3抑制剂有望用于预防和治疗AD。     

盐酸美金刚对癫痫大鼠海马GSK-3β表达的影响

目的探讨盐酸美金刚(memantine,MN)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃慢性癫痫大鼠学习记忆能力及海马中糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)表达的影响。方法动物分为正常对照组(NC)、癫痫组(PTZ)、盐酸美金刚干预组(MN),采用PTZ致痫模型,Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot和RT-PCR方法检测大鼠海马GSK-3β、P-GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达。结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。MN组大鼠学习记忆能力明显好转,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。结论 PTZ点燃慢性癫痫大鼠学习记忆受损,其海马组织中P-GSK-3β蛋白表达明显降低,P-GSK-3β可能参与癫痫后认知功能障碍发病机制;盐酸美金刚可提高P-GSK-3β蛋白表达水平,从而改善癫痫大鼠学习记忆能力。     

脑脊液磷酸化tau蛋白与总tau蛋白比值对散发性Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的通过对CJD病人脑脊液磷酸化tau蛋白与总tau蛋白比值的研究,探讨其对散发性CJD的诊断价值。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测13例散发性CJD、11例其它痴呆及29例非痴呆脑脊液磷酸化tau蛋白。同时测定脑脊液磷酸化tau蛋白与总tau蛋白的比值。结果1.CJD组与其它两组相比,p-tau/t-tau的比值有明显差异(P<0.05)。2.在CJD组高浓度的磷酸化tau蛋白与进展快,病程短有关(P<0.01)。结论测定p-tau/t-tau的比值有助于CJD与AD等痴呆类疾病的鉴别,对判定预后有一定帮助。     

氯化锂在肢体缺血后处理中对脑缺血再灌注大鼠的糖原合酶激酶3β/微管相关蛋白2a/b通路的影响

目的探讨肢体缺血后处理中氯化锂对脑缺血再灌注大鼠糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其下游微管相关蛋白2a/b(MAP2a/b)的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组(I/R组),肢体缺血后处理组(Lpost C组)和氯化锂组(Li Cl组),15只每组。制作脑缺血再灌注,肢体缺血后处理及氯化锂干预大鼠模型,于大鼠脑缺血再灌注24 h后进行神经功能缺损评分和大鼠脑梗死体积测定;应用Western blotting法检测P-GSK3β(ser9),MAP2a/b的蛋白表达。结果除了假手术组,I/R组神经功能缺损评分和脑梗死体积最大,Lpost C组较小,Li Cl组神经功能缺损评分和脑梗死体积最小(均P0.05)。与I/R组相比,Lpost C组磷酸化GSK3β(P-GSK3β)(ser9)及MAP2a/b表达增高(均P0.05)。与Lpost C组相比,Li Cl组P-GSK3β(ser9)及MAP2a/b表达明显升高(均P0.05)。结论肢体缺血后处理使P-GSK3β(ser9)表达增加,激活GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注损伤起保护作用。氯化锂通过增加MAP2 a/b的稳定性增强对脑缺血后处理的脑保护作用。     

腺苷预处理通过增加GSK-3β磷酸化水平减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的 观察腺苷预处理对脑缺血-再灌注(IR)损伤后大鼠海马组织内神经元核抗原(NeuN)、微管相关蛋白2(MAP2)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)和糖原合酶激酶(GSK-3β)表达的影响,探讨腺苷对大鼠IR的保护机制。方法 将27只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和腺苷预处理(AP组),每组9只,IR组和AP组建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用5分制神经行为学评分标准对大鼠进行评分;以TTC染色法观察各组大鼠脑梗死情况,并计算脑梗死体积比例,免疫荧光法检测各组大鼠脑组织中p-GSK-3β的表达,Western blot法检测各组大鼠脑组织中NeuN、MAP2、NSE、p-GSK-3β和GSK-3β的表达。结果 与Sham组比较,IR组大鼠神经功能评分和脑梗死体积比例明显增高(P<0.01),IR组p-GSK-3β、NeuN、MAP2、NSE的表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值明显降低(P<0.05);与IR组比较,AP组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积比例...     

伏立诺他对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能及脑内tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能和脑内tau蛋白磷酸化的影响.方法 分别选择12只5XFAD转基因(5XFAD-CC)和野生型(WT)小鼠,采用HDACi伏立诺他(SAHA,每组7只)与溶媒对照(每组5只)处理动物,利用Y-迷宫、Morris水迷宫评估5XFAD-CC小鼠学习和记忆能力,通过蛋白免疫印迹检测α-tubulin乙酰化、tau和糖原合成激酶3β(GSK313)蛋白及其磷酸化水平.结果 SAHA可改善5XFAD-CC小鼠即刻记忆、工作记忆能力,SAHA组进入新奇区域的次数(39.10％ ±2.25％,t=2.688,P=0.031)和停留时间(26.81％ ±0.78％,t=3.271,P=0.017)较溶媒对照组(分别为30.33％±2.32％和19.80％±1.99％)明显增加;同时,SAHA可改善5XFAD-CC小鼠空间参考记忆能力,SAHA组寻找平台的潜伏期较溶媒对照组缩短(F=5.936,P=0.045)及进入原平台所在象限时间增加(31.70％ ±4.21％,t=2.317,P=0.049).SAHA可增加5XFAD-CC和WT小鼠脑内HDAC6底物α-tubulin乙酰化水平(分别增加26.42％和29.64％),降低5XFAD-CC小鼠海马tau-pSer396、tau-pSer404和tau-pThr231磷酸化水平(与溶媒对照组比较,分别减少24.22％、48.98％和26.95％)及GSK3β磷酸化水平(31.29％).结论 SAHA可改善5XFAD小鼠的学习和记忆能力,可能与其降低tau和GSKSB蛋白磷酸化水平有关.