肺炎克雷伯菌Ⅱ类整合子的分布及结构分析

目的 研究肺炎克雷伯菌中Ⅱ类整合子携带率,分析Ⅱ类整合子基因盒结构.方法 采用PCR法检测98株临床分离肺炎克雷伯菌中的Ⅱ类整合酶基因,检测Ⅱ类整合酶基因阳性菌株中的intI1、sat、ereA、aadA1、orfX、dfrA1、tnsE、tnsD、tnsC、tnsB、tnsA基因.结果 在1株肺炎克雷伯菌中检出Ⅱ类整合酶基因,阳性率为1%;该菌株同时携带intI1、sat、aadA1、orfX、dfrA1、tnsE、tnsD、tnsC、tnsB、tnsA基因;Ⅱ类整合子的结构与公布的AY639870.1、DQ176869.1、DQ275532.1、DQ268533.1序列中的Ⅱ类整合子结构完全相同.结论 肺炎克雷伯菌中Ⅱ类整合子的携带率较低,Ⅱ类整合子结构无新的变化.     

不同年代铜绿假单胞菌1型整合子结构比较

目的研究1992-1996年和2003-2005年两个时间段90份铜绿假单胞菌1型整合子结构，比较其结构差异，以了解不同年代1型整合子变化趋势。方法用常规和长片段PCR方法扩增1型整合子及耐药基因，并对PCR产物进行测序和GenBank比对分析。结果41份1992—1996年间样本有13份检出1型整合子结构，长片段PCR扩增1型整合子DNA平均长度为1868bp，平均包含2个耐药基因，包括qaeE△1（n=6）、sul1（n=14）、aadA1（n=2）、aadB（n=1）、PSE-1（n=2）和tetA（n=1）等6种耐药基因，形成5种耐药基因盒组合。49份2003-2005年间样本中有19份检出1型整合子结构，长片段PCR扩增产物平均长度为3383bp，平均包含3．6个耐药基因，包括qaeE△1（n=18）、sul1（n：25）、aadA1（n=6）、aadB（n=7）、aaeA4（n=2）、PSE-1（n=3）、VEB-1（n=4）、OXA10（n=1）、cm1A（n=1）和tetA（n=2）10种耐药基因，形成9种耐药基因盒组合。结论根据整合子碱基数量和所携带耐药基因盒数量，发现2003--2005年间检出的1型整合子结构比1992—1996间检出的复杂程度增加。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药株中整合子基因研究

目的 探讨整合子介导的耐药机制在产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌多重耐药性中的作用。方法 设计整合子特异引物，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因，并应用PCR定位(mapping)技术和DNA测序研究整合子内携带的耐药基因。结果 44．4％的产ESBLs的大肠埃希菌整合子检测阳性，发现550，l300，l800bp和2600bp等4种不同大小的整合子结构，其中66．6％的整合子大于550bp。整合子中分别携带二氢叶酸还原酶、核苷转移酶和B内酰胺酶等耐药基因。结论 产ESBLs的大肠埃希菌中的整合子机制参与了多重耐药的形成，因整合子可以携带多种耐药基因，容易引起多重耐药的水平传播，应引起高度的重视。     

江阴地区三类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的流行率及Ⅰ类整合子结构研究

目的了解2005—2006年度我院铜绿假单胞菌对几种常用抗生素的耐药率,分析我院三类整合子的流行情况;明确我院Ⅰ类整合子的基因结构。方法采用药敏纸片法检测100株铜绿假单胞菌对环丙沙星、头孢噻肟、庆大霉素和亚胺培南等的耐药率;用煮沸法提取100株铜绿假单胞菌的DNA模板;应用PCR技术检测三类整合子的流行率及其Ⅰ类整合子结构分析。结果100株铜绿假单胞菌对几种常用药物的耐药率分别为环丙沙星32％、头孢噻肟45％、庆大霉素82％、头孢西丁37％、妥布霉素39％和亚胺培南43％。三类整合子的流行率分别为Ⅰ类53％、Ⅱ类21％、Ⅲ类5％。序列分析表明,在Ⅰ类整合子可变区存在dfrA17、aadA2基因盒。结论4种药物的耐药率都有增高,以庆大霉素最显著,铜绿假单胞菌的多重耐药可能与Ⅰ类整合子的流行有重要的关系。     

O139群霍乱弧菌Ⅰ类整合子结构分析

O139群霍乱弧菌是一种引起严重腹泻的肠道病原菌。随着对常用抗菌药物耐药的霍乱弧菌出现，研究其耐药机制和传播也变得重要。Ⅰ类整合子是细菌获得和传播耐药基因的重要机制，携带位点特异性的重组酶系统，可特异性识别耐药基因盒结构，并将其整合在其中，形成各种组合的多重耐药整合子，转移到细菌基因组其他位点上或通过质粒等在细菌之间扩散。本科在2005年分离的1株O139群霍乱弧菌NB05030中检出发现携带andA2耐药基因盒的Ⅰ类整合子结构。     

自腹泻患儿分离的志贺菌属菌株中整合子的分布与耐药性

目的了解自腹泻患儿分离的志贺菌中整合子的分布及耐药情况。方法用PCR法检测自患儿分离的96株志贺菌属菌株的整合子基因。结果 96株志贺菌属菌株中,整合子阳性率为91.7%(88/96)。Ⅰ类整合子占72.7%(64/88),Ⅱ类整合子占83.0%(73/88),Ⅰ类和Ⅱ类整合子同时阳性49株(55.7%)。整合子阳性菌株较整合子阴性菌株耐药率高,但因后者例数较少,未见统计学差异。结论在分离的志贺菌属菌株中,整合子分布以Ⅰ类和Ⅱ类为主,未发现Ⅲ类整合子。整合子阳性志贺菌对多种抗菌药物耐药。     

头孢哌酮舒巴坦联合多西环素有效治疗的泛耐药鲍曼不动杆菌特点分析

目的 探讨头孢哌酮舒巴坦联合多西环素治疗有效的泛耐药鲍曼不动杆菌肺炎特点.方法 对2010年12月至2012年3月经头孢哌酮舒巴坦联合多西环素治疗有效的5例患者及无效的4例患者进行临床分析,比较两组患者的临床特点,并对两组患者分离的泛耐药鲍曼不动杆菌进行基因表型分析.结果 两组患者的临床特点均有碳青霉烯类抗生素、激素使用史,APACHEⅡ评分大于16分、行气管插管（套管）、总机械通气时间均大于14 d.两组细菌株均表达OXA-23碳青霉烯酶基因,头孢哌酮舒巴坦联合多西环素治疗成功组IMP金属酶基因未能扩增出;头孢哌酮舒巴坦联合多西环素治疗无效组中2株携带IMP金属酶基因,2株IMP金属酶基因PCR产物扩增阴性且整合子扩增产物约1200bp.治疗有效组不携带IMP金属酶基因且整合子扩增产物约4000 bp.结论 头孢哌酮舒巴坦联合多西环素可有效治疗部分泛耐药鲍曼不动杆菌肺炎,疗效可能与细菌碳青霉烯酶基因型和整合子结构有关.     

多重耐药大肠埃希菌中I类整合子的研究

目的分析多重耐药大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的流行情况和分子特性。方法对81株多重耐药大肠埃希菌用PCR法扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子，对大小相同的Ⅰ类整合子进行酶切分析，对纯化后的Ⅰ类整合子作DNA测序，将DNA序列在GenBank中搜索，确定Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类和排列。结果在48株（59．3％）细菌的总DNA上检测到Ⅰ类整合子，Ⅰ类整合子的大小约为600～3000bp，48株细菌各含1～2个Ⅰ类整合子，大小相同的Ⅰ类整合子有相同的酶切图谱，整合子中最常见的基因盒为dfr17（甲氧苄啶耐药基因）、aadA5（链霉素、大观霉素耐药基因），最主要的基因盒排列为dfr17-aadA5。结论整合子在多重耐药大肠埃希菌中广泛流行，整合子是介导细菌多重耐药性的重要分子机制。     

鲍曼不动杆菌整合子与耐药性的相关性研究

目的调查鲍曼不动杆菌中Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的存在情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌耐药性的关系。方法测定93株鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物PCR方法,同时扩增整合子5’保守区的I类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性PCR产物用限制性内切酶Hinf I作限制片段长度多态性（RFLP）分析进行整合子分类。结果 22株鲍曼不动杆菌检测出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性的菌株对抗菌药物的耐药率普遍比整合子阴性的菌株高。结论鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性强,细菌的多重耐药性与Ⅰ类整合子的存在相关。     

广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子及其携带耐药基因的研究

目的研究广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子携带现状及其耐药基因与菌株耐药的关系。方法采用基因扩增法,对广东省5所医院临床分离的铜绿假单胞菌三类整合子及耐药基因进行了检测,并检测阳性菌株整合子可变区。结果在30株铜绿假单胞菌中检出23株携带Ⅰ类整合子,有7株携带Ⅱ类整合子,有1株携带Ⅲ类整合子的基因。随机选取三类整合子携带菌各1株进行测序及序列分析,Ⅰ类整合子得到aac-3+aad2的组合形式;Ⅱ类整合子得到CmlA耐药基因盒;Ⅲ类整合子得到bla-MAP耐药基因盒。结论广东地区医院分离铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子的检出率最高,检出1株携带Ⅲ类整合子基因。     

细菌整合子调控机制中启动子的作用研究进展

细菌整合子中大多数的耐药基因盒不含启动子,故基因盒的转录需要依靠整合子可变区上的启动子Pc来启动。不同类型的启动子,可以从整合酶的表达、耐药基因盒的表达以及整合和剪切频率几个方面对整合子的作用产生影响,通过研究不同启动子对整合子表达的影响,研究整合子介导细菌耐药的调控机制,已成为目前的研究热点。本文从启动子的结构、分类以及不同类型启动子对整合子功能的影响等方面,对启动子在整合子调控作用机制中的研究进展做一综述。     

阴沟肠杆菌的Ⅰ类整合子检测及相关耐药基因分析

目的对临床分离的阴沟肠杆菌进行Ⅰ类整合子及相关耐药基因分析,探讨Ⅰ类整合子与阴沟肠杆菌耐药播散的关系。方法使用Vitek-AMS鉴定细菌;采用PCR扩增技术对86株阴沟肠杆菌进行Ⅰ类整合子与ESBLs耐药基因型检测;Ⅰ类整合子与耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据CLSI指南进行药敏试验。结果 86株阴沟肠杆菌中,77.9%的阴沟肠杆菌携带不同大小的整合子,从1 500 bp整合子中检出的耐药基因盒包括:aadB、aadA2;2 500bp整合子中检出PSE-1、aac6-Ⅱ、aadA4基因盒。结论阴沟肠杆菌中常携带含有多种耐药基因的Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子常参与耐药基因在菌株间进行的水平传递。     

Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性相关性研究

目的 了解鲍曼不动杆菌整合子分布情况,探讨Ⅰ类整合子与其耐药性的关系.方法 琼脂稀释法检测65株鲍曼不动杆菌耐药率,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ～Ⅲ类整合子基因;对Ⅰ类整合子阳性菌株进行可变区扩增及序列分析.结果 Ⅰ类整合子检出率为60%(39/65),未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子;Ⅰ类整合子阳性菌株对14种抗菌药物的耐药率高于阴性菌株(P＜0.05);92%(36/39)的Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,序列分析显示携带3种耐药基因aacA4、aadA1和catB8.结论 Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性密切相关,在鲍曼不动杆菌多药耐药性形成机制中起重要作用.     

整合子在鲍曼不动杆菌耐药中的作用研究

目的调查本院鲍曼不动杆菌耐药谱并了解其整合子流行情况;检测鉴定整合子类型并分析其与耐药的相关性。方法收集本院2007年临床分离鲍曼不动杆菌85株,KB法测定其药敏结果。PCR法扩增整合子的整合酶基因,并进一步鉴定整合子种类。分析鲍曼不动杆菌整合子携带与其耐药之间的关系。PCR法扩增整合子开放阅读框,观测其多态性并挑选个别产物测序。结果 85株鲍曼不动杆菌除对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦耐药率低于10%,其他15种常用抗菌药物的耐药率均超过30%。67.1%(57/85)的鲍曼不动杆菌中检出整合子;进一步鉴定结果显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。携带整合子鲍曼不动杆菌株对14种抗菌药物耐药率高于不携带整合子鲍曼不动杆菌株耐药率。开放阅读框可变区扩增产物为0.3～2.5 KB不等条带,测序结果证实含有多药耐药基因编码。结论本院鲍曼不动杆菌耐药率高,以多药耐药菌株为主,携带Ⅰ类整合子率较高;携带整合子鲍曼不动杆菌对14种抗菌药的耐药率明显增高,整合子与鲍曼不动杆菌的多重耐药性具有密切相关性。     

粘质沙雷菌整合子检测及其与耐药表型的相关性分析

目的了解本地区粘质沙雷菌临床分离株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子的携带情况,探讨整合子与其耐药表型的相关性。方法收集临床分离的经VITEK-2Compact细菌分析系统鉴定的粘质沙雷菌287株,以煮沸法制备细菌DNA作为PCR扩增模板,采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株的第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子,分析比较整合子阳性菌株与阴性菌株的药敏试验结果差异。结果在287株粘质沙雷菌中,有262株细菌检出Ⅰ类整合子,检出率为91.3%,3株细菌检出Ⅲ类整合子,未检出Ⅱ类整合子。药敏结果显示,第Ⅰ类整合子阳性菌株对环丙沙星和头孢噻肟的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株(P均0.05),对其他抗菌药物的耐药性,Ⅰ类整合子阳性菌株和阴性菌株间差异无统计学意义(P均0.05)。结论Ⅰ类整合子在粘质沙雷菌中普遍存在,Ⅰ类整合子与粘质沙雷菌的多重耐药无明显的相关性。     

ICU老年患者感染产ESBLs肺炎克雷伯菌的整合子耐药基因研究

目的了解重症监护病房(ICU)老年患者感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌整合子基因的分布及耐药率,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK-2微生物自动鉴定系统,对2013年1月至2015年12月老年ICU患者的各类临床标本进行细菌鉴定和药敏试验,产ESBLs肺炎克雷伯菌167株用PCR分析整合子基因,并通过测序明确基因。结果肺炎克雷伯菌386株中产ESBLs检出率为43.26%;整合子检出阳性率50.89%,检出全为Ⅰ类整合子;整合子可变区扩增出aadA2、aadA1、aada16、dfra27和arr-3基因;产ESBLs整合子基因阳性株耐药率明显高于整合子基因阴性菌株。结论老年ICU患者感染产ESBLs肺炎克雷伯菌和整合子基因密切相关,在细菌的耐药上整合子起着重要作用。     

整合子与大肠埃希菌耐药性的相关性研究

目的调查大肠埃希菌中Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的存在情况,分析细菌携带的整合子与大肠埃希菌耐药性的关系。方法测定87株大肠埃希菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物聚合酶链反应（PCR）方法,同时扩增整合子5′保守区的Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ作限制片段长度多态性（RFLP）分析进行整合子分类。结果 30株大肠埃希菌检测出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌株对抗菌药物的耐药率普遍比整合子阴性菌株高。结论大肠埃希菌临床分离株的耐药性强,细菌的多重耐药与Ⅰ类整合子相关。     

痰标本分离革兰阴性杆菌整合子分布及分型研究

目的研究临床痰标本分离革兰阴性杆菌中整合子的分布与分型。方法用Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类3种整合酶基因通用引物扩增398株痰标本分离革兰阴性杆菌的相应基因;用琼脂对倍稀释法检测临床菌株的MIC。结果Ⅰ类整合酶基因总阳性率为48.7%,Ⅱ类整合酶基因总阳性率为2.3%,未检出Ⅲ类整合酶基因阳性菌株,Ⅰ类和Ⅱ类整合子同时阳性率为1.5%。肠杆菌科细菌Ⅰ类整合酶基因阳性率为69%,Ⅱ类整合子阳性率为2.7%;非发酵菌中Ⅰ类整合子阳性率为34%,Ⅱ类整合子阳性率为1.8%。在肠杆菌科细菌中,Ⅰ类整合酶基因阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率均明显高于阴性菌株。结论在痰标本分离的革兰阴性杆菌中,肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子的携带率高于非发酵菌,Ⅱ类整合子则无明显区别。     

铜绿假单胞菌耐药性与整合子基因的相关性分析

目的：研究铜绿假单胞菌（Pa）的整合子流行现状及其与耐药性的相关性。 方法：收集临床分离的Pa 76株,用KB纸片扩散法测定其对12种常用抗生素的耐药性。同时用PCR扩增Pa整合子基因,产物用琼脂糖凝胶电泳检测,判断整合子基因与耐药性的关系。 结论：Pa的耐药性与整合子基因呈一定的相关性,整合子基因阳性的菌株耐药性较高, 特别是对磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类及广谱青霉素类抗菌药物的耐药较为明显。     

Ⅰ类整合子在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用研究

目的了解我院多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株中Ⅰ类整合子的流行情况,建立一种快速简便的Ⅰ类整合子聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法收集我院2008年9月至2010年9月临床分离的鲍曼不动杆菌63株,用MIC法检测耐药性,PCR技术检测Ⅰ类整合子基因。结果 63株鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子基因阳性率56%（35株）。Ⅰ类整合子阳性和阴性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药性存在明显差异。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子携带率高,携带的耐药基因为aaeA4、catB8和aadA1。PCR技术可以方便快速地检出Ⅰ类整合子。