实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体

目的 应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体(UU),并评价其敏感性和特异性.方法 对140例疑似泌尿生殖道感染患者的拭子和尿液样本,分别采用培养法、SAT进行解脲脲原体检测,检测结果有差异的标本用实时荧光定量PCR法对拭子进行复测,根据实验结果评估SAT检测尿液UU的敏感性和特异性.结果 140例疑似患者试子培养和尿液SAT检测阳性率均为60％,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05),其中16例培养结果与SAT检测结果不一致,8例培养法阳性、SAT阴性的拭子PCR结果复测阳性;8例培养法阴性、SAT阳性的拭子标本PCR结果4例阴性、4例阳性,结合培养法结果和PCR结果作为“扩大金标准”,得出SAT对尿液检测的敏感性为95.5％、特异性为100％.结论 SAT检测泌尿生殖道患者尿液UU具有取样方便,检测快速、准确等优点,适用于临床实验室泌尿生殖道UU的检测.     

荧光原位杂交技术检测沙眼衣原体的可行性研究

目的：探讨荧光原位杂交（FISH）技术检测沙眼衣原体（CT）的临床应用及其意义.方法：将超高倍多媒体显微仪检测法（MMDI）和荧光定量PCR结果一致作为判定衣原体是否感染的扩大金标准,取符合扩大金标准判定的宫颈棉拭子标本纳入FISH技术检测.结果：130例样本中MMDI和荧光定量PCR检测均为CT阳性的有52例,CT阴性的有78例.FISH技术检测阳性的46例,阴性84例.FISH技术检测CT的灵敏度为84.62％,特异度为97.44％,阳性预测值为95.65％,阴性预测值为90.48％.结论：成功构建了FISH技术检测沙眼衣原体的技术平台,该技术弥补了MMDI特异性低及PCR可视性不足的缺点.     

miniVIDAS 在检测生殖和泌尿系沙眼衣原体感染中的应用探讨

目的：应用 miniVIDAS 对生殖和泌尿系中尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测,从而论证其敏感性和特异性。方法：收集疑似或确诊泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物标本共490份。应用 miniVIDAS 对尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测,结果与实时荧光定量聚合酶链反应（real －time PCR）进行比较,从而评价其在尿液和分泌物标本检测中的敏感性和特异性。结果：1、拭子样本检测结果：应用 miniVIDAS 共检出20份阳性样本,经与 real －time PCR 的结果比对,其结果高度一致;对280份阴性结果与 real －time PCR 的结果比对,其结果也完全一致。从而说明 miniVIDAS 在检测拭子样本的敏感度、特异度等方面其结果均达到100％。2、尿液样本检测结果：应用 miniVIDAS 共检出30份阳性样本,与 real －time PCR 结果比对后,10份为真阳性,20份为假阳性。160份阴性样本经比后全部一致。经过一致性分析,miniVIDAS 检测尿液样本的敏感度为100％,特异度为87．8％。结论：应用 miniVIDAS 对生殖和泌尿系中尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测与 real －time PCR 的结果未达到高度一致。可能是由于尿液中含有与沙眼衣原体抗原非常相似的其他微生物,从而与固相载体的抗体进行非特异性结合,而令尿液检测衣原体的特异度偏低,说明 miniVIDAS对尿液样本沙眼衣原体感染的检测并不适合做为筛选实验。     

性病高危人群中女性阴道口部位沙眼衣原体感染的检测

目的：研究能否用阴道口部位标本代替宫颈标本检测沙眼衣原体（CT）。方法：分别用PCR法和立明法（Clearview)对231例性病高危人群的宫颈拭子、阴道口拭子及尿液标本进行检测。结果：以6种检测方法中任何2种结果同时阳性为金标准,宫颈拭子、阴道口拭子及尿液3种标本PCR法的敏感性和特异性分别是86.8%和99．48％,84．2％和100％,63．2％和99．48％;立明法的敏感性和特异性分别是81．6％和100％,47．4％和100％,10．5％和100％。结论：对女性CT检测可以用阴道口拭子代替其它部位标本进行PCR检测。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。     

性病高危人群中女性阴道口部位沙眼衣原体感染的检测

目的 :研究能否用阴道口部位标本代替宫颈标本检测沙眼衣原体 (CT)。方法 :分别用 PCR法和立明法 (Clearview)对 2 31例性病高危人群的宫颈拭子、阴道口拭子及尿液标本进行检测。结果 :以6种检测方法中任何 2种结果同时阳性为金标准 ,宫颈拭子、阴道口拭子及尿液 3种标本 PCR法的敏感性和特异性分别是 86 .8%和 99.4 8% ,84 .2 %和 10 0 % ,6 3.2 %和 99.4 8% ;立明法的敏感性和特异性分别是 81.6 %和 10 0 % ,4 7.4 %和 10 0 % ,10 .5 %和 10 0 %。结论 :对女性 CT检测可以用阴道口拭子代替其它部位标本进行 PCR检测     

3440例男性不同标本沙眼衣原体FQ-PCR测定

目的:探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)用于男性不同标本的沙眼衣原体(Chlamydia tracgomatis,CT)检测情况.方法:用Gene Amp 5700型荧光定量PCR仪对3 440例尿道拭子、前列腺液、精液、尿液等4种标本进行CT检测.结果:共检出CT阳性者483例,占14.04%;其中尿道拭子阳性466例,占该类标本14.4%;前列腺液阳性9例,占该类标本14.5%;精液阳性5例,占该类标本4.7%;尿液阳性3例,占该类标本7.7%.PCR定量:1.08×103 Copy/ml～1.5×109 Copy/ml.结论:尿道拭子、前列腺液标本检出CT阳性率最高,其次为尿液、精液.     

体外扩增法检测尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的研究

目的 :采用聚合酶链反应技术 (PCR)从尿道炎患者尿液中检测沙眼衣原体感染 ,并与细胞培养法及ELISA法相比较 ,以期建立灵敏特异、无创伤性沙眼衣原体DNA诊断技术。方法 :收集患者就诊时初段尿 ,提取尿液沉渣DNA ,PCR法检测沙眼衣原体核酸 ;尿道拭子标本作细胞分离培养 (CC) ;取患者血清作ELISA检测抗体。结果 :采用PCR从尿道炎患者尿液样本中检测到沙眼衣原体DNA ,1 34份尿液样本 ,32份阳性 ,阳性率为 2 3.9%;尿道拭子标本 ,细胞培养阳性率为 2 2 .4 %( 30 /1 34) ;ELISA法检测血清阳性率为 1 7.9%( 2 4 /1 34)。以细胞培养法结果为金标准 ,PCR的敏感度和特异度分别为 1 0 0 %和 98.0 %;ELISA法则为 73.3 %和 98.0 %。三种方法相比较 ,PCR法和CC法无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,两者与ELISA法均存在显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :以尿液为样本 ,采用PCR法检测尿道炎患者沙眼衣原体DNA是一种灵敏特异、无创伤性检测手段 ,值得推广使用     

两种检测男性生殖道沙眼衣原体和解脲支原体方法的对比

目的: 对比应用实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing,SAT)-RNA(SAT-RNA 法)与应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-DNA(PCR-DNA法)检测男性生殖道沙眼衣原体、解脲支原体的效果,以探讨SAT-RNA法的应用价值。方法: 收集2016年4月至2017年4月于中国医科大学附属盛京医院生殖医学中心就诊的因女方因素拟行体外受精-胚胎移植助孕的163例男性,采用SAT-RNA法检测尿液标本中的沙眼衣原体、解脲支原体,并对其中109例符合当天采集精液标本条件者进行相应病原体的检测。同时采用PCR-DNA法检测163例男性尿道拭子标本中的相应病原体。结果: 163例男性生殖道解脲支原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性77例(阳性率47.24%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性78例(阳性率47.85%),两者差异无统计学意义(χ² =0,P>0.05),两种方法的检测结果符合率为93.25%,阳性符合率93.51%,阴性符合率93.02%,检验结果一致性极好(Kappa值0.865)。163例男性生殖道沙眼衣原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性5例(阳性率3.07%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性7例(阳性率4.29%),两者差异无统计学意义(χ²=0.25,P>0.05),两种方法检测结果符合率为97.55%,阳性符合率80.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.654)。对其中109例男性采用SAT-RNA法同时检测尿液和精液标本中的解脲支原体和沙眼衣原体:(1)解脲支原体:尿液标本阳性55例(阳性率50.46%),精液标本阳性49例(阳性率44.95%),两标本差异无统计学意义(χ²=2.08,P>0.05),检测结果符合率为88.99%,阳性符合率93.88%,阴性符合率85.00%,检验结果一致性较好(Kappa值0.780);(2)沙眼衣原体:尿液标本阳性6例(阳性率5.50%),精液标本阳性4例(阳性率3.67%),两标本差异无统计学意义(χ²=0.5,P>0.05),检测结果符合率为98.17%,阳性符合率100.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.791)。结论: SAT-RNA法与PCR-DNA法检测生殖道沙眼衣原体、解脲支原体有良好的一致性;相比PCR-DNA法,SAT-RNA法可用于尿液或精液标本的检测,具有无创、方便等优势,更适宜临床应用。     

核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

二维混合法在尿液沙眼衣原体和淋球菌聚合酶链反应检测中的应用

目的为节约沙眼衣原体和淋球菌在低流行率群体筛查中的成本,探索二维混合标本法在对尿液标本沙眼衣原体和淋球菌检测中的可用性。方法分别用单独检测法、一维检测法、二维混合法检测99份男性性病患者尿液标本中的衣原体和淋球菌,观察结果的一致性和消耗试剂的数量,以判断检测方法的可行性。结果在99份尿样中的沙眼衣原体和淋球菌的阳性率分别为4.04%(4/99)和3.03%(3/99),二维混合法检测后的结果与其一致,并且灵敏度和特异度均为100%,与单独检测法相比,二维混合法可节约检测池58.72%,且显著减少了工作量。结论二维混合法与单独检测法在阳性率不高的条件下一致性很好,二维混合法可以替代单独检测法,节省成本。     

男性无症状性病高危人群尿沉渣检测沙眼衣原体

目的:研究能否用尿沉渣代替尿道拭子检测沙眼衣原体(Ct)。方法:分别用Wellcozyme chlamydia法和PCR法对352例男性无症状的性病高危人群首段尿渣进行Ct检测,两法经尿沉渣、尿道拭子配对研究。结果:以尿道拭子Ct培养为金标准,两种方法的敏感性和特异性分别为50.98%(P<0.05)和100%(P>0.05)、98.04%(P>0.05)和96.68%(P>0.05)。结论:结Ct的检测,用Wellcozyme chlamydia法时,不宜用尿沉渣代替尿道拭子作标本,而用PCR法时,可用尿沉渣代替尿道拭子作标本。     

连接酶链反应检测男性就诊者尿标本中的沙眼衣原体

目的评价连接酶链反应(LCR)检测性病专科门诊男性就诊者尿标本中沙眼衣原体(CT)的敏感性和特异性。方法取852例患者尿道拭子作CT培养;同时取患者较长时间(2 h以上)不排尿后的首次尿(FVU)标本,用质粒LCR检测CT。对培养法和质粒LCR结果相异的标本,用另一针对CT主要外膜蛋白基因的LCR进行确证,参照“扩大的金标准”来确定检测结果。结果质粒LCR敏感性和特异性分别为98.6%和99.4%,而培养法分别为77.4%和99.5%,前者敏感性高于后者(P<0.001)。在伴或不伴尿道症状的就诊者间LCR敏感性和特异性无显著性差异。结论LCR是一种既敏感又特异的CT诊断方法。FVU可作为筛检男性CT感染的一种非损伤方法。     

连接酶链反应检测男性就诊者尿标本中的沙眼衣原体

OBJECTIVE: To determine the sensitivity and specificity of ligase chain reaction (LCR) for detection of Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) in the urine of symptomatic and asymptomatic men. METHODS: C. trachomatis was detected by LCR in both first-void urine (FVU) and urethral swab cultures from 852 randomly selected male outpatients seeking medical attention for sexually transmitted diseases. In cases with discrepancy between the results yielded by the two methods, a second LCR directed against a gene fragment encoding the major outer membrane protein was performed. The results were evaluated on the basis of an expanded gold standard. RESULTS: The sensitivity and specificity was 98.6% and 99.4% with LCR, respectively, and was 77.4% and 99.5% with urethral swab culture. The sensitivity of LCR was much higher than that of urethral swab culture P<0.001 .The presence or absence of urethral symptoms did not show any influence on the results. CONCLUSION: LCR is sensitive and specific for detecting C. trachomatis infections, and FVU can be used for non-invading diagnosis and screening of the infection in men.     

荧光定量PCR检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体

目的调查深圳地区不孕妇女的生殖道沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）感染；比较荧光定量PCR法与UU培养或金标法检测CT的敏感性。方法219例不孕妇女患者取宫颈分泌物，用荧光定量PER法检测219例分泌物标本UU的DNA，同时对196例标本进行CT的DNA检测。另选68例正常体检女性作为对照组；同时采用支原体培养药敏试剂盒进行UU培养以及金标法检测CT，并对结果进行统计、分析。结果荧光定量PCR检出UU阳性率39．7％（87／219），CT阳性率44．9％（88／196），分别高于对照组（P〈0.05）。同时，培养法检出UU阳性率为29．7％，金标法检测CT阳性率为27％，与PER相比，P〈0.05。结论输卵管不孕妇女生殖道UU和CT检出率较高，荧光定量PCR具有敏感性高和特异性强的特点，对不孕患者CT和UU的诊疗具有实际意义。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性。方法回顾性分析12816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒（NG-SAT）检测7107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法（FQ-PCR）复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测。结果NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0%,特异度为98.2%。2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性。179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例。结论NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用。     

缺口连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA的实验研究

目的:建立缺口连接酶链反应方法检测沙眼衣原体.方法:根据编码CT主要外膜蛋白的基因(ompl)的稳定区设计2对互补的寡核苷酸探针.采用G-LCR和常规PCR扩增CT标准株DNA,并对二者检测CT的敏感性进行比较.结果:对5种CT标准株进行G-LCR扩增,均出现54bp长度的DNA片段.敏感性实验可检测出2个CT原体,而PCR可检测出20EBs.G-LCR较PCR敏感10倍;在特异性方面,不扩增肺炎衣愿体及其他细菌DNA,具有很高的特异性.结论:G-LCR用于检测沙眼衣原体特异、敏感、快速、准确,可为CT感染的临床诊断提供依据.