快速简便筛检乙型肝炎病毒C基因启动子变异的方法及应用

目的明确中国乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区段变异特点及其可能的临床意义。方法应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法，结合核苷酸序列分析，检测１４３例ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＢＶ慢性感染者中Ｘ基因／ＢＣＰ区的核苷酸（ｎｔ）１７６２碱基由Ａ→Ｔ和１７６４碱基由Ｇ→Ａ变异。结果在１１４份ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中，３７例感染ＢＣＰ变异株，其中３１例为慢性肝炎病例，６例为慢性ＨＢＶ无症状感染者（ＡｓＩ）；其中４１例ＨＢｅＡｇ阳性ＡｓＩ中仅２例检出，１８例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＩ中也有４例检出。ＨＢｅＡｇ阳性的６５例中，１３例有ＢＣＰ区变异，而ＨＢｅＡｇ阴性的４９例中，２４例有ＢＣＰ区变异（Ｐ＜０．０１）。结论错配ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测这一对点突变，具有快速、简便、适用的优点；ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能与肝病变活动有一定关系。     

重型乙型肝炎病毒C基因启动子变异

目的了解我国重型肝炎Ｃ基因调节序列变异特点。方法克隆及聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接测序方法对,检测７例重型乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因调节序列变异。结果４例存在Ｔ１７６２Ａ１７６４变异;但在Ｔ１７６２Ａ１７６４以外位点也存有诸多变异,其中１例在ｎｔ１７７６－１７７７之间有１１ｂｐ的插入变异。结论重型肝炎ＨＢＶＣ基因启动子区存在较多的变异位点,推测这些变异对Ｃ启动子的调节活性影响可能是综合性的。     

重叠HCV感染对HBV／C基因热点变异的影响

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）重叠丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染时ＨＣＶ对ＨＢＶ复制和基因变异的影响，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）相结合。对１９例ＨＢＶ感染重叠ＨＣＶ感染（Ａ组）和３１例单独ＨＢＶ感染（Ｂ组）的慢怀肝病患者分析前Ｃ区密码２８终止是（Ａ８３）和Ｃ密码９７异亮氨酸变为亮氨酸变异Ｌ９７）。结果显示Ａ组第一次ＰＣＲ阳性率（１６％）明显低于Ｂ组（６５％）（Ｐ，０     

用选择性PCR在e抗原阳性慢性乙型肝炎患者血清中检出前C…

目的：探讨慢性乙型肝炎前Ｃ区终止变异的临床意义，方法：建立一种简单而灵敏度高的选择性聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒前Ｃ终止变异。结果：在４７例慢性乙型肝炎中检出前Ｃ终止变异３８例（８１％），其在慢性肝炎，肝硬化，慢性重型肝炎中的检出率分别为８２％（２８／３４），８０％（８／１０），和６７％（２／３），在ＨＢｅＡｇ阳性和抗ＨＢｅ阳性中分别有７６％（１３／１７）和８３％（２５／３０），Ｐ〉０．     

慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究

３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。     

乙型肝炎病毒S区基因变异与临床

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是一种高度变异的病毒，由于病毒变异后往往引起抗原性和致病性的改变，所以认为ＨＢＶ感染在临床上出现的不同疾病谱与病毒变异有关。在ＨＢＶ４个开放阅读框架（ＯＲＦ）中，对Ｃ区和Ｘ区基因变异已作了不少报道；Ｐ区由于与其它３个区重叠，Ｐ基因变异往往表现为其它基因变异，如果变异严重影响病毒复制，病毒不能存活，所以目前对Ｐ基因变异研究较少；Ｓ区编码病毒包膜蛋白，ＨＢＶＳ区基因的变异则具有重要临床意义。本文就ＨＢＶＳ区基因的结构特点以及变异后对临床的影响作一综述。一、ＨＢＶＳ区基因的结构与…     

乙型肝炎病毒e抗原阴性重型肝炎病人前C基因信号酶位点变异

为进一步了解乙型肝炎病毒变异所致肝细胞内过度表达乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）前体对肝细胞可能带来的影响，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接和克隆后序列分析，在中国ＨＢｅＡｇ阴性重型肝炎病人中发现一种新ＨＢＶ变异株：前Ｃ区第１７位密码子由缬氨酸变为苯丙氨酸，变异影响信号酶切功能，导致ＨＢｅＡｇ加工和分泌障碍，ＨＢｅＡｇ前体在肝细胞内过度积聚。认为细胞毒Ｔ淋巴细胞攻击此靶抗原可能是肝细胞严重坏死的原因，但因例数太少尚难肯定。     

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒前C区基因突变与干扰素的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ前Ｃ和部分Ｃ区基因，快速检测ＨＢＶ前Ｃ终止密码突变方法，对慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与ＨＢＶ前Ｃ突变关系作了初步研究。６例干扰素治疗后４例ＨＢＶＤＮＡ转阴，２例阳性者均检出突变株。１１例非干扰素治疗者中，检出突变株３例。１例干扰素治疗１个月后ＨＢＶｅ抗累（ＨＢｅＡｇ）转阴，优势病毒株已由突变株与野生株共存状态替代原有野生株，提示干扰素治疗后ＨＢｅＡｇ转阴并不意味着ＨＢＶ被清除，而有潜在ＨＢＶ前Ｃ突变的可能。     

慢性乙型肝炎病毒前C区基因突变与中医证型的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区基因突变与慢性乙型肝炎中医证型的关系。方法：将１６２例慢性乙型肝炎病患者按中医辨证分为５种证型,应用聚合酶链反应－单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测ＨＢＶ前Ｃ区基因变异。结果：慢性乙型肝炎湿热中阻型患者ＨＢＶ前Ｃ区突变率为６１．１％（３３／５４）,瘀血阻络型为５７．６％（１９／３３）;肝郁脾虚型为２９．８％（１４／４７）;肝肾阴虚型为３８．１％（     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV发生YMDD变异的检测

目的建立乙型肝炎病毒Ｐ基因区ＹＭＤＤ变异的检测方法,对用拉米夫定治疗５２周出现耐药的病人进行检测。方法从８８例治疗病人中选择１０例服用该药后ＨＢＶＤＮＡ转阴（＜１．６ｐｇ／ｍｌ）,５２周时又反跳≥２０ｐｇ／ｍｌ的病人,用 ＰＣＲ后直接测序的方法,分别对 ０周和 ５２周标本进行 ＨＢＶ ＤＮＡ聚合酶活性区域的测序。结果 １０例服药５２周后ＨＢＶ ＤＮＡ反跳病人中７例测得ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异。其变异分为两种类型：第一种类型为ＹＶＤＤ有５例,有核苷酸Ａ７４１→Ｇ,均伴有Ａ６６９→Ｃ的变异。第二种类型为ＹＩＤＤ有２例,有核苷酸Ｇ７４３→Ｔ,其中１例还有Ｔ７８１→Ｃ。结论少数病人在拉米夫定治疗过程中出现耐药,可能和ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异有关。     

抗HBe(+)慢性乙型肝炎的重组干扰素治疗应答及其影响因素

目的探讨抗ＨＢｅ／ＨＢＶＤＮＡ（＋）慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）的干扰素治疗效果及其影响因素。方法对１５例ＨＢｅ（＋）和２５例ＨＢｅＡｇ（＋）ＣＨＢ患者用重组干扰素α－１ｂ治疗，治疗前、后和随访半年后检测ＨＢＶ及前Ｃ区Ａ１８９６终止变异。结果抗ＨＢｅ（＋）慢性乙型肝炎干扰素治疗近期应答率为７３％（１１／１５），与ＨＢｅＡｇ（＋）组比较差异无显著性（Ｐ＞００５）；治疗前抗ＨＢｅ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ含量明显低于ＨＢｅＡｇ（＋）组（Ｐ＜０００５）；但前Ｃ区Ａ１８９６变异检出率４７％（７／１５）显著高于ＨＢｅＡｇ（＋）组的１６％（４／２５），Ｐ＜００５；４例复发者都是Ａ１８９６变异感染。结论血清ＨＢＶＤＮＡ水平可能是影响其应答的重要因素，前Ｃ区Ａ１８９６变异并不影响干扰素的近期应答率，但可能是其复发的一个重要因素。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ基因启动子 (ＣＰ)变异来探讨ＨＢＶ准种在慢性感染者中的存在意义。以中国株ＨＢＶ基因序列为依据 ,设计特异性聚合酶链反应 (ＰＣＲ)引物 ,自 3例慢性ＨＢＶ感染患者外周血血清中扩增ＨＢＶＣＰ序列 ,克隆入 ｐＧＥＭＴｅａｓｙ质粒 ,随机挑选克隆进行ＤＮＡ测序以确定病毒的变异程度。测序结果发现ＨＢＶＣＰ序列高度保守 ,但在ＴＡＴＡ样盒 ( 1 3)可发生多种点突变 ,其中 184ｎｔ(Ｔ→Ｃ)位替换突变最为常见。在直接重复序列 (ＤＲ)Ｉ上游存有一缺失突变高发区。ＣＰ区内有一缺失高变区 ,ＴＡＴＡ样盒 3的变异…     

抗HCV阳性慢性肝病患者HBV感染及前C／C区基因变异

探讨ＨＢＶ基因变异在ＨＢｓＡｇ阴性抗ＨＣＶ阳性慢性肝病中的意义。方法用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制片段长度多态性相结合，对５６例慢性肝病患者６例ＨＢｓＡｇ阴性抗ＨＣＶ阳性（Ａ组）．１９例ＨＢｓＡｇ阳性抗ＨＣＶ阳性（Ｂ组）及３１例单独ＨＢＶ成染（Ｃ组）进行前Ｃ区密码２８终止变异（Ａ８３）和Ｃ区密码９７异亮氨酸亮氨酸变异（Ｌ９７）分析。结果Ａ组和Ｂ组Ａ８３和Ｌ９７变异检出率分别为３３％和４２％显著低于Ｃ组８１％（Ｐ值＜０．００１）：而Ａ组和Ｂ组间无统计学差异（Ｐ值＞０．０５）。结论ＨＢＶ和ＨＣＶ双重感染ＨＢｓＡｇ阴性与Ａ８３和Ｌ９７变异无相关。     

肝癌及癌旁组织HBV DNA定点PCR研究

目的采用定点ＰＣＲ技术，研究ＨＢＶ的Ｓ和Ｃ基因在肝癌与癌旁组织的存在状态，探讨癌旁ＨＢｓＡｇ表达与Ｓ基因的关系。方法福尔马林固定，石蜡包埋肝癌及癌旁组织２８例，ＨＢｓＡｇ免疫组化后的切片分别切割癌组织、癌旁ＨＢｓＡｇ强阳性区（Ｐ２）及癌旁ＨＢｓＡｇ阴性区（Ｐ１）各１个低倍视野，作Ｓ及Ｃ基因ＰＣＲ。结果癌组织Ｓ基因较Ｃ基因检出率高（１８／２８ｖｓ１０／２８，Ｐ＜０．０５），癌旁二者无差异；癌旁中Ｐ１与Ｐ２的Ｓ及Ｃ基因检出率无显著性差异；高分化肝癌Ｓ和／或Ｃ基因检出率较中分化者低（２／５ｖｓ２０／２８，Ｐ＜０．０５）。结论癌组织中整合的ＨＢＶＤＮＡ为残缺不全的，ＨＢｓＡｇ强阳性与阴性区的Ｓ基因检出无显著性差异。     

乙型肝炎病毒基因变异研究中亟须商榷的几个问题

乙型肝炎病毒基因变异研究中亟须商榷的几个问题骆抗先，侯金林，梁炽森乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是高度变异的，没有两株病毒核苷酸序列完全相同。ＨＢＶ感染有不同的疾病谱，可能与其变异有关。国外已进行了大量的工作，尤其对前Ｃ区和Ｓ基因／ａ决定簇的变异已有很多报道...     

乙型肝炎病毒C基因逆转录病毒载体的构建及在永生化人外周？…

目的体外研究乙型肝炎病毒Ｃ（ＨＢＶ／Ｃ）基因变异的生物学意义。方法 应用逆转 录病毒勒体ＰＸＴ１构建ＨＢＶ／Ｃ基因表达载体，并转染永生化人外周血Ｂ细胞使之稳定ＨＢｃＡｇ。结果 重组质粒ＰＸＴ１－ＨＢＶ／Ｃ经聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＢｇｌⅡ及ＸｈｏⅠ双酶切鉴定均阳性，转染后的永生化人外周血Ｂ细胞ＰＣＲ鉴定含目的ＤＮＡ，流式细胞仪分析显示，约４７．４％的细胞膜上表达了ＨＢｃＡｇ。结论ＨＢＶ／Ｃ基因逆转     

HBV前C区变异与HBe转换和慢性肝炎的预后

ＨＢＶ前Ｃ区变异与ＨＢｅ转换和慢性肝炎的预后田琦琦，骆抗先，陈伟华，杨洁，王志明为进一步了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异与血清ＨＢｅ转换及临床预后的关系，探讨其可能的发生机制，我们对４８例经肝活检及血清学确诊的慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者随访血清进...     

原发性肝细胞癌癌周肝组织中乙型和丙型肝炎病毒抗原？…

目的：了解乙型和丙型肝炎病毒感染与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的病因学关系。方法：病例对照研究，以３９例肝硬化学伴发ＨＣＣ为测试组，４８例肝硬化为对照组，利用免疫组织化学染色观察肝组织切片中乙型（ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ阳性率在ＨＣＣ组（２３／３９，５８．９７％）和肝硬化组（２４／４８，５０％）之间无显著性统计学差异，ＨＢＶ和ＨＣＶ抗原同时阳性者在ＨＣＣ组（１４／３９，３５．８９％）高于肝硬化组（９／４     

乙型肝炎病毒前C区基因变异和外周血单个核细胞增殖反应

一、资料与方法１．对象：选取１９９６－１９９７年宁波市传染病医院８４例住院乙型肝炎患者,按１９９５年（北京）全国肝炎诊断标准,急性肝炎６例,慢性肝炎轻度２２例,中度ＺＩ例,重度２２例,慢性重型肝炎１３例。ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性,其中６９例ＨＢｅＡｇ阳性,１１例抗一ＨＢｅ阳性,对照组１１例为健康献血员,ＨＢＶ血清学标志物均阴性。２．ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变的检测：用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析［１］。ｐＣＲ产物按酶切后ＤＮＡ条带不同,分为野生株,野生株优势变异,变异株优势变异和…     

解偶联蛋白2基因Ala55Val变异与中国人2型糖尿病患者葡萄糖兴奋后胰岛素分泌功能的关系

目的　解偶联蛋白２（ Ｕ Ｃ Ｐ２） 基因定位于人类１１ｑ 染色体区,该区域与高胰岛素血症及肥胖相关连。本研究拟探讨 Ｕ Ｃ Ｐ２ 基因 Ａｌａ５５ Ｖａｌ（ Ａ／ Ｖ５５） 变异与中国人２ 型糖尿病患者胰岛素分泌／ 敏感性的关系。方法　３５９ 例无亲缘关系的中国人（ 据９７ 年 Ａ Ｄ Ａ 标准分为：糖耐量正常者１９３ 例,２ 型糖尿病１６６ 例） 及６６ 例白种人用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ 检测 Ｕ Ｃ Ｐ２ 基因 Ａ／ Ｖ５５ 变异。结果　中国人（ Ａ Ａ０ ．３１ , Ａ Ｖ０ ．５１ 及 Ｖ Ｖ０ ．１８） 与白种人（ Ａ Ａ０ ．３２ , Ａ Ｖ０ ．５６ 及 Ｖ Ｖ０ ．１２） Ｕ Ｃ Ｐ２ 基因 Ａ／ Ｖ５５ 变异的基因型频率分布无显著差异（ Ｐ＝ ０ ．６１５） ,且该基因变异与中国人２ 型糖尿病发病无相关性（ Ｐ＝ ０ ．５５８） 。在１６６ 例２ 型糖尿病患者中, Ｕ Ｃ Ｐ２ 基因 Ａ／ Ｖ５５ 变异与 糖负荷３ 小时 胰岛素总值（ Ｓ Ｕ Ｍ）（ Ｐ＝０ ．０１０８） ,胰岛素曲线下面积（ Ａ Ｕ Ｃ）（ Ｐ＝ ０ ．０１４９） 以及 Ｈ Ｏ Ｍ Ａβ细胞功能（ Ｐ＝ ０ ．０１７４） 相关。且糖负荷３ 小时 Ｃ 肽总值及 Ｃ 肽曲线下面积变化亦与胰岛素有相同趋势。结论　 Ｕ Ｃ Ｐ