尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶(TLE)的酶联免疫吸附分析(ELISA)

本文以辣根过氧化物酶(HRP)为标记酶,聚苯乙烯微量血凝板为固相载体,运用夹心酶联免疫吸附(ELISA)技术研究了部分纯化的尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶(TLE)的微量检测,并用四参数方程模拟了TLE的对数剂量反应曲线。     

用免疫放射测定法和酶联免疫吸附法检测疫苗中的胎牛血清

作者用胎牛血清(FCS)免疫家兔,合并三批滴度高于1:1024000的抗血清,通过辛酸沉淀和凝胶层析提取其中的IgG(即抗-FCS).在免疫放射测定法(IRMA)和酶联免疫吸附法(ELISA)中分别以包被了纯化抗-FCS的聚苯乙烯珠和微量滴度板为固相.为了制备~125I-抗-FCS,作者将抗-FCS溶液,     

应用ELISA检测注意的事项

酶结合免疫吸附测定 (ELISA)法在临床检验中应用广泛 ,它以免疫学反应为基础 ,将抗原抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合 ,由于抗原抗体反应在一种固相载体———聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行 ,每加入一种试剂温育后 ,可通过洗涤除去多余的游离反应物 ,从而保证试验结果的特异性和稳定性。ELISA操作简便 ,灵敏度高 ,但是其步骤较多 ,尤其是做乙型肝炎标志物的检测 ,各个环节稍不注意就会影响结果 ,现将我们在工作中的体会作一总结。1准备1 1将新鲜标本放入37℃水温箱1～2小时 ,再用2500r/min离心10分钟 ,使血清析出 ,注意…     

精子抗原肽P10G和YLP12的合成及在ELISA检测中的意义

目的 人工合成精子肽P10G和YLP12,以此为抗原建立检测抗精子抗体(AsAb)的酶联免疫吸附测定法(ELISA).方法 用PS3全自动合成仪合成精子肽P10G和YLP12,经反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定.分别包板制备ELISA试剂盒,用以检测血清中的AsAb.结果 成功合成两种目的肽,质谱结果显示其相对分子质量均与理论相对分子质量相吻合,高效液谱法(HPLC)结果显示其纯度为97.5％和97.8％.以该两种合成肽为抗原,建立AsAb的ELISA,与商品化试剂盒比较均显示极好的一致性(Kappa值为0.77和0.79,＞0.75).结论 全自动固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,所合成的P10G和YLP12均具有较好的抗原活性,可作为包被抗原用于AsAb的ELISA检测.     

以精子抗原肽为抗原的抗精子抗体ELISA检测方法的建立

目的建立组合多个精子抗原肽为抗原的检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法用PS3全自动多肽合成仪合成4个特异精子肽,并经反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化和质谱鉴定。用ELISA检测4个合成肽的抗原性,基于对这些合成肽抗原活性的评价,将4个精子抗原肽混合后(组合肽)作为抗精子抗体(AsAb)检测用抗原。结果合成了实验所需要的抗原性肽段,RP-HPLC结果显示纯度达95%以上。以组合肽为抗原建立的检测AsAb的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为95.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,以组合的精子抗原肽作为包被抗原建立的ELISA方法可提高AsAb检测的灵敏度。     

用两种间接ELISA测定疫苗诱生和自然获得的类特异性流行性腮腺炎抗体

本文报告了用两种不同的间接ELISA测定类特异性流行性腮腺炎抗体应答的结果。M-ELISA是以直径为6.5mm的聚苯乙烯塑料珠作为包被抗原的固相的方法;m-ELISA则是在96孔微量板上进行。作者用这两种方法检测了46名疫苗接种者和22例具有典型或非典型临床腮腺炎患者的双份血清,同时作中和试验(NT)和补体结合试验(CF)作为对照。多次重复试验表明,在所有接种者和患者的双份血清中,M-ELISA测出流行性腮腺炎IgG抗体有诊断价值升高的标本分     

用酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹病毒特异的IgG抗体

本文报导一种用固相ELISA测定麻疹病毒IgG抗体的方法,并与血凝抑制(HI)及补体结合(CF)两种试验方法进行比较。作者采集了63份健康成人、11份儿童(包括7个未接种麻疹疫苗及4个无麻疹病史的儿童)和36份麻疹患者血清标本。抗原是粗制品,制备方法如下:将Edmonston株病毒接种于VERO细胞,培养3～5天后,用无钙、镁离子的PBS洗二次,并稀释成1∶20,置-70℃反复冻融,再经超声处理60秒,4℃离心5分钟(1,400g)后的上清液,再用PBS稀释到蛋白浓度为0.3mg/ml。未感染病毒的细胞悬液经同法处理作为对照。用U型孔聚苯乙烯微量滴定板进行ELISA测定,其步骤如下:每孔加0.025ml(75μg)麻疹抗原或对照抗原,室温过夜,干燥(并可贮于-70℃备用)。用含0.05％吐温20的PBS     

尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶的药代动力学

本文以聚苯乙烯微量血凝板为固相载体,运用夹心酶联免疫吸附分析(Sandwich ELISA)法研究了大白鼠快速iv尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶(TLEs)后的药代动力学。TLEs的血浆浓度-时间过程具有二室开放模式的动力学特征,其快处置过程(α相)的t(1/2)约为11min,其慢处置过程(β相)的t(1/2)约为7.0h。TLEs具有低表观分布容积的特征,以血液分布为主,经肝、肾消除。     

用干燥抗原ELISA检测人体百日咳杆菌丝状血凝素抗体

ELISA可定量测定人血清中抗丝状血凝素抗体(抗-FHA)和抗百日咳毒素抗体(抗-PT)。但纯化用于致敏的FHA和PT不仅困难,而且不经济,因此,作者改良了试验方法以减少测定抗体所需要的抗原量。作者参照Voller法进行了间接ELISA。用碳酸氢钠缓冲液(pH9.6)吸附抗原致敏聚苯乙烯微量板,置4℃过夜,用室温下在孔内干燥的抗原致敏另一块聚苯乙烯微量板。每孔中加100μl试剂(除封闭过程以外)。抗原致敏的孔用磷酸盐缓冲液(PBS)洗两次,加百日咳恢复期病人抗-FHA和抗-PT阳性血清[参考血清含650 ELISA单位(EU)/ml抗-FHA和200EU/ml抗-PT活性]于37℃孵育2     

用亲和素-生物素-过氧化物酶法检测结合到聚苯乙烯板上的合成肽

本文介绍了一种检测肽是否吸附到聚苯乙烯板上的称为生物素-亲和素-生物素复合物(ABC)试验的简单化学方法,以助正确解释多肽抗体筛选中免疫吸附试验阴性的结果。具体程序是将合成的含11～27个氨基酸的肽(属人肌肉烟酸胆碱受体的α亚单位和人的小脑抗原等)加入板中,用NHS-LC-生     

固相法合成心肌兴奋肽及其类似物

用Boc-和Tos-基团分别保护氨基和侧链胍基,以1%交联度聚苯乙烯二苯甲氨基树脂为载体,用DCC固相法合成肽,HF断裂肽树脂键和去除侧链保护基团,粗产物经高效液相层析纯化,合成了心肌兴奋肽Phe-Met-Arg-Phe-NH_2及其类似物Phe-Pro-Arg-Phe-NH_2,并观察了此二种肽对大鼠血压和心率的影响。     

一种敏感的ELISA用于检测固相化A蛋白纯化的鼠免疫球蛋白中的SPA微量污染

目前固相化葡萄球菌A蛋白(SPA)纯化的抗体已广泛应用于临床治疗,但注射污染SPA的抗体有潜在的生理反应。为此作者建立了一种定量检测SPA的非竞争性酶联免疫吸附法(ELISA),用以测定固相化SPA制剂提纯的治疗用鼠单克隆抗体(McAb)中SPA的微量污染。试验采用双抗体夹心法:先在微孔板中包被纯化的选择性亲合鸡抗SPA抗体作为捕捉抗体,接着加入SPA标准品或含     

不同微量滴定板对间接ELISA测定病毒抗体的适用性

在筛选杂交瘤克隆培养液上清内的抗体或进行血清学试验时,可应用ELISA,但应用不同的病毒抗原和固相板时试验结果有一定差异.作者用间接ELISA测定了口蹄疫病毒(FMDV)抗原和牛瘟病毒(RPV)抗原及其免     

固相法合成心肌兴奋肽及其类似物

用Boc-和Tos-基团分别保护氨基和侧链胍基,以1%交联度聚苯乙烯二苯甲氨基树脂为载体,用DCC固相法合成肽,HF断裂肽树脂键和去除侧链保护基团,粗产物经高效液相层析纯化,合成了心肌兴奋肽Phe-Met-Arg-Phe-NH₂及其类似物Phe-Pro-Arg-Phe-NH₂,并观察了此二种肽对大鼠血压和心率的影响。     

HBsAg前S(2)区的11个连续性氨基酸残基具有两个不同但相互重叠的抚体结合位点

作者用3株抗前S(2)合成肽(p133-151/ayw)单克隆抗体(McAb)和2株抗HBsAg/p33(ayw)完整多肽的McAb,研究了鼠对HBsAg前S(2)区体液免疫应答的特异性。方法:(1)间接固相放射免疫法:合成一系列与HBsAg前S(2)区相应的具有组特异性或亚型特异性的肽,用这些肽和HBsAg/p33(自然蛋白)作为固相;羊抗鼠IgG作第二抗体;猪抗羊     

微量酶联免疫吸附测定法测定人的霍乱抗毒素免疫球蛋白G:本方法与家兔皮肤血管渗透因子技术的相互关系

微量酶联免疫吸附测定法(ELISA)是一种经过改进的测定人霍乱抗毒素免疫球蛋白G(IgG)的微量方法。它特异、敏感、可重复,仅需血清0.5μl。其试验步骤如下:在聚苯乙烯板的U形孔内加100μl的纯霍乱毒素(10μg/ml磷酸盐缓冲盐水),4℃过夜,     

一种以病毒糖蛋白固定于伴刀豆球蛋白A包被的微漏板孔来检测HIV-1包膜糖蛋白抗体的新型ELISA

作者用伴刀豆球蛋白A(ConA)吸附微量滴定板孔,并用以亲和固定在无血清培养基中生长的1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)感染细胞培养液中释放的经去垢剂处理的病毒糖蛋白,大大简化了HIV-1包膜(env)糖蛋白固相的制备程序,从而建立了一种新型ConA env ELISA。以100μl ConA(200μg/ml)包被板孔,用含0.1%Triton-X的PBS洗涤后,将100μl经去垢剂处理的无血清病毒原液加至孔中作用1小时;洗涤板孔,以含10%胎牛血清的RPMI培养液(RPMI-10%FCS)封闭未反应     

利用生物素-亲和素系统提高ELISA的灵敏度

ELISA的灵敏度一般低于或相当于微量固相放射免疫测定(RIA)。结合使用生物素-亲和素(Biotin-Avidin,B-A)系统,可提高ELISA灵敏度。B-A的优点表现为:(1)亲和     

抗心律失常肽(AAP)的合成及其活性比较

抗心律失常肽(AAP)用Merrifield固相多肽合成法合成,羟脯氨酸中的羟基用苄基保护。在药物诱导心律失常的动物模型中,AAP与其它抗心律失常药进行了抗心律失常活性的比较,证实了AAP的抗心律失常作用。     

脱苏氨醇奥曲肽的微波辅助合成

利用自制100 ml微波反应管通过微波辅助固相肽合成技术制得奥曲肽原料药中关键有关物质脱苏氨醇奥曲肽(1)。采用Fmoc策略以2-Cl-Trt-树脂为固相载体,经上载、缩合、脱保护、裂解等操作合成还原型脱苏氨醇奥曲肽,再用空气氧化法并加入活性炭快速氧化得到1,总收率62.9%,单批次产量达3.5 g,中间体及终产物经高分辨质谱及氨基酸分析确证,并通过圆二色谱法研究了环合前后多肽构象的变化。该方法比传统固相合成方法快捷,为研究奥曲肽的关键有关物质提供了可行的合成方法。