MicroRNA与肝癌发生发展关系研究进展简

MicroRNA（miRNA）是一类内源性非编码的小RNA,通过与目标mRNA互补配对,涉及靶基因的转录后调控,在细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥重要的生理作用。利用实验生物学及生物信息学方法对与肿瘤相关的miRNA进行研究成为当前的热点。最近多项研究表明miRNA广泛参与肝癌的发生、发展、转移、多药耐药。本文就microRNA与肝癌发生发展之间的关系作一综述。     

电离辐射诱导microRNA研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA（mRNA）配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,miRNA有可能成为放射病治疗的潜在新靶点。本文概述电离辐射诱导miRNA的研究进展。     

移植肾慢性排斥反应的miRNAs差异表达研究

目的通过microRNAs芯片技术,探讨microRNAs（miRNAs）在移植肾慢性排斥反应中的差异表达情况。方法纳入4例慢性排斥反应患者肾穿组织为实验组,3例病理检查正常的肾组织皮质为对照组。采用miRNA芯片筛选出差异表达显著的微小RNA,并用实时定量PCR技术验证芯片结果可靠性。结果紫外分光光度法和变性电泳法证明所提取样本总RNA质量良好,可用于后续的芯片实验。芯片实验结果显示CR组中出现差异表达显著的miRNAs 63个,其中表达显著上调35个,表达显著下调28个。其中有9个miRNAs集中在3个miRNAs基因簇位点：14q32.31,22q11.21,xq27.3。随机选择显著差异表达的miRNAs（hsa-miR-637,hsa-miR-648,hsa-miR-516-5p）进行实时定量PCR验证实验,其CR/NC结果（0.034,2.670,7.846）与芯片结果（0.035,2.660,7.857）相符,证明了芯片结果的可靠性。结论miRNAs在慢性排斥反应患者中出现显著差异表达,深入研究miRNAs在慢性排斥反应中的作用机制将为其预防和治疗提供新途径。     

miRNA在肝癌中的价值

肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,具有高度侵袭性和复发率,大部分肝癌患者就诊时已经进入中晚期,错失了最佳治疗时机,且预后较差,因此寻找早期肝癌诊断和预后判断的生物分子标志物是十分必要的.Micro RNA(miRNA)是一类内源性、长度为20~25个核苷酸的非编码小RNA,在血清或血浆中表现出高度的稳定性.大量研究表明miRNA在肿瘤中起着促癌基因或抑癌基因的作用,并能同时调节多个靶基因,参与肿瘤的发生发展.因此,肝癌患者和正常人血清样本中表现出显著差异的miRNA可能对肝癌患者的诊断和预后有着潜在的指示作用.     

miRNA和肿瘤干细胞研究进展

microRNA（miRNA）是一类长度为21-23个核苷酸（nt）的非编码单链小RNA分子,由约70nt的pre-miRNA经Dicer酶剪切加工而来,通过RISC（RNA-induced silencing complex）在转录后对靶基因的表达实施调控。如miRNA与其靶基因mRNA的3’-UTR（非翻译区）片段完全互补,     

微小RNA在甲状腺癌发生、 发展中的研究进展

微小RNA（miRNA）是一类内源性的、在进化上高度保守的非编码单链小RNA,其在多种生物和代谢过程中发挥着重要作用,包括信号转导及细胞增殖、分化和凋亡。miRNA可以担任抑癌基因或者癌基因,与肿瘤的形成有着密切的联系。近年来的研究结果显示,miRNA与甲状腺癌关系密切,参与了甲状腺癌的发生、发展过程,这与其具有的高侵袭性特征也存在相关性。笔者主要综述miRNA在不同类型甲状腺癌中的最新研究进展。     

miR-205在宫颈鳞癌中的表达及其对癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 筛选宫颈癌中差异表达的微小RNA（miRNA,miR）,探讨关键miRNA对宫颈癌发生发展的作用及其机制。方法 采用生物信息学方法分析并以差异倍数>2.5及_P<0.01为条件筛选宫颈鳞癌中差异表达的miRNA;采用原位杂交和qRT-PCR分别检测miR-205及白细胞介素（IL）-32的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活力;应用Transwell模型评价细胞迁移及侵袭能力;利用Western blotting检测侵袭相关基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9蛋白的表达量。结果 生物信息学分析获得宫颈鳞癌中差异表达的miRNA 106个,其中70个上调,36个下调;其中miR-205的表达量变化最大。原位杂交及qRT-PCR结果表明,miR-205在宫颈鳞癌细胞中的表达量明显高于癌旁组织（_P<0.05）。miR-205可明显提升宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力（_P<0.05）。在宫颈癌细胞系HeLa及SiHa细胞中,过表达miR-205可增强IL-32的表达,降低_{miR-205表...}     

动物胚胎发育中的MicroRNAs研究进展

MicroRNA（miRNA）是一类广泛存在于真核生物中的非编码RNA,具有调控功能,长度约有20～25个核苷酸,它通过与靶基因特异性的碱基配对引起靶基因的降解或者抑制其翻译,从而实现对靶基因的转录后表达的调控。文章综述了miRNA的发现、体内生成机制、作用机制及不同动物种类胚胎发育过程中miRNA的鉴定和研究．并并阐述了miRNA研究中的问题及应用前景。     

hsa-miR-5688在肝细胞癌中靶途径预测体系的构建与验证

目的 构建并预测在原发性肝细胞癌(肝癌)中hsa-miR-5688的靶途径及调控机制,并通过TCAG数据库和串联质量标签(TMT)标记LC-MS/MS蛋白质测序方法验证其结果,以期构建准确高效的微小RNA(miRNA,miR)靶途径预测方案.方法 通过五大线上数据库筛选hsa-miR-5688靶基因,对细胞定位、分子功能、信号通路、疾病、组织表达和基因互作进行富集分析,构建分析策略,预测其靶途径及调控机制.利用TCAG数据库分析调控途径中靶基因的mRNA表达量、突变频率和生存曲线;基于肝癌复发和预后良好的肝癌组织标本,应用TMT标记蛋白质结合LC-MS/MS方法对靶途径中的互作蛋白进行定量检测,以验证预测体系的正确性.结果 预测获得hsa-miR-5688调控的靶基因,包括信使RNA(mRNA)3031个,环状RNA(circRNA)1511个;代谢通路、细胞定位、分子功能、疾病、组织表达等富集结果经多重分析发现,靶基因RHOBTB1和UBE2W共同参与的泛素化蛋白降解途径是其调控肝癌进程的最关键信号通路.TCAG临床数据分析表明,泛素化途径的靶基因mRNA表达量在肝癌组织中明显高于正常肝组织,且基因突变会明显降低患者生存率.TMT标记蛋白质结合LC-MS/MS分析表明,与RHOBTB1和UBE2W互作的蛋白质泛素化降解相关基因UBA5、NEDD4L、UBE3C和USP14直接参与肝癌复发调控.结论 hsa-miR-5688可通过泛素化蛋白降解途径参与肝癌发生和复发进程,证明通过优化生物信息学构建快速预测miRNA靶途径的体系具有一定的高效性和准确性.     

临床膀胱癌组织中miRNA的差异表达研究

目的寻找并鉴定在膀胱癌及癌旁组织中差异表达的微RNA（miRNA）。方法结合miRNA芯片技术寻找膀胱癌及癌旁组织中差异表达的miRNA,并通过荧光定量PCR进行验证。结果在癌与癌旁组织中共检测到115条存在显著性差异的miRNA,其中膀胱癌组织中下调42条,上调73条。结论膀胱癌组织与癌旁组织中miRNA表达谱存在较大差异,miRNA与膀胱癌的发生发展存在一定的相关性。     

乙型肝炎病毒基因组转染HepG2细胞的microRNA表达研究

目的 检测乙型肝炎病毒(HBV)全基因组转染对人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞中microRNA(miRNA)表达的影响,为进一步探讨肝细胞中HBV复制的分子生物学机制提供平台.方法 分别提取HepG2.2.15细胞(转染HBV全基因组的HepG2细胞,实验组)和其亲本HepG2细胞(对照组)的总RNA并分离miRNA,采用含509条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析.用SAM软件针对差异miRNA筛选的标准为在两组之间荧光强度差异4倍以上,差异miRNA的整体假阳性率为0.选择其中2个miRNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法对芯片结果进行验证.结果 HepG2.2.15细胞与HepG2细胞间差异表达的miRNA共27个(占5.3%),其中7个表达上调,20个表达下调.miR-181d和miR-15a的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片表达结果基本一致.结论 肝细胞中存在着与HBV复制相关的miRNA,这些上调和下调表达的miRNAs可能参与了HBV在肝细胞中的复制.     

miRNA参与p53基因调控网络研究进展

在细胞增殖和细胞死亡等过程中均发现一些miRNA可以作为肿瘤抑制基因或癌基因参与调节。研究发现miR-34作为p53转录激活的靶分子,参与了包括细胞周期阻滞和细胞凋亡等过程的调节,miR-34的缺失可使p53介导的细胞效应受阻。miR-29可激活p53的表达并诱导p53介导的细胞凋亡。此外,还有许多miRNA分子受到p53的转录抑制。一种miRNA可调节多种不同的靶蛋白分子,因此大大拓展了p53调控网络的层面。越来越多的证据表明miRNA参与了癌基因和抑癌基因网络的调控,同时为肿瘤治疗提供了新的治疗策略。     

Discovery and characterization of miRNAs in mouse thymus responses to ionizing radiation by deep sequencing

To investigate the potential regulatory roles of microRNA (miRNA) in mouse response to ionizing radiation (IR)-induced thymus injury, miRNA expression profiles of mouse thymus with or without IR were analyzed using deep sequencing technology. Potential target candidates of the identified miRNA were predicted using RNAhybrid and miRanda. Differently expressed miRNA targets functional annotation and pathways were noted using Swiss-Prot, Gene Ontology (GO), Clusters of Orthologous Groups (COG), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) and non-redundant (NR) databases. In this study, there were 112 differently expressed miRNAs identified, including 45 known mature and 67 novel miRNAs, which meanwhile contained 77 up-regulated and 35 down-regulated miRNAs. The results of quantitative RT-polymerase chain reaction (qRT-PCR) verification were in agreement with the sequencing analysis. And the target genes of miRNA were annotated. These results revealed the differences of miRNA expression, further extended the biological knowledge and greatly facilitated future studies on the function of miRNA in IR-induced thymus injury.     

60Co γ线照射血管内皮细胞外泌体中miRNA的鉴定分析

目的 利用微小RNA(miRNA)芯片和生物信息学技术,研究受照射人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)产生的外泌体miRNA组分的变化,为揭示血管组织放射损伤及其旁效应机制提供新的线索.方法 超高速离心法收集对照组和4 Gy剂量照射组的HUVEC外泌体,运用电镜及Western印迹技术对外泌体进行鉴定,miRNA芯片技术分析细胞内和外泌体中miRNA表达谱,qRT-PCR法验证部分差异miRNA,通过miRDB和TargetScan预测差异miRNA的靶基因,DAVID、KEGG等在线工具进行生物信息学分析.结果 HUVEC经4 Gy照射后外泌体miRNA与对照组相比,照后0.5 h共鉴定到18个发生表达变化的miRNA分子,5个表达上调,13个表达下调;照后2 h鉴定出16个表达上调、5个表达下调miRNA分子;细胞内miRNA与对照组相比,照射后0.5、2 h分别有38个和85个差异表达miRNA,且差异有统计学意义(P<0.01).生物信息学结果表明,这些表达变化的miRNA可能通过参与调控MAPK、Ras、PI3K-Akt信号通路等途径影响细胞辐射旁效应.结论 电离辐射损伤导致血管内皮细胞外泌体miRNA分子组分和表达水平发生显著改变,这些miRNA的靶基因组产物在细胞放射损伤反应的信号通路调节中发挥重要作用.     

基于microRNA差异表达的精神分裂症与抑郁症共病研究

目的 观察精神分裂症(SZ)患者中差异表达的microRNA(miRNA),从miRNA表达水平上分析SZ与抑郁症的关系.方法 通过基因芯片筛选在SZ患者中差异表达的miRNA.采用实时定量PCR(qRT-PCR)在40例SZ患者外周血单核细胞中验证芯片筛查结果,并进行精神分裂症阳性和阴性症状量表(队NSS)评定,同时检测抑郁症中差异表达的5种miRNA(miR-1972、miR-26b、miR-4485、miR-4498、miR-4743)的表达改变及其与SZ中差异表达的miRNA及PANSS评分的相关性.结果 与正常人相比,SZ患者中33种miRNA存在差异表达(32种表达上调,1种表达下调),且其中8种上调的miRNA(miR-1273d、miR-1303、miR-3064-5p、miR-3131、miR-3687、miR-4428、miR-4725-3p、miR-5096)表达差异有统计学意义(P＜0.05).在抑郁症中差异表达的5种miRNA在SZ患者中差异表达也有统计学意义(P＜0.05),且与SZ中差异表达的8种miRNA呈中、高度相关(r=0.607～0.909,P＜0.01),其中miR-1972与PANSS量表阳性症状得分呈显著正相关(r=0.339,P＜0.05),miR-26b与复合量表因子分呈显著正相关(r=0.342,p＜0.05).结论 SZ与抑郁症不仅具有某些共同的临床表现,二者在分子遗传学方面也可能有共同的病理基础.     

Characterization of microRNA expression profiles in blood and saliva using the Ion Personal Genome Machine® System (Ion PGM™ System)

MicroRNA (miRNA) expression profiling is gaining interest in the forensic community because the intrinsically short fragment and tissue-specific expression pattern enable miRNAs as a useful biomarker for body fluid identification. Measuring the quantity of miRNAs in forensically relevant body fluids is an important step to screen specific miRNAs for body fluid identification. The recent introduction of massively parallel sequencing (MPS) has the potential for screening miRNA biomarkers at the genome-wide level, which allows both the detection of expression pattern and miRNA sequences. In this study, we employed the Ion Personal Genome Machine^® System (Ion PGM™ System, Thermo Fisher) to characterize the distribution and expression of 2588 human mature miRNAs (miRBase v21) in 5 blood samples and 5 saliva samples. An average of 1,885,000 and 1,356,000 sequence reads were generated in blood and saliva respectively. Based on miRDong, a Perl-based tool developed for semi-automated miRNA distribution designations, and manually ascertained, 6 and 19 miRNAs were identified respectively as potentially blood and saliva-specific biomarkers. Herein, this study describes a complete and reliable miRNA workflow solution based on Ion PGM™ System, starting from efficient RNA extraction, followed by small RNA library construction and sequencing. With this workflow solution and miRDong analysis it will be possible to measure miRNA expression pattern at the genome-wide level in other forensically relevant body fluids.