CX43在应激性溃疡发生发展过程中的表达与细胞凋亡、增殖的关系

探讨细胞间隙连接蛋白43（CX43）在胃粘膜遭受应激损伤的变化及与细胞凋亡，增殖发生的关系。制作大鼠水浸－束缚应激（WRS）模型，采用原位末端标记（TUNEL）法检测WRS结束前后不同的时间点细胞凋亡的发生；免疫组化ABC法原位检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达，原位杂交检测CS43 mRNA表达变化。结果发现，正常大鼠胃粘膜上皮散在TUNEL－细胞，PCNA蛋白主要在胃腺颈部近胃小凹处呈中等阳性表达，CX43 mRNA在胃腺区呈中等阳性表达，WRS 2h-WRS后5h TUNEL-细胞较对照组明显增多，并逐步达高峰，PCNA蛋白和CX43 mRNA的表达明显低于对照组；WRS后8－12h TUNEL-细胞逐渐减少，而PCNA表达高峰，CX43 mRNA表达恢复并明显增加，WRS后24hTUNEL－细胞仍高于正常水平，PCNA及CX43表达基本恢复至正常水平，相关分析，CX43 mRNA表达与PCNA蛋白表达呈显著正相关，结果提示，CX43 mRNA的表达可能与胃粘膜腺细胞区细胞稳定，增殖和分化有关，并影响上皮细胞凋亡发生。     

RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究

目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细...     

经肝动脉注射32P-玻璃微球治疗肝癌临床与实验研究

目的:评价经肝动脉注射32P-玻璃微球治疗肝癌的临床疗效,并测定其对肿瘤组织多药耐药基因的表达率的影响。方法:116例原发性肝癌随机分成两组,A组58例,TACE 32P-GMS治疗;B组58例,单纯TACE治疗。每例分别在B超或CT引导下经皮穿刺活检,获取肿瘤组织标本,运用RT-PCR法定量分析mdr-1基因表达水平,根据影像学判定肿瘤血管侧支循环、肿瘤缩小情况、血清AFP下降率,比较两种方案的疗效。结果:①血管造影:A组肿瘤血管栓塞程度为97%±3%,侧支循环形成很少;B组肿瘤血管栓塞的程度为90%±8%,有侧支循环形成;②肿瘤坏死面积:A组为76%±17%,B组为60%±14%;③肿瘤缩小平均值:A组为60.54%±10.14%;B组为43.27%±9.12%;④AFP下降率:A组为84.48%;B组为51.72%;⑤1年生存率:A组为81%,B组为56%;⑥mdr-1cDNA\β2-mGcDNA:A组为0.3036±0.0825;B组为0.4755±0.1259。所有数据经μ检验或χ2检验,A组疗效优于B组,统计学上有显著差异(P<0.01)。结论:TACE 32P-GMS治疗原发性肝癌疗效优于单纯应用TACE。     

异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的：观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的增殖周期及凋亡的影响。方法噻唑蓝（Mar）法检测异鼠李素对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测异鼠李素对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。结果MTr结果提示异鼠李素对人肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,并随着作用浓度的增大,抑制作用逐渐增强,以100mg／L的异鼠李素培养基抑制作用最明显。流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,提示异鼠李素有诱导入肝癌细胞凋亡作用。异鼠李素可通过诱导人肝癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0—G1期,使细胞不能进入s期进行DNA合成,最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论异鼠李素抑制人肝癌细胞的增殖。阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,可能具有一定抗肝癌作用。     

MicroRNA与肝癌发生发展关系研究进展简

MicroRNA（miRNA）是一类内源性非编码的小RNA,通过与目标mRNA互补配对,涉及靶基因的转录后调控,在细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥重要的生理作用。利用实验生物学及生物信息学方法对与肿瘤相关的miRNA进行研究成为当前的热点。最近多项研究表明miRNA广泛参与肝癌的发生、发展、转移、多药耐药。本文就microRNA与肝癌发生发展之间的关系作一综述。     

hsa-miR-5688在肝细胞癌中靶途径预测体系的构建与验证

目的 构建并预测在原发性肝细胞癌(肝癌)中hsa-miR-5688的靶途径及调控机制,并通过TCAG数据库和串联质量标签(TMT)标记LC-MS/MS蛋白质测序方法验证其结果,以期构建准确高效的微小RNA(miRNA,miR)靶途径预测方案.方法 通过五大线上数据库筛选hsa-miR-5688靶基因,对细胞定位、分子功...     

多索茶碱对体外U937细胞增殖与诱导凋亡的影响

目的 探讨磷酸二酯酶抑制药多索茶碱对体外培养的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞U937增殖及凋亡的影响.方法 分别将不同实验浓度的多索茶碱作用于一定浓度的处于对数生长期的U937细胞,采用WST-1方法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 不同浓度的多索茶碱分别作用于U937细胞后,细胞增殖活性受抑程度随着作用时间的延长和药物浓度的增加而逐渐增加（P＜0.01）,其中以60 mg/L组最明显.不同浓度的多索茶碱均能促进U937细胞凋亡,且凋亡具有显著的浓度依赖性及时间依赖性（P＜0.01）.结论 多索茶碱能够抑制白血病细胞U937细胞株增殖,诱导其凋亡,并具有浓度及时间依赖性.     

肝细胞癌CT表现特征与VEGF、bFGF及凋亡相关蛋白表达的关系

目的　检测肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)组织中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)及凋亡相关蛋白的表达与CT表现特征之间的关系。 方法　对 3 8例共 40个经病理证实且行动、静脉双期CT增强扫描的HCC病灶进行分析 ,用免疫组化SP法检测癌组织中VEGF、bFGF以及fas、bax、bcl -2和bcl -xl的表达情况 ,并结合病理分级将CT各个表现特征与免疫组化的结果进行对照分析。结果　VEGF、bFGF、fas、bax、bcl-2和bcl-xl的阳性表达率分别为 77.5 % ( 3 1/ 40 )、75 % ( 3 0 / 40 )、2 0 % ( 8/ 40 )、2 5 % ( 10 / 40 )、2 7.5 % ( 11/ 40 )和5 0 % ( 2 0 / 40 )。VEGF分别与bFGF、bcl -2之间 ,bcl-2与bcl-xl之间 ,以及bax分别与bcl -2、bFGF之间均具有一定的相关性 (Ρ<0 .0 5 )。CT显示的病灶大小与bcl-xl的表达具有一定的关系 (P <0 .0 5 ) ;病灶边缘清晰与否与VEGF的表达和病理分级具有一定的相关性 (Ρ <0 .0 5 ) ;瘤内液化坏死与病理分级有关 (Ρ <0 .0 1) ;强化类型和侵袭转移性则与肿瘤的大小有一定的关系 (Ρ<0 .0 5 )。结论　HCC的某些CT表现特征可在一定程度上反映VEGF和bcl-xl的表达 ,同时还受其它因素     

SATB1基因与细胞凋亡的研究进展

SATB1是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白,参与染色质高级结构的形成和组织特异性基因的表达调控,在免疫调节、肿瘤转移和凋亡方面发挥着重要的作用。本研究就SATB1基因与细胞凋亡的研究进展作一综述。     

MMP-14与EMMPRIN在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase 14,MMP-14)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中的临床意义,并分析二者的相关性。方法选取2012年1月—2014年6月于我院口腔颌面外科诊治的69例OSCC患者作为OSCC组,同时选取43例口腔正常新鲜组织标本作为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应技术检测组织中的MMP-14及EMMPRIN mRNA的表达含量。结果MMP-14 mRNA、EMMPRIN mRNA在OSCC组中的相对表达量明显高于对照组,差异具有统计学意义（t=8.198、9.624,P＜0.01）;OSCC组患者在年龄、性别因素中的MMP-14、EMMPRIN mRNA的表达差异不明显（P＞0.05）,在伴有淋巴结转移的患者中均明显升高（t=2.909、2.156,P＜0.05）;且MMP-14、EMMPRIN mRNA在Ⅲ～Ⅳ期、中低分化的OSCC中表达均明显升高,差异具有统计学意义（t=3.376、2.667、3.027、2.399,P＜0.05）;MMP-14与EMMPRIN mRNA表达含量间相关系数为r=0.821,二者呈正相关性（P＜0.01）。结论OSCC组织中MMP-14和EMMPRIN mRNA的高表达状态均与肿瘤的病理分期、分化程度及淋巴结转移因素关系密切,二者的表达具有正相关性,提示MMP-14和EMMPRIN均参与了OSCC的浸润及转移过程,通过检测EMMPRIN及MMP-14 mRNA表达含量可能有助于OSCC的病变程度及预后转归判断。     

上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上调microRNA- 150 (miR- 150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染).采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(p＜0.01).CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P＜0.0l).流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36％±1.78％)与阴性对照组(5.12％±0.54％)及空白对照组(4.68％±0.35％)相比明显增加(P＜0.01).结论 上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因.     

环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察

目的 观察作用于环氧合酶2(COX-2)mRNA的发卡状COX-2(COX-2 shRNA)真核表达质粒对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计靶向COX-2基因的RNA干扰序列,构建COX-2 shRNA表达载体,用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染体外培养的HepG2细胞.半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA表达水平的变化,筛选有效抑制COX-2基因表达的序列.采用CCK-8细胞计数法检测COX-2 shRNA对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测细胞内COX-2和Bcl-2蛋白表达水平.结果 测序结果显示成功构建了2个表达COX-2shRNA的质粒载体,转染HepG2细胞后COX-2 mRNA表达下降至阴性对照组的41.66％和77.79％.选择沉默效率较佳者转染细胞并经G418筛选,获得稳定表达COX-2 shRNA的细胞,胞内COX-2 mRNA表达水平下降了75.30％,细胞增殖活性下降了 29.33％.在稳定表达COX-2 shRNA、错义序列以及未转染的细胞中,细胞凋亡率分别为17.83％、4.63％和4.47％,G0/G1期细胞比例分别为73.93％、61.2％和57.630％,而S期细胞比例分别为13.43％、26.03％和26.90％.Westernblotting检测显示,表达COX-2 shRNA的HepG2细胞内COX-2蛋白水平下降至表达错义序列组的31.25％(P＜0.01),Bcl-2蛋白水平下降至表达错义序列组的54.93％(P＜0.01),而转染错义质粒组与未转染组之间比较差异无统计学意义.结论 构建的真核表达载体pSilencer 2.1-U6-COX-2 shRNA能有效沉默人肝癌HepG2细胞内COX-2基因的表达,并具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和细胞周期阻滞、降低胞内抗凋亡蛋白(H)Bcl-2水平的作用.     

成纤维细胞生长因子19（FGF-19）在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的：分析成纤维细胞生长因子19（FGF-19）在肝细胞癌（HCC）以及癌旁组织中的表达及临床意义。方法选择解放军401医院2003年1月至2009年12月期间行根治切除术的HCC病例209例,应用免疫组织化学方法检测FGF-19在HCC及癌旁组织中的表达,分析FGF-19蛋白的表达与临床和病理因素的关系,采用χ2检验和Fisher精确检验法分析数据, Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox模型分析多因素对生存的影响。结果 HCC组织中FGF-19的高表达率为66．1％（138／209）,显著高于癌旁肝组织的46．9％（98／209）,两组比较差异有显著统计学意义（P＜0．05）;FGF-19的高表达与肿瘤包膜和边界有相关性（P＜0．05）;FGF-19高表达组的术后生存时间明显低于FGF-19低表达组（P＜0．05）。结论 FGF-19在HCC发生和进展过程中起重要作用,FGF-19的表达水平与HCC切除术后患者的生存时间密切相关,是一个潜在的预测HCC预后的分子。     

原发性肝癌患者长期生存的影响因素分析

目的 对明确诊断为原发性肝癌并存活5年以上的患者,探讨影响其长期生存的相关因素及介入治疗对患者长期生存的作用.方法 对2001年1月至2010年1月以来就诊生存时间长于5年的原发性肝癌患者相关资料及治疗经过进行分析,探讨其长期生存的相关因素.结果 随访的452例原发性肝癌患者中43例存活5年以上.其中年龄、肝硬化的程度、肝内肿瘤的大小、肝内肿瘤的数量、门静脉有无受侵对患者的长期生存具有统计学意义(P＜0.01).结论 原发性肝癌患者的年龄、肝硬化的程度、肿瘤的数量、门静脉有无受侵、术后复发选择的治疗方式对患者的长期生存起着显著作用.     

肝切除手术相关因素对肝细胞癌预后的影响

目的 分析影响肝细胞癌(HCC)患者预后的手术相关因素.方法 1991年1月～2002年6月实施根治性肝切除、随访资料和临床资料完整的HCC患者234例,回顾性分析医源性肝癌被膜破裂、术中出血量、输血量、手术持续时间、手术大小程度、肝门阻断次数和术后并发症(胆漏、切口感染、胸腔积液)等手术相关因素对患者长期存活的影响.生存时间比较采用Log-rank检验,各因素间的相关性采用双变量相关分析.结果 医源性肝癌被膜破裂、术中出血量、输血量和手术持续时间可影响HCC预后(P＜0.05).输血量与手术大小程度呈正相关(P＜0.05),但出血量与后者无明显相关性(P＞0.05).结论 减少出血和输血量、缩短手术时间、避免肝癌被膜破裂是改善HCC预后的重要举措.     

免疫检查点阻断与肝癌化疗栓塞

肝癌化疗栓塞通过动脉内灌注化疗药和阻断肿瘤血供诱导大量肿瘤细胞死亡,但它对肿瘤免疫的影响尚不明确。免疫检查点抑制疗法是目前肿瘤免疫治疗的主导方法,对某些特定癌症疗效显著,但并不是对所有癌症普遍有效。早期研究表明免疫检查点阻断与消融或栓塞联合治疗肝癌具有协同抗肿瘤作用。本文就肝癌免疫学特点、免疫检查点抑制剂及其与化疗栓塞联合治疗作一综述。     

Hypocrellin B in hepatocellular carcinoma cells: Subcellular localization and sonodynamic damage

Abstract

Purpose: To study subcellular localization of hypocrellin B in hepatocellular carcinoma cells, and hypocrellin B-mediated sonodynamic action-induced cell damage.

Materials and methods: After incubation with 2.5 μM of hypocrellin B, human hepatocellular carcinoma HepG2 cells were exposed to ultrasound waves for 8 sec at an intensity of 0.46 W/cm². Clonogenic survival of HepG2 cells was measured using a colony forming assay and light microscope. Ultrastructural morphology was observed using transmission electron microscope (TEM) and mitochondrial membrane potential (MMP) was assessed using confocal laser scanning microcope (CLSM) after rhodamine 123 staining. Additionally, subcellular localization of hypocrellin B in HepG2 cells with organelle probe staining was also observed using CLSM.

Results: The colony forming units of HepG2 cells decreased substantially after sonodynamic treatment. The results of TEM showed microvilli disappearance, apoptotic body formation, swollen mitochondria with loss of cristae and mitochondrial myelin-like features (or membrane whorls). Collapse of MMP was found in the treated cells. Hypocrellin B was distributed in mitochondria and lysosomes as well as in endoplasmic reticulum and Golgi apparatus.

Conclusions: The findings demonstrated that sonodynamic action of hypocrellin B induced mitochondrial damage, survival inhibition, and apoptosis of HepG2 cells. Additionally, other subcellular organelles such as endoplasmic reticulum, Golgi apparatus and lysosomes were also the targets of hypocrellin B-mediated sonodynamic action as well as mitochondria.     

温控射频消融治疗VX2肝癌实验研究

目的 探索不同温度控制条件下射频消融(RFA)治疗兔VX2肝癌后靶区内肿瘤细胞凋亡及增殖变化.方法 采用开腹组织块法构建兔VX2肝癌模型,随机分为对照组(n=6,未行RFA)和实验组A组(n=24,射频针温度50～70℃)、B组(n=24,射频针温度70～90℃)、C组(n=24,射频针温度90～110℃).实验组分别接受CT引导下不同温控RFA,靶区由消融中心向外周依次分为针道区、消融区和交界区;采用苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤及周围肝组织病理学变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法检测各区带肿瘤细胞凋亡及增殖情况.结果 RFA后实验组各组各区带6个时间点(术后即刻,1、3、7、14、21 d)标本肿瘤细胞凋亡指数(AI)和增殖指数(PI)与对照组比较,均有统计学差异(P＜0.05);B、C组区带各时间点AI均高于A组(P＜0.05),B、C组间无明显差异(P＞0.05);术后7、14、21 d时B、C组消融区和交界区PI均低于A组(P＜0.05),且术后21 d时C组PI低于B组(P＜0.05).结论 RFA温控在50～110℃能达到基本灭活针道区兔VX2肝癌细胞的作用,选择90～110℃温控更利于彻底控制肿瘤.     

中晚期原发性肝癌96例肝动脉化疗栓塞的疗效分析

目的总结肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗中晚期肝癌的疗效。方法 96例无法切除的中晚期肝癌接受了1～7次TACE(平均1.7次),回顾性分析治疗效果和生存率。结果超选择性肝动脉插管成功率97.9%,1例术后1周因门脉高压突发食管胃底曲张静脉破裂大出血死亡,6个月、1、3年生存率分别为95.8%、72.9%和26%。结论 TACE联合其他抗癌治疗能有效地缓解中晚期肝癌症状和延长生存期。