脱氧核酶的研究进展

自发现group I内含子的自我切割和连接活性以来，已进行了大量关于酸催化活性的研究。通过体外筛选技术又发现一些短的单链DNA具有化学催化活性，这些人工合成的DNA核酶，或称脱氧核酶，具有高效的催化活性和结构识别能力，迄今为止已发现了几十种脱氧核酶，至少能催化7种化学反应，其中最特别的是一种能特异切割RNA的高效通用的脱氧核酶－10－23DNA核酶，它包括一个催化结构域和两翼的识别结构域，迄今为止在脱氧核酶的应用方面，特别是作为基因表达抑制剂在基因治疗方面，取得了较大的进展。     

“10～23”型脱氧核酶的研究进展

脱氧核酶是利用体外分子进化技术获得的一种具有酶活性的单链DNA分子。迄今为止,利用该技术已筛选出多种具有催化功能的脱氧核酶分子,其中研究最多的是具有RNA切割活性的脱氧核酶,尤其是10～23型脱氧核酶,该酶能催化RNA特定部位的切割反应,从mRNA水平使基因灭活,从而调控蛋白质的表达,在抗肿瘤、抗病毒等基因治疗领域具有广阔的应用前景。     

基因治疗新药核酶的研究进展

对基因治疗新药核酶的结构、作用机制、临床和基础应用进行综述及展望。     

一类新型基因药物核酶在肿瘤治疗方面的研究进展

目的 介绍一种新型基因药物——核酶在肿瘤治疗方面的研究进展。方法 对近年来国内外在核酶方面的研究章进行综合分析。结果 核酶是一种具有位点剪切和催化潜能的RNA分子。核酶的作用机制是通过作用于特定有害基因的mR—NA而抑制该有害基因的表达。近年来，科学家们设计并研究了一些抗致癌基因核酶和抗药物性核酶，如：抗活性H—ras核酶、抗K—ras核酶、抗MDRl核酶、抗c—fos核酶等，为进一步的研究打下良好的基础。结论 核酶为肿瘤的治疗提供了一种全新的思路．它必将成为肿瘤治疗的一种有力工具，并最终在治疗肿瘤方面取得突破。     

核酶的化学修饰

核酶是一类具有催化核酸水解和连接功能的核酸分子,体外筛选技术的发展大大扩展了它的催化反应谱.进一步的化学修饰,如引入蛋白酶的催化性官能团和靶向结构,对于改善核酶的药学性质及发展临床应用的核酶药物具有指导意义.     

核酶在肺癌基因治疗中的应用

据统计,目前在我国大城市肺癌发病率已由70年代的第4位升至第1位,死亡率也逐年升高,以往传统的治疗方法如化疗、放疗、手术治疗已不能满足患者的需要,积极探索新的有效的肺癌治疗方法已成为临床医生的迫切任务.     

脱氧核酶抑制细菌blaTEM-1酶基因表达的实验研究

目的观察10-23脱氧核酶对细菌TEM-1酶基因表达的抑制作用。方法PCR扩增TEM-1酶全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠埃希菌JM109中表达。设计并合成针对blaTEM-1的10-23脱氧核酶、反义寡核苷酸,采用氯化钙法将其分别导入表达blaTEM-1的大肠埃希菌中,观察细菌导入脱氧核酶后,在含氨苄西林(100μg/ml)培养基中的生长活力及β-内酰胺酶活性的变化。结果10-23脱氧核酶导入表达blaTEM-1的大肠埃希菌后,在含氨苄西林(100μg/ml)的培养基中大肠埃希菌的生长活力明显低于反义寡核苷酸和空白对照组,导入脱氧核酶的大肠埃希菌β-内酰胺酶活性也明显低于反义寡核苷酸和空白对照组。结论10-23脱氧核酶能特异性地抑制细菌blaTEM-1酶基因表达。     

脱氧核酶抑制Bcl-2基因表达诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究利用脱氧核酶抑制Bcl-2表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响.方法 合成针对Bcl-2基因的“10～23”型脱氧核酶及其类似物;转染入肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Bcl-2mRNA的切割作用;荧光免疫方法测定脱氧核酶对Bcl-2蛋白表达的影响;流式细胞仪检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响.结果 “10 ～ 23”型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)在胞内能有效地切割Bcl-2 mRNA,DzTi比DzT的切割活性显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著地下调细胞内Bcl-2蛋白水平(P＜0.01),抑制肝癌细胞的生长(P＜0.05).流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰,与对照组细胞及脱氧寡核苷酸DzT和 DzTi凋亡率差异有统计学意义(P ＜0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降.结论 脱氧核酶可以有效切割Bcl-2 mRNA,抑制Bcl-2蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡.     

Therapeutic potential of ribozymes in haematological disorders

Ribozymes are RNA molecules that possess the ability to cleave and thus destroy other RNA molecules. As a result of this ability, they are ideal specific agents to use against the messenger RNAs of important genes found to be linked with disease (of cellular and viral origin). This review will briefly describe the different types of ribozyme and the potential they have as therapeutic compounds against viruses, oncogenes and drug resistance in haematological settings. The latest news from the various Phase I and II ribozyme clinical trials is discussed, as is the potential for the ribozymes’ future as therapeutic agents.     

抗生素对核酶活性的影响及其意义

抗生素可抑制或促进核酶的活性 ,其中以抑制作用更常见 ;根据它们能否与鸟苷竞争结合位点 ,又可分为竞争性抑制与非竞争性抑制。这些发现拓宽了人们对抗生素效用的认识 ,并有可能在抗病毒治疗、核酶活性的调控等方面得到应用     

肿瘤生物治疗新进展

生物治疗已经成为肿瘤综合治疗中的第四种模式,越来越受到重视.主要包括:体细胞疗法与细胞因子疗法,肿瘤疫苗与树突状细胞,肿瘤分子靶向治疗,放射免疫靶向治疗,肿瘤基因治疗和生物化疗.现对这些治疗方法和存在问题及展望做一综述.     

基因治疗新策略——酶性DNA的设计和应用

本文综述了能够剪切RNA分子的酶性DNA的种类、结构、作用机制、动力学特征及其在用作新型基因治疗药物方面的优势、设计要点、应用现状与前景等最新研究进展。     

Delivery of therapeutic RNA-cleaving oligodeoxyribonucleotides (deoxyribozymes): from cell culture studies to clinical trials

Introduction. Development of efficient in vivo delivery systems remains a major challenge en route to clinical application of antisense technology, including RNA-cleaving molecules such as deoxyribozymes (DNAzymes). The mechanisms of oligonucleotide uptake and trafficking are clearly dependent on cell type and the type of oligonucleotide analogue. It appears likely that each particular disease target would pose its own specific requirements for a delivery method.

Areas covered. In this review we will discuss the available options for DNAzyme delivery in vitro and in vivo, outline various exogenous and endogenous strategies that have been, or are still being, developed and ascertain their applicability with emphasis on those methods that are currently being used in clinical trials.

Expert opinion. The available information suggests that a practical system for in vivo delivery has to be biodegradable, as to minimize concerns over long-term toxicity, it should not accumulate in the organism. Extracellular vesicles may offer the most organic way for drug delivery especially as they can be fused with artificial liposomes to produce hybrid nanoparticles. Chemical modification of DNAzymes holds great potential to apply oligonucleotide analogs that would not only be resistant to nuclease digestion, but also able to penetrate cells without external delivery agents.     

AdCDES 对人肺癌细胞增殖抑制作用的研究

目的：观察构建的AdCDES重组腺病毒对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法：采用同源重组法构建AdCDES。用测定生长曲线和MTT法观察AdCDES和5FC系统对人肺腺癌细胞A549的生长抑制率。结果：AdCDES转染A549后对细胞生长有明显的抑制作用，且对细胞抑制率随。AdCDES、5 FC的浓度及药物作用时间的增加而增高，差别有统计学意义。结论：AdCDES和5 FC系统对肺腺癌细胞A549有明显抑制作用，为AdCDES用于基因治疗奠定了基础。