WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元烟碱激活电流抑制作用的研究

目的：应用全细胞膜片钳技术,在培养的大鼠三叉神经节（trigeminal ganglion, TG）神经元上观察大麻素WIN55,212-2对烟碱激活电流（Inic）的调制作用及其机制。方法：培养大鼠三叉神经节神经元,利用全细胞膜片钳技术记录烟碱激活电流。结果：(1)实验中大部分受检细胞对外加烟碱敏感,产生一浓度依赖性内向电流。(2) 与烟碱单独作用相比,同时给予WIN55,212-2（3 µM）和烟碱能明显抑制Inic峰值;此快速抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性;WIN55,212-2使烟碱激活电流量效曲线明显下移,但EC50值无明显改变;WIN55,212-2不改变烟碱激活电流的失敏时间常数。(3) WIN55,212-2对烟碱激活电流的抑制作用不被CB1受拮抗剂AM81、CB2受体拮抗剂AM630和VR1受体拮抗剂capsazepine阻断;不受cAMP类似物8-Br-cAMP(1mM)影响;胞内应用非特异性的G蛋白抑制剂GDP-β-S(1mM) 也不影响WIN55,212-2对烟碱激活电流的抑制作用。结论：WIN55,212-2可能直接作用于nACh受体,通过非竞争性方式抑制烟碱激活电流发挥外周镇痛作用。     

皮质酮对大鼠背根神经节细胞钙电流的快速抑制作用

探讨了皮质酮(Corticosterone)对急性分离的大鼠背根神经节细胞(DRG神经元)上电压依赖性钙通道电流的快速作用及作用机制.实验采用全细胞膜片钳方法,结果显示三种浓度的皮质酮,10-7mol/L,10-9mol/L,10-12mol/L均可以在3～5 s的时间内,快速抑制DRG神经元上的电压敏感钙通道电流,其平均抑制的程度分别为48%,37%和25%.且这种快速抑制作用在吹药15 s后可以达到最大,停药20 s后钙电流基本恢复为原来的大小.在外液中加入500 nmol/L的PKC抑制剂BIS之后,皮质酮的对钙电流的快速抑制作用被阻断,提示这一作用可能与PKC信号转导途径有关.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻一氧化氮介导的谷氨酸神经毒作用

研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)是否通过作用于一氧化氮(NO)代谢途径,减轻谷氨酸的神经毒作用.取新生SD大鼠海马,用B27无血清培养基培养神经元;重氮化反应法测定NO浓度,MTT法测定神经元存活率,PACAP能减少谷氨酸引起的海马神经元死亡;谷氨酸呈剂量依赖性地增加海马神经元培养液中NO的含量,PACAP能不同程度地减少NO的含量;分别给予2 mmol/L L-Arg,100 靘ol/L SNP和 200 靘ol/L SNAP处理后,海马神经元存活率明显下降,给予不同浓度的PACAP (10-9,10－11,10-13 mol/L)能增加神经元的存活率.上述结果提示,PACAP通过抑制NO释放及其神经毒作用,减轻谷氨酸引起的海马神经元损害.     

皮质酮对大鼠背根神经节细胞钙电流的快速抑制作用

探讨了皮质酮 (Corticosterone)对急性分离的大鼠背根神经节细胞 (DRG神经元 )上电压依赖性钙通道电流的快速作用及作用机制。实验采用全细胞膜片钳方法 ,结果显示三种浓度的皮质酮 ,10 7mol/L ,10 9mol/L ,10 12 mol/L均可以在 3～ 5s的时间内 ,快速抑制DRG神经元上的电压敏感钙通道电流 ,其平均抑制的程度分别为4 8% ,37%和 2 5 %。且这种快速抑制作用在吹药 15s后可以达到最大 ,停药 2 0s后钙电流基本恢复为原来的大小。在外液中加入 5 0 0nmol/L的PKC抑制剂BIS之后 ,皮质酮的对钙电流的快速抑制作用被阻断 ,提示这一作用可能与PKC信号转导途径有关。     

辣椒素对大鼠骶髓后连合核神经元AMPA受体所介导电流的抑制作用

目的研究辣椒素（CAP）在急性分离的大鼠骶髓后连合核（SDCN）神经元的药理学特性。方法采用制霉菌素穿孔膜片钳全细胞记录方法。结果当钳制电压为-40mV时，在所有被检测的SDCN神经元上给予CAP不引起任何电流；CAP（10～3000μmol／L）可以呈浓度依赖方式可逆性的抑制海人藻酸（KA）所激活的AMPA受体介导的电流，IC50为（60．7±19．2）μmol/L；该抑制作用呈电压非依赖性。结论CAP在大鼠SDCN神经元可对AMPA受体激活的电流产生抑制作用，此作用可能和内脏痛的调节有关。     

乙醇对颈上神经节神经元Ca2+通道的作用

目的 探讨乙醇对颈上交感神经节神经元(SCGs)电压依赖性Ca2+通道(VDCC)的作用.方法 分散、培养新生12h内大鼠SCGs,应用全细胞膜片钳技术观察乙醇对SCGs VDCC的作用.结果 培养SCGs的VDCC类型以N-型为主,约占(73.31±16.31)%(P＜0.01,n=7).在钳制电位-70 mV,刺激电压-70～40 mV,波宽100ms的条件下,乙醇可逆性抑制SCGs VDCC,该作用具电压依赖性及浓度依赖性,其IC50为(257.36±20.56)mmol/L.乙醇可使VDCC的失活曲线显著左移,但不改变其激活曲线及电流的衰减.结论 乙醇对SCGs VDCC呈抑制作用,且可改变其通道特性,这可能是乙醇神经毒性的机制之一.     

硫化氢对PC12细胞存活素表达的影响及其神经保护作用

目的 探讨硫化氢(H2s)对PC12细胞存活素表达的影响及其神经保护作用.方法 应用Western blot检测不同浓度(50～800 μmol/L)的H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞不同时间(0～180min)诱导PC12细胞存活素表达的量效和时效关系;细胞计数Kit-8(CCK-8)比色法检测细胞的存活率.结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min后.在50～200 μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性地促进存活素表达:但随着NaHS浓度的增加,存活素表达逐渐下降,当NaHS 浓度达800 μmol/L时存活素表达低于正常.应用400 μmo/L NariS处理PC12细胞不同时间,在0～60min时间范围内呈时间依赖性地促进PC12细胞存活素的表达,但随着处理时间的继续延长,存活索的表达逐渐下降.另一方面.400 μmo/L NariS预处理还能增强氯化钴(COCl2)对存活素表达的促进作用.并可显著减轻CoCl2对PC12细胞的损伤作用,使细胞存活率增加.结论 在一定浓度和时间范围内H2S可上调存活素的表达,此作用可能与其保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤有关.     

GABA能去抑制水平的变化对海马CAl突触长时程增强的影响

目的 研究改变中间神经元GABA能抑制水平对海马CA1区突触长时程增强(LTP)的影响.同时获得不同浓度Bicuculline阻断GABAA受体介导抑制以及影响海马CA1区突触可塑性详细信息. 方法 应用膜片钳全细胞记录技术记录成年小鼠海马脑片上自发的微小的抑制性突触后电位(mIPSC)和诱发的前馈抑制性突触后电流(IPSC),使用细胞外电生理方法 记录刺激Schaffer侧枝诱发的CA1区辐射层场的兴奋性突触后电位(fEPSP],测量不同浓度Bicuculline对mIPSC、IPSC和fEPSP的作用,以及它们对小鼠海马脑片CA1区突触LTP的影响. 结果 10μmol/L、20μmol/L Bicuculline可以减弱mIPSC和IPSC抑制性突触电流,且20 μmol/L Bicuculline作用更明显;20μmol/L Bicuculline可以明显提高fEPSP的斜率,而5 μmol/L和10 μmol/LBicuculline没有明显作用;5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L和50μmol/L Bicuculline组100赫兹强直刺激诱发后的fEPSP平均斜率均值都大于对照组,但仅10 μmol/L、20 μmol/L两组相比,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 Bicuculline可以减弱GABAA受体介导的抑制以及增加场的fEPSP斜率,并且Bicuculline阻断GABA能抑制到一个关键水平才可以增强海马CA1区突触的LTP.     

激活素A维持小鼠大脑皮质神经元存活和增加神经元电压依赖性钠电流

背景：研究表明,激活素A作为神经细胞生存因子,参与神经损伤的保护作用以及维持海马神经元的存活。目的：观察激活素A对大脑皮层神经元长期存活及其对神经元电压依赖性钠电流的影响。设计、时间及地点：随机的细胞和分子生物学及电生理学实验,于2007-2009年在吉林大学白求恩医学院免疫学系完成。材料：孕17天小鼠购于吉林大学动物中心;小鼠源性Neuro-2a 细胞来自美国ATCC;人重组激活素A购于R&D公司。方法：①取孕17天小鼠胚胎的大脑皮层神经元进行原代培养,于加入5ng/ml 激活素A和4ng/ml NGF后的第1、3、5、7和9天进邢盍觳猓虎诩?ng/ml 激活素A对Neuro-2a 细胞Na+电流（INa）的影响;③RT-PCR检测激活素A对Neuro-2a细胞ActRII、VIP及iNOS mRNA表达的影响。主要观察指标：①台酚蓝染色观察活细胞,通过甲苯胺蓝染色尼氏小体计数神经元;②膜片钳实验记录全细胞INa。结果：①对照组存活的神经元呈现时间依赖性减少,在培养第7天,几乎没有存活的神经元,而NGF组和激活素A组在培养第9天仍有部分存活的神经元;②与对照组 INa (0.817±0.21 nA)相比较,激活素A增加Neuro-2a细胞INa (1.044±0.22 nA) (p< 0.05) (n=10);③激活素A诱导Neuro-2a细胞ActRIIA、ActRIIB 和VIP mRNA的表达,降低iNOS mRNA表达。结论：激活素A维持小鼠大脑皮层神经元长期存活,增加神经元电压依赖性Na+电流。     

姜黄素对AMPA/KA受体介导大鼠海马神经元钙内流的影响

目的 探讨姜黄素对α-氨基-3-羧基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(AMPA)/海人酸(KA)受体介导大鼠海马神经元钙内流的影响.方法 选用胚胎17dSD鼠分离海马,离体培养海马神经元,借助活体钙荧光染色和激光共聚焦钙成像技术观察100μmol/LKA刺激海马神经元内钙的变化,不同浓度(5、10、15、30、50 μmol/L)姜黄素预孵育海马神经元30min对100μmol/L KA刺激下细胞内钙变化的影响,15 μmol/L姜黄素对不同浓度(10、30、50、100、200、300 μmol/L)KA刺激海马神经元内钙变化的影响.应用钴染色技术观察(30、100 μmol/L KA)刺激后海马神经元钴阳性染色细胞变化.姜黄素预孵育30min对KA刺激导致钴阳性染色细胞变化的影响.结果 不同浓度姜黄素预孵育30 min均可以明显缓解100 μmol/L或30 μmol/L KA导致的细胞内钙升高程度.差异均有统计学意义(P<0.05),其中15 μmol/L姜黄素作用最为明显.30μmol/L或100 μmol/LKA刺激均可以引起海马神经元钴染色阳性细胞增加,15 μmol/L姜黄素预处理30 min后明显减少钴染色阳性细胞,差异有统计学意义(P<0.05),而其他浓度(5 μmol/L或30 μmol/L)姜黄素未见明显影响.结论 一定浓度的姜黄素可以影响AMPA/KA受体介导大鼠海马神经元钙内流.这可能是姜黄素抗癫痫作用的一个机制.