RP-HPLC测定Beagle犬血浆中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的浓度及药动学研究

 目的建立Beagle犬血浆中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(SBGC)的RP-HPLC含量测定方法,研究Bea-gle犬灌胃何首乌二苯乙烯苷有效部位后体内药动学。方法色谱条件:Agilent Zorbax Extend-C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(15:85);检测波长:320nm;柱温:30℃;流速:1.0mL·min^-1。Beagle犬灌胃何首乌二苯乙烯苷有效部位后定时取血,测定血浆药物浓度,采用DAS软件计算药动学参数。结果SBGC在0.2064～8.256mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9994);Beagle犬灌胃何首乌二苯乙烯苷有效部位1.0,1.5,2.0g·kg^-1后符合二室开放式模型,t_1/2α分别为0.20,0.10和0.14h;t_1/2β分别为0.56,0.60和0.64h;V/F分别为0.08,0.15和0.08L·kg^-1;CL/F分别为0.11,0.20和0.16L·h^-1。结论该法快速、简便、准确,可满足药动学研究需要。     

间-尼索地平Beagle犬静脉给药后体内药动学研究

 目的建立Beagle犬血浆中间-尼索地平RP-HPLC测定方法,研究Beagle犬静脉注射间-尼索地平后体内药动学。方法色谱条件:Waters C₁₈色谱柱(3.9 mm×300 mm,10μm);流动相:甲醇-水(64∶36);检测波长:236 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min^-1。Beagle犬静脉注射间-尼索地平后定时取血,用RP-HPLC测定血浆药物浓度,3P97软件计算药动学参数。结果间-尼索地平在1.875～480μg·L^-1内线性关系良好(r=0.999 9);Beagle犬静脉注射0.1,0.2,0.5 mg·kg^-1间-尼索地平后药动学行为均符合二室模型,AUC与剂量呈正相关,t_1/2α分别为6.32,7.07和16.0 min;t_1/2β分别为136,149和137 min;V_c分别为4.4,6.7和10.3 L;CL分别为0.20,0.20和0.30 L·min^-1。结论本方法操作简便,灵敏度高,稳定性好,可满足药动学研究需要。     

苯丙醇羟丙基-β-环糊精包合片的生物等效性研究

 目的评价苯丙醇羟丙基-β-环糊精包合片与苯丙醇胶丸的生物等效性。方法采用双制剂双周期交叉实验设计,8只Beagle犬随机分为两组,分别单剂量口服苯丙醇-羟丙基-β-环糊精包合片(受试制剂)和苯丙醇胶丸(参比制剂)各100mg(以苯丙醇计),12d后交叉服药。于给药后0.083,0.25,0.5,1.0,1.5,2,3,4,6,8,12,14,24,36h取血样,0.5mL血浆加入15%高氯酸溶液100μL,涡旋振荡40s,4000r·min^-1离心10min,上清液经0.45μm滤膜过滤后,取20μL进行HPLC分析。流动相为甲醇-双蒸水=60:40,流速为1.0mL·min^-1,色谱柱为Diamond C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温30℃。紫外检测波长为210nm。结果犬血浆中杂质不干扰样品的测定,犬血浆中苯丙醇质量浓度在0.01287～25.73mg·L^-1内线性关系好(r=0.99999);最低检测质量浓度为0.005mg·L^-1(以S/N≥3计)。参比制剂的t_1/2为(5.68±1.11)h,t_max和ρ_max分别为(0.8±0.5)h和(4.46±0.73)mg·L^-1;受试制剂t_1/2为(4.53±0.72)h,t_max和ρ_max分别为(1.0±0.7)h和(3.05±0.44)mg·L^-1,其相对生物利用度为(104.9±14.0)%。结论所建立方法准确可靠,符合生物样品分析要求;犬单剂量口服受试制剂与参比制剂后,药动学统计数据表明,两种制剂生物等效。     

尼奥宁在Beagle犬体内的药动学及其生物利用度研究

研究尼奥宁在Beagle犬体内药动学及其绝对生物利用度,为其进一步研究提供理论基础。实验血浆样品用10%氨水碱化后用乙酸乙酯液液萃取,采用UPLC-Q-TOF-MS测定血浆中尼奥宁浓度。Beagle犬分别灌胃6 mg·kg^-1或静脉给药1 mg·kg^-1进行尼奥宁体内药代动力学和绝对生物利用度研究。血浆样品处理方法中,尼奥宁在0.1~4 mg·L^-1和2~100 μg·L^-1均呈良好线性关系(R²=0.998 2,0.994 5),日内及日间精密度RSD均小于5.0%,准确度RE在90.0%~115%,回收率均大于80%。灌胃或静脉给药后,尼奥宁t_1/2分别为(313.88±63.18),(236.33±229.84) min,AUC_0-∞分别为(58 027.40±14 132.69),(473 578.02±82 333.08) min·μg·L^-1,其绝对生物利用度为(73.15±10.29)%。结果表明UPLC-Q-TOF-MS分析血浆尼奥宁灵敏、可靠、专属性强,可用于尼奥宁的体内药动学分析;尼奥宁在Beagle犬体内生物利用度较高显示其良好的吸收特性,也为进一步研究奠定基础。     

LC/MSn鉴定丁香酚布洛芬酯在大鼠尿中的主要代谢产物

 目的研究鉴定丁香酚布洛芬酯在大鼠体内的代谢行为。方法选择健康Wistar大鼠3只单剂量20mg·kg^-1尾静脉给药丁香酚布洛芬酯后,收集0～12h尿样。将尿样经SPEC₁₈固相萃取柱纯化后,采用LC/MSn方法对尿中的待测的代谢产物进行选择离子监测(SIM)和多级全扫描质谱分析(MSn)。结果在尿中首次检测到丁香酚布洛芬酯的7种代谢产物,其中包括1种Ⅰ相代谢产物和6种Ⅱ相代谢产物。结论丁香酚布洛芬酯在大鼠体内主要先水解成丁香酚和布洛芬,经进一步代谢与葡萄糖醛酸结合。     

液相色谱-串联质谱联用测定人血浆中伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬和苯海拉明的浓度

 目的建立同时测定人血浆中伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的液相色谱-串联质谱方法。方法血浆中加入内标酚妥拉明后,进行固相萃取,以甲醇-0.5%甲酸水溶液(55∶45)为流动相,经C₁₈柱分离后;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z 166.4→m/z 115.2(伪麻黄碱),m/z258.2→m/z157.1(O-去甲基右美沙芬),m/z256.2→m/z167.2(苯海拉明),m/z282.2→m/z212.2(内标,酚妥拉明)。结果线性范围为伪麻黄碱1.0～200μg·L^-1(r=0.9993),O-去甲基右美沙芬为0.05～10μg·L^-1(r=0.9991),苯海拉明为1.0～200μg·L^-1(r=0.9988);提取回收率为伪麻黄碱在67.4%～73.4%之间,O-去甲基右美沙芬在74.6%～75.7%之间,苯海拉明在81.9%～83.9%之间,日内、日间RSD均小于6.2%,伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的最低定量浓度分别为1.0,1.0和0.05μg·L^-1。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确,适用于伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬、苯海拉明的临床药动学研究。     

重组抗人血小板GPⅡb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2在Beagle犬体内药动学

 目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)₂经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)₂的浓度,根据非房室统计矩模型进行曲线拟合并计算药动学参数。结果Beagle犬分别静脉单次注射高、中、低(1.2,0.8,0.4mg·kg^-1)后,t_1/2分别为(7.35±0.65),(8.28±0.68)和(7.03±3.26)h,CL_s与V_ss随着剂量的减小发生增加的变化,血药浓度-时间曲线下面积AUC_0-inf分别为(2453.70±371.59),(1097.64±142.11)和(362.63±169.12)μg·h·L^-1,剂量之比为3:2:1,对应的AUC_0-inf比值为6.8:3:1,剂量与AUC成正相关性,相关系数R²=0.9714,但是AUC_0-inf的增加量大于剂量的增加量。结论在本实验的剂量范围内,剂量与AUC_0-inf成正相关性,AUC_0-inf的增加量大于剂量的增加量,预示在以上剂量范围内嵌合单抗F(ab′)₂在Beagle犬血浆中的浓度变化可能呈非线性药动学规律;动物性别对药动学参数无显著性影响。     

犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的测定及益心酮缓释片药动学研究

目的:建立测定犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的HPLC法,初步研究益心酮缓释片在Beagle犬体内的药动学。方法:应用自身对照设计实验法,用反相高效液相色谱法测定单剂量口服益心酮缓释片(2片×288 mg/片)和市售普通片(4片×144 mg/片)后,Beagle犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的浓度,应用非隔室模型统计矩方法和3p87程序对药动学参数进行分析。结果:益心酮缓释片和普通片口服后在Beagle犬体内过程可分别用单室和双室模型描述;药动学参数为:口服普通片:T_1/2=8.94 h,T_max=1 h,AUC_0-∞=5 880.4 ng.h.mL^-1,MRT=6.1 h;口服缓释片:T_1/2=5.22 h,T_max=4 h,AUC_0-∞=6 792.75 ng.h.mL^-1,MRT=8.4 h,相对生物利用度为115.5%。结论:自制缓释片在犬体内表现出了缓释特性。     

S(+)-盐酸氯胺酮在大鼠体内药动学研究

 目的S(+)-盐酸氯胺酮是盐酸氯胺酮右旋光学异构体,研究大鼠静脉注射给药后体内血浆药动学、组织分布、代谢及排泄特征,为临床应用提供参考依据。方法本实验采用LC-MS测定生物样品中S(+)-盐酸氯胺酮浓度。结果大鼠静脉注射不同剂量S(+)-盐酸氯胺酮(6.25,12.5,25mg·kg^-1)后,ρ_max及AUC与给药剂量呈正相关;体内分布以肾、肾上腺最高,脑、小肠、肌肉、胃、心脏等次之,肝、肺等组织水平最低。S(+)-盐酸氯胺酮静脉注射后经粪、尿、胆汁排泄,排泄量分别占给药量的0.007%,0.66%,和16%。S(+)-盐酸氯胺酮在大鼠体内可经CYP2E1,CYP3A和CYP2C同工酶代谢,氧化成去甲基代谢物和双键去甲基代谢物。结论研究S(+)-盐酸氯胺酮的血浆药动学、组织分布、代谢及排泄特征可为该药临床应用的安全性和有效性提供重要的参考依据。     

静脉注射后吉西他滨及其代谢产物在人体内的药动学研究

 目的研究吉西他滨及其代谢产物(dFdU)在我国恶性肿瘤病人体内的药动学过程。方法8位病人按吉西他滨1000 mg·m^-2体表面积单一给药,采用HPLC测定给药后不同时间点的吉西他滨及其代谢产物的血药浓度,血药浓度-时间数据经PKS软件处理,拟合药动学模型,得出吉西他滨及其代谢产物(dFdU)的药动学参数,并比较药动学参数在性别上的差异及国外文献报道的差异。结果吉西他滨及其代谢产物(dFdU)在我国病人血浆中的药动学过程符合二室模型拟合,其药动学参数分别为:吉西他滨ρ_max(11.29±2.4)mg·L^-1,t_1/2β(25.29±7.85)min,CL(7 410±820)mL·min^-1,V_d(270.13±53.36)L,AUC(2.23±0.34)mg·h·L^-1;代谢产物ρ_max(48.47±6.73)mg·L^-1,t_1/2β(8.04±3.66)h,CL(102.98±24.8)mL·min^-1,V_d(66.08±23.8)L,AUC (170.05±39.44)mg·h·L^-1)。结论吉西他滨按1 000 mg·m^-2体表面积给药,在我国病人体内吉西他滨和代谢产物(dFdU)药动学符合二室模型拟合。吉西他滨的AUC和CL与文献报道不一致,吉西他滨的其余药动学参数和代谢产物(dFdU)药动学参数与文献报道的基本一致。吉西他滨的t_1/2β,AUC和CL可能存在性别上的差异。     

白芍改善睡眠作用的药效物质基础研究

目的：考察姜黄素自微乳在Beagle犬体内的血药浓度经时过程并评价其相对生物利用度。方法：Beagle犬分别单剂量给予姜黄素自微乳及其混悬液,通过HPLC测定血浆中姜黄素的质量浓度,流动相甲醇（A）-水（B）梯度洗脱（0~15 min,30%~70%A;15~30 min,70%~90%A）,检测波长425 nm,采用DAS 2.1.1程序拟合药-时曲线,计算药代动力学参数及生物利用度。结果：姜黄素自微乳与混悬液的药代动力学参数tmax分别为3.0,2.0 h,C_max分别为3 304.3,1 873.6 ng·L^-1,AUC_0-24依次为6 537.5,2 973.2 ng·h·L^-1,姜黄素自微乳相对于混悬液的生物利用度达219.88%。结论：姜黄素自微乳可显著提高药物在Beagle犬体内的生物利用度。     

大鼠肌内注射20(S)-人参皂苷Rg3的药动学研究

 目的研究20(S)-人参皂苷Rg3经肌内注射后在大鼠体内的药动学情况,包括血药动力学研究,组织分布情况,在尿和胆汁中的排泄情况等方面的内容。方法本实验采用蒸发光散射检测法测定药物在血液和组织中的浓度,用3P97药动学程序进行数据处理,方法快捷、简便,结果的精密度、稳定性和回收率均好。结果20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后(1.5mg·kg^-1),其药动学模型为一室模型,t_1/2(ke)为0.75h,t_(peak)为0.116h,ρ_max为13.9mg·L^-1,AUC为16.6mg.h·L^-1;肌注后在心、肝、脾、肺、肾中可以检测到有20(S)-人参皂苷Rg3存在,而在脑、胃、肠、体脂、肌肉和生殖腺中均未检测到;药物主要经尿液排泄,给药8h内,20(S)-人参皂苷Rg3经尿液排出药物总量的72.1%,经胆汁排泄的药物占药物总量的10.1%;药物与蛋白的结合率为15%～17%,且不随浓度的变化而改变。结论20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后可以很快被吸收进入血液,迅速达到血药浓度的峰值,它在体内的代谢速度较快,且大部分药物经尿液由肾脏排出体外,在体内基本无蓄积。     

液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中的槲皮素代谢物

 目的采用液相色谱-质谱联用法鉴定大鼠口服槲皮素单体后血浆中的代谢产物。方法血浆样品经过2mol·L^-1盐酸(甲醇-水)水解后,进行色谱分离,采用液相色谱-质谱联用仪检测,大气压电喷雾离子源(EPI)负离子条件下进行扫描,鉴定大鼠给药槲皮素(100mg·kg^-1)单体后血浆中代谢产物的结构。结果通过与标准物紫外谱图比较,结合质谱仪扫描结果分析,在大鼠给药槲皮素(100mg·kg^-1)单体后血浆中鉴定出槲皮素(m/z→301.0)和异鼠李素(m/z→314.9)两种代谢产物结构。结论采用盐酸酸水解的方法可快速、有效地鉴定出大鼠血浆中槲皮素代谢产物,为进行含槲皮素中药及其复方的药动学研究提供参考。     

维C银翘片中D-(-)-异抗坏血酸的结构鉴定与筛查

 目的 鉴定维C银翘片中非法添加物D-(-)-异抗坏血酸的结构,对样品进行添加物筛查。方法 采用CAPCELL PAK NH₂色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-20 mmol·L^-1乙酸铵（甲酸调pH至2.5）(60∶40),检测波长为246 nm,流速为1 mL·min^-1;离子源为ESI源,雾化气压力为220 kPa,干燥气流速为12 L·min^-1,干燥气温度350 ℃,毛细管电压3.5 kV,正离子检测。用液相色谱分离并制备维C银翘片中添加物,进行¹³C-NMR结构确证。结果 通过对检出的添加物[M+H]⁺多级质谱裂解规律解析及与D-(-)-异抗坏血酸对照品比较,鉴定添加物为D-(-)-异抗坏血酸;通过添加物¹³C-NMR化学位移分析,进一步确认其结构。在366批维C银翘片样品中,有64批样品检出非法添加物D-(-)-异抗坏血酸。结论 液质联用方法准确,灵敏度高,可满足定性检测的要求。
     

HPLC测定N-[2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-)乙基]己酰胺的含量及其有关物质

 目的建立了N-[2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-)乙基]己酰胺(MLT-5)含量测定和有关物质检查的方法。方法采用Zorbax300SB C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(55∶45),流速1.0mL·min^-1,检测波长277nm。结果在所选定的液相色谱条件下,有关物质与主药完全分离,MLT-5在0.05～40mg·L^-1(r=0.9997)内线性关系良好,最低检测限为0.4ng。检测了3批样品,主峰含量均在99.0%以上,有关物质在1%以内。结论此法简便、灵敏、准确,可用于MLT-5的含量测定和有关物质检查。     

喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

HPLC/MS考察大鼠和肝微粒体CYP450活性及硝苯地平代谢研究

 目的建立以硝苯地平为探针药物测定大鼠和犬肝微粒体活性的HPLC/MS。方法采用SHIMADZU VP-ODS(2.0mm×150mm,5μm)色谱柱;柱温为室温;以甲醇-水(55∶45)为流动相,流速:0.2mL·min^-1。选择正离子扫描(SIM)m/z 345。以硝苯地平为探针药物与大鼠或Beagle犬的肝微粒体进行体外孵育,以液相色谱串联质谱法测定硝苯地平的代谢产物氧化硝苯地平。结果在所建立的HPLC/MS条件下,硝苯地平的氧化产物保留时间约为7.15min。杂质峰不干扰测定;氧化硝苯地平最低检测限为3μg·L^-1(S/N=3),线性范围为0.01～10mg·L^-1,回收率及精密度均符合检测要求。结论该HPLC/MS能够准确的检测出在大鼠和Beagle犬肝微粒体中的硝苯地平氧化产物。     

高效液相色谱法测定人绒毛滋养细胞上清培养液中的 <> L - 色氨酸

 目的 建立一种检测人绒毛滋养细胞上清培养液中 <> L - 色氨酸 (<>L-tryptophan , <> L -Trp) 的高效液相色谱 - 紫外检测法。 方法 采用的色谱柱为 Eclipse XDB-C₁₈ 柱 (4.6 mm×150 mm , 5 μm) ,流动相为 0.05 mmol·L^-1 磷酸二氢钾溶液 - 甲醇（ 92 ∶ 8 ）,流速为 1.3 mL·min^-1 。紫外检测波长为 225 nm 。滋养细胞上清培养液标本经 5.0%( 体积分数 ) 高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液过滤后直接进样分析测定。 结果 <> L -Trp 保留时间为 7.5 min ,线性范围为 1.0~100.0 μmol·L^-1 ,最低检出浓度为 0.5 μmol·L^-1 ,回收率为 95.9%~102.0% 。日内、日间测定的相对标准偏差均小于 3% 。加入 1- 甲基色氨酸 (1-methyl tryptophan , 1-MT) 的上清培养液中 <> L -Trp 的浓度高于未加 1-MT 的上清培养液。 结论 该方法简便、快速、稳定、可行,不同条件下 <> L -Trp 的浓度变化可间接证实人绒毛滋养细胞自身存在其他类似吲哚胺 2 , 3- 二氧化酶（ indoleamine 2 , 3-dioxygenase , IDO ）的方式调节 T 淋巴细胞免疫功能。