顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的：研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响，探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法：OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h，采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响，以及诱导细胞凋亡的情况。结果：41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用。在37℃恒温条件下，细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1h，随着顺铂浓度的升高，其细胞毒性作用明显增加。43℃热疗 顺铂共同作用1h，其细胞毒性作用进一步增加，细胞毒性指数最高达72．37％；FCM分析显示对细胞周期有明显的影响，S期细胞比例明显增加，G2与M期细胞比例明显减少。43℃热疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰)，细胞凋亡比例最高达56．47％；透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论：顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用。43℃热疗、43℃热疗 顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞株毒性的实验研究

目的探讨半量顺铂、卡铂联合对骨肉瘤细胞株(OS-732)的细胞毒性强度,为临床应用提供实验依据.方法采用MTT法细胞毒性试验,先分别获取顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50),再分别用IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的顺铂 1/2IC50的卡铂作用骨肉瘤细胞株48h和72h,比较3组药物对骨肉瘤细胞株的细胞毒性.结果根据相应实验结果制作生长曲线求得顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的IC50分别为7.6μg/ml和199.0μg/ml.分别用8.0μg/ml顺铂、200.0μg/ml卡铂、4.0μg/ml顺铂 100.0μg/ml卡铂作用48h时,对骨肉瘤细胞株的细胞毒性指数(CI)值依次为(54.7±5.3)%、(56.9±6 3)%、(57.5±5.7)%,3组比较差别无显著性意义(P＞0.05);作用72h时CI值依次为(65.7±4.5)%、(69.4±2.2)%、(68.4±3.6)%,含卡铂的两组与单独顺铂组比较差别均有显著性意义(均P＜0.05).结论半量顺铂、卡铂联合应用能产生单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株相似的细胞毒性作用.     

顺铂联合足叶乙甙对卵巢癌治疗的机制研究

目的 研究顺铂联合足叶乙甙(EP)方案对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响以及可能的作用机制,为EP方案用于卵巢癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的SKOV3细胞经不同浓度的顺铂和足叶乙甙作用24h,应用MTT法检测药物的细胞毒作用,测定其A值;流式细胞仪测定细胞周期分布的变化,免疫细胞化学法检测细胞周期因子CyclinB1、P34cdc2和Survivin蛋白的表达,探讨可能的机制.结果 足叶乙甙和不同浓度的顺铂联合应用,可明显抑制SKOV3细胞的增殖,引起细胞周期的S期和G2/M期细胞比例的增加,G0/G1期比例明显下降,且下调CyclinB1、P34cdc2和Survivin蛋白的表达.结论 顺铂联合足叶乙甙对SKOV3细胞具有显著的协同效应,加强了对细胞周期的阻滞,其机制可能与细胞周期因子CyclinB1、P34cdc2和Survivin的表达下调有关.     

顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞毒作用的实验研究

目的 :通过半量顺铂和卡铂联合与单一顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的细胞毒性的对比研究 ,为顺铂联合卡铂治疗骨肉瘤提供实验依据。方法 :用IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的作用 4 8、 72h后计算各组的细胞毒性指数值 (CI)。结果 :IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的作用 4 8h后CI值分别为 5 5 8%、 5 7 4 %、 5 8 1% ,三组比较无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的顺铂 +卡 1/2IC50 的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )作用 72h后CI值分别为 6 4 4 %、 6 9 8%、 6 8 5 % ,IC50 的顺铂组与 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50 的卡铂组和IC50 的卡铂组比较均有统计学意义 (P <0 0 5 )。IC50 的卡铂组与 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50 的卡铂组比较无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :半量顺铂、卡铂联合能产生与单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )相似的细胞毒性作用。     

大蒜素联合多西他赛对人骨肉瘤细胞MG-63增殖抑制作用的研究

目的观察大蒜素和多西他赛(DXT)单用及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用。方法采用MTT法检测细胞毒性作用。倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,并检测凋亡率。结果大蒜素和DXT单用及联合用药,在一定浓度范围内均对骨肉瘤细胞MG-63有增殖抑制作用和诱导凋亡作用,其作用与剂量呈正相关。联合用药组作用明显强于单独用药组(P<0.05)。大蒜素和DXT单独及联合作用于人骨肉瘤细胞株MG-63,与细胞生长分裂关系较密切的G2/M期占细胞周期的比例有明显升高,且联合用药的升高作用更明显(P<0.01)。结论大蒜素和DXT均可将骨肉瘤细胞株阻滞于G2/M期,两药联合可能具有协同抗肿瘤作用。     

顺铂不同给药方式对鼻咽癌细胞毒性以及细胞周期影响体外研究

目的:采用细胞培养方法研究顺铂不同给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1的细胞毒性以及细胞周期的影响.方法:MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量.细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96 h;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h;C组为IC70作用3h后间隔93 h;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96 h.采用流式细胞仪进行细胞周期的检测.结果:顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72 h的IC50值为0.26 μg/ml,1/5IC50为0.05 μg/ml,IC70为0.72 μg/ml.顺铂为0.05μg/ml剂量时对CNE-1细胞无明显毒性,但细胞周期研究发现,当其连续作用96 h时,与阴性对照组相比可引起明显G2/M期阻滞(P＜0.05);而顺铂剂量为0.72 μg/ml连续作用3h后间隔24 h以及93 h时检测细胞周期变化也出现显著G2/M期阻滞(P＜0.05);但在0.72 μg/ml的顺铂作用3h后立即检测细胞周期变化,与相应阴性对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:体外低毒性的小剂量顺铂连续给药可诱导鼻咽癌细胞株CNE-1细胞周期G2/M期阻滞.     

苦参碱与8种抗肿瘤药联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的探讨8种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5一氟尿嘧啶、环磷酰胺、阿糖胞酐,三尖杉酯与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,通过流式细胞仪（FCM）检测8种抗肿瘤药物分别联合苦参碱对KBV200细胞株细胞周期的影响。结果苦参碱加顺铂组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞下降,G2～M期细胞升高;苦参碱加阿糖胞酐组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞升高,G2～M期细胞下降;苦参碱加5-Fu组对KBV200耐药细胞株的凋亡作用加强;苦参碱与长春新碱、阿霉素、三尖杉酯、环磷酰胺、平阳霉素联合个组中,对KBV200耐药细胞株细胞周期及凋亡均无明显变化。结论苦参碱分别与顺铂和阿糖胞酐联合作用后,均可影响KBV200耐药细胞株的细胞周期。     

顺铂与卡铂对骨肉瘤细胞株作用的分子机制

目的探讨顺铂与卡铂对骨肉瘤细胞(MG-63)作用的分子机制。方法骨肉瘤细胞混悬液与不同浓度顺铂和卡铂分别作用24、48、72 h后,用倒置显微镜观察细胞生长情况。用噻唑蓝法测定每孔的吸光度值,制作生长曲线,并求出顺铂和卡铂的半抑制浓度(IC_(50))。用IC_(50)顺铂、卡铂作用于骨肉瘤细胞24、48、72 h后用流式细胞仪进行细胞周期分析。免疫印迹技术观察细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2和Bax的表达。结果相同浓度顺铂和卡铂作用的骨肉瘤细胞死亡数量随时间增加而增加。不同浓度顺铂和卡铂对骨肉瘤细胞分别作用24、48、72 h后,对细胞的生长均起到抑制作用,相同时间内,药物浓度越高,生长抑制作用越明显(P<0.05)。骨肉瘤细胞与IC_(50)顺铂和卡铂作用24、48、72 h后,在细胞各期均未见明显凋亡峰,但随着时间增加,G_1、S、G_2期所占比例逐渐下降;顺铂和卡铂作用后不同时间点凋亡细胞所占比例比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,顺铂组和卡铂组PCNA表达下降,Bax表达增加,Bcl-2表达略减少。结论顺铂和卡铂对肿瘤细胞生长各期均有抑制作用,对于骨肉瘤细胞来说,卡铂的浓度约需25倍于顺铂才能产生相似的生长抑制效应。顺铂、卡铂与骨肉瘤细胞作用后存在凋亡现象,但是未能形成凋亡峰,这可能与铂类化合物能够对处于任何生长周期的细胞均能产生杀伤作用有关。     

顺铂损伤U2-OS细胞诱导细胞周期阻滞、凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因表达的实验研究

目的 探讨顺铂损伤U2骨肉瘤细胞(U2-OS)诱导细胞周期阻滞及凋亡过程中不同时间p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供理论依据.方法 使用0、0.3、3.0、30.0 μg/mL顺铂作用U2-OS细胞2 h后继续培养0、6、12、24、48 h.采用四唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹发光法(Western blot法)检测顺铂对U2-OS细胞体外增殖、凋亡作用、细胞周期变化及相关基因的表达.结果 不同浓度的顺铂在体外对U2-OS细胞均有抑制作用,其抑制率随着浓度明显增加,且有组间差异(P<0.05).在顺铂损伤早期细胞发生G1期细胞周期阻滞,且仅p53明显表达;继续培养48 h后,30.0 μg/mL顺铂作用过的细胞凋亡率达27.08%,p53、bcl-2和c-myc mRNA及蛋白表达呈现明显组间差异.结论 不同浓度顺铂通过细胞内p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化,诱导骨肉瘤细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一.在细胞损伤早期p53的表达诱导了G1细胞周期的阻滞,而中后期p53的表达抑制了bcl-2的表达,促进细胞凋亡的发生.c-myc基因表达的抑制在损伤后期参与了抑制细胞的增殖.     

低剂量顺铂节律化疗抗血管生成作用的实验研究

目的 探讨低剂量顺铂节律化疗对体内外血管生成的抑制作用.方法 采用MTT法检测低剂量顺铂节律化疗对人脐静脉内皮细胞HUVECs、人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期观察其对HUVECs、HepG2生长的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用.结果 低剂量顺铂(7.5～750.0 μg/L)持续作用24、48、72 h,对HUVECs具有抑制增殖作用,且在7.5 ～750.0 μg/L 范围内呈现剂量和时间依赖性,低剂量顺铂组的吸光度值明显低于对照组,差异有显著意义(F=14.57～285.44,q=3.50～7.63,P<0.05),且当顺铂浓度达到750.0 μg/L时对内皮细胞HUVECs增殖抑制作用达到饱和.相同条件下,低剂量顺铂对人肝癌细胞株HepG2则未显示出抑制作用,实验组的吸光度值与对照组比较差异无显著意义(F=0.71～1.18,P>0.05).流式细胞仪检测显示低剂量顺铂组处理HUVECs 细胞48 h 后与对照组比较,随顺铂浓度增大,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多,其差异有显著性(F=6.44～12.30,q=3.26～8.47,P<0.05);低剂量顺铂组处理HepG2细胞48 h后与对照组比较,各期细胞比例无明显改变,差异无显著意义(F=0.03～0.10,P>0.05).低剂量顺铂持续作用对鸡胚尿囊膜的血管发生具有显著影响,低剂量顺铂组抑制百分率为(30.0±5.0)%～(50.0±5.0)%,与生理盐水对照组比较差异有显著性(F=259.04,q=7.76～38.80,P<0.05).结论 低剂量顺铂节律化疗体外有抑制血管内皮细胞生长、体内有抑制血管生成作用.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验模型的建立

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，为进一步研究野生型ｐ５３蛋白诱导骨肉瘤细胞凋亡提供体外实验模型。方法：用ＤＮＡ转染技术将ＰＭ４７质粒，它是一种含激素诱导启动的鼠乳腺肿瘤病毒启动子和生化选择标志基因Ｅｃｏｇｐｔ的重组野生型ｐ５３ｃＤＮＡ质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２中，用ｇｐｔ选择培养基筛选阳性细胞克隆。结果：成功地将外源性野生型ｐ５３ｃＤＮＡ重组质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２细胞中，在ｇｐｔ选择培养基中培养２周后生长出阳性细胞克隆，命名为ＯＳ－７３２－Ｐ。结论：利用基因转染技术能将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，并能在选择培养基中生长     

康莱特联合顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞

目的 研究康莱特联合顺铂对骨肉瘤细胞的杀伤作用及其相关机制，探寻骨肉瘤的中西医结合化疗方案。方法 免疫组化及RT—PCR方法检测不同浓度康莱特作用下骨肉瘤OS732细胞的Fas表达，并将康莱特与顺铂单独及联合应用于OS732细胞，采用MTT法检测细胞毒性作用，流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例，相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。结果 康莱特可上调OS732细胞的Fas表达并诱导凋亡，10μL／mL康莱特与1μg／mL顺铂合用于OS732细胞的抑制率与各自单用时相比明显提升（P〈0．01）。细胞形态观察及凋亡率测定也显示，康莱特与顺铂联用可诱导更多OS732细胞凋亡。结论 康莱特可协同顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞，这可能与康莱特上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

Induction of apoptosis in osteogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand and chemotherapeutic agents

Background Osteosarcoma is one of the most common primary malignant tumors of bone with poor prognosis. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) is a member of the tumor necrosis factor (TNF) cytokine family. TRAIL induces apoptosis in various tumor cell lines but is not found to be cytotoxic to many normal cell types in vitro. We investigated the cytotoxic activity of TRAIL and chemotherapeutic agents, including methotrexate (MTX), doxorubicin (DOX) and cisplatin (CDDP), on established osteosarcoma cell line—OS-732.Methods OS-732 cells were incubated with chemotherapeutic agents MTX,DOX and CDDP at various peak plasma concentrations(PPC), 0.1PPC,1PPC and 10PPC, alone or with 100 ng/ml of TRAIL for 24 hours or 48 hours. MTT was used to evaluate the cytotoxic activity of different agents on OS-732. The apoptosis proportion was assayed by flow cytometry. Cellular morphologic changes were observed by phase contrast microscope, scan electron microscope, and transmission electron microscope.Results The inhibitory rate was (24.438±3.414)% with TRAIL of 100 ng/ml for 24 hours. The cells were responsive to DOX and CDDP with a dose-effect relationship (P&lt;0.05). In OS-732 cells, DOX and CDDP cooperated synergistically with TRAIL when incubated the cells with them for 24 hours (the combined inhibitory rate is (58.360±2.146)% and (54.101±2.721)%, respectively). TRAIL alone or drugs alone induced the apoptosis rate was less than 25% (P&lt;0.05). However, the combination of TRAIL and MTX did not present synergistic effects on OS-732 cells (P&gt;0.05, compared with TRAIL alone). Conclusions Osteosarcoma OS-732 cells were not responsive to TRAIL-induced apoptosis. DOX and CDDP sensitize osteosarcoma OS-732 cells to TRAIL-induced apoptosis. The combination of TRAIL and MTX presented no synergistic effects on killing OS-732 cells.     

人成骨肉瘤细胞系OS-732细胞周期的研究

本文应用放射自显影技术研究人成骨肉瘤细胞系OS-732的细胞周期。实验结果表明,细胞周期T_c为18.7小时,平均核分裂指数为3.73‰。T_s=13.1小时,T_M=1小时,T_(G1)=3.6小时,平均标记指数为35.96％,生长指数为51.34％。这些结果提示OS-732细胞系保持其生长特性,对人成骨肉瘤的各种实验研究是较好的模型。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强低剂量顺铂对小细胞肺癌H446细胞株的细胞毒作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]联合顺铂(Cisplatin,DDP)对小细胞肺癌细胞株H446的细胞毒作用及其机制。方法采用MTT法检测EGCG及DDP影响H446细胞增殖的量效和时效关系。采用流式细胞仪检测不同浓度EGCG、DDP及二者联合作用于H446细胞对细胞周期及凋亡的影响。结果 EGCG和DDP均可抑制H446细胞增殖,该增殖抑制作用呈浓度及时间依赖模式。不同浓度的EGCG(80、160μmol/L)与DDP(1.0μg/ml)联合应用时,可使H446细胞阻滞于G2/M期。EGCG可诱导H446细胞凋亡,并能增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用。结论 EGCG能够抑制H446细胞增殖,诱导H446细胞凋亡,增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用,其机制可能与G2/M期阻滞有关。     

一氧化氮对骨肉瘤细胞体外跨膜侵袭能力的影响

OBJECTIVE: To study the effect of nitric oxide on the in vitro invasiveness of human osteosarcoma cell line (OS-732). METHODS: In vitro cultured OS-732 cell suspensions containing different concentrations of sodium nitroprusside (SNP) or PBS (control group) were used to assess the in vitro invasiveness of the tumor cells utilizing Boyden's chamber assay. The tumor cells growing across the filter membrane were counted by means of HE staining and compared between the groups. RESULTS: With the increase of SNP concentration in the cell suspension, the number of tumor cells growing across the membrane tended to decrease. With the exception of the cell suspension containing 500 micromol/L SNP that had a cell number across the membrane significantly different from those of any other groups, significant difference was not observed between any adjacent groups. Between the groups with SNP concentrations that did not come adjacent, however, significant differences were noted. CONCLUSION: Nitric oxide can depress the invasiveness of OS-732 cells across the membrane in vitro.     

人骨肉瘤细胞系OS—732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构观察

目的 观察人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构特点。方法 应用鸡胚绒毛尿囊膜模型。通过解剖显微镜，光镜及透射电镜观察该细胞系诱导生成微血管的解剖显微结构及超微结构特点。结果 OS-732细胞系具有较强的诱导血管生成能力，解剖显微镜下可见血管辐辏现象。透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成，内皮细胞裂隙增宽，基底膜不完整，缺乏平滑肌成分。结论 肿瘤诱导的新生血管在病理，生理及形态功能方面都具有特征性，以血管为靶点治疗骨肉瘤对改善预后可能具有重要意义。     

人骨形成蛋白2反义RNA对骨肉瘤细胞OS-9901生物学活性的影响

探讨骨形成蛋白（BMP）对人骨肉瘤细胞的作用及意义．方法：将重组人BMPZ基因的反义核酸逆转录病毒表达载体PDOR－AB用脂质体导入BMP表达阳性的骨肉瘤细胞OS－99OI，观察骨肉瘤细胞OS－99OI的BMP表达、增殖活性、肿瘤抑制基因＂m23的表达、细胞周期和电镜下形态改变．结果：转染后，OS－99o1细胞中内源性的BMP表达产物明显下降；增殖活性明显下降；肿瘤转移抑制基因＂m23表达未见改变；细胞周期分析表明：GI期细胞比例上升，S期比例下降；电镜观察可见细胞质中溶酶体增多，染色质有断裂现象．结论：反义核酸技术阻断BMPZ在OS－99o1细胞中的表达后，肿瘤细胞的增殖活性降低，证实骨肉瘤细胞中BMP的表达增加了肿瘤细胞的增殖活性．