北京地区汉族人巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点的研究

遗传药理学研究表明,药物代谢酶基因的变异是个体间药物效应差异的主要原因。巯嘌呤甲基转移酶(thiopurinemethytransferase,TPMT)是巯嘌呤类药物(如6 巯基嘌呤,6 mercatopurine,6 MP)代谢的关键酶。目前已表明,TPMT具有遗传多态性,TPMT缺乏的急性白血病患者,用标准剂量的6 MP治疗可能会导致严重的不良反应[1] 。已经发现TPMT等位基因有8种,均表现为序列上单个核苷酸的变异,即单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNP)。不同种族间变异的TPMT等位基因的频率不同,而且类型也有差异,其中以TPMT 2 (G2 38C) ,TP…     

巯嘌呤甲基转移酶基因的单核苷酸多态性与儿童急性白血病

巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）催化巯嘌呤类药物的S－甲基化。TPMT具有遗传多态性，属常染色体共显性遗传，约1／300为TPMT缺乏。TPMT缺乏的急淋白血病（ALL）患儿，用标准剂量6－巯基嘌呤（6－MP）治疗，其血液组织中累积大量的巯嘌呤核苷酸（6－TGN），可导致严重的骨髓毒性。TPMT基因型与红细胞和肿瘤细胞内酶活性有关，而且与毒性反应密切相关。目前，TPMT的分子基础基本明确，绝大多数为异是序列上的单个革酸的不同，即单核苷酸多态性（SNPs）。6－MP的剂量强度是儿童ALL无病生存率的影响因素，而TPMT基因型也可能与继发性肿瘤有关。因此，进一步明确TPMT对巯嘌呤治疗效应的影响，以及毒性反应的危险性，有利于提高巯嘌呤类药物的有效性和安全性。     

巯嘌呤甲基转移酶基因的单核苷酸多态性与儿童急淋白血病

巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)催化巯嘌呤类药物的S-甲基化。TPMT具有遗传多态性,属常染色体共显性遗传,约1/300为TPMT缺乏。TPMT缺乏的急淋白血病(ALL)患儿,用标准剂量6-巯基嘌呤(6-MP)治疗,其血液组织中累积大量的巯嘌呤核苷酸(6-TGN),可导致严重的骨髓毒性。TPMT基因型与红细胞和肿瘤细胞内酶活性有关,而且与毒性反应密切相关。目前,TPMT的分子基础基本明确,绝大多数变异是序列上的单个核苷酸的不同,即单核苷酸多态性(SNPs)。6-MP的剂量强度是儿童ALL无病生存率的影响因素,而TPMT基因型也可能与继发性肿瘤有关。因此,进一步明确TPMT对巯嘌呤治疗效应的影响,以及毒性反应的危险性,有利于提高巯嘌呤类药物的有效性和安全性。     

中国汉族炎症性肠病患者硫嘌呤甲基转移酶基因多态性研究

目的 了解中国汉族炎症性肠病（IBD）患者硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因多态性的分布情况,并探讨TPMT基因多态性与硫唑嘌呤（AZA）药物毒副作用的关系。方法189名汉族IBD患者及273名健康对照者进入了研究。其中有43例患者接受了AZA治疗。分别采用引物特异性聚合酶链反应（PCR）和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）方法对TPMT＊2、TPMT＊3B、TPMT＊3C、TPMT＊3A四个突变等位基因进行检测。对使用药物发生了毒副作用的患者进一步进行了TPMT基因外显子的PCR扩增及测序检测。结果所有的IBD患者和健康对照者均未检测到TPMT＊2、TPMT＊3A、TPMT＊3B突变。IBD患者TPMT＊3C突变等位基因频率为1．59％,与健康对照组相近（1．59％VS1．47％）,经Fisher’S确切检验显示,差异无统计学意义（P〉0．05）。在对43例接受AZA治疗的IBD患者的随访中,观察到有4例患者发生了骨髓抑制,1例发生了肝脏毒性。5例患者均未检测到TPMT＊2、TPMT＊3A、TPMT＊3B、TPMT＊3C这4种常见的TPMT突变等住基因。进一步对该5例患者进行外显子测序工作,发现其中3例患者存在TPMT＊1S突变杂合子．但为无义突变。结论在中国汉族IBD人群中,TPMT突变等住基因频率低,但AZA药物毒副作用的发生率并不低,AZA药物毒副作用无法完全通过TPMT基因突变来解释。     

儿茶酚O-甲基转移酶基因多态性分析方法探讨

目的建立限制性片段长度多态性(RFLP)和变性高效液相色谱(DHPLC)分析儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)基因多态性的方法,探讨分析基因多态性与临床疾病发生风险关系的方法学.方法从子宫内膜癌患者和对照组的全血和蜡块包埋组织提取DNA,应用RFLP和DHPLC法检测COMT基因第4号外显子第158位密码子G/A的多态性,并结合DNA测序法分析两种方法的一致性.结果全血和蜡块组织提取的DNA均可扩增PCR产物,且可行酶切反应;所有全血和小部分蜡块DNA PCR产物可行DHPLC分析.测序法与RFLP法比较,Kappa值=0.697;与DHPLC测序法比较,Kappa值=0.924.结论 RFLP与测序法的一致性好,适用于全血和蜡块提取的DNA的基因多态性分析;DHPLC与测序法的一致性极好,但对机器和样本要求较高,适用于血DNA的基因多态性分析.     

PS-TaqMan PCR检测巯基嘌呤甲基转移酶基因多态性

目的为临床开展巯基嘌呤类药物的个体化用药需要,发展一种适合临床实验室检测TPMT的基因多态性的方法。方法改进TaqMan错配扩增突变检测法（TaqMAMA）,建立引物特异性TaqMan聚合酶链反应（PS-TaqManPCR）,检测245例临床样本的TPMT＊3C突变,结果用双向测序方法验证。结果 PS-TaqManPCR能够准确检测TPMT＊3C突变,TMPT＊1/＊3C基因型频率是2.4%。结论成功发展PS-TaqManPCR作为临床检测TPMT基因多态性的方法 ,该方法可靠、高通量且效率高,适合临床实验室对样本大规模检测的需要。     

TPMT基因型在中国人群中的分布

目的总结TPMT基因型在中国人群中的分布,为硫嘌呤类药物的个体化用药提供参考。方法通过系统检索Pub Med、Embase和CBM数据库中(截止到2015年4月10日)有关TPMT基因型在中国人群中分布的研究文献,对TPMT基因型和等位基因在中国人群中的分布做一整理归纳。检索词分别为"硫嘌呤甲基转移酶","TPMT","thiopurine S-methyltranferase","polymorphism","hepalotype"等。结果共有30篇中文文献和14篇英文文献关于TPMT基因型在中国人群中的分布,共纳入10 458人。中国人群中TPMT基因型总体变异率为2.91%(304/10 458),最常见的变异基因型为TPMT*1/*3C(96.71%,294/304)。TPMT*1/*3A基因型主要出现在哈萨克斯坦族和维吾尔族人群中,TPMT*1/*6和TPMT*1/*2基因型在中国人群极少出现;主要的变异等位基因为TPMT*3C,占总体变异等位基因的97.05%(296/305)。结论根据我国不同地区和民族选择性进行TPMT基因型检测,不但可有效的指导硫嘌呤类药物的个体化用药,而且可节约医疗成本,减轻患者经济负担。     

硫嘌呤甲基转移酶检测在临床个体化治疗中的意义和研究进展

正硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)是存在于人体内的1种非金属胞质酶,能催化体内芳烃和杂环含巯基化合物上的S-甲基,这类化合物包括6-巯基嘌呤(6-MP)、硫唑嘌呤(AZA)和6-硫鸟嘌呤(6-TG)[1]。TPMT活性受多因素影响,导致酶活性基因型和表现型不能完全统一。TPMT遗传具有单基因共显性遗传特征,目前发现的突变类型超过35种,由专门的TPMT命名委员会进行命名[2]。常见类型为:TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B、TPMT*3C(占总突变的95%以上)[3]。     

儿茶酚氧位甲基转移酶基因的3种单核苷酸多态性与精神分裂症及其认知功能的关系

目的:探讨基因的3种单核苷酸多态性与精神分裂症及其认知功能的相关性。方法:实验在济宁市中心血站分子生物学实验室完成。选取位于儿茶酚氧位甲基转移酶基因启动子区域的5’-启动子HindⅢ多态、外显子4的Val158Met多态和外显子6的BglⅠ多态作为研究的位点。利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析技术,在119例精神分裂症患者(2001-07/2003-07曾在山东省济宁医学院附属二院精神科住院患者)及52名正常对照人群中进行3个单核苷酸多态检测,比较患者组与对照组之间基因型分布及等位基因频率的差异。同时对精神分裂症患者的认知功能进行评定,口语流畅性测验要求受试对象分别说出食物、日常用品、人名、地名,各限时1min,以说出的总词汇数为统计指标。简易精神状况检查共30个小项,每项回答正确评1分,回答错误或答不知道评0分,以所得总分为统计指标,以1～24分为有认知功能障碍。并探讨不同基因型的认知功能情况。结果:患者组119例和对照组59人全部采集到血样并完成认知功能检查,均进入结果分析。①儿茶酚氧位甲基转移酶基因3个单核苷酸位点的基因分型:5’-启动子HindⅢ多态和外显子4Val158Met多态呈A/G多态、外显子6BglⅠ多态呈C/-多态;②患者组与对照组之间5’-启动子HindⅢ多态、外显子4Val158Met多态、外显子6BglⅠ多态3个多态的基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义(P均>0.05)。③患者组儿茶酚氧位甲基转移酶基因外显子4Val158Met多态与口语流畅性测验总词汇数相关,相关系数为-0.19,P<0.05。结论:儿茶酚氧位甲基转移酶基因的5’-启动子HindⅢ多态、外显子6BglⅠ多态可能与精神分裂症无关联;而外显子4Val158Met多态可能与精神分裂症认知功能有关,在其发病中起一定作用。     

儿茶酚氧位甲基转移酶基因的3种单核苷酸多态性与精神分裂症及其认知功能的关系

目的：探讨基因的3种单核苷酸多态性与精神分裂症及其认知功能的相关性。 方法：实验在济宁市中心血站分子生物学实验室完成。选取位于儿茶酚氧位甲基转移酶基因启动子区域的5’-启动子HindⅢ多态、外显子4的Va1158Met多态和外显子6的BOI多态作为研究的位点。利用聚合酶链反应一限制性片段长度多态分析技术，在119例精神分裂症患者（2001-07／2003-07曾在山东省济宁医学院附属二院精神科住院患者）及52名正常对照人群中进行3个单核苷酸多态检测，比较患者组与对照组之间基因型分布及等位基因频率的差异。同时对精神分裂症患者的认知功能进行评定，口语流畅性测验要求受试对象分别说出食物、日常用品、人名、地名，各限时1min，以说出的总词汇数为统计指标。简易精神状况检查共30个小项，每项回答正确评1分，回答错误或答不知道评0分，以所得总分为统计指标，以1～24分为有认知功能障碍。并探讨不同基因型的认知功能情况。 结果：患者组119例和对照组59人全部采集到血样并完成认知功能检查，均进入结果分析。①儿茶酚氧位甲基转移酶基因3个单核苷酸位点的基因分型：5’-启动子HindⅢ多态和外显子4Val158Met多态呈A／G多态、外显子6BglI多态呈C／-多态；②患者组与对照组之间5’-启动子HindⅢ多态、外显子4Val158Met多态、外显子6BglI多态3个多态的基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义（P均〉0．05）。③患者组儿茶酚氧位甲基转移酶基因外显子4Val158Met多态与口语流畅性测验总词汇数相关．相关系数为-0．19，P〈0．05。 结论：儿茶酚氧位甲基转移酶基因的5’-启动子HindⅢ多态、外显子6BglI多态可能与精神分裂症无关联；而外显子4Vall58Met多态可能与精神分裂症认知功能有关，在其发病中起一定作用。     

SOCS基因单核苷酸多态性与典型骨髓增殖性肿瘤的研究

本研究探讨细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressorofcytokinesignaling，SOCS）突变和单核苷酸多态性（SNP）对典型骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferativeneoplasms，MPN）的作用及其机制。采用实时定量PCR和直接测序法等方法，在100例MPN患者中分别检测SOCSl、SOCS2、SOCS3基因突变和SNP发生情况。结果表明，SOCS315号外显子第63位核苷酸的A-c多态性（SNP库无报道）21例；SOCS315号外显子第1779位核苷酸的A-c多态性18例；SOCS315号外显子第2249位核苷酸的A-G多态性（SNP库无报道）49例；SOCs315号外显子第2366位核苷酸的T-C多态性（SNP库无报道）39例；SOCS215号外显子第2016位核苷酸的T-C多态性（SNP库无报道）9例。4组SOCs3SNP患者平均年龄高于野生型患者，白细胞计数及血小板水平均高于野生型患者，87．65％SNP均存于JAK2突变。结论：SOCS可能是抗癌治疗的一个重要靶点．SOCSSNP可能参与MPN的发病机制。     

RELN基因单核甘酸多态性与儿童孤独症临床特征的相关分析

目的 探讨RELN基因exon 6 SNP基因型与儿童孤独症临床特征的相关性.方法 应用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)测定30例孤独症患儿及30例正常儿童的基因型和等位基因频率.采用孤独症行为检查表(ABC)对患儿行为进行评定.结果 孤独症组与对照组exon 6 SNP基因型和等位基因频率存在显著性差异(P<0.05);基因型为A/A和A/G之间、A/A和G/G之间的孤独症儿童交往因子存在显著性差异(p<0.05),基因型为A/G和G/G的孤独症儿童ABC总分存在显著性差异(P<0.05).结论 exon 6 SNP与儿童孤独症相关,携带基因型G/G、A/G的患儿比携带基因型A/A的患儿有更严重的人际交往障碍.     

温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的基因多态性

本研究旨在对14例临床诊断的温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的血液学及分子生物学进行分析，测定其PCR产物序列，找出引起该病的致病突变位点并进行单核苷酸多态性分析。对临床诊断的患者抽取静脉血，EDTA-K2抗凝，及时提取模板，设计相关引物，进行PCR扩增后测序，最后经过序列比对和分析，找出引起β珠蛋白合成障碍性贫血的致病突变位点。结果表明：14例标本的DNA扩增产物测序分析中发现4例在IVS-2-654位点发生了C→T的杂合突变；1例为CD41／42位-TTCT缺失；2个位点存在单核苷酸多态性，分别是外显子1第59位的T／C多态性、IVS-2 nt665，T／C多态性。结论：温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者单核苷酸多态性具有一定的特殊性；发现了两种基因突变类型，分别为IVS-2-654 C→T的杂合突变和CD41／42位-TTCT缺失。     

门冬酰胺合成酶启动子区单核苷酸多态性与基因表达量的相关性研究

细胞内门冬酰胺合成酶（asparagines synthetase,AS）的表达水平与白血病细胞对左旋门冬酰胺酶（L-asp）耐药有关。本研究旨在通过筛查发现AS启动子区的单核苷酸多态性（SNP）位点,研究它们对AS基因表达量的影响及寻找对L-asp治疗反应具有影响的个体遗传因素。对82份白血病标本和45份非白血病标本直接测序,筛查AS启动子区的SNP;用实时定量PCR法测定相应标本中的ASmRNA水平。通过对被筛SNP位点不同基因型个体的AS表达水平的统计分析,判断被筛SNP是否对基因表达产生影响。结果发现：被测AS启动子片段内共发现3个SNP位点。分别是-239C/T,-92G/A和-62A/T。其中-92A等位基因在白血病患儿中的发生频率高于非白血病（P〈0.05）。AS表达在该SNP的各种基因型个体间存在差异,基因表达水平由高到底依次为GA杂合子型〉AA纯合子型〉GG纯合子型（P〈0.01）。结论：-92A等位基因变异可能与白血病的某些特征相关,并且这个等位基因变异的存在与AS基因的高表达相关。     

再生障碍性贫血IFN-γ基因＋874位点的单核苷酸多态性

本研究采用扩增不应突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）-PCR对51名健康者和54例再生障性贫血患者IFN-γ基因＋874位点单核苷酸多态性进行检测，旨在探讨再生障碍性贫血患者的遗传易感因素。结果表明，再生障碍性贫血患者IFN-γ＋874位点TT基因型及T等位基因分布频率分别为42．6％与65．7％，显著高于健康对照组中的17．6％与39．2％（Χ^2=13．780，P=0．01；Χ^2=14．811，P〈0．001）。结论：IFN-γ＋874A／T基因多态性可能与再生障碍性贫血患者的遗传易感性相关。IFN-γ4-874位点单核苷酸多态性与再生障碍性贫血的病情严重程度没有相关性。     

单核苷酸多态性及其在异基因造血干细胞移植中的应用

单核苷酸多态性是继限制性片段长度多态性，短串连重复序列多态性之后的第三代遗传标记，是基因组中变异最多的一种，被广泛应用于基因定位、克隆和遗传多样性研究以及法医学亲子鉴定等方面。作为一种稳定的遗传多态性，单核苷酸多态性成为异基因造血干细胞移植中嵌合体检测的新方法。本文就单核苷酸多态性的遗传特性，分析技术，在造血干细胞移植和其它方面的应用进行了综述。     

3种常用单核苷酸多态性检测方法的应用比较

目的：通过比较变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis．DGGE)、单链构像多态性(single—stranded conformational polymorphism，SSCP)、限制性酶切检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)的优缺点。为不同条件下选择最适合的SNP检测方法提供借鉴。方法：DGGE、限制性酶切检测150例大肠癌APEX基因第3外显子，SSCP检测第5外显子，最后结果经直接测序验证。结果：DGGE检测出17例异常泳动条带；测序结果证实该17例均存在1247A→G的SNP；SSCP检测到57例异常条带；经直接测序证实38例有2197T→G的SNP；PCR-限制性酶切结果与DGGE所测结果完全吻合。结论：DGGE检测结果无假阳性，重复性好，准确率高。而且可判断基因型；SSCP简便易行．但存在假阳性与假阴性，而且不能判断基因型；限制性酶切对SNP位点检测及基因分型均能进行较准确的判断。     

汉族儿童TPMT基因全蛋白编码区SNP检测与分析

摘要：目的：分析汉族儿童巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因的蛋白质编码区（CDS）突变,探讨其在急性白血病（AL）患儿中的单核苷酸多态性（SNP）。 方法：变性梯度凝胶电泳结合DNA测序检测103例AL患儿及111例对照组儿童的TPMT基因CDS碱基位点突变情况。 结果：汉族儿童TPMT基因筛查出2个蛋白编码区单核苷酸多态性（cSNPs）,分别为TPMT*3C（A719G）和*1S（C474T）。TPMT*3C AA、AG、GG基因型频率在AL患儿组中分别为95.1%、3.9%和1.0%,在对照组中分别为97.3%、2.7%和0,其G等位基因频率分别为2.9%和1.4%;TPMT*1S CC、CT、TT基因型频率在AL患儿组分别为5.8%、24.3%和69.9%,在对照组中分别为8.1%、28.8%和63.1%,其C等位基因频率分别为18.0%和22.5%。2个cSNPs基因型及等位基因频率在两组中分布差异无统计学意义（P＞0.05）。对照组筛查出C210T和TPMT*26（T622C）基因突变。 结论：汉族儿童存在TPMT*26突变基因型,且TPMT*3C、TPMT*1S可能均与儿童AL易感性无关。     

GAS6基因344-35C/T多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨粤西地区汉族人群中生长停滞特异性基因6(GAS6基因)内含子SNP344-35C/T位点的单核苷酸多态性(SNP)与脑梗死的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测180例脑梗死患者和150例健康对照的GAS6基因内含子SNP344-35C/T的基因型。结果 GAS6基因内含子SNP344-35C/T基因型及等位基因频率在病例组与对照组之间无显著性差异(P>0.05),经性别分层分析发现,女性C等位基因频率(77.9%)高于对照组(66.4%)(P=0.040);CC基因型频率(61.8%)高于对照组(43.1%)(P=0.036)。结论 GAS6基因内含子SNP344-35C/T位点与粤西地区汉族女性脑梗死有关,C等位基因是女性脑梗死的危险因素,CC基因型为女性脑梗死的易感基因型。