HBV特异性抗原对HBV携带者T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 通过分析不同类型HBV携带者外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞免疫功能,分析HBV抗原对其的影响,探索HBV慢性感染的机制并寻求可能的免疫治疗方法.方法 用不同的抗原和(或)细胞因子刺激培养的无症状HBV携带者PBMCs,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中不同细胞因子的水平;流式细胞术检测PBMCs的细胞表型.对数据进行t检验分析和相关性分析.结果 HBsAg刺激无症状HBV携带者PBMCs后产生的干扰素(IFN)γ为(48.3±19.8)Pg/ml,较健康对照人群低[(196.2±104.3)Pg/ml(t=3.023,P＜0.05)].HBsAg和HBcAg刺激HBeAg阳性患者PBMCs分泌的IFN y水平分别为(50.4±51.6)Pg/ml和(63.2±36.9)pg/ml,明显低于HBeAg阴性组[(86.2±42.3)Pg/ml和(101.4±32.5)pg/ml],t值分别为2.468和3.184,P值均＜0.05;HBeAg阳性患者组分泌白细胞介素(IL)-12 P70明显低于HBeAg阴性组(P＜0.05);补偿外源性IL-12可明显促进HBV携带者PBMCs分泌IFN γ(P＜0.01),IL-12协同HBV抗原可激活CD8+CD45RA+CCR7及CD8+CD45RA CD62L+细胞.结论 HBeAg阳性患者PBMCs分泌IL-12减少,这可能是HBV携带者持续感染的重要原因;外源性IL-12可促进HBV携带者PBMCs中的中枢记忆性T淋巴细胞的免疫功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of HBV antigens and pathological mechanism of chronic HBV infection by analyzing the cellular immune function of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from HBsAg carriers. Methods PBMCs were prepared from individuals with chronic asymptomatic HBV infection and cultured in the presence of different antigens and/or cytokines. The levels of cytokines in culture supernatants were detected by ELISA method. The phenotype of the cells was detected by FACS.Results The levels of IFN γ secreted by PBMCs from HBsAg carriers were (48.3 ± 19.8) pg/ml, significantly lower than that from healthy controls (t = 3.023, P ＜ 0.05＝; The IFN γ produced by PBMCs from HBeAg positive patients due to HBsAg and HBcAg stimulation were (50.4±51.6) pg/ml and (63.2 ± 36.9)pg/ml, significantly lower than that of HBeAg negative patients (t = 2.468 and 3.184, P ＜ 0.05, respectively＝.The IL-12p70 secreted by PBMCs from HBeAg positive patients was also significantly lower than that of HBeAg negative patients (P ＜ 0.05＝; Exogenous IL-12 promoted significantly PBMCs to secrete IFN γ (P ＜0.01＝ and IL-12 combined with HBV antigens activated CD8+CD45RA+CCR7+ and CD8+CD45RA-CD62L+cells. Conclusion IL-12 secreted by PBMCs decreased in HBeAg positive patients, which may be the crucial reason of viral persistence in chronic HBV carriers. Exogenous IL-12 combined with specific HBV antigen could promote the central memory CD8+ T cells to produce IFN γ.     

探索Th17细胞在急性髓细胞白血病中的作用

目的:探索急性髓细胞白血病(AML)骨髓中Th17细胞及其相关因子在AML发生与发展中的作用。方法:选取初诊AML患者23例,另取25名健康志愿者为对照。采用流式细胞仪分别测初诊AML组、初诊AML组诱导缓解后、对照组骨髓中CD3~+ CD161~+ IL-17~+ IFN-γ~+ T细胞的比例。采用ELISA法检测初诊AML组、初诊AML组诱导缓解后、对照组骨髓液中血管内皮生长因子(VEGF)、IL-17浓度;对VEGF与IL-17进行相关性分析。结果:初诊AML组骨髓中CD3~+ CD161~+ IL-17~+ IFN-γ~+ T细胞的比例为(1.52±0.10)%,初诊AML组诱导缓解后CD3~+ CD161~+ IL-17~+ IFN-γ~+ T细胞的比例为(1.36±0.06)%,对照组骨髓中CD3~+ CD161~+ IL-17~+ IFN-γ~+ T细胞的比例为(0.22±0.04)%。初诊AML组VEGF浓度(254.08±24.34)pg/ml,IL-17浓度(20.24±3.82)pg/ml;初诊AML组诱导缓解后VEGF浓度(137.37±22.51)pg/ml,IL-17浓度(10.42±2.96)pg/ml;对照组骨髓液中VEGF浓度(125.98±14.96)pg/ml,IL-17浓度(10.59±2.87)pg/ml;VEGF与IL-17呈正相关。结论:Th17细胞具有促进AML发生与发展的作用。     

类风湿关节炎患者血清中期因子和白细胞介素-17的表达

目的 探讨中期因子和白细胞介素(IL)-17在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达及其临床意义。方法 应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测79例RA、37例骨关节炎及70名健康体检者血清中中期因子、IL-17,同时应用ELISA法检测血清抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,免疫散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF),间接免疫荧光法检测抗角蛋白抗体(AKA),分析中期因子与IL-17、抗CCP抗体、CRP、RF、红细胞沉降率(ESR)、AKA及RA疾病活动度评分(DAS)之间的相关性。多组间比较采用Kruskal-WallisH检验,2组间比较采用Mann-Whitney U检验,相关分析采用非参数Spearman相关分析。结果 RA组血清中期因子水平(327±167) pg/ml显著高于骨关节炎组(209±130)pg/ml和健康对照组(225±109) pg/ml,差异有统计学意义（H=22.01,P＜0.01）,骨关节炎和健康对照组比较差异无统计学意义(D0.05)。RA组IL-17水平(44±15) pg/ml也显著高于骨关节炎组(26±8) pg/ml和健康对照组( 27±8) pg/ml,差异有统计学意义(H=66.89,P＜0.01),骨关节炎组和健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。血清中期因子水平与IL-17、CRP呈正相关（r=0.398,P＜0.01;r=0.285,P＜0.01）,与DAS、RF、ESR、AKA、抗CCP等无相关性。结论 中期因子和IL-17可能在RA疾病的发生、发展中发挥了一定的作用,通过复杂的细胞因子网络相互协同,促进了RA的发生发展。     

肿瘤坏死因子-α拮抗剂对类风湿关节炎和强直性脊柱炎患者血清白细胞介素-17和外周血 Th17细胞比例的影响

目的初步探讨外周血 Th17细胞亚群的比例以及 IL-17的表达水平在 RA 和 AS 患者接受 TNF-α拮抗剂治疗前后的改变及其意义。方法选择 RA 患者27例和 AS 患者22例,2种疾病中各有14例患者接受 TNF-α拮抗剂治疗40周。对照组24名来源于健康献血者。采用流式细胞术检测外周血 CD4+T 细胞中 Th17细胞亚群的比例,ELISA 检测外周血 IL-17表达水平。符合正态分布数据采用2个独立样本 t 检验,不符合正态分布则采用 Wilcoxon 秩和检验,患者治疗前后的比较采用配对 t 检验。结果治疗前,RA 和 AS 患者外周血 CD4+ T 细胞中 Th17细胞亚群的比例显著高于健康对照组[RA 1.03%（0.66%,1.78%）与健康对照0.50%（0.43%,0.67%）,Z=-3.236,P<0.01;AS（1.16±0.09）%与健康对照（0.59±0.06）%,t=5.226,P<0.01]。同样,IL-17的表达水平在2组疾病中也显著升高[RA（32.3±2.5） pg/ml,健康对照（14.3±2.5） pg/ml,t=5.070,P<0.01;AS 28.98（23.84,36.14） pg/ml,健康对照11.84（5.33,22.12） pg/ml,Z=-4.103,P<0.01]。 TNF-α拮抗剂治疗后,2组疾病 CD4+T 细胞中 Th17细胞亚群比例无明显变化[RA 驻（0.1045±0.2126）%;AS 驻（0.0025±0.1838）%],但 IL-17表达水平则明显下降[RA 驻（-13.5±5.0） pg/ml;AS 驻（-16.0±1.9） pg/ml]。结论 Th17细胞及其分泌的细胞因子 IL-17在 RA 和 AS 的发病机制中起重要作用,TNF-α拮抗剂对 AS 和 RA 患者 Th17细胞亚群炎症细胞因子的分泌功能有明显的抑制作用,但40周的治疗仍不能降低 Th17细胞比例,这可能是 TNF-α拮抗剂短期治疗后疾病复发的原因之一。     

活化的类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4诱导Th17细胞分化

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs) Toll样受体4(TLR4)通过诱导Th17细胞分化参与RA疾病发生发展的意义.方法 采集22例RA患者和20名健康对照外周血,流式细胞术检测Th17细胞频率,脂多糖刺激PBMCs 2 d,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PBMCs TLR4 mRNA水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.收集上清液与CD4+脐带血单个核细胞(CBMCs)培养3d,RT-qPCR检测CBMCsIL-17 mRNA水平.ELISA检测上清液IL-17含量.统计学处理采用成组t检验.结果 与健康对照组比较,RA患者Th17细胞频率[(0.53±0.14)％与(1.57±0.68)％]、TLR4 mRNA显著升高(P均＜0.01);PBMCs经脂多糖刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.5倍,而健康对照组下降到0.11倍;RA患者PBMCs产生的IL-6、TNF-α较健康对照组明显增加(P＜0.01);RA患者PBMCs上清液诱导CD4+CBMCs IL-17 mRNA水平、IL-17含量与健康对照组相比均显著升高(P＜0.01);而未经脂多糖刺激,2组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者PBMCs的TLR4表达及对脂多糖的刺激的反应性增加,且具有较强的诱导Th17细胞分化能力.     

HBeAg对树突细胞分泌白细胞介素6和12的影响

目的 研究HBeAg对脂多糖(LPS)诱导树突细胞(DCs)分泌炎症因子白细胞介素(IL)-12和IL-6的影响. 方法 密度梯度离心法分离浓缩白细胞获得单个核细胞,经贴壁法纯化的单核细胞由刺激因子诱导得到未成熟DCs,形态学观察及免疫表型鉴定DCs;加入不同浓度(1、2、5 μ g/ml)HBeAg,LPS刺激摄取抗原的DCs,酶联免疫法测定培养上清液中IL-12和IL-6水平.细胞表型比较用Mann-WhitneyU检验,不同浓度组间数据的多重比较用LSD-t检验(方差齐)或Dunnett'sT3检验(方差不齐).结果 HBeAg 1、2、5 μg/ml组及对照组上清液的IL-6分泌水平分别为(1177.64±167.38)pg/m1、(1092.88±60.90) pg/ml、(793.65±96.29) pg/ml和(1612.38±244.59)pg/ml,HBeAg 1、2、5μg/ml组的IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.35、4.00和6.32,P＜0.05或P＜0.01),HBeAg 1 μg/ml组IL-6分泌水平明显高于5 μg/ml组(t=2.96,P＜ 0.05);HBeAg 1、2、5μg/ml组及对照组上清液的IL-12分泌水平分别为(1037.64±58.46)pg/ml、(885.31±13.00) pg/ml、(804.34±15.25) pg/ml和(1101.46±30.76) pg/ml,HBeAg1 μg/ml组与对照组的IL-12分泌水平差异无统计学意义(t=1.67,P＞0.05),2μg/ml和5μg/ml组IL-12分泌水平较对照组明显下调(t值分别为11.21和14.99,P值均＜0.01),5 ug/ml组IL-12分泌水平明显低于2 μg/ml组(t=7.00,P＜0.05).结论 HBeAg能下调DCs分泌炎症因子IL-12和IL-6,这可能是HBV持续感染的免疫逃逸机制之一.     

妊娠对类风湿关节炎患者内皮祖细胞的影响及机制研究

目的:探讨妊娠对RA患者内皮祖细胞(EPC)的影响及机制。方法:将2016年1月至2018年6月来本院就诊的RA初治患者纳入本项研究,按照有无妊娠,将患者分为单纯RA组和RA合并妊娠组,均为女性患者,每组各30例;免疫组织化学染色检测滑膜组织内淋巴细胞共同抗原(LCA)+淋巴细胞和CD68+巨噬细胞的数目;流式细胞术检测EPC和内皮细胞的比例;ELISA检测EPC上清中血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1、IL-6和IL-10的浓度。2组之间比较采用t检验,多组间比较用单因素方差分析。结果:免疫组织化学结果显示RA合并妊娠组关节滑膜内CD68+巨噬细胞和LCA+淋巴细胞的数目低于单纯RA组;ELISA的结果显示单纯RA组外周血可溶性人HLA-G的浓度为(8.9±1.7)pg/ml,RA合并妊娠组的浓度为(396.7±89.6)pg/ml,2组差异有统计学意义(t=4.329,P<0.01);流式细胞学检测结果显示单纯RA组患者淋巴细胞中EPC的比例为(0.13±0.03)%,RA合并妊娠组的比例为(0.76±0.09)%,2组差异有统计学意义(t=6.671,P<0.01);相关性分析结果显示2组患者外周血中EPC比例与可溶性HLA-G浓度呈正相关(r=0.8861,P<0.01);体外的实验结果显示HLA-G能够促进单纯RA患者EPC旁分泌和分化功能的恢复。结论:妊娠能够提高RA患者体内EPC的数量和生物学功能,HLA-G在这个过程中可能发挥着重要作用。     

亚砷酸对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素-1012表达的影响

目的 探讨亚砷酸(ATO)对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素(IL)-10、IL-12表达的影响.方法 MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组、环磷酰胺(CTX)组和生理盐水(NS)组,给药2个月.用四色流式细胞术测脾脏CD3~+(T)细胞和CD3~+CD4~+(Th)细胞的百分率以及CD3~+CD4~+(Th)细胞内IL-10和IL-12的水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测血清中抗双链DNA(dsDNA)抗体、IL-10和IL-12的浓度.分别采用单因素方差分析、LSD检验,配对t检验进行统计学处理.结果 ①给药后ATO组小鼠血清的抗dsDNA抗体水平吸光度值(A)0.92±0.06,较给药前1.14±0.58明显下降(P<0.01);②ATO组CD3~+细胞和CD3~+CD4~+百分率[分别为(44±4)%和(20±4)%]均显著均低于NS组水平[分别为(59±5)%和(30±3)%](P<0.01);③ATO组的血清IL-12浓度(84±12)pg/ml较NS组水平(103±13)pg/ml显著降低(P=0.018);④ATO组Th细胞内IL-10和IL-12的表达水平(1.5±0.4)%和(2.43±0.42)%显著低于NS组(2.5±0.5)%和(3.24±0.40)%(P<0.01).结论 亚砷酸能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗dsDNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IL-12的血清水平和Th细胞的诱生水平,及能降低IL-10的Th细胞的诱生水平.     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞功能的影响

目的观察胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞(Treg)功能的影响。方法选取2016年12月-2017年7月陕西省人民医院感染性疾病科收治的慢性乙型肝炎患者67例,其中38例接受恩替卡韦抗病毒治疗(对照组),29例接受恩替卡韦联合注射用胸腺肽α1治疗(治疗组),分别于治疗前后分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平,纯化CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg,与自体CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞因子分泌水平。计量资料2组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果对照组、治疗组患者经治12周CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg均较基线水平明显下降,差异均有统计学意义(8.85±2.18)%vs(12.32±1.22)%、(9.26±2.30)%vs(13.71±2.32)%,t值分别为4.579、4.803,P值分别为0.0005、0.0003]。选取17例对照组患者和21例治疗组患者检测细胞因子分泌水平。经治12周对照组患者治疗12周后Treg与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养系统中细胞增殖和分泌细胞因子水平均无明显变化;治疗组共培养系统中细胞计数较基线水平明显升高,差异有统计学意义[(3.66±0.95)×106个vs(2.07±0.51)×106个,t=5.709,P0.0001];治疗组共培养细胞分泌抑制性细胞因子IL-10、IL-35水平明显降低,差异均有统计学意义[(41.40±11.89)pg/ml vs(56.53±27.85)pg/ml、(122.9±9.98)pg/ml vs(130.0±15.98)pg/ml,t值分别为2.639、2.459,P值分别为0.019、0.028)],分泌抗病毒细胞因子IFNα、IFNγ水平明显升高,差异均有统计学意义[(297.5±83.56)pg/ml vs(235.6±67.72)pg/ml、(5.83±0.85)pg/ml vs(4.39±0.95)pg/ml,t值分别为2.603、4.659,P值分别0.017、0.0004]。结论胸腺肽α1能够抑制慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平及免疫抑制功能,提高患者免疫功能。     

白介素17抗体减轻吸烟所致慢性阻塞性肺疾病模型小鼠的气道炎症

目的 研究白介素17(interhukin-17,IL-17)抗体在吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型小鼠气道炎症中的作用.方法 C67/BL6雄性小鼠随机分为COPD组(8只)、COPD+IL-17抗体干预组(简称COPD+干预组,8只)和正常对照组(10只).对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数、染色和分类;用酶联免疫吸附试验检测小鼠肺组织匀浆IL-17水平,观察各组小鼠气道病理改变.结果 COPD组与COPD+干预组相比肺功能差异无统计学意义.COPD组、COPD+干预组小鼠与正常对照组相比BALF细胞总数显著增高[分别为(19.64±1.89)×104/ml,(15.47±2.99)×104/ml和(5.13±1.00)×104/ml,P＜0.01];COPD+干预组较COPD组细胞总数下降(P＜0.01);中性粒细胞比例[分别为(8.58+6.77)%,(22.98±8.46)%]及绝对值[(1.28±0.96)×104/ml,(4.53±1.73)×104/ml]显著下降(P值均＜0.01).肺组织HE染色病理评分COPD+干预组(73.25±18.58)较cOPD组(106.13±36.27)炎症有所减轻(P＜0.05).COPD+干预组小鼠肺组织匀浆中IL-17含量(0.084±0.041)pg/mg pro与COPD组(0.221±0.081)pg/mg pro相比显著降低(P＜0.01).结论 吸烟所致COPD小鼠模型中IL-17参与了中性粒细胞引起的气道炎症,抑制IL-17的表达,可以减少气道内中性粒细胞的数量,减轻气道炎症.     

(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯对类风湿关节炎的免疫调节机制研究

目的 ①研究(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对类风湿关节炎(RA)患者外周血和滑液中T细胞增殖的影响及对RA相关细胞因子的免疫调节作用.②观察EGCG对RA滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的影响.方法 ①取RA患者外周血(30份)、滑液(23份)分离单个核细胞,并分设空白对照组,阴性对照组,甲氨蝶呤阳性对照组,EGCG低、中、高剂量组,通过同位素(3H)掺入法,在体外研究EGCG对RA患者外周血及滑液中T细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测EGCG对RA外周血及滑液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素-γ、白细胞介素(IL)-1、IL-6和IL-17A的影响.②取RA患者滑膜组织(8例)进行原代培养,并分设空白对照组,甲氨蝶呤组(阳性对照),EGCG低、中、高剂量组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在体外研究EGCG对RA患者FLS增殖的影响.统计学处理采用方差分析和SNK-q检验.结果 ①RA患者外周血及滑液中EGCG高剂量组每分钟脉冲数(cpm)值[分别是(15 136±2910),(11587±3135)],较阴性对照组(42 856±2127)(35 748±4512)下降,差异均有统计学意义(P均＜0.01);外周血中ECCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(321±13)、(298±20)、(132±12)、(197±7)、(59±8)pg/ml],均较阴性对照组[(458±28)、(505±26)、(346±28)、(405±25)、(109±13)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);滑液中EGCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(41.4±2.9)、(182±16)、(56.3±11.0)、(34.2±1.9)、(44±8)pg/ml],均较阴性对照组[(388.3±19.3)、(469±20)、(104.2±17.8)、(114.5±4.8)、(104±11)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).②EGCG高剂量组FLS吸光度值(0.080±0.017),较空白对照组(0.274±0.041)下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EGCG可体外抑制RA患者外周血和滑液中T细胞增殖,抑制TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A分泌;可体外抑制RA FLS增殖.     

Methotrexate attenuates the Th17/IL-17 levels in peripheral blood mononuclear cells from healthy individuals and RA patients

To investigate whether the inhibition of Th17/interleukin (IL)-17 contributes to the beneficial effects of methotrexate (MTX) in the treatment of rheumatoid arthritis (RA). Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from healthy donors and RA patients were collected. The cells were stimulated with monoclonal antibodies to CD3 and CD28 in the absence or presence of MTX. After coincubation, IL-17 production was detected at both the mRNA and protein levels, and the percentage of cells positive for both CD4 and IL-17 in PBMCs was analyzed by flow cytometry. PBMCs of healthy donors and RA patients were stimulated with CD3 and CD28 monoclonal antibodies to produce high levels of IL-17. The augmentation of IL-17 at the mRNA and protein levels was significantly inhibited when PBMC cultures were preincubated with MTX. Compared with PBMCs of healthy donors, PBMCs of RA patients produced higher levels of IL-17, and this increase in IL-17 levels was more inhibited by MTX pretreatment. MTX inhibited IL-17 at the mRNA level in a dose-dependent manner, but not at the protein level, in both PBMCs of healthy donors and RA patients. MTX did not affect the percentage of CD4- and IL-17-positive cells in PBMCs. MTX dose dependently suppressed the production of IL-17 at the mRNA level by PBMCs from healthy donors and RA patients. Suppression of IL-17 by MTX may contribute to its potent anti-inflammatory role in RA therapy.     

霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及相关细胞因子水平变化特点及意义

目的探讨霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及炎性细胞因子水平变化特点及意义。方法选取2017年1月—12月在我院治疗的霉菌性阴道炎患者182例作为观察组,同时选取女性健康志愿者110例作为对照组,检测2组受试者阴道分泌物中T淋巴细胞及细胞因子水平,同时对观察组阴道分泌物进行真菌培养。结果 182例患者中,病原菌以白色念珠菌为主,占43.41%;观察组阴道分泌物CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平分别为(52.12±10.45)%、(33.30±8.23)%和(25.10±9.22)%,明显低于对照组(P均0.05);观察组阴道分泌物IL-2、TNF-α和IFN-γ分别为(7.21±1.42)pg/ml、(17.90±4.55)pg/ml和(19.81±4.50)pg/ml,明显低于对照组(P均0.05),而IL-4和IL-10分别为(40.32±8.33)pg/ml和(25.66±4.33)pg/ml,明显高于对照组(P均0.05);复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显低于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05),而IL-4和IL-10明显高于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05)。结论霉菌性阴道炎病原体以白色念珠菌为主,Th1/Th2细胞介导的细胞免疫参与了疾病过程。     

SOCS1和SOCS3低甲基化对川崎病Th1/Th2细胞失衡的影响

目的 探讨SOCS1和SOCS3低甲基化对川崎病Th1/Th2细胞失衡的影响.方法 急性期川崎病患儿36例,健康同年龄对照组16名.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL)-6蛋白浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CD4+T细胞SOCS1、SOCS3、T-bet、干扰素(IFN)-γ、GATA3、IL-4基因mRNA表达;流式细胞术检测外周血Th1/Th2细胞比例和CD4+T细胞磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度(MFI);甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测CD4+T细胞SOCSl基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区(5'-UTR)3个可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平.采用t检验进行统计分析.结果 ①急性期川崎病患儿血浆IL-6浓度[分别为(51.8±16.3)pg/ml和(8.6±2.0)pg/ml]、CD4+T细胞pSTAT3 MH水平[分别为(52±14)和(10±4)]显著上调(P＜0.05).其中川崎病合并冠状动脉损伤组(川崎病-CAL+)IL-6和pSTAT3 MFI水平均明显高于无冠状动脉损伤组[IL-6为(87.2±27.4)pg/ml与(36.2±12.8)pg/ml,P＜0.05;pSTAT3 MFI为(75±15)和(42±11),P＜0.05].②急性期川崎病患儿Th1、Th2细胞比例及相关因子(T-bet、IFN-γ、GATA3和IL-4)表达明显增高(P＜0.05),Th1/Th2比值低于健康对照组(P＜0.05).其中川崎病-CAL+组Th1、Th2细胞比例及相关因子表达水平高于川崎病-GAL-组(P＜0.05),而Th1/Th2比值则略低于后者(P＜0.05).③急性期川崎病患儿CD4+T细胞SOCS1和SOCS3 mRNA水平显著高于同年龄对照组(P＜0.05),其中川崎病-CAL+组 SOCS1和SOCS3 mRNA表达低于川崎病-CAL-组(P＜0.05);健康对照组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区第3个STAT3结合位点的CpG岛完全去甲基化,急性期川崎病患儿呈低甲基化状态(P＜0.05),其中川崎病-CAL+组去甲基化水平明显低于川崎病-CAL组(P＜0.05);各组SOCS3基因5'-UTR区第1、2个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P＞0.05).结论 SOCS1和SOCS3基因低甲基化所致表达相对不足可能是川崎病Th1/Th2细胞失衡的因素之一.     

脂多糖对人外周血树突状细胞成熟的影响

目的 通过研究内毒素的不同作用方式,模拟慢性乙型肝炎肠源性内毒素血症,探讨脂多糖(LPS)对人外周血树突状细胞(DC)成熟的影响.方法 用重组人粒细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4、酪氨酸激酶受体3配体和肿瘤坏死因子α体外诱导、培养人外周血单个核细胞.分为持续刺激组:于1、4、7、9 d加入LPS 1 μg/ml;短期刺激组:于7、8 d加入LPS 1 μg/ml;对照组:不加LPS.观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T淋巴细胞的能力,用酶联免疫吸附法检测DC分泌细胞因子的水平.组间比较采用SPSS10.0统计学软件进行单因素方差分析,进一步两两比较用SNK法.结果 DC表达人白细胞-DR抗原、CD86、CD80、CD83分子水平,持续刺激组分别为65.81%±10.96%、48.81%±18.13%、13.56%±5.48%、11.52%±5.09%,对照组分别为78.43%±20.34%、51.29%±15.75%、15.22%±5.53%、15.64%±5.26%,短期刺激组分别为89.83%±16.99%、69.90%±24.05%、25.97%±10.81%、25.96%±10.59%,持续刺激组DC表面分子表达水平低于短期刺激组和对照组,各组比较,F值分别为3.376、3.823、4.535、5.320,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.3组DC诱导同种异体混合T淋巴细胞的增殖指数分别为1.593±0.303、1.949±0.240、1.548±0.365,各组比较,F=3.572,P=0.049,差异有统计学意义.3组DC表达干扰素γ水平短期刺激组为(40.52±11.38)pg/ml,高于对照组和持续刺激组[分别为(21.57±7.68)pg/ml、(15.6±5.83)pg/ml],各组比较,F=3.403,P=0.019,差异有统计学意义.3组DC表达白细胞介素12水平短期刺激组为(84.45±31.28)pg/ml,高于对照组和持续刺激组[分别为(54.42±20.34)pg/ml、(51.77±11.02)pg/ml],各组比较,F=2.212,P=0.088,差异有统计学意义.结论 LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟,可能是肠源性内毒素血症患者细胞免疫功能低下的原因所在.     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1及其配体表达的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎患者在抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1(PD-1)及其主要配体PD-L1表达的变化情况及其与HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系.方法 对10例人类白细胞抗原(HLA)-A2阳性的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以替比夫定抗病毒治疗24 周,分别于治疗的0、12周和24周随访,检测HBV DNA水平、外周血单个核细胞(PBMC)表面PD-1和PD-L1表达水平、HBV特异性T淋巴细胞数量与其表达PD 1水平,及PBMC体外培养上清液中干扰素(IFN)γ水平.其中HBV DNA定量采用荧光定量PCR法检测;PBMC自新鲜血分离,部分PBMC加入重组HBcAg体外培养7d,加入HBV抗原表位肽五聚体复合体;PD-1和PD-L1阳性细胞、CD8'T淋巴细胞以及CD8和PD-1双阳性细胞用流式细胞仪检测;IFN γ水平用酶联免疫吸附试验检测.比较不同时间点PBMC表面PD-1和PD L1表达水平、HBV特异性CD8'T淋巴细胞数量及其PD-1表达水平、PBMC培养上清液中IFN γ水平.对抗病毒治疗前后对应指标数值的变化采用配对t检验分析.结果 治疗前HBV DNA水平为5.16～8.77 log10拷贝/ml,治疗24周时,7例HBV DNA水平低于检测下限,3例仍可检测到,但明显低于基线水平.2例HBeAg/抗-Hbe血清学转换,2例HBeAg阴转,6例仍维持HBeAg阳性.0、12周和24周PBMC表面PD 1表达水平分别为52.1%±17.0%、39.1%±18.2%和23.4%±16.3%(24周和0周比较,P＜0.01);PD-L1分别为45.6%±15.4%、34.6%±16.2%和20.9%±9.5%(24周和0周,P＜0.01;24周和12周比较P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞上PD-1表达水平分别为76.2%±10.4%、66.5%±15.4%和49.5%±25.3%(24周和0周比较,P＜0.01;12周和0周比较,P＜0.05;24周和12周比较,P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞分别为1.3%±0.5%、1.5%±1.0%和2.2%±1.5%; IFN γ水平(pg/ml)分别为91.7±82.1、99.4+93.5和109.0+86.6.24周HBeAg/抗-Hbe血清学转换者上述指标变化明显大于无HBeAg/抗-Hbe血清学转换者.结论 直接抑制HBV复制能降低PD-1、PD-L1表达水平,并增加HBV特异性CD8'T淋巴细胞的数量和功能.早期PD-1快速下降和HBV特异性T淋巴细胞数量及功能的恢复与早期HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系有待于进一步研究.