miR-338—3p在肝癌组织中的表达及意义

目的 检测miRNA 在肝癌中的表达谱,探讨miR-338-3p 在肝癌组织中的表达及与肝癌临床病理参数的关系和意义.方法 采用液相芯片技术分析20 对肝癌组织与其癌旁组织中114 种miRNA 表达谱的差异.Real-time RT-PCR 验证另36 对肝癌组织中miR-338-3p 下调表达及其与肝癌临床参数的相关性.结果 31 种miRNA 在肝癌组织与非肝癌组织间呈现差异表达,其中12 种miRNA 在癌组织的表达较癌旁组织上调,19 种miRNA 在癌组织中表达下调.miR-338-3p下调表达程度与肝癌恶性程度、肿瘤分化程度、肝内和肝外转移及门静脉癌栓有关,与患者性别、AFP、HBsAg、是否合并肝硬变等不相关（P 〈 0.01）.miR-338-3p 的表达量肝癌组织低于非肿瘤组织,转移性肝癌低于非转移性癌组织,miR-338-3p 的表达量随着肿瘤级别的增加而逐近降低（P 〈0.01）.结论 肝癌组织与癌旁组织之间存在miRNA 差异表达,其中miR-338-3p 下调表达程度与肝恶性行为相关.     

早期胃癌特征性miRNA筛选

目的检测早期胃癌组织中微小RNA（miRNA）表达谱,筛选出早期胃癌的特征性miRNA。方法应用中通量基因芯片技术来检测5例早期胃癌组织及其癌旁组织标本中miRNA的表达。结果相对于癌旁组织,早期胃癌组织中共有36个miRNA表达下调,如miR-9．1、miR-103、miR-141等;12个miRNA表达上调,如miR．196a、miR．142．3p、miR-25等。结论在早期胃癌组织中表达异常的miRNA可能与胃癌发生发展有着一定的相关性。     

应用液相芯片分析肝细胞癌及癌旁组织小分子RNA表达谱差异

目的运用液相芯片技术研究肝细胞癌（HCC）及毗邻癌旁组织中小分子RNA（miRNA）表达谱差异。方法常规抽提20例HCC及对照癌旁组织中总RNA，采用含有114种miRNA的液相芯片及配套的Luminex 100检测系统进行miRNA差异表达谱分析；选取部分筛选出的差异表达miRNA，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。结果HCC的miRNA表达谱中差异表达miRNA共有28个，其中上调6个，下调22个，20例标本中共存性差异表达miRNA有9个（上调2个，下调7个，P〈0．01）；选取表达明显上调的miR-222作为进一步研究对象，半定量RT—PCR和Western blot分别证实其调节的靶目标-结缔组织生长因子（CTGF）在mRNA水平HCC和癌旁组织中差异无统计学意义。而蛋白质水平在HCC中表达明显下降。结论液相芯片筛选差异表达miRNA为HCC发病机制和诊断治疗的研究提供了新的思路；miR-18可能通过转录后基因沉默机制抑制CTGF mRNA翻译，从而促进HCC浸润转移。     

结直肠癌肝脏转移相关微小RNA224的研究

目的研究结直肠癌肝脏转移微小RNA（microRNA,miRNA）表达的差异以及相关特性。方法收集2009年4月至2010年11月期间首都医科大学附属复兴医院的10例伴或不伴肝脏转移的结直肠癌患者的肿瘤组织标本,应用miRNA芯片方法对2组样本的miRNA表达差异情况进行研究,并通过实时定量PCR对miRNA的芯片表达差异进行验证。结果芯片结果筛选出6种结直肠癌肝脏转移组较非转移组表达失调的miRNA（上调的miR-224、miR-1236和miR-622,下调的miR-155、miR-342-5p和miR-363）,选取显著上调（即差异信号值大于500）的miR-224进行实时定量PCR验证,结果与芯片实验结果相一致。结论 miR-224可能通过调节其靶基因而在结直肠癌肝脏转移中起重要作用,miR-224可能成为未来结直肠癌生物标记或治疗方法的一个研究方向。     

7种microRNAs在原发性肝癌组织和癌旁组织间的差异表达及与血清肿瘤标志物水平的相关性研究

目的 分析小RNA(microRNAs)在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异及与血清肿瘤标志物水平的相关性,探索肝癌诊断和预后可能的新标志.方法 使用实时定量PCR技术检测7种MicroRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异.结果 7种microRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05).与癌旁组织相比,miR-34c、miR-21、miR-16及miR-10b在肝癌组织中表达上调,miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在肝癌组织中表达下调,其中miR-200a 和 miR-148b下调明显.miR-200a在肝癌和癌旁组织中的表达差异与患者血清AFP水平呈正相关(r=0.848 9,P<0.01),而其余microRNAs的表达差异与患者血清各肿瘤标志物水平均无相关关系(P>0.05).结论 原发性肝细胞癌和癌旁组织中存在microRNAs的表达差异,miR-200a可能成为新的肝癌早期诊断标志.     

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。mi...     

结直肠癌肝转移相关靶基因转录调控网络的构建及基因本体论功能富集分析

目的 研究结直肠癌肝脏转移微小RNA (miRNA)表达的差异及相关特性,并对结直肠癌肝脏转移miRNA对应的靶基因和生物信息学特征进行针对性分析.方法 收集10例伴有或不伴有肝转移的结直肠癌患者肿瘤组织标本.应用miRNA芯片方法对两组样本的miRNA表达差异情况进行研究,利用软件预测靶基因.进一步构建和分析肝转移结直肠癌相关的miRNA-Target转录调控网络及基因本体论功能模块.结果 芯片结果筛选出6种结直肠癌肝转移组较非转移组表达失调的miRNA(上调的miR-224、miR-1236和miR-622;下调的miR-155、miR-342-5p、miR-363).最显著上调的miR-224不但可以与其对应靶基因行使调控作用,而且可以与其他miRNA协同作用于其下游的靶基因功能团,行使相应功能.结论 miR-224作为调控网络的核心,可同时或异时性调控相关的重要基因功能团,进而完成对结直肠癌肝脏转移的转录后水平操控,在肝转移过程中起重要作用.     

Preliminary study of microRNA expression profiles in human pancreatic cancer

目的:探讨微小RNA(miRNA)在人胰腺癌中的表达谱,为进一步研究miRNA在胰腺癌发生发展中的分子机制奠定基础。方法:利用miRNA芯片技术比较胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织的miRNA表达差异;挑选其中两个差异表达的miRNA运用荧光定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)验证。结果:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中表达上调超过1.5倍的miRNA有15个,表达下调超过1.5倍的miRNA有11个;qRT-PCR检测8例胰腺癌组织和相应癌旁正常胰腺组织中miR-10b的相对表达量分别为0.0743±0.0222和0.0287±0.0129;miR-21相对表达量分别为0.3062±0.1117和0.0240±0.0137(均P<0.05),与miRNA芯片结果相符合。结论:miRNA芯片筛选出的26种差异表达的miRNA可能与胰腺癌的发生发展相关,其各自在胰腺癌中的作用值得进一步研究。     

应用基因芯片技术筛选结直肠癌及癌旁组织基因的差异表达

目的用基因芯片技术筛选结直肠癌及癌旁组织基因差异表达,寻找结直肠癌相关基因并了解其在肿瘤发生及转移过程中的作用。方法选用有8000条人类基因的cDNA表达谱芯片,以6例临床手术切除的结直肠癌组织、癌旁3cm和5cm肠黏膜组织及正常肠黏膜组织为研究对象,筛查相关基因的差异表达。结果与正常对照组相比．在癌组织样品中存在显著性表达差异的基因有769个,其中发生上调表达的有363个．下调表达的有406个：在癌旁3cm样品中存在显著性表达差异的基因有155个．其中发生上调表达的有52个．下调表达的有103个：在癌旁5cm样品中存在显著性表达差异的基因有230个．其中发生上调表达的有46个,下调表达的有184个。在癌组织与正常对照组间,具有差异表达的基因较多（19．5％．769／3944）,而在癌旁3Cm、5cm两组直肠黏膜组织与正常对照组间．差异表达的基因则较少．占总体基因数量的3．9％～5．8％。差异表达的基斟中具有明显功能类型的基因主要包括肿瘤相关基因、细胞增殖与凋亡调控基因、基因转录调控基因及细胞外基质成份及其降解相关的基因。结论不同来源组织间在生物学性质上具有各自的特性,多种基因参与了结直肠癌的发生与发展。癌旁组织也存在着基因的差异表达．显示其也有恶变倾向。     

Lnc MALAT1介导OLA1在肝细胞癌中表达及分子机制

目的：探究Obg样ATP酶1(OLA1)及相关非编码RNA(ncRNAs)在肝细胞癌发生发展中的作用及分子机制。方法：利用Oncomine和TCGA数据库分析OLA1基因在肝细胞癌和正常样本中的表达情况。利用GEPIA和Kaplan-Meier Plotter数据库分析OLA1基因与肝细胞癌临床病理特征和预后的关系。利用starBase数据库预测并筛选OLA1上游miRNA并分析miRNA(miR-144-3p)在肝细胞癌中表达水平。利用starBase和GEPIA数据库预测miRNA(miR-144-3p)上游相关lncRNA,分析其在肝细胞癌中表达和生存情况。结果：OLA1基因在肝细胞癌样本中表达水平显著高于正常样本,且与肝细胞癌患者总生存期呈负相关(P<0.01)。肝细胞癌组织中OLA1基因表达水平与肝细胞癌的TNM分期、肿瘤分化程度及血管侵犯和不良预后存在显著相关性(P<0.01)。相关性分析发现肝细胞癌中lncRNA MALAT1与miR-144-3p负相关,且与OLA1基因显著正相关(P<0.01)。结论：OLA1基因的表达水平可作为支持肝细胞癌诊断和彰显...     

microRNA-186-5p及其靶基因CLDN18与甲状腺乳头状癌复发风险的关系

背景与目的：microRNA（miRNA）在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,而且不同的miRNA表达状态与肿瘤的不同生物学特征紧密关联。本研究通过分析不同复发风险甲状腺乳头状癌（PTC）患者差异表达的miRNA,筛选与PTC复发风险相关的miRNA,并分析其作用机制。 方法：用基因芯片技术分析低危复发风险与中高危复发风险PTC患者血清外泌体中差异表达的miRNA,然后用qRT-PCR方法PTC患者肿瘤组织中验证;用Transwell实验筛选出与PTC细胞侵袭能力有关的差异表达miRNA。通过OncomiR在线数据库对筛选的细胞侵袭力相关miRNA的靶基因进行预测,随后采用过表达与敲低策略,分析PTC细胞相关蛋白表达（Western blot）与PTC细胞侵袭能力（Transwell）的变化,明确细胞侵袭力相关miRNA与预测靶基因的关系。最后,通过GEPIA在线网站对TCGA数据库中PTC临床样本的分析进一步确证。 结果：基因芯片分析结果显示,与低危复发风险PTC患者比较,中高危复发风险PTC患者血清外泌体中4个miRNA（miR-186-5p、miR-532-3p、miR-199b-3p、miR-3158-5p）表达上调,1个miRNA（miR-3605-5p）表达下调（均P<0.05）;组织标本qRT-PCR验证结果显示,中高危复发风险PTC患者癌组织中miR-186-5p和miR-3158-5p表达上调（均P<0.05）;Transwell实验结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞侵袭能力明显增强,敲低则明显减弱（均P<0.05）,但改变miR-3158-5p的表达水平对PTC细胞的侵袭能力无明显影响（均P>0.05）。OncomiR在线数据库预测PRDX6、S100PBP、CLDN18、MAP2可能是miR-186-5p的靶基因;Western blot结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞中CLDN18的蛋白表达明显降低,敲低则相反,但改变miR-3158-5p的表达水平对其他3个基因的蛋白表达无明显影响;Transwell实验结果显示,过表达CLDN18表达后PTC细胞的侵袭能力明显减弱,敲低则明显增强,而过表达或敲低miR-186-5p对PTC细胞的作用被同时过表达或敲低CLDN18所逆转（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,PTC组织中CLDN18表达较正常甲状腺组织明显降低。 结论：miR-186-5p表达的增高可能与PTC的复发风险密切相关,机制可能与其通过调节下游CLDN18基因的表达而影响PTC细胞的侵袭能力有关。     

结肠癌组织中微小RNA分子组学分析

目的 检测结肠癌组织与癌旁组织中微小RNA（miRNA）的差异表达.方法 采用实时荧光定量PCR法检测20例结肠癌组织与癌旁组织miRNA分子的差异表达,筛选具有显著差异表达（变化倍数大于2.4且P＜0.01）的miRNA,进一步通过聚类分析不同miRNA之间的聚集性.并分析miRNA与其他结肠癌相关蛋白表达的相关性.结果 17个miRNA分子在结肠癌组织中显著下调.聚类分析显示,其中miR763-3、miR451和miR99a表达相近.血浆CK20水平与miR100（r=-0.948）、miR125a-5p（r=-0.948）、miR125b（r=-0.949）、miR145 （r=-0.949）和miR145＊ （r=-0.949）均呈高度负相关（均P＜0.05）.结论 miR145等17种miRNA可作为结直肠诊断的分子标记物;miR100、miR125a-5p、miR125b、miR145和miR145＊可能成为提示结肠癌淋巴转移的分子标志物。     

三阴性乳腺癌与癌旁组织中差异表达环状RNA筛选及生物信息学分析

目的 筛选三阴性乳腺癌(TNBC)与癌旁组织中差异表达的环状RNA(circRNA),并对其下游可能结合的miRNA及靶基因进行生物信息学分析,预测circRNA在TNBC中可能的调控途径。方法 收集到1例于北京大学深圳医院甲状腺与乳腺外科接受TNBC手术治疗的病人手术样本,行转录组测序分析,并获得TNBC癌组织与癌旁组织的circRNA差异表达谱,分别选择表达上调、下调最显著的5个共10个circRNA。使用RegRNA 2. 0网站预测circRNA可能结合的下游miRNA,进一步通过三个生物信息学网站(miRDB、Target Scan、RNAInter)联合预测miRNA可能结合的下游的靶基因,并对所得mRNA进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。应用STRING在线工具分析预测出的靶基因PPI网络,将数据输出并导入Cytoscape软件,通过MCODE插件筛选出circRNA相关的TNBC的关键基因。用Kaplan-Meier Plotter在线数据库,分析关键基因表达水平与TNBC预后的关系。结果 TNBC与癌旁组织中差异表达的circRNA共6547个,其中表达上调2 311个,下调4 326个;表达显著上调及下调的5个circRNA下游共预测出1 161个mRNA; GO分析及KEGG分析结果显示,这些mRNA主要参与RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录负调控、染色质的共价修饰、转录调控等生物学进程;细胞信号通路方面主要参与到细胞内吞、缩宫素信号通路、Wnt信号通路及c GMP-PKG信号通路等;共筛选出5个关键基因(UBOX5、UBE2G2、DTX3L、FZR1、RNF19A),其中UBE2G2和DTX3L低表达提示TNBC病人总生存率不良; UBE2G2对应的上游miRNA和circRNA分别是hsa＿miR-93-3p和hsa＿circ＿0001361;DTX3L对应的上游miRNA和circRNA分别是hsa＿miR-2115-5p和hsa＿circ＿0002874。结论 TNBC细胞中差异表达circRNA所结合miRNA的下游靶基因中,可能的关键基因是UBOX5、UBE2G2、DTX3L、FZR1、RNF19A,其中UBE2G2、DTX3L与病人预后有关,它们对应的调控轴分别为hsa＿circ＿0001361/miR-93-3p/UBE2G2和hsa＿circ＿0002874/miR-2115-5p/DTX3L,提示二者可能参与到TNBC的发生发展。     

miR-490-5p和miR-363作为结直肠癌诊断标记的研究

目的筛查可作为结直肠癌诊断标记的微小RNA（miRNA）。方法采用实时荧光定量PCR分析miRNA在结直肠癌患者肿瘤和瘤旁组织之间的表达谱．运用非配对t检验的方法,筛查出表达水平具有统计学差异的miRNA。并通过受试者特征曲线（ROC）分析miR-363和miR-490．5p作为诊断标记筛查结直肠癌患者的特异性和敏感性。结果在男性和女性样本中分别发现73和42个表达具有显著性差异的miRNA。而33个miRNA同时在男、女样本中都具有显著性的异常表达,其中10个miRNA的异常表达水平超过5倍,这10个miRNA在男女混合样本中同样具有显著性的异常表达。结论男、女结直肠癌患者中的部分miRNA的表达水平具有显著差异：miR-363和miR-490-5p具有作为结直肠癌的临床筛查指标的潜能。     

miRNA在皮肤瘢痕组织中的表达研究

目的研究正常皮肤组织、非增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中miRNA的表达,筛选对瘢痕异常增生可能发挥作用的miRNA。方法使用miRNA芯片检测正常皮肤组织(C)、非增生性瘢痕(T_1)和瘢痕疙瘩(T2)中miRNA的表达谱,并对各组miRNA进行对比,筛选共同表达但表达有差异的miRNA部分,再选取其中表达差异较为明显的miRNA,对其进行Real-Time quantitative PCR验证实验。结果共计测得miRNA 2539条,差异表达结果为:T_1/C,上调2/下调17;T_2/C,上调3/下调94;T2/T_1,上调9/下调87。选取差异表达显著的miRNA,从C至T_2,miR-100、miR-29a表达呈现下调趋势,而miR-181a、miR-198表达呈现上调趋势。结论非增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的miRNA表达均有别于正常皮肤组织,而miR-100、miR-29a、miR-181a、miR-198对瘢痕组织内成纤维细胞增殖和胶原合成过程中发挥作用的重要信号通路均有影响。瘢痕增生是多基因复合性表达作用的结果 。     

微小RNA let-7基因表达在膀胱癌生物学行为中的作用

目的 探讨膀胱癌组织中微小RNA(miRNA)表达在膀胱癌发生发展中的作用. 方法 Trizol法抽提9例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常膀胱组织标本总RNA,分离与富集miRNA,随机选取2组miRNA标本与miRNA表达谱芯片杂交,采用LuxScan 3.0和SAM 2.1软件对芯片结果 进行图像数据分析.在差异性表达的miRNA中筛选出感兴趣的let-7基因,采用印迹杂交技术对9组miRNA标本中let-7基因进行验证. 结果 膀胱癌组织和正常膀胱组织标本中差异性表达有显著性意义的miRNA 71个,其中表达上调33个,表达下调38个;差异性表达有极显著性意义的miRNA(上调或下调≥4倍)26个,其中显著上调12个,显著下调14个.let-7基因验证结果 与芯片表达结果 一致,癌组织let-7基因表达吸光度值为479.6±228.2,正常膀胱组织为694.6±152.9,组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 膀胱癌组织和正常膀胱组织中存在差异表达的miRNA,let-7基因在膀胱癌的发生中可能起着抑癌基因的作用.     

调节青少年特发性脊柱侧凸患者椎旁肌改变的关键微RNA

目的探寻调节青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者椎旁肌改变的关键微RNA(miRNA)。方法对3例女性AIS患者凹侧与凸侧椎旁肌组织进行RNA高通量测序,获得差异表达miRNA。使用27例AIS手术患者的椎旁肌组织采用实时荧光定量PCR法验证测序的质量和差异,并将miRNA的相对差异表达量与患者临床参数进行相关性分析。结果 AIS患者凹侧与凸侧椎旁肌组织存在18个差异表达miRNA。实时荧光定量PCR法检测结果显示,miR-516、miR-517、mi R-495的表达差异具有统计学意义(P 0.05)。两侧椎旁肌miR-516相对表达量差值与患者发病年龄呈负相关(r=-0.452),miR-517相对表达量差值与侧凸Cobb角呈负相关(r=-0.378)。结论 AIS患者两侧椎旁肌miR-516、miR-517、miR-495存在不对称表达,其中miR-516、miR-517的不对称表达与发病年龄和侧凸角度相关。     

骨肉瘤miRNA基因的差异性表达

目的 筛查骨肉瘤miRNA(微小RNA)基因,建立骨肉瘤miRNA基因表达谱,分析明显上调或理调的基因.方法 提取7例骨肉瘤组织和正常骨组织的RNA,利用丹麦Exiqon公司的micm RNA芯片对其进行分析.结果 筛查出骨肉瘤中上调的基因有28个,下调的基因有26个;其中上调大于2.5倍的miRNA基因有5个:miR-381、miR-18a、miR-586、miRPlus_42780、miR-377*,表达差异最大的为miR-586,5倍;其中下调大于2.5倍的miRNAA基因有9个:miR-126、miR-146a、miR-16、miR-191、miR-142-5p、miR-106b、miR-144、miR-26b、miR-20a,其中miR-144基因下调最为明显为39倍.结论 建立了骨肉瘤的miRNA基凶表达谱,miR-586、miR-144基因为骨肉瘤表达最特异的基因.     

miR-195-3p在肾癌中的表达及其临床意义研究

目的 研究miR-195-3p在肾癌与癌旁组织及肾癌细胞与正常细胞系中的表达差异,分析差异表达与患者临床病理特征间的关系,探究其临床意义. 方法 提取27例配对标本(组织及细胞系)的总RNA,经过逆转录、实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测标本中miR-195-3p标本中的表达量,统计分析miR-195-3p在不同组织、细胞系间的表达差异及其与临床病理特征间的相关性.通过转染上调和下调miR-195-3p,并进行细胞增殖实验(MTT),评估miR-195-3p对肾癌细胞增殖的影响. 结果 miR-195-3p在肾癌组织(18例,66.67％)及肾癌细胞系中的表达较癌旁组织及正常细胞系明显上调(P＜0.05),miR-195-3p在肾癌中的表达量与患者的年龄、性别、癌组织类型、TNM分期、AJCC分期无明显相关性(P＞0.05).miR-195-3p在肾癌细胞系(ACHN、786-O)表达上调后促进肾癌细胞增殖,表达下调后抑制肾癌细胞增殖. 结论 miR-195-3p在肾癌组织中明显升高,并且促进肾癌细胞增殖,提示其可能与肾癌的发生发展有一定关系.     

基于生物信息学构建胰腺癌患者预后相关miRNA预测模型及其应用价值

目的探讨基于生物信息学构建胰腺癌患者预后相关微小RNA(miRNA)预测模型及其应用价值。方法采用回顾性队列研究方法。收集肿瘤基因图谱计划(TCGA)数据库(https://cancergenome.nih.gov/)自建库起至2017年9月171例胰腺癌患者的临床病理资料;男93例,女78例;中位年龄为65岁,年龄范围为35~88岁。171例患者中,64例临床病理资料完整。171例患者采用随机抽样法按7∶3比例分为训练集123例和测试集48例。训练集用于构建预测模型,测试集用于验证预测模型效能。从GEO基因公共表达数据库中下载包含9对胰腺癌及对应癌旁组织的miRNA测序数据的数据集GSE41372,从癌组织及癌旁组织差异表达的miRNA中筛选出候选差异表达miRNA,基于训练集患者信息,进行LASSO-COX回归分析,从候选差异表达miRNA中筛选出与生存相关miRNA,将其拟合成一个相对精简的预后相关miRNA模型。分别在训练集和测试集中对构建的预后相关miRNA模型的预测效能进行验证,以受试者工作曲线下面积(AUC)评价模型准确性,以一致性指数(C-index值)评价模型效能。观察指标:(1)患者生存情况。(2)差异表达miRNA筛选结果。(3)预后相关miRNA模型的构建。(4)预后相关miRNA模型的验证。(5)胰腺癌患者临床病理因素比较。(6)影响胰腺癌患者预后的相关因素分析。(7)预后相关miRNA模型与第8版TNM分期预测效能的比较。正态分布的计量资料以±s表示,两组间比较采用Student-t检验,多组间比较采用方差分析。偏态分布的计量资料以M(范围)表示,组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以绝对数或百分比表示,组间比较采用χ2检验。等级资料分析采用秩和检验。采用计数资料相关性分析,挖掘预后相关miRNA模型与患者临床病理参数之间的相关性。采用COX进行单因素及多因素分析,并判断相关性,结果以风险比及95%可信区间表示,风险比<1时,证明该因素为保护因素;风险比>1时,证明该因素为危险因素;风险比=1时,说明对生存无明显影响。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率,采用Log-rank检验进行生存分析。结果(1)患者生存情况:123例训练集患者随访时间为31~2141 d,中位随访时间为449 d,3、5年总体生存率分别为16.67%、8.06%。48例测试集患者随访时间为41~2182 d,中位随访时间为457 d,3、5年总体生存率分别为15.63%、9.68%。两组患者3、5年总体生存率比较,差异均无统计学意义(χ2=0.017,0.068,P>0.05)。(2)差异表达miRNA筛选结果:生物信息学分析结果显示,共筛选102个候选差异表达miRNA,其中63个miRNA在癌组织中上调,39个miRNA在癌组织中下调。(3)预后相关miRNA模型的构建:在102个候选差异表达基因中,筛选出5个与生存相关的miRNA。名称分别为miR-21、miR-125a-5p、miR-744、miR-374b、miR-664,差异表达模式(癌组织对比癌旁组织)分别为升高、升高、降低、升高、降低,差异表达倍数分别为4.00、3.43、3.85、2.62、2.35倍。由5个与生存相关miRNA构建的预后表达方程=0.454×miR-21表达量-0.492×miR-125a-5p表达量-0.49×miR-744表达量-0.419×miR-374b表达量-0.036×miR-664表达量。(4)预后相关miRNA模型的验证:在训练集和测试集中,预后相关miRNA模型C-index值分别为0.643和0.642。(5)胰腺癌患者临床病理因素比较:COX分析结果显示,预后相关miRNA模型与肿瘤病理学T分期和肿瘤位置具有相关性(Z=45.481,χ2=10.176,P<0.05)。(6)影响胰腺癌患者预后的相关因素分析:单因素分析结果显示为肿瘤病理学N分期、接受放射治疗、接受分子靶向治疗、预后相关miRNA模型评分是胰腺癌患者预后的相关因素(风险比=2.471,0.290,0.172,2.001,95%可信区间为1.012~6.032,0.101~0.833,0.082~0.364,1.371~2.922,P<0.05)。多因素分析结果显示:接受分子靶向治疗是胰腺癌患者预后的独立保护因素(风险比=0.261,95%可信区间为0.116~0.588,P<0.05);预后相关miRNA模型评分≥1.16分是胰腺癌患者预后的独立危险因素(风险比=1.608,95%可信区间为1.091~2.369,P<0.05)。(7)预后相关miRNA模型与第8版TNM分期预测效能的比较:在训练集中,预后相关miRNA模型对胰腺癌患者3、5年生存时间预测概率与第8版TNM分期比较,差异有统计学意义(Z=-1.671,-1.867,P<0.05)。预后相关miRNA模型与第8版TNM分期AUC分别为0.797、0.935与0.737、0.703,95%可信区间分别为0.622~0.972、0.828~1.042与0.571~0.904、0.456~0.951;C-index值分别为0.643与0.534。在测试集中,预后相关miRNA模型对胰腺癌患者3、5年生存时间预测概率与第8版TNM分期比较,差异有统计学意义(Z=-1.729,-1.923,P<0.05)。预后相关miRNA模型与第8版TNM分期AUC分别为0.750、0.873与0.721、0.703,95%可信区间分别为0.553~0.948、0.720~1.025与0.553~0.889、0.456~0.950;C-index值分别为0.642与0.544。结论基于5个与胰腺癌生存相关miRNA构建可用于胰腺癌患者生存预测的预后相关miRNA模型。该模型可与现有TNM分期系统及其他临床病理参数形成互补,为患者提供个体化、准确的生存时间预测,为临床治疗提供参考。