miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-96在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR测定miR-96在不同HCC细胞系(HepG2、7721、huh7)及正常肝细胞系L02中的表达;将HepG2细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-96模拟物(miR-96模拟物组)和miR-96抑制物(miR-96抑制物组)后,用细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot分别测定PTPN9 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-96在各肝癌细胞系中的相对表达量均明显高于其在正常肝细胞系L02的相对表达量(均P0.01)。与阴性对照组比较,细胞划痕愈合率在miR-96模拟物组明显升高,而在miR-96抑制物组明显降低(均P0.05);侵袭细胞数在miR-96模拟物组明显增多,而在miR-96抑制物组明显减少(均P0.05);PTPN9 mRNA与蛋白相对表达量在miR-96模拟物组均明显下调,而在miR-96抑制物组均明显上调(均P0.05)。结论:miR-96在HCC细胞中表达升高,并可能通过下调PTPN9表达促进HCC细胞的迁移与侵袭。     

microRNA-451在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨microRNA-451（miR-451）在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time qPCR）的方法在40例结直肠癌患者癌组织与切缘正常黏膜标本,以及8种结肠癌细胞株中检测miR-451的表达水平,并分析其与临床病理资料之间的关系。结果：与结直肠正常黏膜组织比较,miR-451在结直肠癌组织及各种结直肠癌细胞株中均呈明显的低表达（均P<0.05）;按结直肠癌患者的不同临床病理特征分组比较发现,miR-451的表达差异与组织学类型和分化程度有关,在黏液性腺癌与低分化腺癌中表达水平最低（均P<0.05）。结论：miR-451在结直肠癌组织中呈低表达,且降低程度与结直肠癌分化程度及组织学类型相关。

     

miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

miRNA-639在乳腺癌中表达及其意义

目的：探讨miRNA-639（miR-639）在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌生长、侵袭及转移的关系。 方法：采用荧光定量PCR方法检测miR-639在60例乳腺癌组织（转移性乳腺癌30例,非转移性30例）与30例癌旁组织、以及人乳腺癌MD231细胞与MCF-7细胞中的表达;分析miR-639表达水平与乳腺癌患者临床病理特征关系;分别通过CCK-8实验、细胞划痕实验、Boyden小室实验检测miR-639在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。 结果：miR-639的表达水平在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织、在转移性乳腺癌组织中明显高于非转移性乳腺癌组织、在高侵袭性MD231细胞中明显高于低侵袭性MCF-7细胞,差异均有统计学意义（均P<0.05）。在各项临床病理因素中,miR-639的表达与仅乳腺癌患者的M分期有关（P<0.01）。转染miR-639抑制物后,MD231细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,而转染miR-639后,MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显升高（均P<0.05）。 结论：miR-639在乳腺癌中表达升高,且乳腺癌的增殖、迁移和侵袭能力随miR-639的表达水平升高而增加。

     

miR-137与胃癌侵袭能力的关系研究

目的:探讨胃癌组织mi R-137的表达及其与胃癌细胞侵袭能力间的关系。方法:用q RT-PCR检测胃癌组织与癌旁组织mi R-137的表达,分析mi R-13表达与胃癌临床病理特征的关系;分别用q RT-PCR与Transwell侵袭实验检测3种胃癌细胞(AGS、SGC7901、BGC823)及正常胃黏膜细胞(GES1)mi R-137的表达与穿膜。结果:胃癌组织中mi R-137表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),mi R-137表达与胃癌患者T分期有关,T分期越高mi R-137表达量越低(P<0.05);各胃癌细胞mi R-137表达量均低于正常胃黏膜细胞,且胃癌细胞侵袭力越强胃癌细胞mi R-137表达量越低(P<0.05);穿膜细胞数与mi R-137表达量之间呈明显负相关(r=-0.8881,P<0.05)。结论:胃癌组织mi R-137表达降低,且mi R-137表达量越低提示胃癌细胞侵袭能力越强。     

Fibulin-5表达对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨fibulin-5表达在膀胱尿路上皮癌中的影响作用. 方法 经尿道切除获取膀胱尿路上皮癌标本20例,其中低级别(G_1和G_2)13例、高级别(G_3)7例.蛋白质印迹法检测fibulin-5在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜组织中的表达.将PCR扩增的fibulin-5 cDNA克隆到pMD-19T载体中,构建p-EGFP-fibulin-5质粒.脂质体介导法将p-EGFP-fibulin-5质粒转染到人膀胱癌5637细胞株内,流式细胞仪分选,经G418筛选形成稳定的表达克隆.Boyden小室法检测未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞迁移和侵袭能力. 结果 正常膀胱黏膜、低级别和高级别膀胱尿路上皮癌组织中fibulin-5蛋白相对表达量分别为1.16±0.28、0.57±0.32和0.44±0.42.与正常膀胱黏膜相比,膀胱癌组织中fibulin-5蛋白表达显著下调(P<0.01),低级别和高级别癌之间差异无统计学意义(P>0.05).转染成功的膀胱癌5637细胞显示绿色荧光.未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞的迁移细胞数分别为136.9±5.7、139.3±7.7和127.6±3.1,侵 袭细胞数分别为31.7±4.7、31.5±4.8和8.05±3.1.转染fibulin-5后膀胱癌细胞侵袭力明显降低 (P<0.01),其迁移力虽低于对照组但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 Fibulin-5蛋白表达减 少可能是膀胱癌发生和发展的机制之一,过表达fibulin-5可以抑制膀胱癌细胞侵袭力.     

miRNA-186-5p的表达与结肠癌细胞恶性表型的关系

目的:探究miRNA-186-5p在结肠癌中的表达与功能。方法:用q PCR检测20例配对的结肠癌与其癌旁组织标本,以及正常肠上皮NCM460细胞与不同结肠癌细胞系(HCT-116、HRT-18、HT-29)中miRNA-186-5p的表达;分别用miRNA-186-5p模拟物或阴性对照组序列转染HCT-116细胞后,用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。结果:miRNA-186-5p在结肠癌组织中的表达明显低于相应癌旁组织中的表达,在各结肠癌细胞系中均明显低于正常肠上皮NCM460细胞(均P0.05);与转染阴性对照序列的HCT-116细胞比较,转染miRNA-186-5p模拟物的HCT-116细胞,细胞增殖能力明显降低、克隆形成数明显减少(114.0个vs.311.7个)、划痕愈合率明显降低(28.7%vs.77.0%)、侵袭细胞数明显减少(119.3个vs.259.7个),差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:miRNA-186-5p在结肠癌组织中低表达或缺失,恢复miRNA-186-5p的表达水平能抑制结肠癌细胞的恶性表型,提示miRNA-186-5p在结肠癌中发挥抑瘤作用。     

miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的 研究表明多种microRNA（miRNA）可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨。因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制。方法 从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力（Transwell实验）与增殖能力（MTT实验）的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证。结果 在肝癌组织（vs.正常肝组织）及肝癌患者血清/血浆（vs.正常人血清/血浆）中共同高表达的miRNA有4个（miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p）,共同低表达的miRNA有2个（miR-26a-3p、miR-125b-3p）。qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达（均P<0.05）。过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力（均P<0.05）,而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定。分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3''UTR抑制ADCY1的表达。结论 miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力。     

中下段直肠癌E-cadherin，MMP-2和VEGF表达与肿瘤侵袭转移的关系

为探讨中下段直肠癌肿瘤组织E-cadherin,MMP-2和VEGF的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。笔者采用免疫组化技术检测56例中下段直肠癌肿瘤组织中E-cadherin,MMP-2和VEGF的表达。结果示，44.6%（25/56）的中下段直肠癌E-cadherin表达阴性;其中T3的阴性率为63.0%，明显高于T2和T1的26.1%和33.3%（P=0.028）。淋巴结转移阳性的直肠癌E-cadherin表达阴性率为62.1%，明显高于淋巴结转移阴性者的25.9%（P=0.007）。MMP-2表达阳性率为75.0%（42/56）;其中T3，T2阳性率分别为88.9%，69.6%，明显高于T1期的33.3%（P=0.013）。浸润型直肠癌MMP-2表达率为91.2%，明显高于膨胀型的40.0%（P=0.001）。淋巴结转移阳性者MMP-2表达率为86.2%，明显高于淋巴结转移阴性的63.0%（P=0.045）。VEGF表达率为57.1%（32/56）;其中T3 VEGF表达率为74.1%，明显高于T2和T1期的43.5%和33.3%（P=0.043）;淋巴结转移阳性者VEGF表达率为72.4%，明显高于淋巴结转移阴性的40.7%（P=0.017）。提示中下段直肠癌E-cadherin表达阴性和MMP-2，VEGF表达阳性与肿瘤侵袭和转移有密切关系。     

miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。     

二氢杨梅素对肝癌细胞黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制

目的：研究二氢杨梅素（DHM）对肝癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及其可能机制。 方法：用不同浓度DHM处理肝癌MHCC97L细胞后,分别检测细胞的黏附能力、迁移与侵袭能力,以及E-cadherin、MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白表达。 结果：与空白对照细胞比较,DHM处理后的MHCC97L细胞黏附力明显降低、侵袭与迁移力明显减弱（均P<0.05）;E-cadherin表达明显上调,而MMP-9、VEGF蛋白表达明显下调的水平（均P<0.05）,但MMP-2蛋白的表达无明显改变（均P>0.05）。 结论：DHM可能通过调控E-cadherin、MMP-9和VEGF蛋白的表达抑制肝癌细胞的黏附、迁移和侵袭。     

Bmi-1 及Mel-18在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的：探讨Bmi-1和Mel-18在乳腺癌组织中的表达和临床意义。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色法检测Bmi-1和Mel-18基因与蛋白在40例乳腺癌组织和20例乳腺良性肿瘤组织及20例正常乳腺组织中的表达。分析两者在乳腺癌组织中的表达情况和相关性,以及两者表达与临床病理因素的关系。结果：Bmi-1 mRNA的表达和蛋白阳性率在正常乳腺组织、乳腺良性组织、乳腺癌组织均呈明显依次递增（均P<0.05）,而Mel-18则基本呈反向趋势（正常乳腺组织与乳腺良性组织间差异不明显）;乳腺癌组织中Bmi-1与Mel-18 mRNA及蛋白表达之间均明显呈负相关（r=-0.317,P=0.023;r=-0.413,P=0.008）;两者基因表达和蛋白阳性率水平与淋巴结转移及临床分期密切相关（均P<0.05）,而与患者的年龄、绝经状况、肿瘤大小、组织学分级无关（均P>0.05）。结论：Bmi-1过表达与Mel-18低表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生浸润转移的重要生物学标志。

     

碳酸酐酶IX与直肠癌发生和转移的关系

目的 探讨缺氧标记物碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)在直肠癌患者不同部位表达和对直肠癌细胞体外生长的影响,以及在直肠癌发生和转移中的意义.方法 应用Western blot方法检测CA-Ⅸ在正常直肠组织,直肠腺瘤,直肠癌原发癌灶,系膜组织,肝转移组织中的表达;MTT法检测CA抑制剂乙酰唑胺对体外直肠癌细胞生长能力的影响,判断CA-IX作为直肠癌相关蛋白和转移相关因子的意义.结果 直肠癌癌灶CA-IX阳性率(74.2％)明显高于直肠腺瘤(16.7％)(P＜0.01),而正常直肠组织无CA-Ⅸ表达.癌灶和系膜组织中CA-Ⅸ阳性表达与患者性别、肿瘤大小、分化程度、临床分期无关(均P＞0.05).N0组癌灶CA-Ⅸ阳性率(85.5％)高于N1组(66.7％)和N2组(64.5％)(均P＜0.05);N0组系膜组织CA-Ⅸ阳性率(5.5％)低于N1组(26.2％)和N2组(29.0％)(均P＜0.05).乙酰唑胺能提高不同浓度5-氟尿嘧啶体外对直肠癌细胞杀伤能力(P＜0.05).结论 CA-Ⅸ能促进直肠癌细胞增殖,与直肠癌发生、发展有关,可作为直肠癌相关肿瘤标记物,但不宜作为癌转移相关因子.     

mTOR信号通路与胃癌复发转移关系的研究进展

mTOR及其信号通路在胃癌的复发和转移过程中起重要作用,以mTOR为靶点的靶向药物联合化疗药物对于克服胃癌复发及转移治疗胃癌具有广阔的临床应用前景。笔者就国内、外近年来有关mTOR信号通路在胃癌复发转移中作用机制的研究进展作一综述。

     

miR-124在结肠癌中表达及其对结肠癌肺转移的调控作用

目的:探讨miR-124在结肠癌中的表达,及其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法:用qRT-PCR检测miR-124在结肠癌组织及细胞中的表达情况,用慢病毒载体转染技术上调miR-124在结肠癌细胞中的表达水平后,通过流式细胞术观察细胞凋亡的变化,用不同miR-124表达水平的结肠癌细胞对裸鼠尾静脉注射后观察肺转移及生存情况;通过生物信息学软件预测miR-124的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析以及体外、体内实验进行鉴定和验证。结果:miR-124在结肠癌组织中表达降低,其表达水平与肿瘤大小、分期及淋巴结转移明显有关(均P0.05)。miR-124表达水平随着结肠癌细胞恶性度的增加而降低,上调miR-124的表达后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,裸鼠的肺转移明显抑制、生存时间明显延长(均P0.05)。ITGB1是miR-124的潜在靶基因,下调结肠癌细胞ITGB1表达后,其作用与上调miR-124表达相一致。结肠癌组织中,miR-124与ITGB1的表达呈明显负相关(r=-0.4936,P=0.002)。结论:在结肠癌中miR-124表达下调,其靶基因ITGB1表达相应增加,从而促进结肠癌细胞的生长和侵袭转移。     

术后放化疗在高龄III期直肠癌患者中的临床应用价值

目的：研究术后放化疗在高龄（≥75岁）III期直肠癌患者中的临床应用价值。方法：回顾性分析2010年1月—2014年1月收治的128例高龄（≥75岁）III期直肠癌患者资料,根据术后是否进行放化疗将患者分为放化疗组（60例）和对照组（68例）,比较两组无进展生存期、2年存活率、健康相关的生存质量和术后主要并发症。结果：与对照组比较,放化疗组患者无进展生存期明显延长[（793.58±295.39）d vs. （736.59±305.38）d,P=0.029];2年存活率有增高趋势,但组间差异无统计学意义（91.7% vs. 79.4%,P=0.052）;术后 12个月时健康相关的生存质量评分明显增高（70.25 vs. 63.37,P<0.001）;局部复发率明显降低（16.7% vs. 33.8%,P=0.035）;放射相关性肠炎（13.3% vs. 0.0%）与骨髓抑制（11.7% vs. 0.0%）发生率明显增高（P=0.002,P=0.004）。两组患者肠瘘、肠梗阻和贫血发生率均无统计学差异（均P>0.05）。结论：术后放化疗虽然增加了术后并发症的发生率,但是显著改善了高龄III期直肠癌患者长期预后。

     

直肠癌合并2型糖尿病患者腹腔镜与开腹手术近期疗效的比较

目的：探讨腹腔镜辅助下直肠癌前切除术与同期开腹手术对合并2型糖尿病患者短期疗效。方法：回顾性分析2年间解放军总医院实施直肠癌前切除术的97例患者的临床资料。其中43例行腹腔镜手术（腔镜组）,54例行传统开腹手术（开腹组）,比较两组术中及术后情况。结果：与开腹组比较,腔镜组术中失血量、切口长度、排气时间、开始进流食时间及术后住院天数均优于开腹组（均P<0.01）,且总并发症发生率低于开腹手组（P=0.0479）。两组手术时间、淋巴结清扫个数及术后镇痛泵使用例数差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论：腹腔镜直肠癌前切除术能有效减少直肠癌合并2型糖尿病患者术后并发症发生率,该术式对治疗直肠癌合并2型糖尿病是安全可行的,可作为首选术式。