狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

摘 要 目的：探讨狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮(WSTF)对氧化应激损伤LO2细胞的保护作用。方法: 通过细胞毒性实验确定给药范围,建立过氧化氢（H2O2）致LO2细胞损伤模型,用含不同浓度WSTF的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间,采用MTT比色法测定细胞活力,检测谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST） 和丙二醛（MDA）的水平,评价WSTF对肝细胞损伤的保护作用。检测细胞线粒体膜电位和细胞内活性氧簇（ROS）水平,分析WSTF抑制H2O2诱导LO2细胞凋亡情况。结果:0.3 mmol·L^-1 H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型,确定0.031 2~0.125 mg·mL^-1 WSTF为保护LO2细胞损伤的给药浓度范围。WSTF可抑制H2O2对肝细胞的损伤,并明显降低H2O2致急性损伤肝细胞的 ALT、AST 释放量和 MDA 水平,逆转H2O2诱导LO2肝细胞线粒体膜电位去极化和细胞内ROS升高。结论:WSTF体外给药对肝细胞损伤有保护作用。     

常春卫矛提取物对 H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

摘 要 目的：研究常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物分别对血管内皮细胞ECV 304氧化损伤的保护作用。方法: 体外培养ECV 304细胞,以H2O2诱导ECV 304细胞氧化损伤为模型,分别将常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物（终浓度为400,200,100,50,25 μg·ml^-1）作用于细胞24 h后,以MTT法检测细胞存活率;Hochest染色观察细胞凋亡情况;以测定超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合酶（NOS）和一氧化氮（NO）的含量评价药物对血管内皮细胞氧化应激的影响。结果: 常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物在25～400 μg·ml^-1 浓度范围内,对ECV 304细胞均无细胞毒作用,其中乙酸乙酯提取物在400 μg·ml^-1浓度下,对细胞有一定增殖作用（P<0.05）;常春卫矛乙酸乙酯（浓度50～400 μg·ml^-1）、正丁醇（浓度100～400 μg·ml^-1）提取物对氧化损伤ECV 304细胞存活率有显著提高,OD值与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。常春卫矛乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物能明显提高氧化损伤ECV 304细胞分泌SOD、NO水平（P<0.05或P<0.01）,对NOS水平无影响;常春卫矛乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物均能抑制氧化损伤细胞凋亡,细胞核形态改善,凋亡率与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论:常春卫矛提取物对H2O2诱导血管内皮细胞氧化损伤有一定保护作用。     

基于Nrf 2/HO 1/NF-κB通路探讨栀黄止痛散汤对急性痛风性关节炎大鼠的保护作用

摘 要 目的：探究栀黄止痛散汤对痛风性关节炎（AGA）大鼠的保护作用以及对NF E2相关因子2（Nrf 2）/血红素氧合酶 1/（HO 1）/核转录因子κB（NF-κB）通路的影响。 方法: 采用随机数字表法将90只SD大鼠分为正常对照组、模型组（踝关节腔注射尿酸钠复制AGA大鼠）、栀黄止痛散汤低（2.5 g·kg-1）、中（5 g·kg-1）、高（10 g·kg-1）剂量组、阳性对照组（秋水仙碱 1 mg·kg-1）,每组15只。酶联免疫法（ELISA）检测关节液中白细胞介素 6(IL 6)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 1β(IL 1β)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,造模后对大鼠步态、关节炎症指数进行分级评定,于造模前以及造模后6,12,24,48 h采用容积测定法检测裸关节肿胀度;苏木精 伊红染色法（HE）观察踝关节组织形态学变化情况,实时荧光定量PCR（RT PCR）测定关节组织中Nrf 2、HO 1mRNA表达,免疫印迹法（WB）测定关节组织中Nrf 2、HO 1、P P65、P65、P IKBa、IKBa蛋白表达。 结果: 与正常对照组相比,模型组大鼠步态、关节炎症指数分级、6,12,24,48 h关节肿胀度、关节液中TNF α、IL 6、IL 1β、MDA水平、关节组织中P P65、P IKB蛋白表达显著升高,SOD水平及Nrf 2、HO 1 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与模型组相比,栀黄止痛散汤组和阳性对照组大鼠步态、关节炎症指数分级、6,12,24,48 h关节肿胀度、关节液中TNF α、IL 6、IL 1β、MDA水平、关节组织中P P65、P IKB蛋白表达显著降低,SOD水平及Nrf 2、HO 1 mRNA和蛋白表达显著升高,且栀黄止痛散汤组具有剂量依赖性（P＜0.05）。结论: 栀黄止痛散汤能够降低AGA大鼠关节炎症反应,缓解关节肿胀,其可能通过激活Nrf 2/HO 1/NF-κB通路来实现。     

萝卜硫素对阿霉素诱导的肝细胞损伤保护作用及其与氧化应激关系的研究

目的 探讨萝卜硫素（sulforaphane,SFN）对阿霉素（adriamycin,ADM）诱导的肝细胞损伤保护作用及其与氧化应激的关系。方法 体外培养人正常肝细胞L02和人肝癌细胞株HepG2,加入不同浓度的SFN （6.25,12.5,25,50,100 μg·mL^-1）,培养48 h;另取HepG2细胞中加入3.75,7.5,15,31.25,62.5,125,250,500 μg·mL^-1 SFN,培养24,48 h,MTT法检测培养后细胞抑制率,计算50%抑制浓度（IC₅₀值）。体外培养L02细胞,试验组加入不同浓度的SFN （3.75,7.5,15 μg·mL^-1）,试验组与模型组分别于0.5,1,2,3 h后加入1.25 mg·mL^-1的ADM,通过酶联免疫的方法分别对细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、核因子NF-E2相关因子（Nrf2）进行测定评估。结果 SFN能显著抑制HepG2的体外增殖,而且呈一定的药物浓度-效应和时间-效应关系。SFN对L02的抑制作用相对较弱,其IC₅₀为47.7 μg·mL^-1,明显高于其对HepG2的IC₅₀值。另外,与模型组比较,SFN能够明显降低细胞培养上清液MDA、LDH、GLUT4、TNF-α的水平,升高SOD、Nrf2水平。结论 SFN可显著抑制肝癌细胞的体外增殖能力,对其具有一定的选择性抑制作用,而且对于ADM诱导的肝细胞损伤具有一定的保护作用。可能是通过Keap1-Nrf2/ARE通路,诱导二相抗氧化酶清除体内的致癌物质或其他毒物,从而减轻肝脏组织的氧化应激和炎症反应。     

地榆鞣质提取物对大鼠心、肝、脑及肾组织体外抗脂质过氧化作用的研究

摘 要 目的：研究地榆鞣质提取物对大鼠心、肝、脑、肾组织体外抗脂质过氧化作用。方法: 采用分光光度法测定地榆鞣质提取物对由Fe²+ 半胱氨酸（Fe²+ Cys）体系、Fe²+ 维生素C（Fe²+ VitC）体系、Fe²+ 过氧化氢（Fe²+ H2O2）体系诱导的大鼠心、肝、脑、肾组织体外脂质过氧化的抑制作用。结果: 地榆鞣质对Fe²+ Cys、Fe²+ VitC、Fe²+ H2O2诱导的大鼠脑、心、肝匀浆、肾及线粒体脂质过氧化产生的MDA的抑制作用显著。结论:地榆鞣质对大鼠心、肝、脑及肾组织体外抗脂质过氧化具有较强保护作用,值得进一步研究与开发。     

三七总皂苷对顺铂损伤HK-2细胞增值和氧化指标的影响

摘 要 目的：观察三七总皂苷(PNS)对顺铂(DDP)损伤的人肾近曲小管上皮细胞（HK-2）增殖和氧化指标的影响。 方法: 体外培养HK-2细胞株,使其细胞数约为1×10⁶个/ml,接种于96孔培养板,分为空白组、模型组、阳性药物组和PNS高、中、低剂量组6组。加入终浓度为6.25 μg.L^-1DDP 20μl建立DDP损伤HK-2细胞模型,各组分别给予生理盐水、氨磷汀和不同浓度的PNS处理48 h。MTT法测定细胞存活率;比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）活性;裂解细胞,取上清液采用紫外分光光度法监测细胞内谷胱甘肽（GSH）含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性,TBA法测定MDA含量;荧光素DCFH DA探针法测定细胞内ROS含量。结果: 与空白组比较,模型组的细胞存活率、细胞悬液中的SOD酶活性和GSH PX含量减低,细胞培养液中的LDH活性、细胞悬液中MDA含量和HK-2细胞内ROS水平显著升高,差异均具有显著统计学差异（P<0.05）;与模型组比较,阳性组和PNS高、中、低剂量组的细胞存活率、细胞悬液中的SOD酶活性和GSH PX含量明显升高,细胞培养液中的LDH活性、细胞悬液中MDA含量和细胞内ROS水平显著降低,且作用均有浓度依赖性,差异均具有显著统计学差异（P<0.05）。结论:PNS能促进DDP损伤HK-2细胞的增殖,降低培养液中LDH水平和细胞内的ROS水平,改善其细胞内氧化水平,对DDP损伤的HK-2细胞具有保护作用。其保护机制可能与其抗氧化作用有关。     

小剂量乙酰半胱氨酸治疗慢性肝损伤作用及其机制

目的 研究小剂量乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对CCl₄所致慢性肝损伤的疗效及其作用机制。方法 将大鼠分为正常对照组、模型组、小剂量NAC低、中、高剂量组和阳性对照组。小剂量NAC低、中、高剂量组分别给予45,90,180 mg·kg^-1,阳性对照组给予阿拓莫兰54 mg·kg^-1,正常对照组和模型组腹腔注射等容积灭菌生理盐水。采用CCl₄复制大鼠慢性肝损伤模型,末次给药后24 h麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血清ALT、AST含量以及肝组织中SOD、MDA、GSH和Hyp含量,观察肝脏组织病理学变化,免疫组化检测肝组织Nrf2、HO-1的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、MDA和Hyp含量明显升高（P<0.01）,SOD、GSH虽有下降趋势,但结果无统计学差异,Nrf2、HO-1蛋白表达均增加,但差异无统计学意义。与模型组比较,小剂量NAC低、中、高剂量组ALT、AST水平明显降低（P<0.01）,低、中剂量组SOD、GSH、Hyp含量差异均有显著性（P<0.01或P<0.05）,高剂量组GSH、Hyp含量差异均有显著性（P<0.01或P<0.05）,各剂量组MDA均有下降趋势,但无统计学意义,低、中、高剂量组Nrf2、HO-1蛋白表达均增加,其中低剂量组差异有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论 小剂量乙酰半胱氨酸对CCl₄诱导大鼠慢性肝损伤具有较好的治疗作用,其作用机制可能通过Nrf2/HO-1通路发挥抗氧化应激作用。     

吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及机制研究

摘 要 目的：探讨吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其可能机制。方法: 以前列腺素F2α（PGF2α）诱导大鼠离体子宫平滑肌收缩,生物机能实验系统观察吴茱萸碱舒张离体子宫平滑肌的作用以及辣椒素受体阻断药capsazepine、磷脂酶Cβ阻断药U73122和钙调蛋白阻断药W 7对吴茱萸碱作用的影响,Prism 5.01非线型可变斜率回归计算半效浓度(EC50)。结果: 吴茱萸碱对PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L^-1)收缩离体子宫平滑肌舒张作用的EC50为9.56×10 9 mol·L^-1。半抑制浓度(IC50)的capsazepine(6.30×10-11 mol·L^-1),U73122(2.57×10-11 mol·L^-1)和W 7(5.65×10-13 mol·L^-1)预舒张离体子宫平滑肌后,吴茱萸碱的EC50降低,量效曲线左移。EC50的大小顺序依次为：U73122 吴茱萸碱(1.95×10-12 mol·L^-1)＞capsazepine 吴茱萸碱(7.35×10-13 mol·L^-1)＞W 7 吴茱萸碱(8.88×10-15mol·L^-1)。结论: 吴茱萸碱对PGF2α收缩的离体子宫平滑肌有舒张作用,其作用机制可能与辣椒素受体1、磷脂酶Cβ和钙调蛋白有关。     

络塞维改善D-半乳糖致亚急性衰老大鼠的学习记忆力的机制初探

摘 要 目的： 观察络塞维改善D-半乳糖致亚急性衰老大鼠学习记忆力下降的作用,并初步研究其作用机制。方法: 将48只SD大鼠随机分为对照组,模型组,阳性药物组,络塞维6、12、24 mg·g^-1剂量组。除对照组外,所有大鼠颈部皮下注射 D-半乳糖120 mg·kg^-1·d^-1造模。在给药进行4周后,采用Morris水迷宫测试各试验组大鼠学习记忆能力差异,血气分析仪测定大鼠脑中血氧分压（PO₂）,血氧浓度（O₂）及血氧饱和度（SaO₂）,并在试验结束后处死大鼠测定脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH Px）活性和丙二醛（MDA）含量。结果: 络塞维12、24 mg·g^-1·d^-1可显著缩短衰老大鼠在Morris水迷宫的潜伏期（P<0.01或P<0.05）,并减少大鼠的游泳总距离和错误角度。同时,给予络塞维6,12,24 mg·g^-1·d^-1治疗衰老大鼠均能不同程度提高大鼠脑内PO₂,  O₂和SaO₂浓度, SOD、CAT、GSH Px活性及降低MDA含量,并具一定量效关系。结论:络塞维可改善D 半乳糖所致大鼠学习记忆下降现象,该作用可能与回升血氧含量,并保护SOD、CAT、GSH Px等酶活性,降低MDA生成有关。     

HPLC法同时测定复合维生素B片中5种维生素的含量

摘 要 目的：应用HPLC技术,建立同时测定复合维生素B片中维生素B1（硫胺素）、维生素B2（核黄素）、维生素B3（烟酰胺）、维生素B5（泛酸）和维生素B6（吡多辛）含量的方法。方法: 采用Alltima C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）,以50 mmol·L^-1磷酸二氢铵溶液（磷酸调至pH 3.0） 乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 ml·min^-1,维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6的检测波长为275 nm,维生素B5的检测波长为210 nm,柱温30℃,进样量为5 μl。结果:维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5和维生素B6的线性范围分别为39.48～197.40μg·mL^-1、40.16～200.80 μg·mL^-1、39.36～196.80 μg·mL^-1、38.80～194.00 μg·mL^-1、41.76～208.80 μg·mL^-1,r均≥0.999 9。其平均回收率分别为98.70%,99.91%,99.04%,99.63%,98.75%,RSD分别为0.40%,0.27%,0.40%,0.92%,0.39%（n=9）。结论:该方法准确、简便、快速,可作为复合维生素B片中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5和维生素B6同时测定的方法。