氯化甲基汞对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响

目的:探讨氯化甲基汞(MMC)对发育大鼠小脑组织转录因子CREB DNA结合活性的影响.方法:将妊娠大鼠于妊娠7～10 d连续4 d每日灌胃给予氯化甲基汞4 mg*kg-1,取生后1、3、7、14 d大鼠小脑组织提取核蛋白.采用凝胶移位法观察MMC对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响.结果:对照组和实验组各发育阶段小脑组织CREB在凝胶移位电泳中均呈现两条迟滞带;对照组和实验组P1-7大鼠幼仔小脑CREB DNA结合活性随生后发育时间延长呈下降趋势;实验组大鼠幼仔小脑CREB DNA结合活性均高于相应对照组.结论:CREB参与大鼠脑发育的调节;甲基汞所致发育脑组织损伤可能与其引起CREB DNA结合活性升高有关.     

长期接触低剂量氯化甲基汞对发育阶段大鼠小脑蛋白激酶C活性的影响

目的：探讨氯化甲基汞(mthylmercury chloride,MMC)对发育大鼠小脑组织蛋白激酶C(PKC )活性的影响。方法：实验组母鼠从妊娠前90 d至仔鼠出生后30 d连续喂饲含有不同剂量MMC（0.75、1.50和3.00 mg·kg^-1）的普通饲料,取其生后(Postnatal day, PND)3、7、14、21和30 d仔鼠小脑组织提取胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai法观察MMC对发育大鼠小脑PKC活性的影响。结果：实验组生后不同时间仔鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性均高于相应对照组,其中实验组Ⅰ（0.75 mg·kg^-1 MMC）PND　3、7和14 d,实验组Ⅱ (1.5 mg·kg^-1 MMC)和实验组Ⅲ (3.0 mg·kg^-1 MMC)仔鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性明显高于对照组（P<0.05)。结论：MMC可能通过影响大鼠脑发育过程中PKC活性介导其神经毒性作用。     

氯化甲基汞对不同发育阶段大鼠脑组织c-Jun表达的影响

目的 :探讨氯化甲基汞 (MMC)对发育脑组织损伤的机理。方法 :将 Wistar系妊娠大鼠于妊娠 7～ 1 0 d连续灌胃给予 MMC 4mg/kg,取 P1 (postnatal day 1 ) ,3,5,7,1 0 ,1 5仔鼠脑组织制备常规组织切片 ,采用免疫组织化学法检测 c- Jun表达。结果 :对照组发育阶段仔鼠大、小脑有c- Jun表达。随着出生后时间延长 ,大、小脑c- Jun阳性细胞数下降 ,并且 c- Jun阳性细胞具有典型凋亡形态。实验组 c- Jun表达有高于对照组的趋势 ,其中 P7,1 0 ,1 5小脑中 c- Jun表达明显高于对照组 (P<0 .0 5)。结论 :c- Jun参与了脑细胞发育中正常的凋亡过程。MMC诱导大鼠脑发育中神经细胞凋亡 ,可能是通过 c- Jun表达实现的。     

长期接触氯化甲基汞对大鼠不同发育阶段仔鼠海马NMDA受体2A亚单位表达的影响

目的：探讨氯化甲基汞(MMC)对不同发育阶段大鼠幼仔海马组织N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2A亚基(NR2A)表达的影响。方法：体重为(120±20)g雌性大鼠随机分为对照组和实验组,连续90 d每天分别进食含不同剂量MMC(0.75、1.50和3.0 mg•kg^-1)的饲料后,取其生后7、14、21和28 d的仔鼠海马组织提取NR2A蛋白,采用Western blotting法观察MMC对不同发育阶段大鼠幼仔海马组织NR2A表达的影响。 结果：对照组和实验组各发育阶段仔鼠海马组织都有NR2A的表达,生后14 d达到高峰。实验组大鼠幼仔在生后7、14、21和28 d海马组织NR2A表达与对照组相比均有不同程度的减少。结论：NMDA受体参与中枢神经系统发育的调节;甲基汞所致发育阶段脑损伤可能与其引起NMDA受体表达降低有关。     

氯化甲基汞对发育阶段大鼠海马组织蛋白激酶C活性的影响

目的:阐明氯化甲基汞(MMC)致脑发育损伤与海马组织蛋白激酶C（PKC）活性变化之间的关系,探讨MMC致脑发育损伤机制。方法:选用Wistar雌性大鼠120只,随机分为3个MMC剂量实验组和1个对照组,每组30只,实验组母鼠从妊娠前90 d 至仔鼠出生后30 d 连续喂饲含有不同剂量MMC (0.75,1.50和3.00 mg/kg ) 的普通饲料,取其生后(PND) 3 、7 、14 、21 和30 d 仔鼠海马组织提取胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai 法观察MMC 对发育大鼠海马PKC 活性的影响。结果:随着脑汞含量的增加,仔鼠实验组和对照组海马组织胞膜胞浆PKC的活性随仔鼠生后时间的延长,逐渐增高,生后30 d达峰值。1.50 mg/kg 剂量组生后21和30 d仔鼠以及3.00 mg?kg-1剂量组仔鼠海马组织胞膜和胞浆PKC活性较对照组明显增高（P<0.05）。结论:长期接触低剂量MMC可引起发育阶段大鼠海马组织胞浆及胞膜PKC活性升高。MMC可能通过影响大鼠脑发育过程中PKC 活性介导其神经毒性作用。     

氯化甲基汞对不同发育阶段大鼠脑组织c—Jun表达的影响

目的：探讨氯化甲基汞（ＭＭＣ）对发育脑组织损伤的机理。方法：将Ｗｉｓｔａｒ系妊娠大鼠于妊娠７￣１０ｄ连续灌胃给予ＭＭＣ ４ｍｇ／ｋｇ,取Ｐ１（ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｄａｙ １）,３,５,７,１０,１５仔鼠脑组织制备常规组织切片,采用免疫组织化学法检测ｃ－Ｊｕｎ表达。结果：对照组发育阶段仔鼠大、小脑有ｃ－Ｊｕｎ表达。随着出生后时间延长,大,小脑ｃ－Ｊｕｎ阳性细胞数下降,并且ｃ－Ｊｕｎ阳性细胞上有典型凋     

氯化甲基汞对不同发育阶段小鼠脑组织神经元c-fos基因表达的影响

目的:探讨氯化甲基汞(Methylmercury chloride,MMC)对不同发育阶段小鼠大、小脑组织神经元c-fos表达的影响.方法:选用1、4、8、16、28天龄和成年(P1、P4、P8、P16、P28、AD)雄性昆明系小鼠,实验组腹腔注射10 mg*kg-1 MMC,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,染毒后各天龄组小鼠按下述时间点在麻醉状态下取脑组织, P8组小鼠在30、45、60、120和180 min时间点及其余各组在45 min时间点迅速取脑组织,常规石蜡包埋,采用原位杂交法观察MMC对大、小脑神经元c-fos基因表达的影响.结果:P8小鼠大脑和小脑c-fos mRNA阳性细胞率在第30分钟时开始增加,45 min时间点最高,随着时间的延长逐渐减少;P8实验组45 min阳性表达率小脑高于大脑(P<0.05);45 min时间点实验组大脑和小脑c-fos mRNA阳性细胞率随小鼠天龄的增加而减少;P1、P4、P8天龄组大脑阳性细胞率高于对照组高(P<0.05);P1、P4、P8、P16、P28天龄组小脑阳性细胞率高于对照组 (P<0.05).结论: MMC可诱导小鼠大、小脑神经元c-fos基因表达,这可能是MMC神经损伤的机理之一.     

宫内接触甲基汞对发育阶段大鼠脑神经细胞凋亡和细胞周期影响的研究

目的 :探讨宫内接触甲基汞所致脑发育神经细胞损伤的机理。方法 :对妊娠 7～ 1 0 d的大鼠每天灌胃给予 4mg/ kg氯化甲基汞。对 2 0 d胎鼠和出生 1～ 7d幼鼠的脑组织行流式细胞术定量分析。结果 :1宫内接触甲基汞可诱导初生期大鼠脑神经细胞凋亡。 2宫内接触甲基汞对脑神经细胞周期有一定的影响。结论 :宫内接触低剂量甲基汞是以诱导凋亡的方式致脑神经细胞损伤。     

氯化甲基汞对大鼠脑毒蕈碱受体的影响

通过大鼠体内、外试验研究氯化甲基汞对其脑组织Ｍ胆碱受体的影响。体外试验结果表明：氯化甲基汞能抑制氚标记配体二苯羟乙酸奎宁酯（￣３Ｈ－ＱＮ用与大鼠大脑Ｍ胆碱受体的结合，其ＩＣ＿（５０）为０．０１３７±０．００３７ｍｏｌ／Ｌ；饱和试验结果进一步证实了其抑制作用是因为氯化甲基汞可减少大鼠大脑组织受体的最大结合位点以及降低￣３Ｈ－ＱＮＢ与受体的亲合力。体内试验是在大鼠受孕的第７～１２天，每天经腹腔分别注射氯化甲基汞溶液１．５，２．５，３．５ｍｇ／ｋｇ。各组仔鼠出生后于第７、１４、２１天处死，分离出大、小脑，分别制成匀桨进行Ｍ胆碱受体与￣３Ｈ－ＱＮＢ的结合试验。观察结果显示氯化甲基汞对仔鼠发育的大脑和小脑的Ｍ胆碱受体与￣３Ｈ－ＱＮＢ的结合均具有抑制效应。     

长期接触低剂量氯化甲基汞对老化模型小鼠脑蛋白激酶C活性的影响

目的探讨氯化甲基汞（Methylmercury chloride，MMC）对12月龄快速老化模型小鼠（Senescence-accelerated mouse，SAM）的快速老化亚系SAMP-prone／8（SAMP8）及抗快速老化亚系SAM-resistance／1（SAMR1）小脑组织蛋白激酶C（Protein kinase C，PKC）活性的影响。方法实验小鼠随机分为3组：MMC各剂量组小鼠6月龄开始连续喂饲含有不同剂量（1．00、2．00和3．00mg／kg）MMC的普通饲料至12月龄建立SAM快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1汞中毒模型，对照组给予普通饲料，提取鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai法观察MMC对鼠小脑PKC活性的影响。结果MMC各剂量组鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01），与对照组比较其脑汞含量随接触剂量和时间的延长不同程度地明显高于对照组（P〈0．01，P〈0．001）。结论MMC可能通过影响小鼠小脑PKC活性介导其神经毒性作用，在老化进展中具有重要作用。     

失血性休克合并内毒素血症兔肺cAMP反应元件结合蛋白表达和活性的变化

目的探讨失血性休克合并内毒素血症诱发急性肺损伤（ALI）兔肺cAMP反应元件结合蛋白（CREB）表达和活性的变化。方法采用家兔失血性休克合并内毒素血症诱发肺损伤模型,36只家兔随机分为：造模后2h组,造模后12h组和对照组。分析动脉血氧分压（PaO2）、肺湿重／干重（W／D）和肺组织病理学改变,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子（TNF）-α含量,Western印迹检测肺组织CREB蛋白的表达,凝胶电泳迁移率（EMSA）法检测CREB／DNA结合活性：结果病理学显示造模后12h组肺泡结构破坏,肺泡壁和肺间质内有大量中性粒细胞浸润和较多红细胞渗出,造模后2h组病变轻微。造模后12h组PaO2显著低于对照组（55．0±11．0 mmHg vs 92．9±14．6mmHg;P〈0．01）,W／D高于对照组（5．5±1．1 vs 3．5±0．8;P〈0．01）,而造模后2h组与对照组比较变化不明显;造模后12h组肺组织匀浆中TNF-α含量显著高于对照组（491．6±59．2pg／m vs 159．3±44．9pg／ml;P〈0．01）,而造模后2h组与对照组比较变化不明显。造模后2h组和12h组肺组织CREB蛋白的表达量均显著高于对照组（0．874±0．182,0．775±0．258 vs 0．483±0．199;P〈0．01）,造模后2h组和12h组CREB／DNA结合活性也显著高于对照组（355±79,330±108vs185±68;P〈0．01）。结论失血性休克合并内毒素血症促进了肺组织CREB的表达和活化,CREB可能通过促进炎症因子的表达而参与了急性肺损伤的炎症反应过程。     

低剂量氚水对发育中鼠中枢神经系统的影响及其机理研究

目的研究低剂量氚水对发育中鼠的中枢神经系统的影响，为评价核电站排放氚的危险度及制定核安全防护标准提供实验基础资料。方法孕龄１２５天和１３０天的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠及Ｗｉｓｔａｒ大鼠，单次腹腔注射氚水活度分别为２４０９、４８１８和１４４５４×１０４Ｂｑ／ｇ体重。检测仔代鼠神经行为、学习能力及记忆功能的改变。采用膜片钳技术观察脑海马神经元Ｃａ２＋电流幅度的变化。利用形态学和ＤＮＡ电泳分析的生物化学方法对培养的脑细胞进行凋亡的鉴定、用ＳＤＳＰＡＧＥ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ方法检测培养的脑细胞Ｐ５３蛋白的变化。结果鼠出生前经氚照射可导致出生后神经行为早期的兴奋状态转为后期的抑制状态；学习能力及记忆功能明显下降；发育中的神经元表现出Ｃａ２＋电流降低、凋亡增加、ＤＮＡ梯状图谱以及Ｐ５３蛋白表达增高，在培养第４天，３Ｈ氚化胸腺嘧啶组和氚水组细胞凋亡百分比分别为２４５％和２８１％，而对照组则为８１％～９３％。结论导致氚辐射对鼠中枢神经系统损伤的物质基础与氚照射导致脑海马神经元Ｃａ２＋电流幅度下降、脑细胞凋亡增加及Ｐ５３蛋白表达异常等因素有密切关系。     

甲状腺激素对大鼠脑皮质发育期突触体素表达的影响

目的探讨甲状腺激素（TH）对发育关键期大鼠大脑皮质突触体素（syn）表达的作用和影响。方法选用甲巯咪唑（MM）复制甲状腺机能减退大鼠模型,实验分成正常对照组（n=42）和甲减组两组（n=36）,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减组仔鼠脑组织。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑皮质突触体素的表达变化情况。结果正常对照组syn mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在第4天表达最高。以后表达逐渐下降,至第30天表达水平基本接近于成年鼠水平（P120d）。甲减组synmRNA表达在各时点均明显低于正常对照组（P〈0.001）。甲减组syn mRNA表达高峰延迟3d,在出生后第7天达到高峰。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的异常改变了大脑皮质突触体素的表达,进一步影响了其突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

产前糖皮质激素应用对胎鼠脑发育的影响

目的:探讨产前应用不同剂量糖皮质激素(antenatal corticorsteriod theray,ACT)对胎鼠脑发育的影响.方法:对怀孕第17天的SD大鼠每天肌注地塞米松0.8 mg/kg,肌注1次的为1剂组、肌注3次的为3剂组和肌注4次的为4剂组,没有使用地塞米松的为对照组.对各组孕鼠所生的胎鼠,分别于生后第1、第7和第14天测量体重、全脑重量、脑细胞凋亡情况并与对照组作比较.结果:实验组胎鼠的体重、全脑重量较对照组明显下降,尤以4剂组最明显;脑细胞凋亡数3剂组、4剂组与对照组在第1天有差别,第7天和第14天差别减弱.结论:ACT对胎鼠的体重、全脑重量、脑细胞凋亡等产生不良影响,剂量越大副作用越明显.     

孕期补充DHA对脂多糖所致宫内感染仔鼠脑组织TLR4表达的影响

目的探讨宫内感染的孕鼠经二十二碳六烯酸(DHA)干预后,对围产期炎症暴露的仔鼠脑组织炎症状态的影响。方法将孕鼠随机分为3组,①实验组(LPS+DHA组):孕期第1天开始给予DHA 130 mg/kg灌胃至分娩。于孕第17、18天连续2次腹腔注射LPS,剂量为350μg/kg;②模型组(LPS组):无菌生理盐水灌胃,同期连续2次腹腔注射LPS,剂量同上;③对照组(NS组):无菌生理盐水灌胃,同期腹腔注射无菌生理盐水0.6 mL。取各组孕21天,生后第1、7、14天(G21,P1,P7,P14)的胎鼠及幼鼠脑组织,用苏木精-伊红染色法观察不同时间点脑组织的病理改变。Realtime-PCR法检测脑组织Toll样受体4(TLR4)、IL-1βmRNA转录水平,Western blot法检测脑组织TLR4、IL-1β蛋白表达水平。结果模型组新生鼠平均出生体重较实验组及对照组减低(均P<0.05)。模型组脑组织苏木精-伊红染色见细胞水肿,组织疏松,细胞数减少。实验组脑细胞水肿较模型组减轻,细胞数减少不明显,而对照组脑组织炎性改变不明显。模型组及实验组IL-1βmRNA、IL-1β蛋白表达较对照组高(均P<0.05),但实验组表达较模型组减低(均P<0.05)。模型组及实验组TLR4mRNA、TLR4蛋白表达较对照组升高(均P<0.05),实验组表达较模型组减少(均P<0.05)。结论孕期LPS腹腔注射可引起孕鼠胎盘和胎儿的炎症反应,导致子代的脑损伤。孕期补充DHA能减少仔鼠脑内致炎细胞因子的表达,因此可能会降低宫内炎症暴露仔鼠脑损伤的发生率。     

电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马突触可塑性蛋白的影响

目的：探讨电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马突触性蛋白表达的影响,明确其治疗机制。方法：48只SD大鼠随机分为4组：对照组、模型组、电针组、氟西汀组,除对照组外,各组均采用慢性不可预见性温和应激（CUMS）建立抑郁动物模型。电针组于每日应激前选取百会、印堂两穴进行电针治疗,每天1次;氟西汀组于造模前通过灌胃给予阳性药氟西汀水溶液,剂量为10 mg/kg,持续21 d。于应激造模后7、14、21 d分别采用旷场测试和强迫游泳实验评价大鼠的抑郁样行为,Golgi染色观察海马突触结构的病理特点,Western blot检测海马突触可塑性相关蛋白SYN、PSD-95、CREB、BDNF的表达。结果：与对照组比,模型组大鼠7 d时强迫游泳不动时间显著增加（P＜0.05）,14 d时旷场自主活动评分显著下降（P＜0.05）,抑郁样行为明显,海马突触结构损伤,突触可塑性蛋白SYN、PSD-95、CREB、BDNF表达均显著下调（P＜0.01）;经电针治疗后,大鼠抑郁样行为得以明显改善（P＜0.01）,树突棘形态及数量趋于正常,SYN、PSD-95、CREB、BDNF表达均明显回升（P＜0.01）。结论：电针能显著改善慢性应激抑郁模型大鼠的抑郁样行为,其机制与改善突触结构,上调突触可塑性蛋白表达有关。