乙型肝炎病毒感染者外周血树突状细胞的检测分析

目的检测急、慢性乙型肝炎、肝硬化患者和健康人外周血树突状细胞(DC)数量和功能的变化,了解DC与乙型肝炎病毒感染(HBV)的关系。方法采用流式细胞技术检测15例急性乙型肝炎,40例慢性乙型肝炎,20例肝硬化患者及25例健康人体内DC亚群(MDC和PDC)的变化;体外分离培养产生的DC1表型及刺激混合性淋巴细胞反应(MLR)的能力反映MDC的功能;外周血单个核细胞(PBMCs)产生的α-干扰素水平反映PDC的功能。结果慢性乙型肝炎患者的DC1表面CD80、CD86、CD83的表达水平低于健康人;健康人外周血MDC的比例为0.42%±0.09%,绝对数为(12.9±6.1)×106/L,两者在慢性肝炎、肝硬化患者中均下降;而健康人外周血PDC的比例为0.37%±0.14%,绝对数为(9.0±4.1)×106/L,两者在慢性肝炎、肝硬化患者均降低,慢性肝炎和肝硬化患者PDC分泌的α-干扰素量也低于健康人。结论慢性乙型肝炎、肝硬化患者体内两种DC均出现数量和功能异常,此种异常降低了DC的抗原递呈作用,导致HBV的慢性化及疾病进程。     

乙型肝炎病人外周血树突状细胞亚群鉴定及其临床意义

近年来的研究认为,树突状细胞(DC)在人体免疫系统应答过程中发挥重要作用[1],根据其细胞表面标志不同,可将DC分为DC1和DC2亚群[2]。我们对慢性乙型肝炎病人外周血DC亚群变化及其功能与疾病的发生、发展等关系进行分析。资料与方法一、研究对象随机选择解放军第251医院2001年5月～10月住院慢性乙型肝炎病人24例(其中轻、中型19例,重型5例),男17例,女3例,平均年龄29.5(12～47)岁。诊断符合2000年9月全国第十次病毒性肝炎及肝病学术会议(西安)修订标准。全部病例排除其他型病毒性肝炎感染。对照者为10名健康自愿献血者,其中男8例,女2例,平…     

乙型肝炎病毒感染不同时期患者外周血树突状细胞亚群数量的变化

目的 探讨HBV感染患者不同感染时期(免疫耐受期、免疫活动期、非复制期)的树突状细胞(DC)亚群髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)数量的差异及其与外周血HBV DNA水平的相关性.方法 收集HBV感染不同阶段的患者30例,分为免疫耐受组、免疫活动组、非复制组各10例,另选健康人10名作为对照组.取4组患者的抗凝血10 ml,提取外周血单个核细胞,然后用流式细胞仪检测并计算出患者外周血DC亚群的频率(百分比)和数量.统计学分析不同组间DC亚群频率、数量变化及其与HBV DNA的相关性.结果 HBV感染组mDC绝对值、pDC百分比、pDC绝对值分别为(9.40±4.16)x 106/L、0.17%±0.10%、(3.77±2.44)×106/L,均低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05).健康对照组mDC百分比(0.56%±0.11%)高于免疫耐受组(O.47%±0.19%),mDC绝对值[(14.81±4.75)×106/L]高于免疫耐受组[(9.50±3.98)× 106/L]和免疫活动组[(8.44±2.66)× 106/Ll,pDC百分比(0.26%±0.08%)高于免疫活动组(0.14%±0.10%)和非复制组(0.18%±0.11%),pDC绝对值[(16.65±2.01)×106/L]高于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05).HBV感染不同组别中仅免疫耐受组pDC细胞数与HBV DNA水平呈负相关关系(P<0.05).结论 HBV感染不同时期mDC和pDC频率和数量较健康人群下降.不同组DC亚群数量中仅免疫耐受组pDC细胞数与HBVDNA水平呈负相关.     

艾灵颗粒对HIV感染者外周血树突状细胞亚群的影响

目的 观察中药艾灵颗粒治疗艾滋病病毒(HIV)感染者外周血树突状细胞(Dendritic cell,DC)亚群变化特点.方法 收集未接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的17例HIV感染者,采用中药艾灵颗粒治疗9个月,11例健康人作为对照,观察治疗前后症状体征变化.采用流式细胞技术对患者外周血髓样树突状细胞(MDC)及浆细胞样树突状细胞(PDC)频率进行检测,并对PDC产生α-干扰素(IFN-α)能力进行检测.结果 疗后3个月、9个月,MDC频率与疗前的差异有统计学意义(P＜0.05),疗后9个月,PDC频率与疗前的差异有统计学意义(P＜0.05),均从疗前低于健康对照水平恢复到疗后健康对照水平.疗后9个月IFN-α均值升高,与疗前的差异有统计学意义(P＜0.01).结论 艾灵颗粒可能在一定程度恢复MDC和PDC频率,升高PDC分泌IFN-α的作用,提高感染者免疫功能.     

树突状细胞亚群相对数与乙型肝炎病毒复制及肝损伤的关系

目的探讨外周血树突状细胞(DC)亚群相对数量与慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平和肝脏病理炎症损伤程度问的关系。方法定量聚合酶链反应法检测患者血清HBV DNA,利用流式细胞仪检测外周血DC亚群。结果血清HBV DNA<106拷贝/ml慢乙肝患者外周血DC2相对数量显著高于HBV DNA≥106拷贝/ml患者和健康者(P<0.05),而后两组间DC2的差异无统计学意义;上述三组中DC1相对数量差异无统计学意义;外周血DC亚群相对数与患者临床型别和肝内炎症损伤程度无关。结论外周血DC2亚群的升高与慢乙肝患者体内HBV低水平复制相关,提示DC2 可能在抑制HBV复制中发挥作用;外周血DC亚群相对数与肝组织炎症程度不相关。     

不同类型慢性乙肝病毒感染者外周血树突状前体细胞亚群的变化特点

目的观察不同类型慢性乙肝病毒感染者外周血树突状前体细胞（pDC）亚群的变化,探讨pDC亚群在慢性乙肝病毒感染自然史中的意义。方法采集健康对照组15例,免疫耐受组19例,慢性乙型肝炎组26例,非活动性组33例的外周血,用流式细胞技术检测髓样树突状前体细胞（pDC1）和浆细胞样树突状前体细胞（pDC2）。结果与健康对照组比较,慢性乙型肝炎组pDC2显著下降（P〈0.05）,慢性乙型肝炎组pDC1显著高于免疫耐受组（P〈0.05）,非活动性组pDC2显著高于免疫耐受组和慢性乙型肝炎组（P〈0.05）。相关性分析表明,HBVDNA水平与pDC2之间存在正相关（r=0.303,P=0.043）。结论慢性乙肝病毒感染自然史不同阶段的外周血树突状前体细胞（pDC）亚群的频率和数量的变化,可能与HBV持续感染的机制和肝炎的发病机制有关。     

慢性阻塞性肺疾病与树突细胞亚群的相互关系

树突细胞是1973年由美国Steinman首先发现,是目前所知的抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞（autigen pnesenfing cell,APC）,对树突细胞（dendritic cells,DCs）的研究有助于深入了解机体免疫应答的产生和调控机制,对肿瘤、移植排斥、感染等发生发展机制的认识有重要理论意义,     

老年慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子改变及其相关性

目的探讨老年慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的改变及其相关性。方法老年慢性乙肝患者45例为观察组,另纳入健康体检的老年人群30例为对照组。观察两组外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子改变及外周血CD4/CD8与Ig G的相关性。结果观察组CD4~+细胞比例及CD4/CD8比值、外周血Ig G水显著低于对照组(P0.01)。观察组外周血CD4/CD8水平与Ig G水平呈现显著正相关(r=0.856,P0.001)。结论老年慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子发生明显改变,表现为免疫紊乱及免疫抑制。     

寄生虫感染对树突状细胞亚群的影响

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知功能最强的抗原提呈细胞,在宿主针对寄生虫感染的免疫应答过程中起到了重要作用。 近年来DC越来越受到的关注,寄生虫感染作用于树突状细胞亚群的研究也不断深入。本文就寄生虫感染对树突状细胞亚群的影响予以综述。     

1型糖尿病患者外周血浆细胞样树突状细胞亚群数量及功能的研究

目的 分析1型糖尿病(T1DM)患者外周血浆细胞样树突状细胞(PDC)数量及功能变化.方法 采用流式细胞术检测22例T1DM患者(DM组)及20位健康人(NC组)体内PDC的比例及数量;用免疫刺激序列(CpG ODN-2216)刺激外周血单个核细胞(PBMCs)并与之共培养,通过检测PBMCs产生的干扰素α(IFN-α)水平评估PDC的功能: 结果 与NC组比较,DM组外周血PDC的百分比和数量均显著下降(P<0.01);PDC经CpG ODN-2216刺激后产生IFN-α的能力也明显下降(P<0.05);相关性分析表明,经CpG ODN-2216刺激后IFN-α的产量与PDC数量呈正相关(r=0.439,P<0.05). 结论 T1DM患者体内PDC数量和功能异常,说明PDC可能参与了机体免疫功能紊乱进程;PDC产生的IFN-α减少,可能使患者对感染的控制能力降低而易感.     

Decreased numbers and impaired function of circulating dendritic cell subsets in patients with chronic hepatitis B infection (R2)

BACKGROUND AND AIM: To investigate the frequencies, numbers and function of circulating dendritic cell (DC) subsets in patients with hepatitis B virus (HBV) infection, we assayed the circulating precursor DC subsets (including pDC1 and pDC2) and their ability in patients at various stages of HBV infection in vitro. METHODS: Circulating pDC1 and pDC2 frequencies in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were analyzed by flow cytometric analysis. Costimulatory molecule expression and allostimulatory mixed lymphocyte reaction (AMLR) of DC1, cultured from PBMC in vitro, were detected in patients with chronic hepatitis B (CHB). On behalf of pDC2, interferon (IFN)-alpha production of PBMC was determined by the ELISA method in HBV-infected patients. RESULTS: The number of circulating pDC1 decreased only in patients with liver cirrhosis (LC) compared with that in normal controls. However, pDC2 numbers decreased in both CHB and LC patients. DC1 from CHB patients showed lower expression of costimulatory molecules CD80, CD86 and impaired allostimulatory mixed lymphocyte reaction (AMLR) compared with those in normal controls. The ability of PBMC to secrete IFN-alpha also decreased significantly in patients with chronic HBV infection. CONCLUSIONS: Our results suggest that patients with chronic HBV infection have a significantly lower expression of costimulatory molecules and impaired AMLR of pDC1, as well as decreased number and impaired function of circulating pDC2, which may be partially related to HBV disease progression in these patients.     

慢性乙型肝炎患者肠源性内毒素血症与树突状细胞表型及功能的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)与肠源性内毒素血症(IETM)的关系.方法 CHB患者80例,健康对照者21例,采集外周血,测定血浆内毒素含量、ALT、TBil.根据血浆内毒素水平,将患者分为内毒素阳性组和阴性组.同时用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4、酪氨酸激酶受体3配体和TNF-a体外诱导、培养CHB患者DC,采用流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T淋巴细胞的能力,用ELISA检测DC分泌细胞因子的水平.多组间比较采用单因素方差分析.结果 CHB患者DC表达CD83、CD80、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR分子的水平及诱导同种异体混合T淋巴细胞增殖的能力均明显低于健康对照组.内毒素阳性组患者表达CD83、CD80、CD86、HLA-DR水平及诱导T淋巴细胞增殖的能力分别为(8.25±3.63)%、(10.63±4.52)%、(36.61±16.16)%、(61.65±14.33)%、0.812±0.311,明显低于内毒素阴性组的(11.39±4.35)%、(13.56±5.13)%、(45.90±15.35)%、(70.35±18.89)%、1.153±0.324(F=5.123、4.213、3.714、3.323、3.125,均P＜0.05).培养至第9天,CHB患者DC分泌IL-12和IFN-γ分别为(16.99±6.74)pg/mL和(10.52±4.19)pg/mL,明显低于健康者的(44.51±14.56)pg/mL和(17.94±5.86)pg/mL.内毒素阳性组患者IL-12水平为(13.14±5.71)pg/mL,明显低于内毒素阴性组的(20.98±9.03)pg/mL(F=3.225,P=0.016).IFN-γ水平在内毒素阳性组为(9.46±3.24)pg/mL,与阴性组的(11.54±5.20)pg/mL比较,差异无统计学意义(F=2.003,P=0.076).结论 IETM是导致CHB患者体内DC功能异常的原因之一.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between dendritic cell (DC)and intestinal endotoxemia in patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods Peripheral blood were collected from CHB patients (n = 80)and healthy controls (n = 21 ).Plasma endotoxin (ET)levels,liver function (alanine transaminase,total bilirubin)were detected.According to plasma ET concentration,all CHB patients were divided into two groups:ET positive and ET negative.The peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)were isolated and then cultured with recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor ( rhGM-CSF),recombinant human interleukin-4 ( rhIL-4 ),FMS-related tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L)and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α)to derive DC.The phenotypic patterns were characterized by flow cytometry.The proliferation of T lymphocytes was evaluated with mixed leukocytes reaction (MLR)and the levels of IL-12 and interferon-γ (IFN-γ)produced by DC were analyzed with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Comparisons among the two groups and healthy control group were done by single factor analysis of variance.Results Compared to healthy controls,the expressions of CD83,CD80,CD86,human leucocyte antigen (HLA)-DR and the proliferation of allogeneic T lymphocytes by DC were all significantly reduced in CHB patient groups.The expressions of CD83,CD80,CD86,HLA-DR and the activation of proliferation in ET positive subjects were lower than those in ET negative subjects [CD83 (8.25±3.63)% vs(11.39±4.35)% ,CD80 (10.63±4.52)% vs (13.56±5.13)%,CD86 (36.61±16.16)% vs (45.90±15.35)%,HLA-DR (61.65±14.33)% vs (70.35±18.89)%,the activation of proliferation0.812±0.311 vs 1.153±0.324; F=5.123,4.213,3.714,3.323 and 3.125,respectively; all P＜0.05].After cultured for 9 days,the secretions of IL-12 and IFN-γ by DC were significantly lower in CHB patients than in healthy controls [IL-12 (16.99± 6.74)pg/mL vs (44.51±14.56)pg/mL,IFN-γ (10.52±4.19)pg/mL vs (17.94±5.86)pg/mL].The level of IL-12 in the ET positive group was significantly lower than that ET negative group [( 13.14 ±5.71)pg/mL vs (20.98 ± 9.03)pg/mL; F= 3.225,P = 0.016].The level of IFN-γ was not different between two groups [(9.46 ± 3.24)pg/mL vs (11.54 ± 5.20)pg/mL; F = 2.003,P =0.076].Conclusion The intestinal endotoxemia may play a role in DC dysfunction in CHB patients.     

慢性乙型肝炎患者单核细胞来源树突状细胞Toll样受体的表达特征分析

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者单核细胞来源树突状细胞（moDC）Toll样受体（TLR）的表达，并分析抗病毒相关TLR（TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9）在CHB患者moDC的表达特征及意义。方法用羟乙基淀粉（HES）分离10例CHB患者及15例健康对照外周血单个核细胞（PBMC），经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）诱导培养树突状细胞（DC），经流式细胞仪用特异性单克隆抗体检测不同成熟阶段DC的TLR表达，并以HBcAg负载未成熟DC，应用FACS分析HBcAg的负载效率及细胞内IFN-γ、IL-4表达水平。结果moDC不同成熟阶段TLR的表达水平不同；CHB患者的未成熟moDC（imDC）表达的TLR7、TLR8低于健康对照（75．9％、1．0％比98．4％、15．4％，P〈0．05），CHB患者成熟moDC（mDC）表达TLR3、TLR7低于健康对照（9．5％、79．7％比11．5％、90．7％，P〈0．05）；应用HBcAg分别于细胞培养第3天和第5天冲击DC，第1次冲击后48hHBcAg的膜内、膜外负载率分别为53．0％和7．5％，第2次冲击后分别为80．2％和19．0％；HBcAg负载或未负载的moDC，均刺激淋巴细胞高表达IFN-γ，较少表达或不表达IL-4，呈现显著的Th1免疫应答。结论CHB患者moDC的抗病毒相关TLR表达低下，且可能是其DC功能低下的重要原因之一；应用HBcAg冲击imDC，可使其有效负载HBcAg，负载后DC的成熟过程及功能不受影响，仍以诱导Th1免疫应答反应为主。     

不同基因型慢性乙型肝炎患者外周血辅助性T细胞分化和树突状细胞的功能

目的探讨不同基因型的慢性乙型肝炎（乙肝）患者体内辅助性T细胞（Th）和树突状细胞（DCs）功能差别。方法检测29例不同基因型慢性乙肝患者外周血Th细胞因子（IL-12、IL-2、IL-4）的表达，并对其中20例不同基因型患者进行外周血DC的分离和体外诱导培养，观测其形态和数量变化，检测DC分泌的IL-12含量，对数据应用t检验进行统计学分析。结果慢性乙肝患者与正常对照组比较，外周血IL-12、IL-2、IL-4表达明显升高（t=2．9272，P〈0．01；P〈0．01；P〈0．05）。C型患者组与D型患者组比较，丙氨酸转氨酶（ALT）、IL-12、IL-2、Th1／Th2明显升高（t=2．4626，P〈0．05；P〈0．05；P〈0．05；P〈0．01），IL-4明显降低（P〈0．05）。慢性乙肝患者外周血的单核细胞经培养和细胞因子诱导后，可获得成熟的具有典型形态的DC。慢性乙肝患者组与正常对照组比较，DC数量明显减少（t=5．4186，P〈0．01）。DC分泌的IL-12水平明显降低（t=3．265，P〈0．01）。不同基因型患者之间DC的数量与DC分泌IL-12差异无统计学意义。结论慢性乙肝患者体内存在Th分化的不平衡；C型慢性乙肝患者体内Th1优势应答，肝脏炎症较重，治疗效果及预后较差。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血树突状细胞亚群的鉴定及其临床意义

目的：探讨检测乙型肝炎肝硬化患者外周血树突状细胞（DC）亚群的临床意义。方法采用流式细胞分析技术检测42例乙型肝炎肝硬化患者、45例慢性乙型肝炎患者和30例健康人外周血 DC 细胞亚群和淋巴细胞亚群的构成,比较三者间的差异。结果乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC1和 DC2百分数分别为（0.2±0.1）%和（0.2±0.04）%,慢性乙型肝炎患者为（0.3±0.1）%和（0.2±0.1）%,均显著低于健康人群[（0.4±0.1）%和（0.3±0.1）%, P＜0.01];13例 HBeAg 阳性乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC2亚群细胞绝对计数为（5.62±1.28）个/μL,显著低于29例 HBeAg 阴性的乙型肝炎肝硬化患者[（8.75±2.32）个/μL,P＆lt;0.05],但是两者 DC1细胞水平无明显差别;乙型肝炎肝硬化患者外周血 CD4＋T 淋巴细胞和 CD8＋T 淋巴细胞计数分别为（588.4±124.2）个/μL 和（338.5±97.4）个/μL,均显著低于慢性乙型肝炎患者[（686.7±106.5）个/μL 和（432.1±102.6）个/μL,P＜0.05],而且乙型肝炎肝硬化患者和慢性乙型肝炎患者外周血 CD8＋T 细胞数均显著低于健康对照人群[（560.2±105.6）个/μL,P＜0.05]。结论乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC1和 DC2数量减少,伴 CD8＋T 细胞数降低,可能是导致肝硬化形成的原因之一。     

细胞因子诱导的自体杀伤细胞回输治疗慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的研究

目的了解细胞因子诱导的自体杀伤（CIK）细胞回输治疗是否能恢复慢性乙型肝炎（CHB）患者树突状细胞（DC）的功能。方法12例CHB患者应用CIK细胞回输治疗,入组前6个月至CIK细胞治疗随访期间,患者未接受任何抗病毒及免疫调节治疗。观察24周后患者髓样树突状细胞（mDC）、浆细胞样树突状细胞（pDC）比例和功能变化,并对其变化结果进行分析。结果应用CIK细胞回输治疗24周后,病毒载量下降≥2个log或转阴的患者外周血mDC、pDC功能明显提高。病毒学应答患者（n=6）病毒载量下降水平与外周血DC功能的恢复密切相关。结论CHB患者接受CIK细胞回输治疗可以提高外周血mDC和pDC功能。     

慢性乙型肝炎患者CD11c+髓样树突状细胞数量和功能的变化

BV形成免疫耐受是其持续感染的主要原因.树突状细胞(DC)作为体内最强的抗原递呈细胞,在诱导HBV特异性细胞毒T淋巴细胞反应中起重要作用[1].其中外周血DCs前体CD11c+髓样树突状细胞(mDC)主要发挥抗原提呈功能,促进Th1细胞极化和细胞免疫的发生[2].     

宫内感染乙型肝炎病毒免疫失败婴幼儿树突状细胞和T细胞亚群的变化

目的通过检测婴幼儿外周血树突状细胞和T细胞亚群的数量变化,探讨宫内感染乙型肝炎病毒导致免疫失败的机制。方法采用流式细胞仪技术和三色荧光染色法,对20例宫内感染免疫失败婴幼儿及29例宫内感染免疫成功婴幼儿进行外周血髓源性树突状细胞（MDC）、浆细胞样树突状细胞（PDC）和T细胞亚群检测。结果免疫成功组外周血MDC的百分比为（0.30±0.12）%,绝对数为（20.28±6.82）×106/L;PDC百分比为（0.28±0.12）%,绝对数为（18.01±5.58）×106/L;CD4＋百分比（39.55±8.80）%,CD8＋百分比（24.62±7.23）%,CD4＋/CD8＋为1.66±0.51。免疫失败组外周血MDC的百分比为（0.18±0.08）%,绝对数为（12.94±5.97）×106/L;PDC百分比为（0.16±0.09）%,绝对数为（11.75±7.36）×106/L;CD4＋百分比（32.94±7.58）%,CD8＋百分比（29.61±7.08）%,CD4＋/CD8＋为1.13±0.50。免疫失败组婴幼儿外周血2种DC的百分比、绝对数、CD4＋百分比、CD8＋百分比、CD4＋/CD8＋与免疫成...