尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6基因多态性对丙戊酸钠代谢的影响

目的探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6（UGT1A6）基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响。方法选择单药服用丙戊酸钠且无肝肾功能异常的癫痫患者67例,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分析患者的UGT1A6基因552位点的多态性;同时应用荧光偏振免疫法（FPIA）测定患者丙戊酸钠的血药浓度。结果67例患者中UGT1A6的552位点基因型为A／A,A／C及C／C的例数分别40（59．7％）、24（35．8％）及3（4．5％）。A／A组标准血药浓度均值（4．32±0．21）μg·kg·ml^-1·mg^-1和A／C组（3．43±0．30）μg·kg·ml^-1·mg^-1比较差异有统计学意义;含有C等位基因的A／C及C／C作为一组[标准血药浓度均值（3．40±0．28）μg·kg·ml^-1·ng^-1]与A／A组比较,其标准血药浓度均值差异具有统计学意义。结论UGT1A6是丙戊酸钠的代谢酶,UGT1A6基因多态性可影响丙戊酸钠的代谢,UGT1A6基因552位点含有C等位基因的患者应用丙戊酸钠应较常规增加用药剂量。     

人UGT1A3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

目的 建立人UGT1A3催化黄酮类化合物定量构效关系,考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响.方法 采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGT1A3催化葡醛酸反应的Km值进行定量构效关系研究.结果 所建立的QSMR模型(pKm=-2.207 07+0.002 56HOF+3.212 90 QC5)具有较好的拟合性.结论 分子生成热(HOF)和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素.     

核因子E2p45相关因子2基因在茶多酚调节结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A及其同工酶表达中的作用

目的探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)基因在茶多酚中的主要化学物质epigallocatechin gallate(EGCG)诱导结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A及其同工酶UGT1A8、UGT1A10表达中的调节作用。方法EGCG分别作用Caco-2及HT-29结肠癌细胞12h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达水平的变化,免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜观察细胞内Nrf2蛋白定位的改变。此外,利用RNA干扰技术抑制细胞内Nrf2基因的表达,观察阻断前后EGCG对基因表达水平影响的改变。结果(1)Caco-2及HT-29结肠癌细胞系、结肠癌及癌旁组织中UGT1A、1A8、1A10基因表达水平存在差异。(2)EGCG作用Caco-2及HT-29细胞后Nrf2、UGT1A、1A8、1A10表达升高1.8~9.2倍(均P<0.05),免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜检测到Nrf2蛋白向细胞核内聚集。(3)酶切分析和测序证实成功构建了RNA干扰真核表达载体pSilence-Nrf2-A、B、C、D及随机序列对照pSilence-CON。(4)pSilence-Nrf2-B质粒转染可显著抑制Nrf2基因的表达,在Caco-2及HT-29细胞中抑制率分别为81.46%±1.68%及84.72%±2.08%(实验重复3次);稳定筛选建立的Nrf2低表达的细胞系Caco-2-siNrf2、HT-29-siNrf2,不仅基础UGT1A酶的表达水平降低,而且EGCG作用后酶诱导表达的作用消失。结论Nrf2基因参与了EGCG诱导UGT1A及其同工酶表达的过程并在其中起关键作用,为进一步论证EGCG在结肠癌化学预防中的作用及其可能的机制提供了新的论据。     

高血氨对大鼠血清胆红素及肝组织血红素加氧酶1、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1表达的影响

目的:分析高血氨状态下大鼠胆红素水平、胆红素代谢相关的血红素加氧酶1(HO-1)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)表达的变化及NF-κB通路的激活情况。方法:25只成年健康雄性Wistar大鼠分为2组:高血氨组15只,每天给予氯化铵灌胃2次;对照组10只,同法灌胃生理盐水。每周心脏采血一次,应用ELISA检测血清总胆红素(TBIL)与直接胆红素(DBIL)水平。4周后处死大鼠,心脏灌流后取肝脏,免疫组化SP染色观察HO-1与NF-κB的表达,RT-PCR检测UGT1A1mRNA的表达水平。结果:高血氨组大鼠血清TBIL、DBIL均较对照组明显升高(TBIL:F组间=201.524,F时间=446.552,P均<0.001;DBIL:F组间=131.864,F时间=455.413,P均<0.001)。高血氨组HO-1蛋白表达量(2250.31±620.43)较对照组的(156.66±10.28)上调(t=56.829,P<0.001),高血氨组NF-κB阳性细胞百分比为(0.248±0.052)%,较对照组的(0.072±0.033)%增加(t=62.347,P<0.001)。高血氨组UGT1A1mRNA的表达水平(0.611±0.152)高于对照组的(0.328±0.063)(t=6.449,P<0.001)。结论:血氨升高时TBIL和DBIL亦随之升高,HO-1和UGT1A1在组织中的表达增加,提示组织处于氧化应激状态,NF-κB通路被激活。     

RP-HPLC法测定大鼠血浆中槲皮素含量

目的建立大鼠血浆中槲皮素的反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定方法,研究菟丝子水提取液中槲皮素在正常大鼠血浆中的药物代谢动力学过程。方法给予大鼠灌胃菟丝子水提取液后,于不同时间点采血。血浆样品经酸化后乙酸乙酯萃取,RP-HPLC法进行检测,采用HypersilODS柱（250mm×4.6mm,5滋m）,流动相为甲醇-0.5%磷酸水（60∶40）,流速1.0ml/min,柱温25℃,检测波长为360nm。应用药物代谢动力学软件DAS2.1.1拟合房室模型,并计算药物代谢动力学参数。结果槲皮素在0.5~6滋g/ml线性关系良好,最低检测限为0.5滋g/ml,高、中、低（含槲皮素5、2.5和1滋g/ml）3种浓度的平均回收率均为90%~105%,日内和日间相对标准偏差均＜5%。槲皮素的血药浓度-时间曲线符合二室模型,槲皮素的消除半衰期为4.589h,0~t时刻药时AUC为13.498滋g/（L·h）,药时总AUC为20.765滋g/（L·h）。结论建立了测定菟丝子水提取液中槲皮素在血浆的RP-HPLC测定方法,此方法简便、灵敏、准确、稳定,适用于测定槲皮素的血药浓度及在大鼠体内的药物代谢动力学研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中9种青霉素类药物的残留量

目的:建立一种HPLC-MS/MS方法快速测定牛奶中9种青霉素类药物的残留量。方法:前处理方法采用乙腈沉淀蛋白,正己烷液液萃取除脂;经高效液相色谱C18柱分离,选用pH 3.1甲酸水溶液和乙睛-pH3.1甲酸水溶液为流动相,11 min内在线梯度洗脱;在优化的质谱条件下,采用多反应监测(MRM),外标法定量。结果:方法的线性范围为0.4～400μg/L,9种青霉素类药物在牛奶基质中均有良好的线性关系(r>0.990);方法最低检测限为0.1～0.8μg/L,定量限为0.3～2.6μg/L;方法回收率均在80%以上,重复性良好,日内精密度<8.5%。结论:该方法测定9种青霉素药物的残留量简便、快速、准确,可以满足对青霉素残留的监测要求。     

半枝莲总黄酮中4种有效成分含量测定

目的:建立半枝莲总黄酮有效部位中4种有效成分定量分析方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Zorbax C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:A相1%醋酸、B相CH3OH-CH3CN(80∶20),线性梯度程序洗脱,流速1 ml/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μl。结果:半枝莲总黄酮主要有效成分为野黄芩苷(scutellarin)、异野黄芩素-8-O-葡萄糖醛酸苷(isoscutellarein-8-O-glucuronide)、异野黄芩素(isoscutellerin)和木犀草素(luteolin),其线性范围分别为0.14~11.20μg、0.03~2.40μg、0.007~0.560μg、0.027~2.160μg;平均加样回收率分别为(101.9±1.4)%、(103.5±0.6)%、(98.1±2.9)%、(100.5±2.3)%。结论:该定量分析方法专属性强、重现性好,可用于半枝莲总黄酮有效部位的质量控制。     

HPLC法测定制首乌及复方虫草胶囊中二苯乙烯苷的含量

建立原药材制首乌及复方虫草胶囊中 2 ,3 ,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量测定方法。方法 :YWG C18柱 (4 .6mm× 2 5 0mm ,10 μm) ;流动相乙腈 水 (1∶4) ;检测波长 :32 0nm ,参比波长 380nm ;流速 :1ml·min-1;柱温 :室温。结果 :2 ,3 ,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷对照品在 1.6 5～ 3 .85 μg范围内 ,进样量与峰面积间呈良好的线性关系 ,r=0 .9997,平均回收率 (98.84± 0 .2 3) %。对照品在复方虫草胶囊中的峰纯度因子为 999.35 2。结论 :用HPLC法测定原药材制首乌及复方虫草胶囊中 2 ,3,5 ,4′ 四羟基葡萄糖苷的含量 ,操作简便 ,结果准确 ,可用于控制原药材制首乌及复方虫草胶囊制剂的质量。     

高效液相色谱法测定骨康口服液中芍药苷的含量

[目的]建立骨康口服液中芍药苷质量控制方法.[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定芍药苷的含量,以BDSHypersil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈—体积分数0.1％磷酸溶液(10∶90),流速1.0 mL/min,检测波长230 nm.[结果]芍药苷在30.36～121.42 μg/mL呈良好的线性关系(r=0.999 8),回收率为98.2％ (sR 2.0％,N=9).[结论]本法简便,准确,灵敏度高,重现性好,可用于骨康口服液的控制.     

柱前衍生HPLC法测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量

目的:建立一种测定大鼠肾组织中羟脯氨酸(Hyp)含量的柱前衍生HPLC法。方法:将大鼠肾组织以6 mol·L-1盐酸于110℃水解24 h,加入9-芴甲氧基羰酰氯(FMOC)衍生后,进行HPLC分析。HPLC分析条件为:Phenomenex C18色谱柱(4.60 mm×150 mm,5(m);流动相:醋酸钠缓冲液(pH3.78)-甲醇-乙腈(梯度洗脱);流速:1.0 ml·min-1;柱温:40℃;检测波长:265 nm。结果:羟脯氨酸在浓度范围为15.30～612.00 mg.L-1内线性良好(r=0.9999);回收率为97.4%～103.9%。结论:该方法简单、准确、灵敏,可用于测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量。     

RP-HPLC法测定眼房水中三种不同剂型匹罗卡品含量

目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定眼房水中匹罗卡品含量的方法.方法:RP-HPLC法采用ODS-C18柱,流动相:0.5%三乙胺的KH2PO4(10 mmol/L)缓冲液(pH 2.5)-乙腈(98/2,v/v),流速:1.0 ml/min,检测波长:215 nm.90只兔均分为3组,分别于每只兔眼滴入不同剂型滴眼剂50 μl,分别测定给药后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min时眼房水中匹罗卡品滞留量,用二氯甲烷提取房水中药物.结果:RP-HPLC法适用于眼房水中匹罗卡品的含量测定,匹罗卡品质量浓度在0.1～20 μg/ml范围内线性良好(r=0.9998),平均提取回收率为68.1%±2.7%(n=9),日内精密度为2.87%,日间精密度为4.33%.3种不同剂型匹罗卡品50 μl滴眼后,药-时曲线下面积以1%脂质体为最高,且维持时间最长.结论:本方法易行,重现性好,线性范围广.将匹罗卡品滴眼液的剂型改为脂质体可以明显提高匹罗卡品的生物利用度,具有较好的应用前景.     

反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸的含量

[目的]测定朝鲜大黄中大黄酸的含量.[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为VP-ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以1 mL/L甲醇-磷酸(85∶15)为流动相,流动速度为1.0 mL/min,检测波长为254 nm.[结果]大黄酸进样量在0.08~0.80μg范围内,其峰面积积分值与质量浓度之间呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为99.58%(n=6),RSD为2.85%.药用大黄及朝鲜大黄中大黄酸含量分别为2.562 8,12.088 8 mg/g.[结论]反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸含量的方法简便、准确,可用于朝鲜大黄中大黄酸含量的测定;朝鲜大黄中大黄酸含量高于药用大黄.     

气相色谱法测定3-氯-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸中残留溶剂

目的:建立3-氯-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ACCA)中丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、异丁醇、吡啶、甲苯残留量的测定方法。方法:采用气相色谱法,载气为氮气,FID检测器,色谱柱为Agilent INNOWAX毛细管柱,柱温为程序升温:起始温度70℃,保持6 min,以10℃/min升温至160℃,保持1 min;进样量1.0μl,分流进样,分流比10∶1,外标法检测7-ACCA中丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、异丁醇、吡啶、甲苯的含量。结果:在本研究建立的色谱条件下,丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、异丁醇、吡啶、甲苯的最低检出质量浓度分别为2.5μg/ml、1.5μg/ml、15μg/ml、2.5μg/ml、2.5μg/ml、2.5μg/ml、11μg/ml。样品中仅检测到丙酮,且其残留量远在药典规定的限量以下。结论:建立的方法能有效控制7-ACCA中丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、异丁醇、吡啶、甲苯的残留量。