新生大鼠牙乳头细胞的体外培养和矿化特征

目的：观察体外培养的新生大鼠牙乳头细胞的生物学特征。方法：体外培养出生1d大鼠磨牙牙乳头细胞，进行组织学染色，透射扫描电镜观察。结果：体外培养的新生大鼠牙乳头细胞能形成细胞克隆，第3代细胞在含2mmol／L β-甘油磷酸钠、50mg／L抗坏血酸、10^-8moL/L地塞米松的培养液中培养7～8d后可呈现复层生长，培养14～16d后细胞结节中出现矿化，茜素红染色呈阳性反应；透射电镜观察细胞内出现大量含有致密小体的基质小泡样超微结构。结论：发育阶段较早的大鼠牙乳头细胞具有增殖和矿化能力。     

小鼠重组OSF-2对人牙周膜细胞附着和伸展的影响

目的：观察小鼠重组牙周膜细胞特异性因子2（OSF-2）对牙周膜细胞附着和伸展的作用。方法：采用固相结合分析实验及四唑盐比色等细胞生物学技术,观察牙周膜细胞在OSF-2基质上的附着能力和伸展率。结果：牙周膜细胞在OSF-2基质上附着和伸展良好,当浓度在20ug／ml以上时,作用尤其显著（P〈0．01）,与在FN基质的生长结果相似。结论：小鼠重组OSF-2可有效促进牙周膜细胞的附着和伸展。     

人牙髓干细胞的体外分离、培养及鉴定

目的 :体外分离、培养人牙髓干细胞 ,从不同角度对其进行鉴定。方法 :采用胶原酶和Dispase酶联合消化法培养人牙髓干细胞 ,有限稀释法分离纯化 ,将克隆形成的细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析及抗波形丝蛋白 (Vimentin)、CD44、骨粘素 (ON)、牙本质涎蛋白 (DSP)免疫组化染色方法进行鉴定。结果 :通过有限稀释法获得了人牙髓干细胞克隆 ,透射电镜下观察这种克隆形成细胞具有干细胞典型的超微结构特点 ,大多数细胞处于G0 /G1期 ,为细胞周期的静止期 ,并具有牙源性未分化间充质细胞的表型特点。结论 :克隆化培养是人牙髓干细胞较为有效的分离纯化方法 ,该方法分离的人牙髓干细胞具有干细胞的结构、细胞周期及表型特点。     

Analysis and optimisation of the behaviour of a certain class of intermediates in electrosynthesis

The behaviour of an electrochemically generated Cypridina luciferin analogue system in non-flow, tank-flow, and piston-flow cells is analysed via simplified substance balance models. The existence of optimal species-capture conditions is demonstrated to be a function of (mean) residence times in the cells.     

Evaluation of Cd8+ and natural killer cells defense in oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma

Purpose

The aim of this study was to evaluate the population of CD8+ and natural killer (NK) cells in samples of oral (OSCC) and oropharyngeal (OPSCC) squamous cell carcinoma.

细胞重编程及其影响因素

细胞重编程是指分化的细胞在特定的条件下反转恢复到全能性状态,或者形成胚胎干细胞系,或者进一步发生形成一个新个体的过程。重编程诱导体细胞为诱导性多能性干细胞,解决了种子细胞来源的问题。氧化应激、低氧和热处理等微环境改变可启动和诱导核心转录因子激活,启动重编程过程,促使已分化体细胞去分化为未分化状态的前体或干细胞。牙髓细胞和牙周膜细胞拥有干细胞性能,是牙再生的种子细胞。牙髓在受到外伤和炎症刺激时易处于低血低氧状态,低氧状态激活牙髓细胞重编程相关基因表达,恢复牙髓细胞再生能力。微环境改变使分化成熟的细胞去分化为未成熟的更原始细胞,为体细胞诱导多能干细胞提供了新的途径。本文就细胞重编、细胞重编程的作用因素、微环境对VI腔干细胞重编程的作用等研究进展作一综述。     

外胚间充质干细胞的体外分离和鉴定

目的 :探讨SD大鼠外胚间充质干细胞的超微结构及经体外长期传代后变化程度。方法 :电镜分析组织细胞的超微结构 ;用流式细胞仪检测传代细胞的干细胞特异性标志CD57和P75的变化。结果 :细胞增殖旺盛 ,代谢活跃 ,处于未分化状态。P0 -P5期间 ,CD57和P75阳性细胞的比例没有明显降低 ,从P6开始 ,下降迅速 ,至P8-P10 期间已不可测。结论 :①干细胞可以在体外维持生长并增殖 ;②长期培养后 ,干细胞比例下降 ,甚至消失 ,这可能存在两种原因 :其一 ,干细胞经过体外培养已经完全分化了 ,失去了原有的表型 ;其二 :干细胞仍然存在 ,但缓慢增殖 ,被增殖迅速的瞬时扩增细胞稀释 ,以至无法检测     

人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

Differential infiltration of CD8+ and NK cells in lip and oral cavity squamous cell carcinoma

J Oral Pathol Med (2010) 39 162–167 Background: CD8⁺ and natural killer (NK) cells have been considered the most effective cells in the combat of cancer, contributing to better prognosis and longer survival. Methods: The aim of this study was to evaluate the population of CD8⁺ and NK cells, by immunohistochemistry, in samples of oral cavity squamous cell carcinoma (OCSCC) and lip squamous cell carcinoma (LSCC), leukoplakia, actinic cheilitis, and healthy oral mucosa (control). The relationship of CD8⁺ and NK cells with survival data, lymph node metastasis, tumor size, and proliferative index was also evaluated. Results: The number of peritumoral and intratumoral CD8⁺ and NK cells was significantly higher in LSCC, when compared with control, pre‐malignant lesions, and OCSCC. A higher proportion of peritumoral CD8⁺ cells demonstrated correlation with a lower neoplastic proliferative index. Moreover, patients with OCSCC with a high density of peritumoral CD8⁺ cells showed a tendency towards a longer survival time. Conclusions: The differential CD8⁺ and NK cells infiltration in oral SCC might reflect a distinctive tumor microenvironment with a favorable local cytotoxic immune response against neoplastic cells.     

体外成牙环境对牙髓干细胞和外胚间充质干细胞分化的影响

目的利用牙胚细胞（TGC）作为诱导成牙环境,将牙髓干细胞（DPSC）、外胚间充质干细胞（EMSC）分别与其共培养,观察DPSC和EMSC的分化能力。方法利用出生后4 d的大鼠TGC作为诱导成牙环境,将培养的DPSC、EMSC使用BrdU标记及鉴定后与其共培养,免疫荧光双标检测标记细胞表面抗原牙本质涎蛋白（DSP）的表达和碱性磷酸酶（ALP）活性的变化,免疫组化染色鉴定及图像分析DPSC、EMSC在成牙环境中的分化能力。结果共培养7 d后,EMSC共培养组DSP阳性细胞的转化率高于DPSC共培养组（P<0.05）。免疫组化染色图像分析结果表明共培养7 d后,共培养组与TGC单独培养组差异显著（P<0.05）。共培养组3、7 d后ALP活性明显增高,EMSC共培养组较DPSC共培养组ALP活性高。结论混合培养的TGC作为诱导细胞分化的微环境与DPSC、EMSC共培养后,能够诱导细胞向成牙本质细胞分化,EMSC分化能力高于DPSC。     

人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法

目的建立一种能维持人胚胎干细胞（ESC）和诱导性多功能干细胞（iPSC）生长的饲养层细胞的标准制备方法。方法选取受孕12．5-14．5d的CF-1雌鼠,原代培养的鼠胚胎成纤维细胞（MEF）经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞,观察其维持人ESC和iPSC的生长情况;同时研究不同培养器具所需细胞数量,制备高质量饲养层细胞。结果经丝裂霉素C处理后,MEF可很好维持人ESC和iPSC的生长,使其保持自我更新能力和未分化状态;控制铺板的细胞密度,可得到高质量饲养层细胞。结论本实验得到的饲养层细胞能很好支持人ESC和iPSC生长,可作为饲养层细胞制备的标准方法使用。     

成体干细胞及牙源性干细胞的研究进展

人体干细胞是在人体生长和发育过程中起主干作用的细胞,干细胞研究是目前生物医学研究的前沿领域,本文着重对成体干细胞和牙源性干细胞的研究现状及进展作一介绍。     

头颈部肿瘤干细胞的表面标志物及其分选

越来越多的研究显示,头颈部肿瘤干细胞很可能是头颈部肿瘤形成、复发、转移和耐药的根源。本文就头颈部肿瘤干细胞表面特异分子标志物,头颈部肿瘤干细胞的分选等研究进展作一综述。     

髓样来源的抑制细胞在舌癌小鼠中的表达及意义

目的 评价舌癌小鼠外周血和病变部位髓样来源的抑制细胞（MDSC）的变化及意义。方法 建立4NQO舌癌小鼠模型,观察MDSC细胞在外周血的表达,同时观察T细胞亚群的表达,评价MDSC细胞与T细胞亚群及CD4⁺/ CD8⁺比例变化的相关性。观察MDSC细胞在舌黏膜病变部位的表达,并检测舌组织精氨酸酶1（ARG-1）mRNA的表达。结果 4NQO小鼠外周血中MDSC比例随着肿瘤进展显著升高（P<0.01）,外周血中MDSC比例与相应CD3⁺CD8⁺T细胞的比例呈正相关,与CD4⁺/CD8⁺比呈负相关关系。4NQO小鼠异常增生区域的MDSC细胞较正常对照组有所增加,在舌癌组织内及与正常组织的交界处,均浸润了大量的MDSC细胞,而且ARG-1 mRNA水平显著升高（P<0.01）。结论 MDSC细胞在舌癌组织和外周血中的扩增可能是肿瘤进展的重要原因。MDSC细胞可能成为口腔癌免疫治疗的潜在靶点。     

Expression and function of laminin and integrins on adhesion/migration of primary culture cells derived from rat oral epithelium

Sugisawa M, Masaoka T, Enokiya Y, Muramatsu T, Hashimoto S, Yamada S, Shimono M. Expression and function of laminin and integrins on adhesion/migration of primary culture cells derived from rat oral epithelium. J Periodont Res 2010; 45: 284–291. © 2010 John Wiley & Sons A/S Background and Objective: It remains controversial whether or not the junctional epithelium cells that are directly attached to teeth migrate on the enamel surface, as those cells are able to adhere firmly to the enamel. The aim of this study was to investigate the expression patterns of laminin γ₂, integrin β₄ and integrin α₃, and to examine their potential function in cell migration. Material and Methods: Oral epithelium cells obtained from Sprague–Dawley rats were established in primary culture. We employed a wound‐healing assay to characterize the direction of cell extension at the start of cell migration, and observed different localizations of laminin and integrins using immunofluorescence. For functional analyses of integrins, we employed a phosphatidylinositol‐3‐kinase (PI3K) activator to promote integrin β₄ function and used P1B5 to inhibit integrin α₃ function, and we analyzed the percentage of re‐epithelialization as the migration function. Results: Marked accumulation of laminin γ₂ was detected in the peripheral cytoplasm of cells adjacent to the wound area, as shown by the results of the migration assay. Integrin β₄ was detected in the distal cell processes of actively migrating cells, while integrin α₃ was found in cell membranes of cells adjacent to the wound area. In the functional analyses, the percentage of re‐epithelialization was significantly lower in the PI3K‐activator group and in the P1B5‐treated group (2.5% and 7.2%, respectively) than in the control group (39.0%) (p < 0.01). Conclusion: The results suggest that laminin γ₂ is secreted as a foothold for cell migration, that integrin β₄ participates in cell adhesion and that integrin α₃ is involved in cell migration in the primary culture cells.     

大鼠成釉器细胞的分离纯化

目的：寻找一种大鼠成釉器细胞分离纯化的简捷方法。方法：分离出生后6dSD大鼠上下颌第一和第二磨牙完整牙胚，剥离牙囊和成釉器，酶消化法原代混合培养。采用多次差别消化法去除成纤维样细胞，纯化上皮样细胞，并进行抗角蛋白染色和RT—PCR检测釉原蛋白、成釉蛋白mRNA表达。结果：原代细胞为混杂细胞，经2～3次差别消化可完全去除成纤维样细胞。上皮样细胞呈多角形，铺路石样生长，抗角蛋白染色阳性，表达釉原蛋白、成釉蛋白mRNA。结论：本研究通过多次差别消化获得了纯化的大鼠成釉器细胞。     

小鼠重组Periostin对成骨细胞附着和伸展的影响

目的：观察小鼠重组Periostin对成骨细胞附着和伸展的作用。方法：采用固相结合分析实验和四唑盐比色（MTT）法等细胞生物学技术,观察成骨细胞在Periostin基质上的附着能力和伸展率。结果：成骨细胞在Periostin基质上附着和伸展良好,当浓度在20μg/ml以上时,作用尤其显著（P＜0．01）,与在纤维结合蛋白（Fn）基质上生长相似。结果：小鼠重组Periostin可有效促进成骨细胞的附着和伸展,但其作用的附着和伸展,但其作用的切分子机制还需深入研究。     

The benefits and risks of stem cell technology

The potential impact of stem cell technology on medical and dental practice is vast. Stem cell research will not only provide the foundation for future therapies, but also reveal unique insights into basic disease mechanisms. Therefore, an understanding of stem cell technology will be necessary for clinicians in the future. Herein, we give a basic overview of stem cell biology and therapeutics for the practicing clinician.     

酸性培养对人舌鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响及其机制研究

探究酸性培养条件对人舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖、凋亡、迁移能力的影响及潜在的分子机制。