B淋巴细胞对卡介苗颗粒性抗原的递呈作用

作者通过体外试验,将分离纯化的人外周血B细胞先与卡介苗(BCG)共育,成为激发的B细胞,再与建立的对BCG具特异性的T细胞株细胞混合培养,在无单核巨噬细胞存在的情况下,检测B细胞对颗粒性抗原的递呈效应。结果显示,6％的B细胞与BCG共育24小时后,胞浆中可见有BCG菌体,48小时后菌体界限模糊;激发的B细胞能明显地刺激T细胞株出现增殖反应及产生IL-2,但可被氯奎所抑制。表明B细胞对颗粒性抗原有递呈给T细胞,使之有激活作用。     

树突状细胞的移行与递呈抗原作用的实验研究

借助异硫氰酸荧光素的可显示性，将其作为抗原免疫ＣＢＡ小鼠，以观察树突状细胞的移行及其抗原递呈方式与功能。结果表明，经ＦＩＴＣ两次刺激后，移行至局部淋巴结的树突状细胞数明显高于对照组ＦＡＣＳ的分析结果亦表明，局中淋巴结内的树突状细胞荧光阳性率显著率高，且荥光显微镜观察呈现不均一的膜荧光。提示该细胞的抗原递呈方式为单纯膜结合型，而无内在化过程。ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应及ＦＩＴＣ特异性刺激的细胞增     

树突状细胞的移行与递呈抗原作用的实验研究

借助异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）的可显示性，将其作为抗原免疫ＣＢＡ小鼠，以观察树突状细胞的移行及其抗原递呈方式与功能。结果表明，经ＦＩＴＣ两次刺激后（皮内），移行至局部淋巴结的树突状细胞数明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。ＦＡＣＳ的分析结果亦表明，局部淋巴结内的树突状细胞荧光阳性率显著增高，且荧光显微镜观察呈现不均一的膜荧光，提示该细胞的抗原递呈方式为单纯膜结合型，而无内在化过程。ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应及ＦＩＴＣ特异性刺激的细胞增殖反应则分别体现了树突状细胞抗原递呈作用的后效应。     

胶原抗原肽表位诱导的耐受性抗原递呈细胞对大鼠类风湿关节炎的治疗作用

目的:观察抗原肽表位(CTE)1和CTE2诱导、TGF-β2刺激的抗原递呈细胞(APC)对大鼠类风湿关节炎的疗效.方法:雌性Wistar大鼠32只,分为关节炎组、免疫性细胞组、耐受性细胞组和正常对照组,每组8只.关节炎、免疫性细胞和耐受性细胞组大鼠使用鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)加完全福氏佐剂诱导CIA后,分别静脉注射免疫性APC、耐受性APC和Hanks平衡盐溶液(HBSS),1周后观察大鼠关节炎指数,1月后检测外周血血清中抗CⅡ抗体吸光度(A)值,流式细胞仪检测各组大鼠外周血CD4+T细胞中Th1和Th2细胞比例.结果:各组大鼠关节炎指数、外周血抗CⅡ抗体A值和Th1型/Th2型CD4+T细胞比率比较,差异均有统计学意义(F=20.911、22.498和10.775,P＜0.001);耐受性细胞、免疫性细胞和关节炎组较正常对照组升高(P＜0.05),耐受性细胞组较免疫性细胞和关节炎组降低(P＜0.05).结论:CTE1和CTE2诱导、TGF-β2 刺激的APC对大鼠类风湿关节炎有抑制作用.     

氟烷性肝炎免疫应答中Kupffer细胞的抗原递呈作用和MHC限制

目的：探讨豚鼠氟烷性肝炎免疫应答中Kupffer细胞的抗原递呈作用。方法：雄性Hartley豚鼠16只，随机分为2组，每组8只，实验组：每隔42d在40％O2下吸入1％氟烷4h,共3次，对照组，每隔42d吸入40％O24h，共3次，两组在最后一次吸入后21d分离淋巴细胞和肝Kupffer细胞，两组细胞按一定比例混合培养3d，终止培养前18h加入氚标记胸腺嘧啶核苷（3H－TdR)，通过淋巴细胞转化试验（LTT）分析机体吸入氟烷后诱导免疫应答过程中Kuppffer细胞的抗原递呈作用,结果：氟烷诱导豚鼠Kupffer细胞对自体淋巴细胞有显著的促增殖作用（P＜0．01），对同种异体淋巴细胞无促增殖作用，而未吸氟烷豚鼠Kupffer细胞对自体／同种异体淋巴细胞均无促增殖作用，Kupffer细胞数目与淋巴细胞增殖有显著相关性（r=0.9950），用TFA抗原致敏的Kupffer细胞对淋巴细胞的促增殖能力作用更强，脾脏巨噬细胞不能增加TFA－GSA抗原促进自体淋巴细胞增殖的作用。结论：Kupffer细胞是氟烷性肝炎免疫机制中重要的抗原递呈作用。能明显促进机体免疫应答，其抗原递呈作用受MHC限制。     

B淋巴细胞膜表面IgM在抗原提呈中的作用

Previous studies showed that both resting and lipopolysaccharide activated B cells were very effective accessory cells and antigen presenting cells in T cell responding to mitogens and antigens. This paper discusses the role of B cell surface IgM in antigen presentation. Splenic B cells obtained from C57BL/6 mouse were depleted of macrophages, dendritic cells and T cells. The purified B cells were prepulsed with sheep anti-mouse IgM antibody (SaM) at 4 degrees C for 60 min or with tetanus toxoid antigen (TT-Ag) at 37 degrees C for 12 h before pulsing with TT-Ag or SaM. Then B cells (2 x 10(5)/well) were used as antigen presenting cells without further addition of TT-Ag in TT-Ag primed T cells (2 x 10(5)/well, obtained from TT-Ag immunized C57BL/6 mouse lymph node) proliferation. The results showed that antigen presentation of B cells prepulsed with SaM before pulsing with TT-Ag was blocked. But if B cells were preincubated with TT-Ag before pulsing with SaM, antigen presentation of B cells was not blocked by SaM. These results have suggested that B cell surface IgM can take up antigen and can present the antigen to antigen specific T cells. It has also been revealed that B cell surface IgM by taking up antigen plays an important role in antigen presentation. Also, the biological significance of the role on B cell surface IgM in antigen presentation is discussed.     

异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞的分布

目的:观察异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞(APC)的分布情况。方法:绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H-2b)小鼠作为供体,经5.5Gy×2剂量照射24h的BALB/c(H-2d)小鼠作为宿主,于骨髓移植后21d和35d取出宿主小鼠眼球,分离得到虹膜睫状体,荧光显微镜下观察供体骨髓来源的细胞分布。同时采用免疫组织化学染色方法观察普通和移植后小鼠F4/80阳性细胞在虹膜中的分布规律。结果:异基因骨髓移植后21d和35d,宿主虹膜睫状体内可观察到大量呈树突状形态的绿色荧光细胞,呈“满天星”样散在分布于小鼠虹膜睫状体中,这些细胞F4/80抗体免疫组织化学荧光染色多为阳性。结论:虹膜睫状体中的APC细胞来源于骨髓,且大部分为F4/80阳性细胞;异基因骨髓移植后宿主虹膜睫状体中的APC细胞全部被供体来源的APC细胞取代。     

中枢神经系统炎症对抗原递呈细胞白细胞介素-27表达影响

目的：探讨在炎症因子与凋亡细胞刺激下对中枢神经系统抗原递呈细胞白细胞介素（interleukin,IL）-27的表达调控。方法：用脂多糖（lipo-polysaccharide,LPS）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和X射线诱导凋亡细胞对小鼠小胶质细胞和骨髓源树突状细胞刺激。采用实时定量 PCR法,检测不同刺激组小胶质细胞和树突状细胞 p28基因mRNA的转录水平。Western blot法检测不同刺激组细胞 IL-27蛋白表达水平。结果：LPS刺激和 LPS与 IFN-γ共刺激的小胶质细胞和树突状细胞 p28 mRNA表达与空白组相比明显升高（小胶质细胞：PLPS 0.50 μg/ml=0.029;PLPS+IFN-γ=4×10-7;树突状细胞：P0.50 μg/ml=0.021;PLPS+IFN-γ=8×10-7）,凋亡细胞预刺激组p28基因 mRNA转录水平明显低于LPS和IFN-γ刺激组,差异有统计学意义（小胶质细胞：PLPS+凋亡细胞=1.2×10-4;PIFN-γ+LPS+凋亡细胞=1×10-7;树突状细胞：PLPS+凋亡细胞=3×10-4;PIFN-γ+LPS+凋亡细胞=2×10-7）。IL-27蛋白表达水平在 LPS和 IFN-γ刺激组明显增加（小胶质细胞：PLPS 0.25 μg/ml=0.022; PLPS+IFN-γ=8×10-7;树突状细胞：PLPS 0.50 μg/ml=0.021;PLPS+IFN-γ=2×10-7）,在凋亡细胞预刺激组表达下降（小胶质细胞：PLPS+凋亡细胞=9.6×10-5;PIFN-γ+LPS+凋亡细胞=3×10-7;树突状细胞：PLPS+凋亡细胞=0.001;PIFN-γ+LPS+凋亡细胞=1.1×10-5）。结论：中枢抗原递呈细胞在 LPS和 IFN-γ刺激下 IL-27 p28 mRNA和IL-27蛋白表达增加,吞噬凋亡细胞后 IL-27 p28 mRNA和 IL-27蛋白表达下降。     

小鼠树突状细胞过继转移抗原作用的实验研究

用绵羊红细胞免疫小鼠，取其脾脏分离树突状细胞产针这些带有抗原信息的ＤＣＳ经尾静脉注射给小鼠，以观察ＤＣＳ过继转移抗原的作用。结果表明，各试验组小鼠抗体形成细胞及血清中ＳＲＢＣ效价明显高于对照组，Ｐ〈０．０１，再次免疫ＤＣ组抗ＳＲＢＣ效价高于初次免疫ＤＣ组Ｐ〈０．０５，ＤＣＳ具有过断转移抗原的作用。     

嗜酸性粒细胞在小鼠体内的抗原呈递过程

目的探讨嗜酸性粒细胞(EOS)在体内能否将抗原呈递给T淋巴细胞,了解EOS在体内呈递抗原的过程和特征.方法以鸡卵清蛋白致敏和雾化吸入刺激BALB/c小鼠以诱发EOS在气道聚集.收集并纯化气道EOS以荧光素标记后注入小鼠气道,应用荧光显微镜观察EOS的移行过程.将接受气管EOS注入小鼠的气管旁淋巴结取出后制备单细胞悬液,以流式细胞仪检测其中T细胞的增殖反应并鉴定增殖T细胞的亚群.结果荧光标记的EOS注入正常鼠气道后8h即可出现于气管旁淋巴结(19.0个/mm2±1.8个/mm2),24h达高峰(59.2个/mm2±7.2个/mm2),并至少可以维持120h(29.6个/mm2±2.8个/mm2).致敏小鼠气管内注入5×105个接触过抗原的EOS1d后气管旁淋巴结增殖的T细胞百分数(6.9%±0.5%)即明显高于基础对照值(3.2%±0.3%,P<0.01),3d后达到峰值(10.8%±0.8%,P<0.01),7d以后下降(6.1%±0.6%,P<0.05).此外,EOS呈递抗原所引起的T细胞增殖反应具抗原特异性,出现增殖反应的T细胞仅限于CD4+细胞.结论气道EOS在体内可成为抗原呈递细胞,从而促使CD4细胞出现显著的增殖反应.     

催乳素对人B淋巴细胞增殖功能的影响

目的探讨催乳素(PRL)对B淋巴细胞生长的调节作用。方法将生理浓度(10 ng.ml-1)的PRL加到IM-9细胞中培养72 h,以MTT比色分析法检测细胞增殖情况。结果空白对照组、脂多糖(LPS)组、PRL组、LPS+PRL组、LPS+溴隐停(Br)组、LPS+PRL+Br组A值分别为1.00±0.09、1.11±0.14、1.21±0.23、1.38±0.44、0.95±0.14、0.89±0.11。与空白对照组比较,PRL(t=2.689,P<0.01)、LPS(t=2.292,P<0.05)均能促进IM-9细胞的增殖;与LPS组相比,加入Br后对IM-9细胞的增殖有抑制作用(t=2.556,P<0.05);与LPS-PRL组相比,加入Br后对IM-9细胞的增殖亦有抑制作用(t=3.417,P<0.01)。结论人PRL能明显地促进IM-9细胞的增殖,Br对IM-9细胞的增殖有抑制作用。     

mPEG修饰淋巴细胞HLA-A2抗原的研究

目的用甲氧基-聚乙二醇(mPEG)修饰淋巴细胞表面HLA-A2抗原,阻断它与相应抗体的特异性结合。方法在不同温度、不同pH的磷酸缓冲液(PBS)中分别使用终浓度为12 mmol/L不同种类的mPEG对淋巴细胞表面HLA-A2抗原进行修饰。结果4 ℃及室温对淋巴细胞表面HLA-A2抗原修饰效果无明显影响,30 ℃及37 ℃条件下不利于修饰;高浓度mPEG在碱性环境中对HLA-A2抗原的修饰效果较好,且不同mPEG对修饰效果亦有影响。结论室温下,在pH7.4的PBS介质中mPEG-BTC(benzotriazole carbonate)对淋巴细胞表面HLA-A2抗原的修饰效果最好,其次为mPEG-丙酸-琥珀酰亚胺,mPEG-马来酰亚胺无修饰能力。     

卡介苗对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡的影响

变应性哮喘的主要特征是嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞在肺内募集导致的气道慢性炎症,其中CD4 辅助细胞在哮喘气道炎症的发生发展中起关键作用.研究[1,2]证明,卡介苗(BCG)有明显的防治哮喘的作用.本研究就哮喘小鼠淋巴细胞的凋亡与BCG之间的关系进行了探讨.     

钩端螺旋体外膜抗原基因OMPL1在卡介苗中的克隆和初步表达

采用ＰＣＲ技术直接从致病性钩端螺旋体（简称钩体）赖型０１７菌株基因组中扩增钩体外膜蛋白基因ＯｍｐＬ１,并克隆到大肠杆菌—卡介苗穿梭质粒载体ｐＹ６００２中,重组质粒经电转化导入卡介苗。斑点杂交筛选重组卡介苗,再通过免疫印迹对其表达进行初步研究。在所得６个重组卡介苗中,有３个表达了ＯｍｐＬ１基因产物,其中一个表达较强。该研究为发展新一代高效广谱的钩体基因工程疫苗打下了基础。     

mPEG修饰淋巴细胞HLA-A2抗原的研究

目的 用甲氧基-聚乙二醇(mPEG)修饰淋巴细胞表面HLA-A2抗原，阻断它与相应抗体的特异性结合。方法 在不同温度、不同pH的磷酸缓冲液(PBS)中分别使用终浓度为12mmol／L不同种类的mPEG对淋巴细胞表面HLA-A2抗原进行修饰。结果 4℃及室温对淋巴细胞表面HLA-A2抗原修饰效果无明显影响，30℃及37℃条件下不利于修饰；高浓度mPEG在碱性环境中对HLA-A2抗原的修饰效果较好，且不同mPEG对修饰效果亦有影响。结论 室温下，在pH7．4的PBS介质中mPEG-BTC (benzotriazole carbonate)对淋巴细胞表面HLA-A2抗原的修饰效果最好，其次为mPEG-丙酸-琥珀酰亚胺，mPEG-马来酰亚胺无修饰能力。     

催乳素保护人B淋巴细胞免其凋亡的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)在B淋巴母细胞系IM-9细胞凋亡中的保护作用。方法:在地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的实验体系中加入PRL(10ng/ml),DNA琼脂糖凝胶电泳观察PRL对地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的保护。结果:地塞米松组诱导的IM-9细胞在48h后出现细胞凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳显示有大量小分子DNA片段形成,呈典型的细胞凋亡DNA梯形带,地塞米松-PRL组的IM-9细胞的DNA经电泳后未出现凋亡的DNA条带。结论:地塞米松能诱导IM-9细胞的凋亡,PRL能保护IM-9细胞,免其凋亡。