p53在神经酰胺诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p53在外源性神经酰胺(C2-ceramide)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法:体外培养脐静脉内皮细胞,用不同浓度的C2-ceramide进行处理,Tunel检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测p53的表达;并用p53的抑制剂PFT-α(pifithrin alpha,PFT-α)预处理细胞,再加入C2-ceramide与对照组比较观察细胞凋亡指数。结果:C2-ceramide呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡;p53的表达随着C2-ceramide浓度的增加呈现降低的趋势;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的凋亡。结论:神经酰胺能诱导内皮细胞的凋亡,可能不依赖于p53途径。     

神经酰胺诱导内皮细胞凋亡机制的研究

目的 探讨p53、Fas在外源性神经酰胺（C2-ceramide）诱导内皮细胞凋亡中的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以不同浓度的C2-ceramide处理后,用TUNEL染色法检测细胞的凋亡。用p53 的抑制剂PFT-α和Fas的抑制剂Fas相关磷酸酶-1（FAP-1）预处理细胞后,加入C2-ceramide,与对照组比较观察Fas的表达和细胞凋亡指数的变化。结果 C2-ceramide可剂量依赖性地诱导内皮细胞凋亡。FAP-1可抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡。结论 神经酰胺能够诱导内皮细胞凋亡,其作用机制可能是通过Fas途径而非通过p53途径。     

鼠双微基因2在血管紧张素Ⅱ和神经酰胺致内皮细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨神经酰胺和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致内皮细胞凋亡过程中鼠双微基因2（mdm2）的变化及其作用。方法体外培养脐静脉内皮细胞,分别用AngⅡ1型受体拮抗剂氯沙坦、AngⅡ2型受体拮抗剂PDl23319、神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉素B1（FB1）预处理细胞,再加入AngⅡ与双蒸水对照组比较观察细胞凋亡情况及mdm2 mRNA和蛋白的表达,并用不同浓度的c2-神经酰胺进行处理,RT—PCR和Western blot检测mdm2的mRNA和蛋白表达及细胞凋亡的情况。结果PD123319组和FB1组抑制了AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡,其凋亡指数明显下降（P〈0．05）,而与对照组相比差异无统计学意义,相反氯沙坦组凋亡指数较对照组显著增加（P〈0．05）,FB1组抑制了mdm2的表达。c2．神经酰胺呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡,mdm2的表达随着C2-神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论AngⅡ诱导内皮细胞凋亡通过AT2受体和神经酰胺起作用,AngⅡ和神经酰胺可能是通过抑制mdm2来诱导凋亡的。     

bcl-2在神经酰胺致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究bcl-2在神经酰胺诱导人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度神经酰胺进行诱导并观察bcl-2的表达及细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定bcl-2mRNA和蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果神经酰胺以剂量依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,对照组和5、12.5、25及50μmol/L神经酰胺处理24h后各组细胞凋亡率分别为2.13%±0.12%、13.24%±1.32%、29.67%±2.32%、34.43%±3.36%及38.56%±2.21%,神经酰胺处理组bcl-2mRNA及蛋白的表达较对照组显著降低(P<0.05)。结论神经酰胺在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,bcl-2表达减低,从而引起细胞凋亡。     

神经酰胺在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的 观察神经酰胺（CER）在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法分别以流式细胞术和TUNEL法、高压液相色谱法等检测细胞凋亡、CER和酸性鞘磷酯酶（ASM）。结果（1）高糖呈浓度依赖性引起细胞内CER和酸性ASM活性增加,左旋葡萄糖无类似效应;（2）地昔帕明可抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,外源性（CER）可逆转其抑制作用;（3）外源性CER及酸性ASM可诱导内皮细胞凋亡;（4）高糖诱导的细胞内CER增加与高糖浓度及细胞凋亡均正相关。结论由酸性ASM水解引起的细胞内神经酰胺增加参与了高糖诱导的内皮细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导小细胞肺癌细胞凋亡及p53、bcl-2基因表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导小细胞肺癌细胞凋亡及其机制。方法：采用末端脱氧核苷酰转移（TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫组织化学（SABC）法分析As2O3对小细胞肺癌细胞（NeI-H细胞）p53、bcl-2基因蛋白表达的影响。结果：As2O30.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L作用72h，NeI-H细胞均可呈现凋亡所特有的亚G1峰，凋亡比率随药物作用浓度增加和作用时间延长而增高。实验组p53基因蛋白表达较对照组明显增多，药物浓度越高表达越多（P=0.001）；bcl-2基因蛋白表达较对照组明显减少，药物作用浓度越高表达越少（P=0.001）。结论：As2O3抗肿瘤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机制与上调p53基因表达及下调bcl-2基因表达有密切关系。     

阿魏酸钠对TNF-α致血管内皮细胞凋亡的作用

目的 探讨阿魏酸钠（sodium femlate，SF）对TNF-α引起的血管内皮细胞（VEC）凋亡的作用及机制。方法 以培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验模型，采用电镜、TUNEL法观察凋亡细胞，用免疫组化技术检测bcl-2和bax的表达。结果 电镜观察TNF-α组可见VEC凋亡典型特征；TUNEL法检测TNF-α组VEC凋亡率为35．2％，显著高于对照组，SF组和TNF-d＋SF组（JD〈0．01）；TNF-α组bcl-2表达聪显减少，同时加入SF后bcl-2表达明显上升，而TNF-α可诱导bax表达增加，加入SF后明显降低。结论 TNF-d能诱导VEC凋亡，SF可抑制细胞凋亡，同时SF可使TNF-α诱导的VEC中bcl-2表达明显恢复，而对bax表达明显降低。     

EHT1864对低氧诱导内皮细胞的影响和机制研究

目的 探讨Rac抑制剂EHT 1864对低氧诱导的内皮细胞凋亡和氧化应激的影响。方法 在低氧和正常氧的情况加入EHT 1864孵育HUVECs（人脐静脉内皮细胞）24 h,CCK-8（细胞增殖-毒性检测试剂盒）法检测细胞活性,DCFH-DA（二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯）荧光探针检测活性氧簇（ROS）水平,TUNEL（原位缺口末端标记法）染色观察细胞凋亡水平,免疫印迹法检测氧化应激、凋亡及相关通路蛋白的表达。结果 培养处理24 h后,低氧刺激组细胞促氧化因子Gp91、p47 phox蛋白表达及凋亡水平高于正常氧浓度组,而抗氧化因子SOD2蛋白表达低于正常氧浓度组,差异均有统计学意义（P<0.05）;而EHT 1864处理后能抑制低氧诱导的炎症和凋亡因子表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 EHT1864能够通过AMPKα-NOXs信号通路改善低氧诱导的内皮细胞氧化应激及凋亡。     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

游离饱和脂肪酸诱导大鼠睾丸Leydig细胞凋亡

目的 探讨游离脂肪酸对大鼠睾丸Leydig细胞凋亡的影响。方法 （1）用不同剂量的游离脂肪酸包括饱和脂肪酸[软脂酸（PA）和硬脂酸（SA）]和不饱和脂肪酸[花生四烯酸（AA）]处理体外培养的大鼠Leydig细胞（LC-540）24h-72h，然后用台盼蓝排除法测定细胞的生存率；（2）用DNA片段法确定是否存在细胞凋亡；（3）观察外源性神经酰胺C2-ceramide(25-200μmol/L)引起的细胞凋亡和神经酰胺合成酶抑制剂FumonisinB1是否可以阻断PA引起的细胞凋亡；（4）观察检测AA是否对PA引起的细胞凋亡有保护作用。结果 （1）PA和SA以剂量和时间依赖的方式抑制细胞的生存率，而10倍于生理浓度的AA（10μmol/L）能够显著增加细胞的数量；（2）DNA片段化研究证实PA引起的细胞死亡为凋亡；（3）G2-神经酰胺以剂量依赖的方式引起细胞凋亡；饱和脂肪酸引起的细胞凋亡可能是通过神经酰胺造成的，因为FumonisinB1可以阻断PA的致细胞凋亡作用；（4）AA能够部分阻断PA的致细胞凋亡作用。结论 （1）PA和SA引起睾丸Leydig细胞凋亡并可能与神经酰胺有关；（2）AA能够部分阻断PA所致的凋亡作用。     

阿托伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡涉及NADPH氧化酶及p38MAPK途径

目的观察阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧的影响,并探讨其作用机制。方法Hcy单独或联合阿托伐他汀、N-乙酰半胱氨酸（NAC）、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶抑制剂（DPI）或p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶（p38MAPK）阻断剂（SB203580）处理人脐静脉内皮细胞后,检测细胞凋亡率,活性氧水平,NADPH氧化酶活性,caspase-3 mRNA的表达和p-p38MAPK的表达。结果阿托伐他汀明显抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧的产生,并能拮抗Hcy诱导的NADPH氧化酶的激活,p38MAPK蛋白的磷酸化及caspase-3 mRNA表达的增加。NAC、DPI、SB203580可产生相同的作用。结论阿托伐他汀可能通过抑制NADPH氧化酶的激活,p38MAPK磷酸化途径抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧的产生和细胞凋亡。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡及Bcl-2、BaX、P53和Caspase-3蛋白表达的影响

目的：研究沥水调脂胶囊抑制内皮细胞凋亡的机制。以氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，观察Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达。方法：用流式细胞术检测细胞凋亡并进行周期分析；用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达水平。结果：沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。在此过程中沥水调脂胶囊上调了Bcl-2蛋白表达水平，对Bax蛋白表达未见明显影响，同时下调了P53和Caspase-3蛋白表达水平。结论：推测沥水调脂胶囊可能是通过上调Bcl-2蛋白表达，下调P53和Caspase-3蛋白表达抑制内皮细胞凋亡的。     

高糖对血管内皮细胞蛋白激酶Cα和δ表达及功能的影响

以高糖培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）研究显示,高糖可诱导血管内皮细胞（EC）功能紊乱,凋亡增加,NO浓度降低,可溶性细胞间黏附分子1水平增加;高糖可诱导HUVECs的蛋白激酶C（PKC）α及PKCδ表达位置转移,PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。高糖所致EC功能异常,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

金黄色葡萄球菌α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的研究金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）α溶血素诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度金葡菌a溶血素感染脐静脉内皮细胞,2、4、8和12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果金葡菌α溶血素10、30、90和270ng／ml均可诱导脐静脉内皮细胞发生凋亡,以30ng／ml时诱导细胞凋亡能力最强,作用2h后细胞即发生凋亡,并随着诱导时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加。结论金葡菌α溶血素可诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并存在明显的时间、剂量效应关系,这可能是金葡菌L型垂直感染影响胎儿宫内发育的重要机理之一。     

冷冻联合rhTNF-α对C6大鼠脑胶质瘤细胞凋亡的影响及其调控机制

目的 探讨冷冻联合肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对C6大鼠脑胶质瘸细胞凋亡的影响及其调控机制。方法 建立C6大鼠脑胶质瘤动物模型，将80只大鼠均分为四组（对照组、冷冻组、rhTNF-α组、冷冻联合rhTNF-α组），治疗后第15天留取标本，以末端标记法、流式细胞仪（FCM）检测肿瘤细胞凋亡，以免疫组化技术检测p21基因表达。结果 与其他三组比较，冷冻联合TNF-α组诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及上调p21表达明显（P〈0．01），二者呈显著正相关（P〈0．01）。FCM分析显示。G1峰前出现典型的亚二倍体峰。结论 诱导细胞凋亡可能是冷冻联合TNF-α杀伤脑胶质瘤细胞的重要机制之一；p21基因可能参与这种细胞凋亡的调控。     

MiR-197-3p/STAMP2对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及炎症应激的影响

目的 探究miR-197-3p/前列腺六次跨膜蛋白（Six transmembrane protein of prostate,STAMP）2对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡和炎症应答。 方法 用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型;RT-PCR检测miR-197-3p和STAMP2表达;ELISA检测细胞凋亡;Western blot用于检测STAMP2,Bax和Bcl-2的蛋白水平;ELISA检测HUVECs中细胞间黏附分子（ICAM）-1,血管内皮细胞黏附分子（VCAM）-1和E选择素（E-selectin）的表达水平;生物信息学预测miR-197-3p的靶基因;并采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot验证miR-197-3p与STAMP2的靶向调控关系。 结果 ox-LDL能明显上调miR-197-3p的表达（P<0.05）,同时降低STAMP2的表达（P<0.05）,且呈时间依赖性;下调miR-197-3p能够显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡（P<0.05）,同时降低促凋亡蛋白Bax并增加抑凋亡蛋白Bcl-2（P<0.05）;抑制miR-197-3p明显降低ox-LDL诱导的炎症因子的表达（P<0.05）;此外,生物信息学预测提示STAMP2是miR-197-3p的靶基因,而且qRT-PCR及Western blot结果显示抑制miR-197-3p明显上调STAMP2 mRNA和蛋白水平（P<0.05）,从而证实miR-197-3p能够靶向调控STAMP2。 结论 MiR-197-3p可以通过靶向调控STAMP2从而调节ox-LDL诱导的HUVECs凋亡及炎症应答,为动脉粥样硬化的靶向治疗提供理论基础。     

二苯乙烯苷通过核因子κB信号通路抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 研究二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用,探讨二苯乙烯苷是否通过核因子κB信号通路调节凋亡相关基因的表达来抑制细胞凋亡.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、过氧化氢组和二苯乙烯苷组,采用显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测核因子κB p65、IκB、bcl-2蛋白的表达.结果 过氧化氢能显著抑制内皮细胞增殖,增加细胞凋亡率;并增加核因子κB p65蛋白的表达,降低bcl-2和IκB蛋白的表达.二苯乙烯苷预处理后显著增加氧化损伤内皮细胞的增殖率,并降低细胞凋亡率;与过氧化氢组相比,二苯乙烯苷组核因子κB p65蛋白的表达显著降低,bcl-2和IκB蛋白的表达显著升高(P<0.01).结论 二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与其抑制核因子κB/ IκB信号通路并上调bcl-2蛋白的表达有关.     

三氧化二砷洗脱支架诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）多聚左旋乳糖酸（PLLA）涂层支架对猪损伤冠脉平滑肌细胞的凋亡诱导作用及机制。方法在6头小型家猪的冠脉内随机植入裸金属支架、PLLA涂层支架、雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架,7天后处死,TUNEL法检测支架段血管平滑肌细胞凋亡率、免疫组化和Western blot法检测凋亡蛋白p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达,体外观察As2O3对大鼠血管平滑肌细胞的凋亡诱导作用和p53表达。结果与裸支架和PLLA涂层支架相比,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部平滑肌细胞凋亡率以及p53表达明显增多,尤其以As2O3洗脱支架最为明显（P〈0．01）,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部PCNA表达较裸支架和PLLA涂层支架明显减少（P〈0．01）,但二者间无显著性差异（P〉0．05）。体外细胞培养显示As2O3呈剂量依赖性的诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡和p53蛋白的表达。结论As2O3洗脱支架具有诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡的作用,且较雷帕霉素洗脱支架更明显,其凋亡诱导作用和增加局部细胞p53表达有关。     

乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨蜂胶乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法用消化灌注法收集人脐静脉内皮细胞进行体外原代培养,于培养液中给予10 mg/L脂多糖处理以建立细胞凋亡模型,乔松素处理组于模型条件培养液中分别加入不同浓度的乔松素(50、100和200 mg/L)干预,共同孵育24 h。光镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率以观察细胞增殖变化,缺口末端标记技术TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测信号转导系统核因子κB亚基p65核易位变化。结果模型组内皮细胞凋亡率明显高于阴性对照组,不同浓度乔松素组细胞凋亡率均低于模型组,同时细胞存活率增高(P0.01)。加入不同浓度乔松素能显著降低脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞核因子κB p65核易位活性(P0.01)。结论乔松素可通过抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡而保护内皮细胞功能,其机制可能与抑制核因子κB p65活化有关。     

不同的脂肪酸对人血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解游离脂肪酸（FFAs）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical veinen dothelialcells，HUVEC）凋亡及生长周期的影响。方法 用不同种类，不同浓度的FFAs培养人血管内皮细胞（VEC），然后应用流式细胞术（FCM）对培养的人VEC生长周期及细胞凋亡进行分析。结果 饱和脂肪酸（SFA）（C16：0，C18：0，C24：0），使培养的人VEC生长受到抑制，随浓度升高细胞凋亡率升高；不饱和脂肪酸（USFA）（C18：1，C18：2），当低浓度时，VEC凋亡率较低（P〉0．05，P〉0．01），而当达400或600μmol／L时凋亡率升高（P〈0．05，P〈0．01）。结论 SFA对培养的人VEC具有抑制增殖及诱导凋亡的作用。低浓度USFA对VEC凋亡及生长周期的影响不大，但高浓度时，其诱导凋亡的作用增强。