猴免疫缺陷病毒(SIV)慢性感染猴模型的建立

目的：在先前已建立了模拟人艾滋病感染者和患者的猴免疫缺陷病毒（ＳＩＶ）急性感染猴和中、晚期猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型的基础上,再摸索建立ＳＩＶ慢性感染猴模型,以期为抗区滋病药物的体内药效学介研究提供更合适的动物模型。方法：用ＳＩＶｍａｃ２５１感染恒河猴１７只,追踪观察其临床表现,体征变化,病程进展,血浆和全血病毒症规律,淋巴细胞亚群ＣＤ４的动态等。结果：临床体征有特征性,病程较长,１年内死亡２只（     

SIV实验感染猴淋巴结病的免疫病理研究

活检或尸检SIV实验感染的恒河猴淋巴结38个，观察到SIV感染时淋巴结病的病变过程是淋巴结从增生到萎缩、耗竭的动态变化经过；SIVp27抗原检查显示阳性的淋巴细胞、组织细胞和吞噬细胞，IgM、IgG和IgA广泛沉着于生发中心及灶性沉着于副皮质区内，66.7%的猴感染后2个月，IgM开始沉着，88．9%的猴在感染后5个月IgG出现，沉着区为一种或两种以上的免疫球蛋白。免疫球蛋白沉着的滤泡出现成纤维细胞、毛细血管普遍增生；CD4^ 、CDB^ 淋巴细胞分析，感染后5个月，CDB^ 淋巴细胞普遍较CD4^ 淋巴细胞数量为多。     

猴免疫缺陷病毒感染猕猴淋巴结和脾脏的病理学观察

目的 观察SIVmac251病毒感染猕猴后其脾脏和淋巴结组织的病理学变化,探索猴艾滋病毒感染及猴艾滋病的发病机理.方法 采用SIVmac251病毒感染猕猴,取感染过程中死亡猴以及实验结束存活猴的脾脏和淋巴结进行光镜与电镜观察.结果 光镜观察,见三种淋巴结的病理变化,包括增生型,退化型和耗竭型;电镜观察,淋巴细胞胞质、胞核及静脉内皮细胞胞质内见病毒颗粒和晶格状排列的病毒;脾脏和淋巴结超微损伤以线粒体为主,表现为线粒体增生,肿胀和形态改变(长形巨大线粒体).结论 SIV感染猕猴淋巴结病理改变与人HIV淋巴结病理改变相近,是适于研究艾滋病免疫机理的理想动物模型.首次发现晶格状排列的SIV病毒.     

猴免疫缺陷病毒（SIV）猴模型的建立

应用ＳＩＶｍａｃ毒株感染中国恒河猴１３只，感染剂量为病毒液的１０－１～２×１０－５；感染食蟹猴４只，感染剂量为１０－２。感染后２周出现各种症状和体征如皮疹，浅表淋巴结肿大，脾肿大，血象白细胞总数下降，出现异常淋巴细胞和中性白细胞。感染后期Ｔ４下降，Ｔ４、Ｔ８比例倒置等。从外周血淋巴细胞和血浆分离病毒阳性，血清抗体上升。淋巴结组织切片呈规律性改变，即淋巴滤泡增生－滤泡耗竭－淋巴组织耗竭或逐渐恢复。感染后２．５个月有急性死亡病例，以后呈散在死亡例，尸检还发现机遇性感染如肺寄生虫，肺、肝巨细胞病毒感染等。     

青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒感染中国恒河猴模型T淋巴细胞活化的调节作用

目的:观察注射用青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)感染中国恒河猴模型免疫异常激活的改善情况,探讨青蒿琥酯对艾滋病的干预作用。方法:选用8只SIV感染平台期中国恒河猴模型,随机分为治疗组和对照组,每组各4只,治疗组按每天3 mg·kg~(-1)剂量肌肉注射青蒿琥酯注射液8周,对照组肌肉注射等剂量生理盐水。分别于给药前,给药后2周、4周、6周、8周,停药后4周、8周检测血浆病毒载量、全血细胞计数、淋巴细胞亚群及免疫活化相关标记物CD_(69)~+、CD_(25)~+、HLA-DR~+和CD_(38)~+表达情况。结果:青蒿琥酯可在4周内下调CD_8~+细胞CD_(69)~+、HLA-DR~+和CD_(38)~+表达水平(P0.05),对CD_4~+细胞影响较小。给药第4周出现一过性嗜中性粒细胞下降,后回升至正常水平。结论:青蒿琥酯可改善SIV感染中国恒河猴细胞毒性T细胞免疫异常激活,嗜中性粒细胞下降是可逆的。     

猴免疫缺陷病毒培养特性及温度敏感性的研究

SIV感染CEMx-174和HUT-78细胞后,显示出SIV对CEMx-174细胞敏感,产生明显的CPE并能杀死该细胞;SIV感染HUT-78细胞亦能引起CPE,但CPE不易与正常HUT-78细胞中的大细胞相区分;60℃加热30分钟能杀死SIV,4℃可存放2周,22℃可存放1周,-20℃存放3周滴度由1:8192分别下降到1:1024、1:16和1:2048,-70℃存放2周滴度由1:8192下降到1:4096并维持此水平2个月。     

猴免疫缺陷病毒感染的猴自身抗体和自身免疫

目的 研究猴免疫缺陷病毒（SIV）感染的猴艾滋病模型自身抗体和病理形态学的动态变化,探讨艾滋病与自身免疫的关系。方法采用间接免疫荧光法,以小鼠心、肝、脾、肺、肾和淋巴结为靶抗原测定SIV感染猴各时间点的自身抗体;采用ECV304内皮细胞株和粒细胞抗原片分别测定抗内皮细胞和粒细胞的自身抗体。并对比检查相应的淋巴结、肾、脑等脏器的病理组织学改变。结果 SIV感染后多种自身抗体比感染前升高,如抗淋巴细胞抗体、抗血管内皮细胞抗体和抗粒细胞抗体等。病理组织学检查结果显示,在淋巴结有不同程度的组织损伤;在淋巴结、大脑皮层、消化道黏膜下层、心脏间质、肾和肝窦等脏器内有比较明显的小血管病变及其诱发的病理改变。结论 猴自身抗体水平的升高及相应组织、器官的损伤是猴艾滋病自身免疫的佐证。     

非洲绿猴在艾滋病研究中的应用进展

人类在人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV-1）感染后,通常经过一段潜伏期,进展为艾滋病（acquired immunodeficiency syndromes,AIDS）。非洲绿猴（African green monkeys,AGM）是SIV（simian immunodeficiency virus,SIV）的天然宿主,虽然体内的病毒水平与HIV感染者相似,但不表现出艾滋病症状。因此,探索AGM控制病毒复制和疾病进展的分子机制,可以很好地促进对HIV感染致病机理的认识和AIDS疫苗与治疗方法的研究。本文简要介绍AGM在艾滋病研究中的应用和最新研究进展,为艾滋病动物模型的研究提供更多参考。     

猴免疫缺陷病毒荧光定量聚合酶链反应检测标准品的体外合成

【目的】合成猴免疫缺陷病毒(SIV)荧光定量检测标准品,并总结出核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则。【方法】首先寻找到SIV保守序列,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,然后在所测得的SIV序列中进一步寻找保守序列,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所获得的PCR产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,再用PCR和电泳检测验证。【结果】通过数次引物调整,最终成功合成了SIV荧光定量PCR标准品。【结论】SIV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①必须选择保守序列;②在选择保守序列之后还需要搜索是否含有较多潜在的终止密码或者起始密码,设计引物使这些中止或起始密码排除在PCR目标产物之外;③必须注意将启动子(如T7启动子)挂在适当的引物上,以保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成好RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完毕的DNA。     

PCR在猴艾滋病模型中检测SIV基因的应用

我们设计了两对特异的聚合酶链式反应(PCR)扩增SIV基因的引物，建设了SIV感染的PCR基因扩增检测法，实验结果表明，PCR方法可检出0．01Pg水平的SIV基因．PCR法、检测与病毒分离相比较，PCR检查敏感性高，特异性强，特别是恒河猴实验感染后期，病毒分离多为阴性，而PCR检查均获阳性结果。PCR基因扩增检测法应用于猴艾滋病模型的研究．将有助乎艾滋病药物的体内实验治疗和艾滋病疫苗的效果评价。     

中药复方艾达康治疗慢性猴艾滋病病毒感染的实验研究

[目的]观察中药复方艾达康对慢性猴艾滋病病毒感染模型的疗效。[方法]恒河猴8只,均感染猴艾滋病病毒SIVmac251复制慢性猴艾滋病模型;18个月后随机分成2组,即模型组和艾达康组,艾达康组给予2g·kg-1·d-1剂量灌胃,模型组灌胃生理盐水,连续56d;观察治疗前后体征变化,采用流式细胞仪检测猴血浆T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆病毒载量,并行淋巴结活检,进行病理学检查。[结果]治疗后艾达康组猴体质量有上升趋势,但与模型纽比较无统计学差异,并能减少感染性腹泻发生;对血中WBC计数及血浆病毒载量均无显著影响,但可升高血浆CD4+、CD8+细胞水平,与模型组比较具有显著性差异(均P<0.05);2组猴治疗前均出现淋巴结退变、耗竭现象,经治疗后艾达康组出现淋巴滤泡增生、生发中心扩大和免疫母细胞增生等淋巴结恢复、重建现象。[结论]中药复方艾达康对SIV慢性感染猴具有一定的免疫恢复和重建作用,但无明显抗病毒作用。     

艾滋病病毒感染猴的循环免疫复合物的变化

【目的】观察猴免疫缺陷病毒(SIV)感染猕猴后循环免疫复合物(CIC)的动态变化。【方法】使用SIVmac251感染30只实验猴，并在感染SIV后不同时间点取样，采用补体致敏的酵母茵凝集试验，检测血清CIC水平的变化．并同时检测了68只正常猴的血清作为对照。【结果】30只SIV感染猴在接种后第4周开始检出CIC(总阳性率为30％)，第8周迅速升高并达到高峰46，7％，在第16周降低至33．3％并逐渐下降；从第20周开始，感染猴的CIC浓度维持一较低的滴度和阳性率，接近于正常猴(约10％)。【结论】CIC在SIV急性感染期间出现并升高，但其后伴随着循环中病毒的减少，CIC也逐渐下降。CIC的形成可能无益于控制病毒复制和引导抗病毒免疫，并可能参与了SIV感染后的发病过程。     

艾可清对猴艾滋病模型的治疗作用

[目的]应用猴艾滋病模型评价艾可清治疗艾滋病的效果.[方法]以猴免疫缺陷病毒SIVmac239感染12只恒河猴,复制猴艾滋病模型后分为3组:SIV对照组,艾可清高、低剂量组(剂量分别为445.5、148.5 mg·kg-1·d-1),感染l0周后开始给药.给药8周后停药观察8周.每4周采集外周静脉血,进行外周血CD4+...     

中药艾可清体外抑制猴免疫缺陷病毒活性的观察

以猴免疫缺陷病毒（SIV）和相应的CEMx－174细胞系统为模型,以3-叠氮胸苷（azidothymidine,AZT）为阳性对照药物,以抗原阳性细胞抑制率、病毒产量、细胞病变和SIV－1p27抗原表达抑制率为指标,观察了以清热解毒中药（紫花地丁、夏枯草、黄芩等）为主组成的艾可清复方对SIV的体外抑制作用。结果表明：中药艾可清在亚细胞毒性浓度（1：320）对抗原阳性细胞抑制率为69．6％,病毒产量显著下降,SIV-1p27抗原表达抑制百分率为94．67％,基本可以抑制细胞病变。综合4项指标,艾可清抑制SIV活性ED50为1：1280。提示该方在体外具有明显的抑制SIV活性作用。     

脾虚小鼠脏器组织学变化及强肌健力口服液的修复作用

【目的】观察脾虚证模型小鼠肝、脾、肾、胸腺等脏器组织形态学的变化及强肌健力口服液对其修复作用。【方法】将健康雄性NIH小鼠40只随机分为正常对照组、脾虚模型组、强肌健力口服液组和四君子汤组;除正常组外,其他3组均采用腹腔注射利血平法复制脾虚模型,强肌健力口服液组与四君子汤组均按26 g.kg-1.d-1剂量灌胃给药,其他2组灌服等容积蒸馏水,连续21 d;最后1次给药后12 h,各组动物称体质量,取肝、肾、脾、胸腺进行组织病理学观察。【结果】模型组小鼠体质量下降,肝、肾、脾、胸腺均有不同程度的组织损伤;强肌健力口服液与四君子汤均能使模型小鼠体质量增加,使已遭损伤的各脏器组织得以修复。【结论】脾虚模型小鼠的肝、脾、肾、胸腺均呈现不同程度的损伤,而健脾方药对其具有修复作用,验证了《内经》有关“脾主身之肌肉,”“脾为孤脏,中央土以灌四傍”的理论。     

鸟氨酸脱羧酶表达水平与溃疡性结肠炎病变时相的关系

【目的】观察鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平与不同时相溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠病理变化的关系。【方法】Wistar大鼠60只,随机分为正常组(12只),模型1、2、3组(各16只),以90 mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)结肠注射复制UC模型,分别于实验第10、20、30天处死模型1、2、3组大鼠,正常组于第30天处死;分别对各组大鼠结肠进行大体和组织病理学评分,并采用免疫组化法检测结肠ODC的表达。【结果】随着实验周期的延长,模型大鼠结肠病变从急性炎症、组织坏死向慢性炎症、溃疡修复进展,ODC在正常结肠粘膜低表达,在溃疡形成、组织坏死阶段的表达略高于正常组,在溃疡修复、细胞大量增生时ODC表达明显增强,在病灶修复处于稳定阶段时ODC表达有所回落。【结论】不同时相UC模型大鼠结肠ODC表达变化特点与结肠病理变化特点相符。     

金锁固精丸加味方对大鼠阿霉素肾病的防治作用

【目的】观察金锁固精丸加味方对阿霉素肾病模型大鼠的治疗作用。【方法】将SD大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组和金锁固精丸加味方组(中药组);除正常对照组外,其他组大鼠均采用一次性尾静脉注射阿霉素6 mg／kg复制肾病综合征模型;中药组同时给予金锁固精丸加味方水煎剂96g/kg灌胃,正常对照组、模型组以等容积饮用水灌胃,连续45 d;分别取24h尿、血清及肾组织观察该方对模型大鼠24h尿蛋白,血清总蛋白、白蛋白、总胆固醇、尿素氮、肌酐及肾组织形态学的影响。【结果】金锁固精丸加味方能降低24 h尿蛋白和血清总胆固醇,升高血清总蛋白和白蛋白,与模型组比较均有显著性差异(P<0．05或P<0．01),但对血清肌酐、尿素氮无明显影响(P>0．05);苏木素-伊红(HE)染色和电镜检查结果均显示该方可减轻模型大鼠肾组织病理改变。【结论】金锁固精丸加味方对阿霉素肾病模型大鼠具有一定的治疗作用。